Estudo fitoquímico da fração AcOEt do extrato etanólico das folhas de Arrabidaea brachypoda (DC) Bureau - Bignoniaceae e atividades antioxidante e inibitória da enzima mieloperoxidase das substancias isoladas

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Aplicação da microtomografia de raios-x laboratorial e síncrotron em estudos in vitro utilizando dente bovino e ciclagem de pH

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Resveratrol na apoptose e produção de superóxido em neutrófilos de cães

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Avaliação da atividade antioxidante, fotoprotetora e antiglicação dos extratos de folhas e frutos de espécies da família Annonaceae

Pós-graduação em Biociências - FCLAS

Effects of the extract and glycoalkaloids of Solanum lycocarpum St. Hill on Giardia lamblia trophozoites

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Fluoride gel supplemented with sodium hexametaphosphate reduces enamel erosive wear in situ

This study evaluated the effect of fluoride gels, supplemented or not with sodium hexametaphosphate (HMP), on enamel erosive wear in situ. Twelve healthy volunteers wore palatal appliances containing four bovine enamel discs. Subjects were randomly allocated into four experimental phases (double-blind, crossover protocol) according to the gels: Placebo (no fluoride or HMP), 1% NaF, 2% NaF, and 1% NaF+9% HMP. Enamel discs were selected after polishing and surface hardness analysis, and treated only once with the respective gels prior to each experimental phase. Erosion (ERO) was performed by extra-oral immersion of the appliance in 0.05M citric acid, pH 3.2 (four times/day, five minutes each, 5 days). Additional abrasion (ERO+ABR) was produced on only two discs by toothbrushing with fluoridated dentifrice after ERO (four times/day, 30s, 5 days). The specimens were submitted to profilometry and hardness analysis. The results were analyzed by two-way ANOVA and the Student-Newman-Keuls test (p<0.05). The 1% NaF+9% HMP gel promoted significantly lower enamel wear for ERO compared to the other groups, being statistically lower than 1% NaF and Placebo for ERO+ABR. Similarly, the lowest values of integrated lesion area were found for 1% NaF+9% HMP and 2% NaF, respectively, for ERO and ERO+ABR. The addition of HMP to the 1% NaF gel promoted greater protective effect against ERO and ERO+ABR compared to the 1% NaF gel, achieving similar protective levels to those seen for the 2% NaF gel. Gel containing 1% NaF+9% HMP showed a high anti-erosive potential, being a safer alternative when compared to a conventional 2% NaF gel.

In vitro effect of low-fluoride toothpastes containing sodium trimetaphosphate on enamel erosion

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Antiproliferative Effects of Fluoxetine on Colon Cancer Cells and in a Colonic Carcinogen Mouse Model

The antidepressant fluoxetine has been under discussion because of its potential influence on cancer risk. It was found to inhibit the development of carcinogen-induced preneoplastic lesions in colon tissue, but the mechanisms of action are not well understood. Therefore, we investigated anti-proliferative effects, and used HT29 colon tumor cells in vitro, as well as C57BL/6 mice exposed to intra-rectal treatment with the carcinogen N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) as models. Fluoxetine increased the percentage of HT29 cells in the G(0)/G(1) phase of cell-cycle, and the expression of p27 protein. This was not related to an induction of apoptosis, reactive oxygen species or DNA damage. In vivo, fluoxetine reduced the development of MNNG-induced dysplasia and vascularization-related dysplasia in colon tissue, which was analyzed by histopathological techniques. An anti-proliferative potential of fluoxetine was observed in epithelial and stromal areas. It was accompanied by a reduction of VEGF expression and of the number of cells with angiogenic potential, such as CD133, CD34, and CD31-positive cell clusters. Taken together, our findings suggest that fluoxetine treatment targets steps of early colon carcinogenesis. This confirms its protective potential, explaining at least partially the lower colon cancer risk under antidepressant therapy.

Brazilian blood donation eligibility criteria for dermatologic patients

A focused and commented review on the impact of dermatologic diseases and interventions in the solidary act of donating blood is presented to dermatologists to better advise their patients. This is a review of current Brazilian technical regulations on hemotherapeutic procedures as determined by Ministerial Directive #1353/2011 by the Ministry of Health and current internal regulations of the Hemotherapy Center of Ribeirão Preto, a regional reference center in hemotherapeutic procedures. Criteria for permanent inaptitude: autoimmune diseases (>1 organ involved), personal history of cancer other than basal cell carcinoma, severe atopic dermatitis or psoriasis, pemphigus foliaceus, porphyrias, filariasis, leprosy, extra pulmonary tuberculosis or paracoccidioidomycosis, and previous use of etretinate. Drugs that impose temporary ineligibility: other systemic retinoids, systemic corticosteroids, 5-alpha-reductase inhibitors, vaccines, methotrexate, beta-blockers, minoxidil, anti-epileptic, and anti-psychotic drugs. Other conditions that impose temporary ineligibility: occupational accident with biologic material, piercing, tattoo, sexually transmitted diseases, herpes, and bacterial infections, among others. Discussion: Thalidomide is currently missing in the teratogenic drugs list. Although finasteride was previously considered a drug that imposed permanent inaptitude, according to its short halflife current restriction of 1 month is still too long. Dermatologists should be able to advise their patients about proper timing to donate blood, and discuss the impact of drug withdrawal on treatment outcomes and to respect the designated washout periods.

Modulation of epidermial growth factor receptor signaling in colon adenocarcinoma

The use of agents targeting EGFR represents a new frontier in colon cancer therapy. Among these, monoclonal antibodies (mAbs) and EGFR tyrosine kinase inhibitors (TKIs) seemed to be the most promising. However they have demonstrated low utility in therapy, the former being effective at toxic doses, the latter resulting inefficient in colon cancer. This thesis work presents studies on a new EGFR inhibitor, FR18, a molecule containing the same naphtoquinone core as shikonin, an agent with great anti-tumor potential. In HT-29, a human colon carcinoma cell line, flow cytometry, immunoprecipitation, and Western blot analysis, confocal spectral microscopy have demonstrated that FR18 is active at concentrations as low as 10 nM, inhibits EGF binding to EGFR while leaving unperturbed the receptor kinase activity. At concentration ranging from 30 nM to 5 μM, it activates apoptosis. FR18 seems therefore to have possible therapeutic applications in colon cancer. In addition, surface plasmon resonance (SPR) investigation of the direct EGF/EGFR complex interaction using different experimental approaches is presented. A commercially available purified EGFR was immobilised by amine coupling chemistry on SPR sensor chip and its interaction to EGF resulted to have a KD = 368 ± 0.65 nM. SPR technology allows the study of biomolecular interactions in real-time and label-free with a high degree of sensitivity and specificity and thus represents an important tool for drug discovery studies. On the other hand EGF/EGFR complex interaction represents a challenging but important system that can lead to significant general knowledge about receptor-ligand interactions, and the design of new drugs intended to interfere with EGFR binding activity.

Design of nanoparticle systems with antimicrobial properties

Infektiöse Komplikationen im Zusammenhang mit Implantaten stellen einen Großteil aller Krankenhausinfektionen dar und treiben die Gesundheitskosten signifikant in die Höhe. Die bakterielle Kolonisation von Implantatoberflächen zieht schwerwiegende medizinische Konsequenzen nach sich, die unter Umständen tödlich verlaufen können. Trotz umfassender Forschungsaktivitäten auf dem Gebiet der antibakteriellen Oberflächenbeschichtungen ist das Spektrum an wirksamen Substanzen aufgrund der Anpassungsfähigkeit und Ausbildung von Resistenzen verschiedener Mikroorganismen eingeschränkt. Die Erforschung und Entwicklung neuer antibakterieller Materialien ist daher von fundamentaler Bedeutung.rnIn der vorliegenden Arbeit wurden auf der Basis von Polymernanopartikeln und anorganischen/polymeren Verbundmaterialien verschiedene Systeme als Alternative zu bestehenden antibakteriellen Oberflächenbeschichtungen entwickelt. Polymerpartikel finden Anwendung in vielen verschiedenen Bereichen, da sowohl Größe als auch Zusammensetzung und Morphologie vielseitig gestaltet werden können. Mit Hilfe der Miniemulsionstechnik lassen sich u. A. funktionelle Polymernanopartikel im Größenbereich von 50-500 nm herstellen. Diese wurde im ersten System angewendet, um PEGylierte Poly(styrol)nanopartikel zu synthetisieren, deren anti-adhesives Potential in Bezug auf P. aeruginosa evaluiert wurde. Im zweiten System wurden sog. kontakt-aktive kolloide Dispersionen entwickelt, welche bakteriostatische Eigenschaften gegenüber S. aureus zeigten. In Analogie zum ersten System, wurden Poly(styrol)nanopartikel in Copolymerisation in Miniemulsion mit quaternären Ammoniumgruppen funktionalisiert. Als Costabilisator diente das zuvor quaternisierte, oberflächenaktive Monomer (2-Dimethylamino)ethylmethacrylat (qDMAEMA). Die Optimierung der antibakteriellen Eigenschaften wurde im nachfolgenden System realisiert. Hierbei wurde das oberflächenaktive Monomer qDMAEMA zu einem oberflächenaktiven Polyelektrolyt polymerisiert, welcher unter Anwendung von kombinierter Miniemulsions- und Lösemittelverdampfungstechnik, in entsprechende Polyelektrolytnanopartikel umgesetzt wurde. Infolge seiner oberflächenaktiven Eigenschaften, ließen sich aus dem Polyelektrolyt stabile Partikeldispersionen ohne Zusatz weiterer Tenside ausbilden. Die selektive Toxizität der Polyelektrolytnanopartikel gegenüber S. aureus im Unterschied zu Körperzellen, untermauert ihr vielversprechendes Potential als bakterizides, kontakt-aktives Reagenz. rnAufgrund ihrer antibakteriellen Eigenschaften wurden ZnO Nanopartikel ausgewählt und in verschiedene Freisetzungssysteme integriert. Hochdefinierte eckige ZnO Nanokristalle mit einem mittleren Durchmesser von 23 nm wurden durch thermische Zersetzung des Precursormaterials synthetisiert. Durch die nachfolgende Einkapselung in Poly(L-laktid) Latexpartikel wurden neue, antibakterielle und UV-responsive Hybridnanopartikel entwickelt. Durch die photokatalytische Aktivierung von ZnO mittels UV-Strahlung wurde der Abbau der ZnO/PLLA Hybridnanopartikel signifikant von mehreren Monaten auf mehrere Wochen verkürzt. Die Photoaktivierung von ZnO eröffnet somit die Möglichkeit einer gesteuerten Freisetzung von ZnO. Im nachfolgenden System wurden dünne Verbundfilme aus Poly(N-isopropylacrylamid)-Hydrogelschichten mit eingebetteten ZnO Nanopartikeln hergestellt, die als bakterizide Oberflächenbeschichtungen gegen E. coli zum Einsatz kamen. Mit minimalem Gehalt an ZnO zeigten die Filme eine vergleichbare antibakterielle Aktivität zu Silber-basierten Beschichtungen. Hierbei lässt sich der Gehalt an ZnO relativ einfach über die Filmdicke einstellen. Weiterhin erwiesen sich die Filme mit bakteriziden Konzentrationen an ZnO als nichtzytotoxisch gegenüber Körperzellen. Zusammenfassend wurden mehrere vielversprechende antibakterielle Prototypen entwickelt, die als potentielle Implantatbeschichtungen auf die jeweilige Anwendung weiterhin zugeschnitten und optimiert werden können.

Untersuchungen zum Einfluss des HMG-CoA-Reduktase-Inhibitors Lovastatin auf die Toxizität ionisierender Strahlung sowie des Anthrazyklinderivats Doxorubicin im Mausmodell

Hintergund: HMG-CoA-Reduktase-Inhibitoren (Statine) sind klinisch etablierte Cholesterinsenker. Über die Inhibition der intrinsischen Cholesterinbiosynthese hinaus zeigen sie sogenannte pleiotrope biologische Effekte. Ein Großteil dieser Wirkungen wird auf die Inhibition kleiner Ras homologer GTPasen (Rho GTPasen) zurückgeführt. In vitro schützt das Statinderivat Lovastatin (Lova) primäre humane Endothelzellen vor der Zytotoxizität von ionisierender Strahlung (IR) und dem Krebsmedikament Doxorubicin (Doxo). Zielsetzung: Die Relevanz dieser Befunde für ein in vivo Mausmodell sollte in der vorliegenden Arbeit überprüft werden. Dafür wurden BALB/c-Mäuse mit IR oder Doxo behandelt und der Einfluss einer Kobehandlung mit Lova auf verschiedene Toxizitätsendpunkte untersucht (24 h nach einer einzelnen hohen Dosis IR (i), 14 Tage nach zwei geringen Dosen IR (ii), 48 h nach einer einzelnen hohen Dosis Doxo (iii), sowie 8 Tage nach drei niedrigen Dosen Doxo (iv)). Eine mögliche gleichzeitige Protektion von Tumorzellen durch die Statingabe wurde in einem Xenotransplantationsexperiment überprüft (v), in dem das gleiche Behandlungsschema wie bei iv angewendet wurde. Ergebnisse: Es konnte gezeigt werden, dass eine Statinbehandlung Normalgewebe vor Doxo- und IR-induzierter Toxizität schützt, ohne gleichzeitig protektiv auf transformierte Zellen zu wirken. Dieser Effekt ist wahrscheinlich von einer Inhibition der kleinen GTPasen Rac1 und RhoA abhängig und einer daraus folgenden Modifizierung der DNA-Schadensantwort. i: Die Statinvorbehandlung der Mäuse hatte keinen Einfluss auf die Bildung von initialen IR-induzierten DNA-Doppelstrangbrüchen (DSB) in der Leber. Die Lova-Behandlung wirkte sich jedoch auf IR-induzierte Stressantworten aus, was sich in einer Minderung der Expression von Inflammations- und Fibrosesurrogatmarkern in Leber und Darm widerspiegelte. ii: In der Lunge der Tiere wurde ein Anstieg von molekularen Inflammations- und Fibrosesurrogatmarkern detektiert, der bei Statinkobehandlung ausblieb. Zudem verhinderte die Kobehandlung mit Lova eine IR-induzierte Abnahme der Thrombozytenzahl, ohne sich auf die durch IR verringerte Leukozytenzahl im Blut auszuwirken. iii: Die Verabreichung einer hohen Dosis Doxo induzierte DSB-Formation in der Leber. Die Statinvorbehandlung reduzierte deren Menge um ca. 50 %. Dieser genoprotektive Effekt war unabhängig von der Entstehung reaktiver Sauerstoffspezies sowie einer Änderung des Doxo-Imports oder Exports. Die Expression von proinflammatorischen und profibrotischen Genen fiel besonders in der Leber und im Herzen durch die Lova-Kobehandlung geringer aus, als in der nur mit Doxo behandelten Gruppe. Zudem verringerte Lova die durch Doxo induzierte Hochregulation von für den AP1-Komplex kodierenden Genen sowie von Zellzykluskontrollfaktoren. Die Lova-Vorbehandlung führte darüber hinaus im Herzen zu einem reduzierten mRNA-Spiegel der Topoisomerasen II α und β. iv: Es konnten schwere Herz- und Leberschäden detektiert werden (gemessen an Gldh-, Gpt- sowie cTn-I-Serumkonzentrationen), die bei einer Kobehandlung mit dem Statin nicht auftraten. Die Lova-Kobehandlung verhinderte außerdem eine durch die Doxo-Behandlung verringerte Leukozytenzahl. Molekulare Marker für frühe fibrotische Ereignisse, sowie für Inflammation und Hypertrophie waren in der Leber und im Herzen nach der Doxo-Behandlung erhöht. Das Statin war auch hier in der Lage, diese toxischen Wirkungen des Anthrazyklins zu mindern. Auch die Doxo-induzierte Expression von Surrogatmarkern für Zellantworten auf oxidativen Stress wurde in der Leber abgeschwächt. In der Leber und im Herzen wiesen die mit Doxo behandelten Tiere höhere mRNA Spiegel von an Zellzykluskontrolle beteiligten Faktoren sowie von DNA-Reparatur und Fremdstoffmetabolismus assoziierten Genen auf. Am stärksten wurde die Expression von Topoisomerase II alpha - ein molekularer Marker für Zellproliferation und bedeutsame Zielstruktur von Doxo - in der Leber hochreguliert. Die Statin-Kobehandlung verhinderte all diese Doxo-induzierten Expressionsänderungen. Im Gegensatz zur Leber wurde die Top2a-mRNA Menge im Herzen durch die Doxo-Applikation reduziert. Auch hier bewirkte die Kobehandlung mit dem Statin, dass die Expression nahe dem Kontrollniveau blieb. v: Die Kobehandlung mit Lova führte zu keinem Schutz der Tumorzellen vor Doxo, sondern erhöhte sogar dessen antineoplastisches Potential.rnFazit: Die Erkenntnisse aus vorhergegangenen in vitro Versuchen konnten zum großen Teil auf die in vivo Situation im Mausmodell übertragen werden. Sie stehen im Einklang mit Ergebnissen anderer Gruppen, welche die Inhibition kleiner GTPasen mit einer geringeren, durch zytotoxische Substanzen induzierten, Inflammation und Fibrose korrelieren konnten. Eine Kobehandlung mit Lova während einer Krebstherapie erscheint somit als vielversprechende Möglichkeit Doxo- oder IR-induzierte Nebenwirkungen auf Normalgewebe zu mildern.

In vitro characterization of human AML-reactive CTL clones generated from the naive subset of healthy donors and adoptive transfer into leukemia-engrafted NSG mice

Acute myeloid leukemia (AML) is a very aggressive cancer of the hematopoietic system. Chemotherapy and immunotherapeutical approaches including hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) and donor lymphocyte infusion (DLI) are the only curative options available. The beneficial graft-versus-leukemia (GVL) effect of cellular immunotherapy is mostly mediated by donor-derived CD8+ T lymphocytes that recognize minor histocompatibility antigens (mHags) and leukemia-associated antigens (LAAs) presented on the surface of AML blasts (Falkenburg et al. 2008; Kolb 2008). A main complication is graft-versus-host disease (GVHD) that can be induced when cytotoxic T lymphocytes (CTLs) recognize broadly expressed antigens. To reduce the risk of GVHD, specific allogeneic T-cell therapy inducing selective GVL responses could be an option (Barrett &amp; Le Blanc 2010; Parmar et al. 2011; Smits et al. 2011). This requires efficient in vitro strategies to generate AML-reactive T cells with an early differentiation phenotype as well as vigorous effector functions and humanized mouse models to analyze the anti-leukemic potential of adoptively transferred T cells in vivo. In this study, AML-reactive CTL clones and oligoclonal T-cell lines could be reliably generated from the naive subset of healthy HLA-class I-identical donors by stimulation with primary AML blasts in mini-mixed-lymphocyte / leukemia cultures (MLLCs) in eight different patient / donor pairs. These CTLs were promising candidates for cellular immunotherapy because of their relatively early differentiation phenotype and strong proliferative and lytic capabilities. The addition of the common γ-chain cytokine IL-21 to the stimulation protocol enabled more precursors to develop into potent leukemia-reactive CTLs, presumably by its beneficial effects on cell survival and antigen-specific proliferation during the first weeks of cultures. It also strengthened the early-stage phenotype. Three long-term cultured CTLs exemplarily transferred into leukemia-engrafted immunodeficient NSG mice mediated a significant reduction of the leukemic burden after a single transfusion. These results demonstrate that CTL clones with reactivity to patient-derived AML blasts can be isolated from the naive compartment of healthy donors and show potent anti-leukemic effects in vivo. The herein described allo-MLLC approach with in vitro “programmed” naive CTL precursors independent of a HSCT setting is a valuable alternative to the conventional method of isolating in vivo primed donor CTLs out of patients after transplantation (Kloosterboer et al. 2004; Warren et al. 2010). This would make leukemia-reactive CTLs already available at the time point of HSCT, when residual leukemia disease is minimal and the chances for complete leukemia eradication are high. Furthermore, leukemia-reactive CTLs effectively expanded by this in vitro protocol can be used as screening populations to identify novel candidate LAAs and mHags for antigen-specific immunotherapy.

Analysis and mapping of CACNB4, CHRNA1, KCNJ3, SCN2A and SPG4, physiological candidate genes for porcine congenital progressive ataxia and spastic paresis

The cause of porcine congenital progressive ataxia and spastic paresis (CPA) is unknown. This severe neuropathy manifests shortly after birth and is lethal. The disease is inherited as a single autosomal recessive allele, designated cpa. In a previous study, we demonstrated close linkage of cpa to microsatellite SW902 on porcine chromosome 3 (SSC3), which corresponds syntenically to human chromosome 2. This latter chromosome contains ion channel genes (Ca(2+), K(+) and Na(+)), a cholinergic receptor gene and the spastin (SPG4) gene, which cause human epilepsy and ataxia when mutated. We mapped porcine CACNB4, KCNJ3, SCN2A and CHRNA1 to SSC15 and SPG4 to SSC3 with the INRA-Minnesota porcine radiation hybrid panel (IMpRH) and we sequenced the entire open reading frames of CACNB4 and SPG4 without finding any differences between healthy and affected piglets. An anti-epileptic drug treatment with ethosuximide did not change the severity of the disease, and pigs with CPA did not exhibit the corticospinal tract axonal degeneration found in humans suffering from hereditary spastic paraplegia, which is associated with mutations in SPG4. For all these reasons, the hypothesis that CACNB4, CHRNA1, KCNJ3, SCN2A or SPG4 are identical with the CPA gene was rejected.

FTY720 suppresses interleukin-1beta-induced secretory phospholipase A2 expression in renal mesangial cells by a transcriptional mechanism

BACKGROUND AND PURPOSE: FTY720 is a potent immunomodulatory prodrug that is converted to its active phosphorylated form by a sphingosine kinase. Here we have studied whether FTY720 mimicked the action of sphingosine-1-phosphate (S1P) and exerted an anti-inflammatory potential in renal mesangial cells. EXPERIMENTAL APPROACH: Prostaglandin E(2) (PGE(2)) was quantified by an enzyme-linked immunosorbent-assay. Secretory phospholipase A(2) (sPLA(2)) protein was detected by Western blot analyses. mRNA expression was determined by Northern blot analysis and sPLA(2)-promoter activity was measured by a luciferase-reporter-gene assay. KEY RESULTS: Stimulation of cells for 24 h with interleukin-1beta (IL-1beta) is known to trigger increased PGE(2) formation which coincides with an induction of the mRNA for group-IIA-sPLA(2) and protein expression. FTY720 dose-dependently suppressed IL-1beta-induced IIA-sPLA(2) protein secretion and activity in the supernatant. This effect is due to a suppression of cytokine-induced sPLA(2) mRNA expression which results from a reduced promoter activity. As a consequence of suppressed sPLA(2) activity, PGE(2) formation is also reduced by FTY720. Mechanistically, the FTY720-suppressed sPLA(2) expression results from an activation of the TGFbeta/Smad signalling cascade since inhibition of the TGFbeta receptor type I by a specific kinase inhibitor reverses the FTY720-mediated decrease of sPLA(2) protein expression and sPLA(2) promoter activity. CONCLUSIONS AND IMPLICATIONS: In summary, our data show that FTY720 was able to mimic the anti-inflammatory activity of TGFbeta and blocked cytokine-triggered sPLA(2) expression and subsequent PGE(2) formation. Thus, FTY720 may exert additional in vivo effects besides the well reported immunomodulation and its anti-inflammatory potential should be considered.