Biologia do gene pheA de Mycobacterium tuberculosis : clonagem, seqüenciamento e superexpressão do seu produto - a proteína prefenato desidratase

A Tuberculose (TB) é a principal causa de óbitos entre as doenças infecciosas causadas por um único agente. De acordo com a Organização Mundial da Saúde (OMS) o agente etiológico da TB no homem, o complexo Mycobacterium (M. tuberculosis, M. africanum, M. bovis) é responsável por cerca de 8 milhões de novas infecções e 3 milhões de mortes a cada ano no mundo. No começo da década de 80, a reemergência da TB em países em desenvolvimento deve-se à crescente incidência do Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV), à falta de recursos para o tratamento desta doença e à proliferação de cepas resistentes a múltiplas drogas (MDR-TB). Esta situação criou a necessidade da busca por novos agentes antimicobacterianos capazes de reduzir o tempo de tratamento, melhorar a adesão dos pacientes ao mesmo e ser efetiva contra cepas MDR-TB. A via do chiquimato leva à biossíntese do corismato, o precursor de aminoácidos aromáticos, tirosina, triptofano e fenilalanina. A primeira reação na biossíntese de fenilalanina envolve a conversão de corismato a prefenato, catalisada pela corismato mutase. A segunda reação na biossíntese de fenilalanina é a descarboxilação e desidratação de prefenato a fenilpiruvato, catalisada pela prefenato desidratase. Embora ausente em mamíferos, esta via está presente em bactérias, algas, fungos, plantas e parasitos do Phyllum Apicomplexa. Esta rota é essencial em M. tuberculosis e, portanto, suas enzimas representam alvos potenciais para o desenvolvimento de novas drogas antimicobacterianas. O objetivo deste trabalho foi estudar o gene pheA da linhagem de M. tuberculosis H37Rv e seu produto, a enzima prefenato desidratase Para isso, DNA genômico de M. tuberculosis H37RV foi extraído e o gene pheA foi amplificado pela técnica de PCR, clonado no vetor de expressão pET-23a(+), seqüenciado e superexpresso em células de Escherichia coli BL21(DE3). Os resultados obtidos confirmaram a região predita para o gene pheA, que foi amplificado com sucesso, mostrando 963 pb, sendo que a presença de 10% dimetil sulfoxido (DMSO) mostrou ser essencial para permitir a desnaturação do DNA rico em bases G-C. Análise da seqüência nucleotídica pelo método de Sanger confirmou a identidade do gene clonado e demonstrou que nenhuma mutação foi introduzida pelos passos de PCR e clonagem. A enzima prefenato desidratase foi superexpressa em células de E. coli BL21(DE3) eletroporadas com pET-23a(+)::pheA. Análise por SDS-PAGE mostrou expressão significativa de uma proteína com aproximadamente 33kDa, estando de acordo com a massa molecular esperada para a prefenato desidratase. A proteína recombinante foi superexpressa sem a adição de IPTG, e a presença da proteína pôde ser detectada em todos os intervalos de tempo testados (6, 9 e 24 horas depois da OD600nm alcançar o valor de 0,5). Foi realizado ensaio enzimático com a prefenato desidratase de acordo com Gething et al. (1976) utilizando prefenato de bário como substrato e coeficiente de extinção molar de 17.500 a 320 nm para calcular a concentração de fenilpiruvato. Houve um aumento de 1766 vezes na atividade específica da prefenato desidratase no extrato bruto da proteína recombinante em relação ao controle, no qual o vetor pET23a(+) sem o gene pheA foi introduzido em células de E. coli BL21(DE3).

Mapeando fundamentos do Constructo Neuromarketing com profissionais de empresa de publicidade

This study aims to acknowledge the domain level and influence of the neuromarketing construct. This is done considering professionals at advertising agencies in Brazil. The presence of concepts related to this new approach is very little divulged, and there are little analysis performed on this area. Thus, the research is of qualitative and exploratory nature and used as primary fonts books, articles related to marketing, neuroscience, and psychology as well as secondary fonts. A profound interview was realized aiming the main advertising agencies in Brazil. The public was composed by managers responsible for planning. A content analysis was performed afterwards. The advances related to the brain science have permitted the development of technological innovation. These go primarily towards knowledge and unconscious experiences of consumers, which are responsible for the impulse of decision making and consumer behavior. These issues are related to Neuromarketing, that in turn, uses techniques such as FMRI, PET and FDOT. These scan the consumer s brain and produces imagines on the neuron s structures and functioning. This is seen while activities such as mental tasks for the visualization of brands, images or products, watching videos and commercials are performed. It is observed that the agencies are constantly in search of new technologies and are aware of the limitations of the current research instruments. On the other hand, they are not totally familiar with concepts related to neuromarketing. In relation to the neuroimage techniques it is pointed out by the research that there is full unawareness, but some agencies seem to visualize positive impacts with the use of these techniques for the evaluation of films and in ways that permit to know the consumer better. It is also seen that neuroimage is perceived as a technique amongst others, but its application is not real, there are some barriers in the market and in the agencies itself. These barriers as well as some questioning allied to the scarce knowledge of neuromarketing, make it not possible to be put into practice in the advertising market. It is also observed that even though there is greater use of neuromarketing; there would not be any meaningful changes in functioning and structuring of these agencies. The use of the neuro-image machines should be done in research institutes and centers of big companies. Results show that the level of domain of the neuromarketing construct in the Brazilian advertising agencies is only a theoretical one. Little is known of this subject and the neurological studies and absolutely nothing of neuroimage techniques

Construction and demolition waste as a source of PVC for recycling

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Digestibility for dogs and cats of meat and bone meal processed at two different temperature and pressure levels

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Fontes de proteína e carboidratos para cães e gatos

O mercado de alimentos para cães e gatos absorve importante quantidade de proteínas e carboidratos, apesar disso poucos estudos existem sobre digestibilidade e energia metabolizável destes ingredientes. Arroz e milho têm sido considerados as melhores fontes de amido, mas demonstra-se que o sorgo é igualmente bem digerido por cães. Na interpretação dos estudos, deve-se distinguir os que empregaram farinhas ou amidos purificados dos que empregaram ingredientes moídos, como utilizado na fabricação de alimentos para animais de companhia. Além de sua digestibilidade e valor energético, amidos interferem na glicemia de cães, o que torna interessante se empregar, para animais em condições específicas, fontes de carboidrato que levem à menores respostas de glicose e insulina. Devido a elevada necessidade de proteína, ingredientes protéicos são importantes nas formulações. Proteínas de origem animal apresentam maior variação em composição química, qualidade e digestibilidade que as de origem vegetal. Farinhas de origem animal podem apresentar excesso de matéria mineral, limitando sua inclusão na fórmula, enquanto derivados protéicos vegetais apresentam diversos fatores anti-nutricionais que devem ser inativados durante seu processamento. Demonstra-se que proteínas vegetais apresentam boa digestibilidade e energia metabolizável para cães e gatos, sendo sua inclusão interessante para reduzir a matéria mineral da dieta, controlar o excesso de bases do alimento e manter adequada a digestibilidade do produto, neste sentido soja micronizada e o farelo de glúten de milho 60% se destacam em digestibilidade e teor de energia metabolizável. A farinha de vísceras de frango, dentre as proteínas de origem animal secas demonstra-se como a de melhor digestibilidade e energia metabolizável.

Uso da biodiversidade por populações humanas na caatinga e na Mata Atlântica, Rio Grande do Norte, Nordeste do Brasil

The use of animals is a common activity but it can be really variable between human populations. This work analyzed the knowledge about useful animal species between human communities in Caatinga and Atlantic Forest considering the influence of socioeconomics and environmental factors on the species selection. Forty people were interviewed in Caraúbas community (Atlantic Forest) and thirty were interviewed in Barrocas community (Caatinga). A total of 193 animals were cited. The communities showed a low degree of similarity (20%) and the general diversity of mentioned species was significantly bigger in Caraúbas. Men cited a diversity of species greater than women for food category in Caraúbas and pet category in Caraúbas and Barrocas. Women cited greater species diversity for medicinal use in Caraúbas. In general, in both communities, the age group >60 years showed a greater knowledge than the others. The multiple regression analysis showed the age as the only socioeconomic factor which influenced significantly the knowledge about animals for the food category in both communities. Considering the richness of known species, there were differences only between gender for sum of uses and food category in Caraúbas and for the pet category in Barrocas with men showing a greater knowledge than women. The results showed that local environmental differences are fundamental at the species selection but they also showed that within communities there are other factors like gender and age that tend to influence the knowledge about species. It is important to consider cultural, economic, social and environmental factors to understand better the interactions between people and animals so that this information can be used to facilitate the implementation of conservation measures

Processamento mínimo em goiabas 'Paluma' e 'Pedro Sato': 2. Avaliação química, sensorial e microbiológica

Foram utilizados frutos de goiabeiras das cultivares Pedro Sato e Paluma, provenientes de pomar comercial, no estádio de maturação de vez, correspondente à coloração verde-mate e considerados ótimo para o consumo. Os frutos foram inicialmente imersos em solução de hipoclorito de sódio (150mg de cloro.L-1) por 5 minutos, para desinfecção superficial. Pessoas treinadas, utilizando proteção adequada e equipamentos desinfetados descascaram os frutos, cortaram-nos longitudinalmente ao meio e eliminaram a polpa com as sementes, em ambiente a 12°C. Após enxágüe com água clorada (20mg de cloro.L-1) foram embalados em contentores de tereftalato de polietileno (PET) com tampa. Estas unidades foram armazenadas a 3°C por 10 dias. Foram realizadas análises microbiológicas ao longo do período. Determinaram-se quimicamente os conteúdos de lignina, ácido ascórbico, acidez total titulável, sólidos solúveis totais e porcentagem de solubilização das pectinas, bem como as variáveis sensoriais de textura, sabor e preferência. A textura tornou-se mais frágil e os conteúdos de ácido ascórbico se reduziram, ao longo do período de armazenamento, nos produtos de ambas as cultivares. Durante este período houve aumento no conteúdo de lignina e manutenção dos conteúdos de sólidos solúveis totais (SST), acidez total titulável (ATT) e da relação SST/ATT. O produto da cultivar Pedro Sato apresentou menor perda de textura que o da 'Paluma', sendo considerado pelos provadores como o mais saboroso e, portanto, o mais preferido. Devido aos cuidados higiênicos tomados durante o processamento o produto apresentou baixa contagem microbiana (< 10³ UFC.g-1), em todas as avaliações efetuadas.

Avanços metodológicos na seleção do sexo de espermatozóides bovinos para utilização no melhoramento genético e na produção animal

O mercado demanda, desde final da década de 20, uma tecnologia para a sexagem de espermatozóides que possa ser inserida na indústria de produção de sêmen congelado e que tenha as seguintes características: a) não altere a viabilidade espermática; b) seja compatível com a congelação do espermatozóide sexado; c) permita a sexagem de espermatozóides previamente congelados e descongelados; d) permita a produção de várias doses de sêmen sexado congelado por dia, com custo compatível ao mercado. A importância dessa tecnologia para maximizar a produção animal a um custo baixo tem sido um desafio da pesquisa a vários anos. A possibilidade de produzir, em escala comercial, doses de sêmen enriquecidas com espermatozóides X ou Y aumentará os benefícios do uso da inseminação artificial no seu papel de maximizar o progresso genético entre gerações de acordo com os requerimentos de cada programa de melhoramento animal. Diferentes rotas tecnológicas são percorridas na tentativa de selecionar-se o sexo em mamíferos, tanto nas espécies de interesse zootécnico quanto em espécies ameaçadas de extinção, animais de companhia. Neste sentido, existem duas alternativas: a separação de espermatozóides portadores do cromossomo X, daqueles portadores do cromossomo Y; ou a sexagem de embriões pré-implantados. A viabilidade da sexagem de espermatozóides em bovinos é esperada por muitos anos e os desenvolvimentos recentes tornaram essa tecnologia de aplicação commercial. Entretanto, muitas limitações ainda existem, principalmente, referente à taxa de gestação em condições de campo. Isso restringe a utilização dessa tecnologia no melhoramento genético e produção animal. Nessa palestra abordaremos os potenciais sistemas de criação e produção que poderão beneficiar-se com a sexagem de espermatozóides, quando essas limitações forem solucionadas.

Sources of human non-typhoid salmonellosis: a review

Salmonellosis is a worldwide disease caused by bacteria of the genus Salmonella. Currently, there are over 2,500 identified serovars of Salmonella. A reduced number of these serovars, about eighty, are implicated in most animals and human diseases. Most cases of salmonellosis in humans are associated with the consumption of contaminated food products such as beef, pork, poultry meat, eggs, vegetables, juices and other kind of foods. It may also be associated with the contact between humans and infected pet animals. Therefore, the chain of human salmonellosis is very complex and in most cases the origin of the infection is difficult to establish. The use of antimicrobial agents to treat and to prevent bacterial infections in humans and animals, as well as as growth promoters in animal production, has favoured the selection and transference of resistance genes between different bacteria, including Salmonella serovars. Many studies have confirmed the role of foods of animal origin as a source of multi drugresistant Salmonella serovars. For this reason, continuous surveillance of these pathogens along the food chain together with the responsible use of antimicrobial agents is necessary.

Trânsito de saberes e campo representacional na visão dos profissionais da saúde da família e do programa de educação pelo trabalho e para a saúde

The Family Health Strategy (ESF) is emerging as a possible restructuring of services and new practices of intervention in health care; it requires skilled professionals to work with that framework. Within this purpose, we established the Education Programme for Work and Health (PET-Saúde), in order to integrate teaching and service activities, focusing on primary care. On this basis, the aim of this work is to apprehend the social representation of nurse, doctor and dentist (Project PET-Natal Health RN preceptors) on the ESF, while practice field of them. It is a descriptive and exploratory study, with a qualitative approach, carried out in 07 Family Health Units (USF) included in the PET-Saúde Natal (RN). The population was composed of 35 professional components of the primary care team with bachelor's degree of the USF linked to this project. The sample was composed of 05 nurses, 05 physicians and 05 dentists, for a total of 15 subjects. Data were collected through three instruments: the drawing-themed story, a semi-structured individual interviews and field diary. The data relating to the identification of the subjects were entered and tabulated by the Microsoft Excel software 2007 version. The drawing analysis and interpretation is given by the significance attributed to the resource chart from title and keywords assigned by the subjects, considering the ESF as an inductive term. The stories and interviews were transcribed and typed and then subjected to read/listen the material and a lexical analysis through Alceste. After this process, the discursive material was analyzed and discussed by theoretical and methodological feature of the Social Representations theory. The majority of health professionals were female, aged between 46 and 52 years old, married, income less than six minimum wage, time since graduation ranged from 22 to 29 years and working time in the ESF range from 02 to 11 years. From the classification system ALCESTE were selected categories identified by: Category 1 - ESF: relations and territory; Category 2 - Training and bond profile; Category 3 - Working process in the ESF; Category 4 - Articulation between teaching and service; Category 5 - Health care and disease prevention. The representational field construction, while a process, followed the logic of structural cores in existing categories. In this sense, it is clear that the ESF is an environment rich in diversity, experience and relationships with potential such as the relationship "very subject-subject" and the link established between professional-community, but also has some weaknesses such as poor working conditions, lack of popular participation and management support, thus difficulties in the achievement of teamwork. Being essential to that end, the teaching-service aimed at the formation of a new health professional able to work in the ESF. In this research, the training of the representational field encountered a diversity of structural cores, or thoughts on training, about the ESF because of the greater emphasis on the here and now of the interaction between health professionals, the ESF, the community, PET Health-UFRN and students, emphasizing that such proposals are still considered as concepts in the context of recent health and that, therefore, are not fully realized in the social imaginary

Use of modified atmosphere to extend shelf life of fresh-cut carambola (Averrhoa carambola L. cv. Fwang Tung)

Fresh-cut fruit products, including carambola (Averrhoa carambola L.), have limited marketability due to cut surface browning attributed to phenolic compound oxidation by enzymes, such as polyphenol oxidase (PPO). The objective of this study was to evaluate postharvest changes in carambola slices in three different packages. Carambola fruit (cv. Fwang Tung) were picked from the Estacao Experimental de Citricultura de Bebedouro orchard at the mature-green stage. The fruit were washed, dipped in NaOCl solution (200 mg L-1 for 5 min), stored overnight at 10 degrees C, then manually sliced into pieces of approximately 1 cm. The slices were rinsed with NaOCl solution at 20 mg L-1, drained for 3 min, and packaged in polyethylene terephthalate (PET) trays (Neoform (R) N94); polystyrene trays covered with PVC 0.017 turn (Vitafilm (R), Goodyear); and vacuum seated polyolefin bags (PLO, Cryovac (R) PD900). The packages were stored at 6.8 degrees C and 90% RH for 12 d, with samples taken every 4 d. PET trays and PVC film did not significantly modify the internal atmosphere and the high water permeability of PVC led to more rapid slice desiccation. PPO activity was lower when the slices were packaged in PLO vacuum sealed bags, which reduced degreening and led to better appearance maintenance for up to 12 d. (R) 2006 Elsevier B.V. All rights reserved.

Minimally processed guava fruits (Psidium guajava L.)

'Paluma' guavas, after internal quality evaluation using magnetic resonance tomography, were used to produce fresh-cut product. Fruits were peeled or not, cut in halves and seed removed, and they were packaged in polystyrene trays covered with PVC film or in a PET container with a lid. These packages were stored for 12 days at 5 degrees C, 10 degrees C and ambient temperature (22.6 degrees C). Tomography evaluation verified that impacts produced internal bruising with loss of cellular integrity and liquefication of the placenta tissues. Compression was more evident on the pericarp and cutting promoted superficial deformation. Storage temperature affected the weight loss, with fruit packaged in the polystyrene tray having a greater weight loss. The peeling did not influence weight loss. Product stored at 5 degrees C and 10 degrees C for 8 days had low microbial growth (< 10(3) UFC.g(-1)) and no coliforms. Rapid spoilage and a short shelf life (3-4 days) occurred when the product was stored at ambient temperature. Peeling reduced ascorbic acid concentration and total soluble solids. Use of calcium to protect fresh-cut products was not efficient. Calcium absorption capacity of 'Pedro Sato' guava was tested using Ca-45. Fruits treated with 2% CaCl2, with or without the radioisotope, were divided in four layers (epicarp, mesocarp, endocarp and seed) and analyzed for the total and Ca-45 calcium. It was observed that the applied calcium remained in superficial layers of fruits, which was confirmed by autoradiography. Internal layers did not contain Ca-45, indicating that calcium was not distributed into different parts of the fruit.

Postharvest Storage of 'Ponkan', 'Satsuma Okitusu' and 'Fremont' Tangerines and Their Minimally Processed Products Using Refrigeration and Controlled Atmosphere

This study aimed to evaluate the postharvest conservation of tangerines 'Fremont', 'Satsuma Okitsu' and 'Ponkan' when stored at different conditions, as well as the quality of the minimally processed product. Fruit were harvested when a sugar: acid ratio of 10.0 to 12.0 for 'S. Okitsu' and 'Fremont' and 16.0 to 19.0 for 'Ponkan' was reached, selected for uniformity of color, size, and absence of injuries. Whole fruits were stored at 3 degrees C, 85% RH and 7 degrees C, 95% RH, and after each storage period, fruits were brought to ambient conditions (22 degrees C, 65% RH) for 3 days before evaluation. The minimally processed products (peeled) were packed in polystyrene trays (22.4x14.8x3.7 cm) coated with polyvinyl chloride (PVC) stretchable, with 0.014 mm thickness, and in lidded packages (500 ml) of transparent polyethylene terephthalate. Fruit were analyzed for appearance, weight loss, respiratory rate, package atmosphere, rind and pulp color, soluble solids, titratable acidity and ascorbic acid content. Shelf life of tangerine 'Fremont' was limited to 42 days based on freshness. Its minimally processed product had a 9 day shelf-life for products packaged in PVC film. The mandarins 'S. Okitsu' had 35 days shelf-life at 7 degrees C, which was reduced to 28 days at 3 degrees C. Its fresh-cut product had a shelf-life of 15 days, stored in PVC or PET. 'Ponkan' fruit stored at 3 degrees C had a shelf life of 35 days, which was reduced to 28 days at 7 degrees C. When minimally processed, its shelf-life lasted for 15 days, whether packaged in PVC or PET. The 'Ponkan' had a shelf-life of 35 days at 3 degrees C and 28 days at 7 degrees C, also limited by loss of freshness. When minimally processed and stored in PVC or PET, its shelf life reached 15 days.

Efeito da temperatura no armazenamento de uvas apirênicas minimamente processadas

O trabalho teve como objetivo avaliar a qualidade pós-colheita de três cultivares de uvas de mesa sem semente submetidas ao processamento mínimo e armazenadas sob refrigeração e à temperatura ambiente. Para tanto, foram utilizadas uvas das cultivares BRS Clara, BRS Linda e BRS Morena, produzidas na Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA) Uva e Vinho/Estação Experimental de Viticultura Tropical, em Jales-SP. Os cachos, depois de higienizados e imersos em água clorada a 200 mg de cloro.L-1 por 5 minutos, foram mantidos em câmara fria, a 12ºC, por 12 h. As bagas foram degranadas e lavadas em solução de álcool a 70%, por 5 segundos. Depois de escorrido o excesso da solução alcoólica, as bagas foram acondicionadas em bandejas de tereftalato de polietileno (PET) transparente com tampa e com capacidade para 500 mL. Cada unidade, contendo 200 g de bagas, foi armazenada a 12±1,8ºC e 24±0,8ºC, por 12 dias. Avaliaram-se, a cada três dias, a perda de massa fresca, a aparência, a coloração e os teores de sólidos solúveis (SS) e de acidez titulável (AT). A temperatura de 12ºC manteve a turgidez, a coloração, as qualidades organoléptica (relação SS/AT) e comercial das bagas das três cultivares testadas, por nove dias, enquanto no armazenamento à temperatura ambiente (24ºC), ocorre perda da qualidade comercial das bagas aos três dias para as cvs. BRS Clara e BRS Linda, e aos seis dias para a cv. BRS Morena.

Processamento mínimo de uvas de mesa sem semente

O trabalho teve como objetivo avaliar os aspectos qualitativos de uvas de mesa apirênicas (sem sementes) quando submetidas ao processamento mínimo e armazenadas sob refrigeração. Para tanto, foram utilizadas uvas da cultivar BRS Morena e da Seleção Avançada nº 8, produzidas na Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA) Uva e Vinho/Estação Experimental de Viticultura Tropical (da Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA) de Jales). Os cachos, depois de higienizados, imersos em água clorada a 300 mg de cloro.L-1 por 5 min., foram mantidos em câmara fria, a 12ºC, por 12 h. Pessoas treinadas e com proteção adequada procederam à degrana dos cachos e ao posterior enxágüe das bagas com água clorada (20 mg.L-1) a 12ºC. Depois de escorrido o excesso de água, as bagas foram acondicionadas em bandejas de tereftalato de polietileno (PET) transparente com tampa e com capacidade para 500 mL. Cada unidade, contendo 200 g de bagas, foi armazenada a 2,5 ± 1ºC e 88% UR por até 36 dias. Avaliaram-se a perda de massa fresca, a evolução da aparência, a coloração e os teores de sólidos solúveis totais (SST), e de acidez titulável (AT). Nas condições do experimento, os produtos minimamente processados da cv. BRS Morena e da Seleção 8 apresentaram baixa perda acumulada de massa fresca (0,16%). O produto da cv. Morena apresentou-se mais escuro (L = 25,04) e mais arroxeado (h° = 332,88) que o da Seleção 8 (L = 29,86 e h° = 345,11), propiciando-lhe melhor qualidade visual. O suco da 'BRS Morena' apresentou maiores teores de SST (22,17 °Brix) e menores para a AT (0,56 %), o que resultou em uma relação SST/AT maior e melhor (39,76) que o da Seleção 8 (18,81). A cv. BRS Morena também apresentou boa manutenção da aparência e, portanto, da qualidade comercial, por 33 dias a 2,5°C, superior ao obtido para a Seleção 8 (24 dias).