Detecci��n e identificaci��n de los metabolitos de la T-514 del g��nero karwinskia in vivo e in vitro

Tesis (Doctorado en Ciencias con Especialidad en Farmacolog��a y Toxicolog��a) UANL

Efecto de la intoxicaci��n cr��nica con ars��nico sobre diferentes mecanismos inmunitarios en ratones BALB

Tesis (Doctorado en Ciencias con Especialidad en Microbiolog��a M��dica) UANL

Evaluaci��n del potencial genot��xico y citot��xico de campos electromagn��ticos de 60 Hz en c��lulas de mam��fero

Tesis (Doctorado en Ciencias Biol��gicas con Especialidad en Biolog��a Celular y Gen��tica) UANL

Evaluaci��n del efecto de la administraci��n transplacentaria y postnatal de ars��nico sobre el cuerpo estriado de la rata .html Martha Eugenia Santoyo P��rez.

Tesis (Doctor en Ciencias con Orientaci��n terminal en Morfolog��a) U.A.N.L., 2006

Verificaci��n de los niveles de atenuaci��n de dos tipos de protectores auditivos tipo copa en trabajadores de una empresa del sector Hidrocarburos. Barrancabermeja-Colombia 2013.

El presente estudio se realiz�� con el fin de verificar los niveles de atenuaci��n de dos tipos de protectores auditivos tipo copa, bajo condiciones reales de operaci��n en una empresa del sector hidrocarburos en Colombia. Esta verificaci��n se llev�� a cabo determinando las diferencias existentes entre los niveles de atenuaci��n establecidos por el fabricante (NRR Te��rico), los niveles de atenuaci��n ajustados de acuerdo a la metodolog��a propuesta por NIOSH (NRR Ajustado) y los niveles de atenuaci��n obtenidos experimentalmente (NRR Experimental). El estudio se desarroll�� sobre la evaluaci��n de los niveles equivalentes de presi��n sonora, mediante dosimetr��as de doble canal, valorando los niveles de ruido al interior y al exterior del pabell��n auditivo de forma simult��nea. Los valores obtenidos en las mediciones se ajustaron a los criterios establecidos en la norma ISO 11904 parte 1 considerando la estimaci��n de niveles de inmisi��n sonora mediante t��cnica MIRE (Microphone In a Real Ear) corregidos a condiciones de campo libre. Los resultados obtenidos permitieron establecer diferencias significativas entre los niveles de atenuaci��n te��ricos, ajustados y experimentales, aspecto que brinda oportunidades de mejora cuando se trata de seleccionar y mantener elementos de protecci��n personal auditiva como estrategia preventiva primaria en el prop��sito de la disminuci��n de la probabilidad de ocurrencia de hipoacusia neurosensorial inducida por ruido en el lugar de trabajo.

La histeria de conversi��n.

Descubrir en qu�� consiste la histeria de conversi��n. Analiza al hombre como unidad psicof��sica, expone la historia de la histeria de la conversi��n, para poder definirla y explicar los factores que pueden influir en el desencadenamiento de esta enfermedad. Despu��s describe la histeria, el comportamiento del hist��rico y explica la influencia del ambiente en la formaci��n de la neurosis. 1) El ambiente que rodea al ni��o durante la lactancia, vida preescolar y edad escolar tiene una importancia decisiva en el desarrollo de la personalidad. Tensiones emocionales cr��nicas constituyen la regla en la mayor��a de los pa��ses civilizados. Cada individuo pasa a trav��s de la vida soportando un fardo pesado de tensi��n y ansiedad que mantienen el organismo en una constante presi��n que, cuando es muy intensa y persistente, altera las funciones y produce s��ntomas a trav��s del sistema vegetativo en la mente, en los sentimientos, en la conducta o en una combinaci��n de todas estas expresiones. Es entonces cuando el individuo usa sus mecanismos de defensa para no perder la normalidad. 2) Todo el organismo responde a las fuerzas emocionales en tal forma que los disturbios pueden reproducirse en cualquier parte de nuestra biolog��a. Pueden producirse trastornos funcionales e incluso puede llegar a producir da��o anat��mico, tal como sucede en la ��lcera duodenal. 3) La forma en que una persona reacciona ante las fuerzas emocionales provenientes del ambiente, depende de su personalidad y madurez emocional. Todo esto significa que la salud y las enfermedades mentales son manifestaciones ecol��gicas entre el individuo y su ambiente. El proceso de adaptaci��n mental es influido favorable o desfavorablemente por las fuerzas emocionales y las tensiones a que estamos sometidos de manera permanente. 4) La vida es un proceso constante de ajuste a un ambiente variable. Algunos individuos se ajustan con facilidad y otros no. Esto depende de la conformaci��n biol��gica y de la personalidad del individuo y de las infinita variedad de demandas que opone el ambiente. 5) Toda persona reacciona de modo distinto a los acontecimientos, de acuerdo con sus propios est��mulos y capacidad de integraci��n. Los factores sociales son enajenantes en todos los niveles y la unidad de la persona ser�� mejor comprendida si se acepta que la misma s��lo adquiere significado y sentido en un marco de convivencia social, pol��tica y econ��mica. A la vieja patolog��a de la histeria le agregamos hoy las llamadas enfermedades de la civilizaci��n. El hombre ha hecho grandes progresos en todos los campos de la civilizaci��n, pero a costa de esclavizarse. 1) Los efectos fisiológicos del estr��s emocional sobre el sistema cardiovascular est��n bien demostrados y establecidos. Muchos de los pacientes que se presentan con s��ntomas de enfermedad cardiaca, sufren en realidad manifestaciones card��acas de ansiedad. En la sociedad actual la aglomeraci��n de seres humanos ha forzado el contacto personal a seres que no se conocen entre s��. La necesidad de interacci��n requiere ser satisfecha de manera que cada participante signifique algo como persona, nuestra sociedad provoca sentimientos de inseguridad personal y precisamente ��sta es una de las causas reconocidas en la producci��n de la histeria. 2) Un rasgo caracter��stico de nuestra sociedad es que no satisface el deseo del hombre de significaci��n personal, de modo que ��ste se siente sin importancia, aislado, es un engranaje m��s de la m��quina que forma esta nuestra sociedad de consumo que precisamente lo que hace es consumir al hombre, degradarlo y enloquecerlo. La clase de persona que llegamos a ser est�� determinada, en gran medida, por la cultura en la que nos educamos, es tan evidente esta influencia que algunos llegan a considerarla un factor todo poderoso. Debemos admitir que lo que consideramos como un ser humano individual, con su capacidad para pensar y comunicarse, con sus ideales, principios y creencias, con su percepci��n del mundo, es un producto social. La personalidad es creada por la sociedad. La gente se ve forzada a comportarse de una determinada manera, aunque su estructura de car��cter la impulsa a actuar de forma opuesta.

El movimiento es salud : deporte, ocio y tiempo libre para alumnos con necesidades educativas especiales.

Incluye las fichas de trabajo, las actas de reuniones y los resultados de la evaluaci��n

An��lise retrospectiva de fatores de risco e preditores de complica����es intraoperat��rias dos bloqueios do neuroeixo realizados na Faculdade de Medicina de Botucatu-UNESP

JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS: As altera����es cardiovasculares associadas aos bloqueios do neuroeixo apresentam interesse pela frequ��ncia com que ocorrem e porque algumas delas podem ser consideradas efeitos fisiológicos desencadeados pelo bloqueio do sistema nervoso simp��tico. O objetivo desta pesquisa foi avaliar as complica����es cardiovasculares intraoperat��rias e os fatores preditores associados aos bloqueios do neuroeixo em pacientes com idades > 18 anos submetidos a procedimentos n��o obst��tricos, em um per��odo de 18 anos, em hospital universit��rio de atendimento terci��rio-HCFMB-UNESP. M��TODO: Foi realizada an��lise retrospectiva das seguintes complica����es: hipertens��o arterial, hipotens��o arterial, bradicardia sinusal e taquicardia sinusal. Tais complica����es foram correlacionadas com t��cnica anest��sica, estado f��sico (ASA), idade, sexo e comorbidades pr��-operat��rias. Para a an��lise estat��stica, foram utilizadas o teste de Tukey para compara����es entre propor����es e regress��o log��stica. RESULTADOS: Foram avaliados 32.554 pacientes submetidos a bloqueios do neuroeixo e houve 4.109 cita����es de hipotens��o arterial, 1.107 de bradicardia sinusal, 601 de taquicardia sinusal e 466 de hipertens��o arterial no per��odo intraoperat��rio. Hipotens��o foi mais frequente nos pacientes submetidos �� anestesia subaracnoidea cont��nua (29,4%, OR = 2,39), com idades > 61 anos e do sexo feminino (OR = 1,27). CONCLUS��ES: Hipotens��o e bradicardia intraoperat��rias foram complica����es mais frequentes, sendo que a hipotens��o arterial esteve relacionada �� t��cnica anest��sica (ASC), faixa et��ria elevada e sexo feminino. Taquicardia e hipertens��o arterial podem n��o ter sido diretamente relacionadas aos bloqueios do neuroeixo.

Avalia����o da qualidade de ��leos de fritura utilizados em restaurante universit��rio

Frying is a widely used method of preparing food, because it is a very fast and convenient process, and because it provides specific characteristics of color, flavor, odor, and texture, besides having great consumer acceptance. Therefore, the interest in the physiological effects that oils heated at high temperatures can cause to the human body arises. The aim of this work was to analyze the levels of frying used oil alteration in different kinds of foods served at the university restaurant at ���Instituto de Bioci��ncias, Letras e Ci��ncias Exatas��� (IBILCE), in S��o Jos�� do Rio Preto-SP. In addition, it aims to make the restaurant aware of the good ways to fry and the commitment of providing good quality food to students and professionals of the Institute. With this purpose, determination of total polar compounds, conjugated dienoic acids, peroxide value, and fatty acid profile were analyzed. Two rapid tests were also used: 3M Fat Monitor and Oil Test kit. The results were compared with limits recommended for the disposal of oils and fats used in frying by the Brazilian Health Surveillance Agency (ANVISA), by other countries, and by other researches. Thus, it was concluded that the university restaurant provides the consumers with fried food of good quality, since none of the analyses showed results above recommended, although there is a need of improvement in the quality control of the oil used, in order to avoid unnecessary costs to the university restaurant.

Ergonom��a y bienestar para las personas sentadas : propuesta para puestos de trabajo en oficinas y veh��culos

El crecimiento sostenido de las actividades humanas, particularmente de aquellas que se realizan en postura sedente y la frecuencia de patolog��as ocasionadas por el mantenimiento de dicha postura, plantean la conveniencia del estudio del bienestar en el uso de equipamiento concebido para sentarse. El prop��sito del trabajo es lograr un conjunto de recomendaciones y una gu��a para el an��lisis del confort postural en productos y puestos de trabajo a partir del diagn��stico de los dise��os de asientos actualmente disponibles en el mercado local, en particular: sillas, taburetes, butacas de veh��culos, aplic��ndose en el estudio la metodolog��a propia de la ergonom��a.

Alimento con alto contenido de fructanos

El topinambur (Helianthus tuberosus L.) es una especie perteneciente a la familia de las Aster��ceas originaria de Am��rica del Norte. Esta especie produce tallos subterr��neos (tub��rculos) que almacenan polisac��ridos en forma de fructanos y, dentro de ��stos, la inulina es el principal carbohidrato de reserva. Este compuesto posee caracter��sticas beneficiosas en la salud al actuar como fibra dietaria, sin disminuir la absorci��n de minerales. La presencia de inulina y sus derivados, hace de los tub��rculos una buena fuente de fibra dietaria y particularmente de fibra funcional, cuya definici��n comprende a aquellos carbohidratos no digeribles aislados que tienen efectos fisiológicos beneficiosos en los seres humanos. Los objetivos de este estudio fueron: o Elaborar pur�� de alto contenido de fructanos, con variantes, a partir de tub��rculos de topinambur de variedades Roja y Blanca; o Caracterizar de forma f��sico-qu��mica los tub��rculos sin procesar y los pur��s elaborados; o Cuantificar el contenido de fructanos presente en los tub��rculos sin procesar y en los productos obtenidos luego de cada elaboraci��n; o Evaluar la aceptaci��n por parte de los consumidores del pur�� preparado, mediante una prueba de evaluaci��n sensorial. Siguiendo los objetivos, se elaboraron los pur��s, realizaron las caracterizaciones f��sico-qu��micas y cuantificaciones de fructanos en los tub��rculos y productos obtenidos, y se someti�� el preparado a una prueba sensorial afectiva con escala hed��nica. Los resultados obtenidos indican que el procesamiento de tub��rculos de topinambur para obtener pur��, no modifica sustancialmente el contenido de fructanos, y las p��rdidas asociadas al mismo var��an entre el 0% y el 16% dependiendo del ensayo. Los consumidores aceptar��an comprar el producto evaluado, si se ofreciera en el mercado a igual costo que un pur�� de papas tradicional, y no exhiben preferencia de una variedad de topinambur sobre la otra en los productos preparados. Por ello resulta viable elaborar pur�� de topinambur de variedad Roja o Blanca, el cual se considera beneficioso para la salud por su alto contenido en fructanos, cuyo valor m��nimo cuantificado fue de 7,4% en el producto preparado, considerando que el mismo ser��a aceptado por la poblaci��n.

Identification of the method to quantify soluble fibre and the effect of the source of fibre on the ileal and faecal digestibility of soluble and insoluble fibre in rabbits = Identificaci��n del m��todo para cuantificar la fibra soluble y el efecto de la fuente de fibra en la digestibilidad ileal y fecal de la fibra soluble e insoluble en conejos

La presente tesis constituye un avance en el estudio de los m��todos para cuantificar la fibra soluble y los efectos de las fracciones de fibra y las fuentes de fibra sobre la digesti��n de las diferentes fracciones de fibra (soluble e insoluble) en el conejo. Hay un efecto positivo de la fibra soluble sobre la salud intestinal de los conejos y, por ende, una reducci��n de la mortalidad en animales destetados. Pese a esto, no est�� claro si estos efectos se deben espec��ficamente a la fracci��n soluble. Por lo que los objetivos generales de esta tesis fueron: 1) comparar diferentes metodolog��as qu��micas e in vitro para cuantificar la fibra soluble y estudiar las posibles interferencias en la cuantificaci��n de la fibra soluble por las mucinas, y viceversa, 2) determinar los efectos de la fibra, el lugar de fermentaci��n, el m��todo para valorar la fibra soluble e insoluble, y la correcci��n de la fibra soluble por el contenido intestinal de mucinas sobre la digestibilidad de las distintas fracciones de la fibra y 3) evaluar los efectos individuales de las fracciones soluble e insoluble de la fibra de pulpa de remolacha y de manzana, sobre la digestibilidad de la fibra soluble e insoluble y los par��metros digestivos. Para ello se llevaron a cabo 4 estudios. En el primer estudio se compararon diferentes metodolog��as qu��micas e in vitro para valorar la fibra soluble de diferentes alimentos y se estudi�� la posible interferencia en la determinaci��n de la fibra soluble y mucinas. Para ello se utilizaron seis ingredientes (pulpa de remolacha, pectinas de pulpa de remolacha, pulpa de remolacha lavada, paja de cereal, cascarilla de girasol y lignocelulosa) y siete piensos de conejos con diferentes niveles de fibra soluble. En un primer experimento se analiz�� la fibra diet��tica total (FDT), la fibra diet��tica insoluble (FDI), la fibra diet��tica soluble (FDS), la fibra neutro detergente corregida por cenizas y prote��nas (aFNDmo-pb), y la digestibilidad in vitro 2 pasos pepsina/pancreatina (residuo corregido por cenizas y prote��na, ivMSi2) de los ingredientes y piensos. Adem��s la fibra soluble se calcul�� mediante la diferencia entre FDT-FDI (FDSFDI), FDT- ivMSi2 (FDSivMSi2), y FDT - aFNDmo-pb (FDSaFNDmo-pb). Cuando la fibra soluble se determin�� directamente como FDS o se calcul�� como FDT-FDI no se observaron diferencias (109 g/kg MS, en promedio). Sin embargo, cuando la fibra soluble se calcul�� como FDT - aFNDmo-pb su valor fue un 40% menor (153 g/kg MS. P < 0,05), mientras que la FDSFDI (124 g/kg MS) no fue diferente a ninguna de las otras metodolog��as. La correlaci��n entre los tres m��todos fue elevada (r > 0,96. P < 0,001. n = 13), pero disminuy�� o incluso desapareci�� cuando la pulpa o las pectinas de la remolacha fueron excluidas del an��lisis. En un segundo experimento, se compar�� el m��todo ivDMi2 usando crisoles (m��todo de referencia) con una modificaci��n del mismo usando bolsas ANKOM digeridas individualmente o en colectivo para simplificar la determinaci��n de la FDSivMSi2. La FDSivMSi2 no difiri�� entre los m��todos comparados. En un tercer experimento, se analiz�� la posible interferencia entre la determinaci��n de la fibra soluble y las mucinas intestinales. Se observ�� un contenido de FDT y de mucinas elevado en las muestras de pectinas de remolacha (994 y 709 g/kg MS), as�� como en el moco intestinal de conejo (571 y 739 g/kg MS) cuando se aplic�� el m��todo de mucinas por precipitaci��n con etanol. Sin embargo, despu��s de aplicar una pectinasa en el material precipitado, la cantidad de mucinas recuperadas en las muestras de pectinas de remolacha fue cercana a cero, mientras que en el moco intestinal fue similar a los resultados previos al uso de la enzima. Con los resultados de este ensayo se estimaron los carbohidratos de mucinas retenidos en los contenidos digestivos y se propuso una correcci��n para la determinaci��n de la digestibilidad de la FDT y fibra soluble. En conclusi��n, la contaminaci��n de las mucinas de la digesta con fibra soluble se soluciona usando pectinasas. El segundo estudio se centr�� en estudiar: 1) el efecto del tipo de fibra, 2) el sitio de fermentaci��n, 3) el m��todo para cuantificar fibra y 4) la correcci��n por mucinas sobre la digestibilidad de la fibra. Para ello se formularon tres piensos con diferentes niveles de fibra soluble (FDT-aFNDmo-pb). Un pienso bajo en fibra soluble (LSF. 85 g/kg DM), un pienso medio en fibra soluble (MSF. 102 g/kg DM), y un pienso alto en fibra soluble (HSF. 145 g/kg DM). Estos piensos se obtuvieron reemplazando un 50% del heno del alfalfa en el pienso MSF por una mezcla de pulpa de manzana y remolacha (HSF) o por una mezcla de cascarilla de avena y prote��na de soja (LSF). Se utilizaron 30 conejas canuladas para determinar la digestibilidad ileal y fecal. La digestibilidad cecal se calcul�� mediante diferencia entre la digestibilidad fecal e ileal. La fibra insoluble se determin�� como aFNDmo-pb, IDF, e ivMSi2, mientras que la fibra soluble se calcul�� como FDSFDI, FDSaFNDmo-pb, y FDSivMSi2. La digestibilidad de la FDT y la fibra soluble se corrigieron por las mucinas. La concentraci��n de mucinas en la digesta ileal y fecal, aumento desde el grupo LSF hasta el grupo con el pienso HSF (P < 0,01). La correcci��n por mucinas aument�� las digestibilidades de la FDT y la fibra soluble a nivel ileal, mientras que a nivel cecal las redujo. (P < 0.01). El coeficiente de digestibilidad ileal de FDT aument�� desde el grupo LSF al grupo HSF (0,12 vs. 0,281. P < 0,01), sin diferencias en el coeficiente de digestibilidad cecal (0,264), por lo que la tendencia a nivel fecal entre los grupos se mantuvo. El coeficiente de digestibilidad ileal de la fibra insoluble aumento desde el grupo con el pienso LSF al grupo con el pienso HSF (0,113 vs. 0,210. P < 0,01), sin diferencias a nivel cecal (0,139) y sin efecto del m��todo usado, resultando en una digestibilidad elevada a nivel fecal, con tendencias similares a las observadas a nivel ileal. El coeficiente de digestibilidad de la FND fue elevada en comparaci��n con la FDI o la ivMSi2 (P > 0.01). El coeficiente de la digestibilidad ileal de la fibra soluble fue mayor en el grupo LSF respecto al grupo LSF (0,436 vs. 0,145. P < 0,01) y el m��todo no afect�� a esta determinaci��n. El coeficiente de la digestibilidad cecal de la fibra soluble se redujo desde el grupo LSF hasta el grupo HSF (0,721 vs. 0,492. P < 0,05). El valor m��s bajo de digestibilidad cecal y fecal de fibra soluble fue medido con el m��todo FDSaFNDmo-pb (P < 0,01). Se observ�� una alta correlaci��n entre las digestibilidades de la fibra soluble determinada como FDSFDI, FDSaFNDmo-pb, y FDSivMSi2, por lo tanto la informaci��n proporcionada por una u otra metodolog��a fueron similares. Sin embargo, cuando se compararon con efectos fisiológicos (producci��n de mucinas y peso del ciego y pH del ciego de un trabajo previo), la FDSaFNDmo-pb globalmente mostr�� estar mejor correlacionado con estos par��metros fisiológicos. En conclusi��n, la correcci��n por mucinas es necesaria para determinar la digestibilidad ileal de la FDT y fibra soluble, mientras que la elecci��n de uno u otro m��todo es menos relevante. La inclusi��n de pulpa de manzana y remolacha incrementa la cantidad de FDT que desaparece antes de llegar al ciego. En el tercer estudio se estudi�� el efecto de la fracci��n fibrosa soluble e insoluble de la pulpa de remolacha y el m��todo de cuantificaci��n de la fibra soluble e insoluble sobre la digestibilidad de la fibra y algunos par��metros digestivos. Para ello se formularon cuatro piensos con niveles similares de fibra insoluble (315g aFNDmo-pb/kg MS) y prote��na (167 g/kg MS). El pienso control contuvo el nivel m��s bajo de fibra soluble (30,3 g/kg, con cascarilla de girasol y paja como fuente de fibra). Un segundo pienso se obtuvo mediante la sustituci��n de 60 g de almid��n/kg del pienso control por pectinas de remolacha (82,9 g fibra soluble/kg MS). Los otras dos piensos resultaron de la sustituci��n parcial de las fuentes de fibra del pienso control por la fracci��n insoluble de la pulpa de remolacha y la pulpa de remolacha entera (42.2 y 82.3 g fibra soluble/kg MS, respectivamente). Cincuenta y seis conejos en cebo (14/pienso), de 2,4 ��� 0.21 kg de peso, fueron usados para determinar la digestibilidad ileal y fecal de la FDT, FDI, aFNDmo-pb, FDSFDI, y FDSaFNDmo-pb. La concentraci��n de mucinas en el ��leon y heces se utilizaron para corregir la digestibilidad de la FDT y fibra soluble. Tambi��n se midi�� el peso de diferentes segmentos del tracto digestivo y el pH del contenido digestivo. Los conejos alimentados con el pienso de fibra insoluble de pulpa de remolacha mostraron los consumos m��s bajos con respecto a los dem��s grupos (124 vs. 139 g/d, respectivamente. P < 0,05). El flujo de mucinas ileales fue m��s alto (P < 0.05) en el grupo alimentado con el pienso de pectinas de remolacha (9,0 g/d en promedio) que los del grupo control (4,79 g/d), mostrando los otros dos grupos valores intermedios, sin detectarse diferencias a nivel fecal. La digestibilidad ileal de la FDT (corregida por mucinas) y la fibra insoluble no se vieron afectadas por el tipo de pienso. El m��todo usado para determinar la fibra insoluble afect�� su digestibilidad ileal (0,123 para FDI vs. 0,108 para aFNDmo-pb. P < 0.01). De todas formas, los m��todos no afectaron al c��lculo de la fibra fermentada antes del ciego (4,9 g/d en promedio). Los conejos alimentados con el pienso de pulpa de remolacha y con el pienso con la fracci��n insoluble de la pulpa de remolacha mostraron las digestibilidades fecales m��s altas de la fibra insoluble (0,266 en promedio vs. 0,106 del grupo control), mientras que en los animales del pienso con pectinas esta digestibilidad fue un 47% mayor respecto al pienso control (P < 0,001). La digestibilidad fecal de la fibra insoluble fue un 20% m��s alta cuando se us�� la FND en lugar de FDI para determinarla (P < 0.001). Esto hizo variar la cantidad de fibra insoluble fermentada a lo largo del tracto digestivo (9,5 �� 7,5 g/d cuando fue calculada como FDI o aFNDmo-pb, respectivamente. P < 0,001). Las digestibilidades ileales de la fibra soluble fueron positivas cuando los an��lisis de fibra soluble de los contenidos ileales fueron corregidos por mucinas, (P < 0,001) excepto para la digestibilidad ileal de la FDSIDF del grupo control. Una vez corregidas por mucinas, los conejos alimentados con los piensos que contuvieron la fracci��n soluble de la pulpa de remolacha (pienso de pectina y pulpa de remolacha) mostraron una mayor digestibilidad ileal de la fibra soluble, respecto al grupo control (0,483 vs. -0,010. P = 0.002), mientras que el grupo del pienso de fibra insoluble de pulpa de remolacha mostr�� un valor intermedio (0,274). La digestibilidad total de la fibra soluble fue similar entre todos los grupos (0.93). Los conejos alimentados con pulpa de remolacha y su fracci��n insoluble mostraron los pesos relativos m��s altos del est��mago respecto a los del pienso control y de pectinas (11 y 56 % respectivamente; P < 0,05). Por otra parte, el peso relativo del ciego aument�� en los animales que consumieron tanto la fracci��n soluble como insoluble de la pulpa de remolacha, siendo un 16% m��s pesados (P < 0,001) que el grupo control. El pH del contenido cecal fue m��s bajo en los animales del grupo de pulpa de remolacha que en los del grupo control (5,64 vs. 6,03; P < 0,001), mientras que los del grupo de pectinas y de fibra insoluble de pulpa de remolacha mostraron valores intermedios. En conclusi��n, el efecto positivo de la pulpa de remolacha en el flujo de mucinas a nivel ileal se debe a la fracci��n soluble e insoluble de la pulpa de remolacha. La mitad de la fibra soluble de la pulpa de remolacha desaparece antes de llegar al ciego, independientemente si esta proviene de pectinas puras o de la pulpa de remolacha. El pH cecal esta mejor correlacionado con la cantidad de FDT que desaparece antes del ciego m��s que con la que se degrada en el ciego. En el ��ltimo estudio se estudiaron los efectos de la fibra soluble e insoluble de la pulpa de manzana sobre la digestibilidad de la fibra y algunos par��metros digestivos. Cuatro dietas fueron formuladas con niveles similares de fibra insoluble (aFNDmo-pb 32,4%) y prote��na (18,6% ambos en base seca). El pienso control contuvo el nivel m��s bajo de fibra soluble (46 g de fibra soluble/kg, con cascarilla de girasol y paja de cereales como la fuentes de fibra). Un segundo pienso fue obtenido mediante la sustituci��n de 60 g de almid��n/kg del pienso control por pectinas de manzana (105 g fibra soluble/kg). Los otros dos piensos se obtuvieron por la substituci��n de parte de las fuentes de fibra del pienso control por pulpa de manzana o pulpa de manzana despectinizada (93 y 71 g de fibra soluble/kg, respectivamente). La digestibilidad fecal fue determinada en 23 conejos/pienso con 1.68 �� 0.23 kg de peso vivo, los cuales fueron sacrificados a los 60 d edad para recolectar su contenido digestivo para determinar digestibilidad ileal y otros par��metros digestivos. La fibra soluble de manzana (pectinas y pulpa entera) estimul�� el flujo ileal de mucinas (P = 0,002), pero no asi la pulpa despectinizada. La correcci��n por mucinas increment�� la digestibilidad de la FDT y la fibra soluble a nivel fecal, y especialmente a nivel ileal. Cerca de la mitad de la fibra soluble proveniente de los piensos con cualquiera de las fracciones de la pulpa de manzana fue degradada a nivel ileal, sin mostrar diferencias entre los grupos (46 y 86% en promedio a nivel ileal y fecal respectivamente). La inclusi��n de pulpa despectinizada de manzana mejor�� la digestibilidad de la FND a nivel fecal (P < 0,05) pero no a nivel ileal. El contenido cecal de los conejos alimentados con la pulpa de manzana tuvieron el pH cecal m��s ��cido que los del pienso control (5,55 vs. 5,95. P < 0,001), mientras que los animales con el pienso de pectinas de manzana y de pulpa de manzana despectinizada mostraron valores intermedios. En conclusi��n los efectos positivo de la pulpa de manzana en el flujo de mucinas se debi�� principalmente a la fracci��n soluble de la pulpa de manzana. La mitad de la fibra soluble fue degradada antes del ciego independientemente de si esta provino de las pectinas o de la pulpa de manzana. El pH cecal estuvo mejor correlacionado con la cantidad de FDT fermentada en todo el tracto digestivo y antes de llegar al ciego que con la que se degrad�� en el ciego. Al integrar los resultados de los estudio 2, 3 y 4 se concluy�� que la correcci��n de mucinas de los contenidos digestivos al determinar FDT y fibra soluble es necesaria para ajustar los c��lculos de su digestibilidad. Esta correcci��n es mucho m��s importante a nivel ileal y en dietas bajas en fibra soluble. Por otra parte, la FDT desapareci�� en proporciones importantes antes de llegar al ciego, especialmente en piensos que contienen pulpa de remolacha o de manzana o alguna fracci��n soluble o insoluble de las mismas y estas diferencias observadas entre los piensos a nivel ileal se correlacionaron mejor con el pH cecal, lo que indicar��a que la FDT se solubiliz�� antes de llegar al ciego y una vez en est�� ferment��. Estos resultados implican que determinar la fibra soluble como FDSaFNDmo-pb es la mejor opci��n y que en la determinaci��n de la digestibilidad de la FDT y fibra soluble se debe considerar la correcci��n por mucinas especialmente a nivel ileal y en piensos bajos en fibra soluble. ABSTRACT The present thesis constitutes a step forward in advancing the knowledge of the methods to quantify soluble fibre and the effects of the fibre fractions and source of fibre on the site the digestion of different fractions of fibre (soluble and insoluble) in the rabbit. There is a positive effect of soluble fibre on rabbit digestive health and therefore on the reduction of mortality in weaning rabbits. Nevertheless, it is no so clear that the effects of soluble fibre on rabbits are due particularly to this fraction. This thesis aims: 1) to compare the quantification of soluble fibre in feeds using different chemical and in vitro approaches, and to study the potential interference between soluble fibre and mucin determinations, 2) to identify the effects of type of fibre, site of fermentation, method to quantify insoluble and soluble fibre, and correction of the intestinal soluble fibre content for intestinal mucin on the digestibility of fibre fractions and 3) to evaluate the individual effect of soluble and insoluble fibre from sugar beet pulp and apple pulp on ileal and faecal soluble and insoluble digestibility and digestive traits. These objectives were developed in four studies: The first study compared the quantification of soluble fibre in feeds using different chemical and in vitro approaches, and studied the potential interference between soluble fibre and mucin determinations. Six ingredients, sugar beet pulp (SBP), SBP pectins, insoluble SBP, wheat straw, sunflower hulls and lignocellulose, and seven rabbit diets, differing in soluble fibre content, were evaluated. In experiment 1, ingredients and diets were analysed for total dietary fibre (TDF), insoluble dietary fibre (IDF), soluble dietary fibre (SDF), aNDFom (corrected for protein, aNDFom-cp) and 2-step pepsin/pancreatin in vitro DM indigestibility (corrected for ash and protein, ivDMi2). Soluble fibre was estimated by difference using three procedures: TDF - IDF (SDFIDF), TDF - ivDMi2 (SDFivDMi2), and TDF - aNDFom-cp (SDFaNDFom-cp). Soluble fibre determined directly (SDF) or by difference, as SDFivDMi2 were not different (109 g/kg DM, on average). However, when it was calculated as SDFaNDFom-cp the value was 40% higher (153 g/kg DM, P < 0.05), whereas SDFIDF (124 g/kg DM) did not differ from any of the other methods. The correlation between the four methods was high (r ��� 0.96. P ��� 0.001. n = 13), but it decreased or even disappeared when SBP pectins and SBP were excluded and a lower and more narrow range of variation of soluble fibre was used. In experiment 2, the ivDMi2 using crucibles (reference method) were compared to those made using individual or collective ankom bags in order to simplify the determination of SDFivDMi2. The ivDMi2 was not different when using crucibles or individual or collective ankom bags. In experiment 3, the potential interference between soluble fibre and intestinal mucin determinations was studied using rabbit intestinal raw mucus, digesta and SBP pectins, lignocelluloses and a rabbit diet. An interference was observed between the determinations of soluble fibre and crude mucin, as the content of TDF and apparent crude mucin were high in SBP pectins (994 and 709 g/kg DM) and rabbit intestinal raw mucus (571 and 739 g/kg DM). After a pectinase treatment, the coefficient of apparent mucin recovery of SBP pectins was close to zero, whereas that of rabbit mucus was not modified. An estimation of the crude mucin carbohydrates retained in digesta TDF is proposed to correct TDF and soluble fibre digestibility. In conclusion, the values of soluble fibre depend on the methodology used. The contamination of crude mucin with soluble fibre is avoided using pectinase. The second study focused on the effect of type of fibre, site of fermentation, method for quantifying insoluble and soluble dietary fibre, and their correction for intestinal mucin on fibre digestibility. Three diets differing in soluble fibre were formulated (85 g/kg DM soluble fibre, in the low soluble fibre [LSF] diet; 102 g/kg DM in the medium soluble fibre [MSF] diet; and 145 g/kg DM in the high soluble fibre [HSF] diet). They were obtained by replacing half of the dehydrated alfalfa in the MSF diet with a mixture of beet and apple pulp (HSF diet) or with a mix of oat hulls and soybean protein (LSF diet). Thirty rabbits with ileal T-cannulas were used to determine total tract apparent digestibility (CTTAD) and ileal apparent digestibility (CIAD). Caecal digestibility was determined by difference between CTTAD and CIAD. Insoluble fibre was measured as aNDFom-cp, IDF, and ivDMi2, whereas soluble fibre was calculated as SDFaNDFom-cp, SDFIDF, SDFivDMi2. The intestinal mucin content was used to correct the TDF and soluble fibre digestibility. Ileal and faecal concentration of mucin increased from the LSF to the HSF diet group (P < 0.01). Once corrected for intestinal mucin, The CTTAD and CIAD of TDF and soluble fibre increased whereas caecal digestibility decreased (P < 0.01). The CIAD of TDF increased from the LSF to the HSF diet group (0.12 vs. 0.281. P < 0.01), with no difference in the caecal digestibility (0.264), resulting in a higher CTTAD from the LSF to the HSF diet group (P < 0.01). The CIAD of insoluble fibre increased from the LSF to the HSF diet group (0.113 vs. 0.21. P < 0.01), with no difference in the caecal digestibility (0.139) and no effect of fibre method, resulting in a higher CTTAD for rabbits fed the HSF diet compared with the MSF and LSF diets groups (P < 0.01). The CTTAD of aNDFom-cp was higher compared with IDF or ivDMi2 (P < 0.01). The CIAD of soluble fibre was higher for the HSF than for the LSF diet group (0.436 vs. 0.145. P < 0.01) and fibre method did not affect it. Caecal soluble fibre digestibility decreased from the LSF to the HSF diet group (0.721 vs. 0.492. P < 0.05). The lowest caecal and faecal soluble fibre digestibility was measured using SDFaNDFom-cp (P < 0.01). There was a high correlation among the digestibilities of soluble fibre measured as SDFaNDFom-cp, SDFIDF, and SDFivDMi2. Therefore, these methodologies provide similar information. However, the method that seems to be globally better related to the physiological traits (ileal flow of mucins, and relative weight of the caecum and caecal pH from previous work) was the SDFaNDFom-cp. In conclusion, a correction for intestinal mucin is necessary for ileal TDF and soluble fibre digestibility whereas the selection of the fibre method has a minor relevance. The inclusion of sugar beet and apple pulp increased the amount of TDF fermented in the small intestine. The third study examined the effect of fibre fractions of sugar beet pulp (SBP) and the method for quantifying soluble and insoluble fibre on soluble and insoluble fibre digestibility and digestive traits. Four diets were formulated with similar level of insoluble fibre (aNDFom-cp: 315 g/kg DM) and protein (167 g/kg DM). Control diet contained the lowest level of soluble fibre (30.3 g/kg DM, including sunflower hulls and straw as sole sources of fibre). A second diet was obtained by replacing 60 g starch/kg of control diet with SBP pectins (82.9 g soluble fibre/kg DM). Two more diets were obtained by replacing part of the fibrous sources of the control diet with either insoluble SBP fibre or SBP (42.2 and 82.3 g soluble fibre/kg DM, respectively). Fifty six (14/diet) rabbits weighing 2.40 ��� 0.213 kg were used to determine faecal and ileal digestibility of total dietary fibre (TDF), insoluble dietary fibre (IDF), neutral detergent fibre corrected for ash and CP (aNDFom-cp) and soluble fibre estimated as SDFaNDFom-cp and SDFIDF. Faecal and ileal mucin content was used to correct TDF and soluble fibre digestibility. It was also recorded weight of digestive segments and digesta pH. Rabbits fed insoluble SBP showed the lowest feed intake with respect to the other 3 diets (124 vs. 139 g/d, respectively. P < 0.05). Ileal mucin flow was higher (P < 0.05) in animals fed pectin and SBP diets (9.0 g/d, as average) than those fed control diet (4.79 g/d), showing InsSBP group an intermediate value. No differences on mucin content were detected at faecal level. There was no diet effect on the CIAD of TDF (corrected for mucin) and insoluble fibre. Fibre methodology influenced the CIAD of insoluble fibre (0.123 for IDF vs. 0.108 for aNDFom-cp. P < 0.01). Anyway, the amount of insoluble fibre fermented before the caecum did not differ between both methods (4.9 g/d, on average). Rabbits fed insoluble SBP and SBP diets showed the highest CTTAD of insoluble fibre (0.266 on average vs. 0.106 for control group), whereas those fed pectin diet had an intermediate value (0.106. P < 0.001). The CTTAD of insoluble fibre measured with IDF was higher than that measured with aNDFom-cp (by 20%. P < 0.001). It led that the amount of insoluble fibre fermented along the digestive tract were different (9.5 or 7.5 g/d when calculated as IDF or aNDFom-cp, respectively; P < 0.001). When the CIAD of soluble fibre was corrected for mucin they became positive (P < 0.001) except for control group measured as SDFIDF. Once corrected for mucin content, rabbits fed soluble fibre from SBP (pectin and SBP groups) showed higher CIAD of soluble fibre than control group (0.483 vs. -0.019. respectively), whereas the value for insoluble SBP group was intermediate 0.274. The CTTAD of soluble fibre (mucin corrected) was similar among diets 0.93. Rabbits fed with SBP and insoluble SBP diets showed higher total digestive tract and stomach relative weight than those fed pectin and control diets (by 11 and 56 %. respectively, P < 0.05). The caecal relative weight did not differ in rabbits fed pectin, insoluble SBP, and SBP diets (62 g/kg BW, as average) and they were on average 16% higher (P < 0.001) than in control group. Caecal content of rabbits fed SBP diet was more acid than those fed control diet (5.64 vs. 6.03. P < 0.001), whereas those from pectin and insoluble SBP diets showed intermediate values. In conclusion, the positive effect of SBP fibre on ileal mucin flow was due to both its soluble and insoluble fibre fraction. Half of the soluble SBP fibre was degraded before the caecum independently it came from pectin or SBP. The caecal pH correlated better with the ileal amount of fermented TDF in the digestive tract rather than with that fermented in the caecum. The last study examined the effect of soluble and insoluble fibre of apple pulp on fibre digestibility and digestive traits. Four diets were formulated with similar level of insoluble fibre (aNDFom-cp: 324 g/kg DM) and protein (18.6 g/kg DM). Control diet contained the lowest level of soluble fibre (46 g soluble fibre/kg DM, including oat hulls and straw as sole sources of fibre). A second diet was obtained by replacing 60 g starch/kg of control diet with apple pectins (105 g soluble fibre/kg DM). Two more diets were obtained by substituting part of the fibrous sources of the control diet by either apple pulp or depectinized apple pulp (93 and 71 g soluble fibre/kg, respectively). The CTTAD was determined in 23 rabbits/diet weighing 1.68 ��� 0.23 kg BW, and 23 rabbits/diet were slaughtered at 60 d of age to collect ileal digesta to determine CIAD and record other digestive traits. Soluble fibre from apple stimulated ileal flow of mucin (P = 0.002), but depectinized apple pulp did not. The correction for mucin increased the digestibility of crude protein, total dietary fibre, and soluble fibre at faecal, but especially at ileal level, depending in this case on the diet. Around half of the soluble fibre in diets containing any fibre fraction from apple was degraded at ileal level, with no differences among these diets (0.46 vs. 0.066 for control group, P=0.046). Faecal soluble fibre digestibility was 0.86 on average for all groups). Inclusion of the apple insoluble fibre improved NDF digestibility at faecal (0.222 vs. 0.069. P < 0.05) but not at ileal level. Caecal content of rabbits fed apple pulp diet was more acid than those fed control diet (5.55 vs. 5.95. P < 0.001), whereas those from pectin and depectinised apple pulp diets showed intermediate values. In conclusion, the positive effect of apple fibre on ileal mucin flow was mainly due to its soluble fibre fraction. Half of the soluble apple fibre was degraded before the caecum independently it came from pectin or apple pulp. The caecal pH correlated better with the total and ileal amount of fermented TDF in the digestive tract rather than with that fermented in the caecum. The results obtained in the studies 2, 3 and 4 were considered together. These results showed that the mucin correction is necessary when the TDF and soluble fibre digestibility is determined, and it correction is more important at ileal level and in diets with low level of soluble fibre. On another hand, incrementing the soluble fibre using sugar beet and apple pulp increased the amount of TDF disappear before the caecum. Moreover, the caecal pH correlated better with the ileal amount of fermented TDF in the digestive tract rather than with that fermented in the caecum. This suggests that an ileal fibre solubilisation may occur rather than ileal fermentation. Therefore the implications of this work were that: the estimation of soluble fibre as SDFaNDFom-cp is an adequate method considering its correlation with the physiological effects; and the TDF and soluble fibre digestibility must be corrected with intestinal mucins, especially when the ileal digestibility is determined.

Mecanismo de interacci��n, calcio dependiente, entre Calcineurina y PERK, involucrado en el Estr��s de Ret��culo Endopl��smico

El Estr��s de Ret��culo Endopl��smico (RE) es inducido por la acumulaci��n de prote��nas sin plegar en el lumen de la organela. Esto se puede observar en diversas situaciones fisio-patol��gicas como durante una infecci��n viral o en proceso isqu��mico. Adem��s, contribuye a la base molecular de numerosas enfermedades ya sea ��ndole metab��lico (Fibrosis qu��stica o Diabetes Miellitus) o neurodegenerativas como mal de Alzheimer o Parkinson (Mutat Res, 2005, 569). Para restablecer la homeostasis en la organela se activa una se��al de transducci��n (UPR), cuya respuesta inmediata es la atenuaci��n de la s��ntesis de prote��na debido a la fosforilaci��n de subunidad alpha del factor eucari��tico de iniciaci��n de translaci��n (eIF2��) v��a PERK. Esta es una prote��na de membrana de RE que detecta estr��s. Bajo condiciones normales, PERK est�� inactiva debido a la asociaci��n de su dominio luminar con la chaperona BIP (Nat Cell Biol, 2000, 2: 326). Frente a una situaci��n de estr��s, la chaperona se disocia causando desinhibici��n. Recientemente, (Plos One 5: e11925) se observ��, bajo condiciones de estr��s, un aumento de Ca2+ citos��lico y un r��pido incremento de la expresi��n de calcineurina (CN), una fosfatasa citos��lica dependiente de calcio, heterodim��rica formada por una subunidad catal��tica (CN-A) y una regulatoria (CN-B). Adem��s, CN interacciona, sin intermediarios, con el dominio citos��lico de PERK favoreciendo su trans-autofosforilaci��n. Resultados preliminares indican que, astrocitos CNA��-/- exhibieron, en condiciones basales, un mayor n��mero de c��lulas muertas y de niveles de eIF2�� fosforilado que los astrocitos CNA��-/-. Hip��tesis: CNA��/B interacciona con PERK cuando el Ca2+ citos��lico esta incrementado luego de haberse inducido Estr��s de RE, lo cual promueve dimerizaci��n y auto-fosforilaci��n de la quinasa, acentu��ndose as�� la fosforilaci��n de eIF2�� e inhibici��n de la s��ntesis de prote��nas. Esta activaci��n citos��lica de PERK colaborar��a con la ya descrita, desinhibici��n luminal llevada cabo por BIP. Cuando el Ca2+ citos��lico retorna a los niveles basales, PERK fosforila a CN, reduciendo su afinidad de uni��n y disoci��ndose el complejo CN/PERK. Objetivo general: Definir las condiciones por las cuales CN interacciona con PERK y regula la fosforilaci��n de eIF2�� e inhibici��n de la s��ntesis de prote��na. Objetivos espec��ficos: I-Estudiar la diferencia de afinidades y dependencia de Ca2+, de las dos isoformas de CN (�� y ��) en su asociaci��n con PERK. Adem��s verificar la posible participaci��n de la subunidad B de CN en esta interacci��n. II-Determinar si la auto-fosforilaci��n de PERK es diferencialmente regulada por las dos isoformas de CN. III-Discernir la relaci��n del estado de fosforilaci��n de CN con su uni��n a PERK. IV-Determinar efectos fisiológicos de la interacci��n de CN-PERK durante la respuesta de Estr��s de RE. Para llevar a cabo este proyecto se realizar��n experimentos de biolog��a molecular, interacci��n prote��na-prote��na, ensayos de fosforilaci��n in vitro y un perfil de polisoma con astrocitos CNA��-/- , CNA���-/- y astrocitos controles. Se espera encontrar una mayor afinidad de uni��n a PERK de la isoforma �� de CN y en condiciones donde la concentraci��n de Ca2+ sea del orden micromolar e imite niveles del i��n durante un estr��s. Con respecto al estado de fosforilaci��n de CN, debido a los resultados preliminares, donde solo se la encontr�� fosforilada en condiciones basales, se piensa que CN podr��a interactuar con mayor afinidad con PERK cuando CN se encuentre desfosforilada. Por ��ltimo, se espera encontrar un aumento de eIF2�� fosforilado y una acentuaci��n de la atenuaci��n de la s��ntesis de prote��na como consecuencia de la mayor activaci��n de PERK por su asociaci��n con la isoforma �� de CN en astrocitos donde el Estr��s de RE se indujo por privaci��n de oxigeno y glucosa. Estos experimentos permitir��n avanzar en el estudio de una nueva funci��n citoprotectora de CN recientemente descrita por nuestro grupo de trabajo y sus implicancias en un modelo de isquemia.