Btk regulates macrophage polarization in response to lipopolysaccharide

Bacterial Lipopolysaccharide (LPS) is a strong inducer of inflammation and does so by inducing polarization of macrophages to the classic inflammatory M1 population. Given the role of Btk as a critical signal transducer downstream of TLR4, we investigated its role in M1/M2 induction. In Btk deficient (Btk (-\-)) mice we observed markedly reduced recruitment of M1 macrophages following intraperitoneal administration of LPS. Ex vivo analysis demonstrated an impaired ability of Btk(-/-) macrophages to polarize into M1 macrophages, instead showing enhanced induction of immunosuppressive M2-associated markers in response to M1 polarizing stimuli, a finding accompanied by reduced phosphorylation of STAT1 and enhanced STAT6 phosphorylation. In addition to STAT activation, M1 and M2 polarizing signals modulate the expression of inflammatory genes via differential activation of transcription factors and regulatory proteins, including NF-κB and SHIP1. In keeping with a critical role for Btk in macrophage polarization, we observed reduced levels of NF-κB p65 and Akt phosphorylation, as well as reduced induction of the M1 associated marker iNOS in Btk(-/-) macrophages in response to M1 polarizing stimuli. Additionally enhanced expression of SHIP1, a key negative regulator of macrophage polarisation, was observed in Btk(-/-) macrophages in response to M2 polarizing stimuli. Employing classic models of allergic M2 inflammation, treatment of Btk (-/-) mice with either Schistosoma mansoni eggs or chitin resulted in increased recruitment of M2 macrophages and induction of M2-associated genes. This demonstrates an enhanced M2 skew in the absence of Btk, thus promoting the development of allergic inflammation.

Mise en évidence de dysfonctions liées au développement de l'endométriose péritonérale Contributions angio-inflammatoires des cytokines et prostaglandines

L’endométriose est une maladie gynécologique, touchant les femmes en âge de procréer. Cette pathologie est caractérisée par la présence de tissu endométrial ectopique, c’est-à-dire en dehors de la cavité utérine. Des dysfonctions du système immunitaire sont de plus en plus souvent suspectées comme étant un des éléments responsables de la pathogenèse de cette maladie. L’objectif général de ce projet a donc été d’étudier les mécanismes cellulaires de molécules pro-inflammatoires aux propriétés variées et à l’expression anormalement élevée dans cette pathologie, que sont MIF et les prostaglandines PGE2 et PGF2α, dans les anomalies inflammatoires et invasives en cause dans cette pathologie. La première partie de nos travaux a porté sur l’étude d’un modèle murin de l’endométriose déficient du gène MIF. Le nombre et le volume des lésions collectées à partir des souris déficientes pour le gène MIF sont significativement inférieurs à ceux mesurés dans des souris sauvages utilisées comme contrôle. L’analyse par PCR des cellules isolées des lésions de souris déficientes du gène MIF a révélé une expression réprimée des protéines d’adhésion, d’inflammation et d’angiogenèse. Ces données démontrent pour la première fois que le MIF agit directement sur la croissance et la progression de lésions d’endométriose in vivo. Une partie de nos travaux a porté sur les molécules nécessaires au métabolisme de PGE2 et PGF2α dans l’endomètre eutopique des femmes normales et l’endomètre eutopique et ectopique des femmes atteintes d’endométriose. Selon nos données, l’expression de certains de ces facteurs est perturbée durant cette maladie, ce qui peut avoir des effets délétères sur la physiologie de la procréation. La stimulation des cellules ectopiques par PGF2α entraîne une libération accrue de VEGF et CXCL-8, ceci via l’induction de COX-2 et des deux variants d’épissage du récepteur FP. De plus, la PKC joue un rôle dans ce phénomène, dépendamment et indépendamment de la PLC. Par son effet inducteur sur la libération de VEGF et CXCL-8, PGF2α pourrait favoriser l’aspect inflammatoire et le développement ectopique des lésions d’endométriose, notamment par des phénomènes d’angiogenèse et de prolifération cellulaire accrus. L’effet de PGF2α sur la libération de VEGF et CXCL-8 par les cellules endométriales ectopiques pourrait également expliquer les quantités élevées de ces cytokines dans le liquide péritonéal des femmes atteintes d’endométriose, un phénomène suspecté dans l’infertilité et les douleurs associées à cette maladie. Nos derniers résultats obtenus à partir du liquide péritonéal montrent un profil cytokinique en faveur de l’angiogenèse et la prolifération des lésions d’endométriose, avec une forte augmentation des facteurs suivants : EGF, FGF-2, IL-1α, MIP-1β, TGFα, PDGF-AA, PDGF-BB, MCP-3, sCD40L, Gro Pan, IL-17α, MDC et Rantes, confortant nos observations préalables redéfinissant la maladie comme étant d’origine angio-inflammatoire. L’endométriose et ses symptômes sont des phénomènes complexes ayant probablement plus qu’une seule origine. Parmi les nombreux facteurs à l’expression altérée dans l’endométriose, notre étude montre que MIF, PGE2 et PGF2α, ainsi qu’une pléthore de facteurs pro-angiogéniques pourraient être de ceux jouant un rôle dans l’infertilité et les douleurs reliées à cette maladie.

MicroRNA-induced polarization of microglia and macrophages after focal cerebral ischemia

Der ischämische Schlaganfall ist nicht nur die zweithäufigste Todesursache weltweit, sondern auch eine der Hauptursachen für körperliche Beeinträchtigungen im Erwachsenenalter. Das Ausmaß der durch den Schlaganfall hervorgerufenen Gewebeschädigung ist stark durch das Immunsystem geprägt. Die im Zentralnervensystem (ZNS) ansässigen Mikroglia und die aus dem Blutsystem infiltrierenden Makrophagen sind die Schlüsselzellen der lokalen und systemischen Entzündungsantwort nach dem ischämischen Schlaganfall. Sowohl Mikroglia als auch Makrophagen spielen in der Entwicklung der Gewebeschädigung eine duale Rolle. Zum einen phagozytieren sie Zelltrümmer und unterstützen neuroregenerative Prozesse, zum anderen sind diese Zellen in der Lage den Zustand der Gewebsschädigung zu verschlimmern und einer Regeneration des ZNS entgegenzuwirken. Die Polarisierung der Mikroglia/Makrophagen hin zu verschiedenen Phänotypen ist abhängig von der jeweiligen Phase der Gewebeschädigung. Der destruktive, proinflammatorische Phänotyp (M1) steht dabei dem protektiven, antiinflammatorischen Phänotyp (M2) gegenüber. Die Notwendigkeit einer zielgerichteten Regulierung der polarisierten Mikroglia/Makrophagen zum protektiven M2-Phänotyp wurde bereits mehrfach im Zusammenhang mit der Behandlung von neurodegenerativen Erkrankungen erwähnt. In der vorliegenden Dissertation soll die immunregulierende und neuroprotektive Wirkung der microRibonukleinsäure-124 (miRNA-124) in Bezug auf die Polarisierung von Mikroglia/Makrophagen zu verschiedenen Zeitpunkten nach Verschluss der Arteria cerebri media (ACM) im Gehirn von Mäusen gezeigt werden. Zu diesem Zweck wurde die liposomierte miRNA-124 zu einem frühen Zeitpunkt (Tag 2) und zu einem späten Zeitpunkt (Tag 10) nach Verschluss der ACM verabreicht. Die Behandlung mit der miRNA-124 zu einem frühen Zeitpunkt resultierte dabei in einem signifikanten Anstieg in der Anzahl der M2-positiven Mikroglia/Makrophagen im Vergleich zur Kontrollgruppe. Gleichzeitig nahm die Anzahl der M1-positiven Mikroglia/Makrophagen signifikant ab. Im Wesentlichen resultierte die Behandlung mit der miRNA-124 zu beiden Zeitpunkten in einem geringeren Verhältnis von proinflammatorischen (M1) zu antiinflammatorischen (M2) Mikroglia/Makrophagen. Zu den weiteren Erkenntnissen einer frühzeitigen Behandlung im Rahmen dieser Dissertation gehören: (i) eine signifikante Zunahme des neuronalen Überlebens, das zudem positiv mit der Anzahl der M2-positiven Mikroglia/Makrophagen korreliert, (ii) eine verbesserte funktionelle Erholung, welche in Verbindung mit den veränderten neuroinflammatorischen Ereignissen steht und (iii) ein signifikant verkleinertes Läsionsareal, welches durch reaktive Astrozyten zum gesunden Gewebe hin abgegrenzt wird. Die Ergebnisse dieser Dissertation zeigen, dass die Verabreichung von miRNA-124 eine neue Möglichkeit zur Regulierung der Immunantwort und der Neuroprotektion im Rahmen der Behandlung des ischämischen Schlaganfalls darstellt.

A case of extraovarian primary peritoneal carcinoma in an oophorectomized-hysterectomized patient: a diagnostic dilemma

Extra Ovarian Primary Peritoneal Carcinoma (EOPPC) is a rare type of adenocarcinoma of the pelvic and abdominal peritoneum. The objective examination and the histological aspect of the neoplasia virtually overlaps with that of ovarian carcinoma. The reported case is that of a 72 year-old patient who had undergone a total hysterectomy with bilateral annessiectomy surgery 20 years earlier subsequently to a diagnosis for uterine leiomyomatosis. The patient came to our attention presenting recurring abdominal pain, constipation, weight loss, severe asthenia and fever. Her blood test results showed hypochromic microcytic anemia and a remarkable increase CA125 marker levels. Instrumental diagnostics with Ultrasound (US) and CT scans indicated the presence of a single peritoneal mass (10-12 cm diameter) close to the great epiploon. The patient was operated through a midline abdominal incision and the mass was removed with the great omentum. No primary tumor was found anywhere else in the abdomen and in the pelvis. The operation lasted approximately 50 minutes. The post-operative course was normal and the patient was discharged four days later. The histological exam of the neoplasia, supported by immunohistochemical analysis, showed a significant positivity for CA 125, vimentin and cytocheratin, presence of psammoma bodies, and cytoarchitectural pattern resembling that of a serous ovarian carcinoma even in absence of primitiveness, leading to a final diagnosis of EOPPC. The patient later underwent six cycles of chemotherapy with paclitaxel (135 mg/m2/24 hr) in association with cisplatin (75mg/m2). At the fourth year follow-up no sign of relapse was observed. .

Lavado peritoneal como método diagnóstico de lesión intraabdominal. Estudio en pacientes politraumatizados con sospecha de trauma abdominal cerrado y con herida penetrante abdominal por arma blanca, en el Hospital Vicente Corral Moscoso, octubre de 1998 a julio de 1999. Cuenca-Ecuador

Analizamos en base a nuestra experiencia apoyados por bibliografía reciente, la importancia, validez, precisión y actualidad del Lavado Peritoneal como método diagnóstico de lesión intraabdominal en pacientes con trauma contuso y penetrante por arma blanca hemodinámicamente estables que cumplían los criterios de inclusión predeterminados para el caso. Durante un período de 10 meses desde Octubre de 1998 a Julio de 1999, tomando como Universo a los pacientes politraumatizados de la sala de emergencia del Hospital Vicente Corral Moscoso de Cuenca - Ecuador, se obtuvo una muestra de 50 casos con sospecha de lesión intraabdominal por trauma abdominal contuso o herida penetrante por objeto corto punzante, en quienes se efectuó un estudio cuasi experimental descriptivo al ser sometido a lavado peritoneal diangóstico para determinar casos positivos, negativos, falsos positivos y falsos negativos. Se utilizó la técnica abierta de Fisher por considerarla la más segura y con menos complicaciones. Se decidió laparotomía de urgencia en los casos positivos registrándose los hallazgos transoperatorios. Se obtuvieron 27 lavados positivos, 20 negativos, un falso positivo que al ser laparotomizado se comprobó que la sangre en cavidad provenía de la pared del abdomen y dos falsos negativos que se desestabilizaron hemodinámicamente, presentaron reacción peritoneal y también fueron intervenidos quirúrgicamente. Por lo tanto, se realizaron 30 laparotomías, justificándose 27, dos resultaron ser los casos falsos negativos y una sola laparotomía fue innecesaria. Las complicaciones por el procedimiento estuvieron ausentes. En este estudio, el Lavado Peritoneal Diagnosticó demostró una sensibilidad del 93.1 por ciento especificidad del 95.2 por ciento, un valor predictivo positivo del 96.4 por ciento, un valor predictivo negativo del 90.9 por ciento; datos que se equiparan con otros estudios. De acuerdo a la experiencia realizada concluimos que el Lavado Peritoneal Diagnóstico constituye una prueba efectiva, precisa, rápida, económica para la manejor evaluación clínica en centros de baja complejidad o faltos de otros métodos complementarios diagnósticos como ultrasonido o T.A.C. y que ante su existencia, el Lavado Peritoneal Diagnóstico es coadyuvante, por tanto, debe formar parte de los protocolos de valoración de traumatismo abdominal en nuestros hospitales

Gastric and Peritoneal Involvement of Human Herpes Virus 8 Related Kaposi Sarcoma in a Patient with Acquired Immunodeficiency Syndrome

Kaposi's sarcoma (KS) is one of the most frequent neoplastic diseases in patients infected with human immunodeficiency virus (HIV). The authors report the case of a 40-year-old male with ascites, peripheral edema and peritoneal carcinomatosis secondary to a gastric KS related to human herpes virus type 8 (HHV-8). The patient had severe immunodeficiency, with a TCD4+ count of 86 cells/µl and newly diagnosed acquired immunodeficiency syndrome. His clinical condition rapidly deteriorated, with multiorgan failure, and he died without the possibility of initiating antiretroviral therapy or chemotherapy. To the authors’ knowledge, carcinomatosis is a rare feature in KS.

Gallbladder Perforation with Postoperative Preservation of Peritoneal Dialysis Catheter

A patient undergoing peritoneal dialysis was admitted with acute peritoneal dialysis-related peritonitis. On the 10th day of intraperitoneal antibacterial therapy, the patient’s dialysate developed a green color. Gallbladder perforation was revealed. The patient underwent a conventional cholecystectomy with a preserved peritoneal catheter. There are few cases in the medical literature about green dialysate. In all of them, peritoneal dialysis catheters were removed after cholecystectomy. The present case report shows a patient with an intact peritoneal catheter and with no further complications.

Macrophages and CD4 T-cells in rheumatoid arthritis and their modulation by JAK inhibitors

Background: Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic inflammatory arthritis that causes significant morbidity and mortality and has no cure. Although early treatment strategies and biologic therapies such as TNFα blocking antibodies have revolutionised treatment, there still remains considerable unmet need. JAK kinase inhibitors, which target multiple inflammatory cytokines, have shown efficacy in treating RA although their exact mechanism of action remains to be determined. Stratified medicine promises to deliver the right drug to the right patient at the right time by using predictive ‘omic biomarkers discovered using bioinformatic and “Big Data” techniques. Therefore, knowledge across the realms of clinical rheumatology, applied immunology, bioinformatics and data science is required to realise this goal. Aim: To use bioinformatic tools to analyse the transcriptome of CD14 macrophages derived from patients with inflammatory arthritis and define a JAK/STAT signature. Thereafter to investigate the role of JAK inhibition on inflammatory cytokine production in a macrophage cell contact activation assay. Finally, to investigate JAK inhibition, following RA synovial fluid stimulation of monocytes. Methods and Results: Using bioinformatic software such as limma from the Bioconductor repository, I determined that there was a JAK/STAT signature in synovial CD14 macrophages from patients with RA and this differed from psoriatic arthritis samples. JAK inhibition using a JAK1/3 inhibitor tofacitinib reduced TNFα production when macrophages were cell contact activated by cytokine stimulated CD4 T-cells. Other pro-inflammatory cytokines such as IL-6 and chemokines such as IP-10 were also reduced. RA synovial fluid failed to stimulate monocytes to phosphorylate STAT1, 3 or 6 but CD4 T-cells activated STAT3 with this stimulus. RNA sequencing of synovial fluid stimulated CD4 T-cells showed an upregulation of SOCS3, BCL6 and SBNO2, a gene associated with RA but with unknown function and tofacitinib reversed this. Conclusion: These studies demonstrate that tofacitinib is effective at reducing inflammatory mediator production in a macrophage cell contact assay and also affects soluble factor mediated stimulation of CD4 T-cells. This suggests that the effectiveness of JAK inhibition is due to inhibition of multiple cytokine pathways such as IL-6, IL-15 and interferon. RNA sequencing is a useful tool to identify non-coding RNA transcripts that are associated with synovial fluid stimulation and JAK inhibition but these require further validation. SBNO2, a gene that is associated with RA, may be biomarker of tofacitinib treatment but requires further investigation and validation in wider disease cohorts.

Principales agentes causales de peritonitis asociada a diálisis peritoneal de catéter blando y rígido y su sensibilidad antimicrobiana, en pacientes de nefrología del Hospital Nacional Rosales, de Mayo a Octubre de 2013

La falla renal crónica definitiva ocasiona la acumulación de productos metabólicos de desecho, alteraciones en el volúmen y en la concentración de electrólitos, así como diversos trastornos endocrinos. La diálisis peritoneal es una forma efectiva de terapia sustitutiva de la función renal. El Hospital Nacional Rosales, es la institución que más demanda tiene de servicios, y como en todo centro de salud es necesario conocer los patrones de susceptibilidad y las posibles terapias empíricas para las diferentes infeccines nosocomiales asociadas a la diálisis peritoneal. El objetivo del presente estudio es el de determinar cuáles son los microorganismos más comunes y su sensibilidad antimicrobiana en pacientes con peritonitis asociada a diálisis peritoneal en el programa de nefrología, de mayo a octubre de 2013. Materiales y método: observacional descriptivo y transversal. Periodo de investigación: mayo a octubre de 2013. Universo: cultivos de líquido peritoneal de pacientes de nefrología con diálisis peritoneal con catéter rígido o blando en el periodo mayo a octubre de 2013. Muestra: cultivos de líquido peritoneal positivos, de pacientes de nefrología con diálisis peritoneal con catéter rígido o blando en el periodo mayo a octubre de 2013. Tipo de muestreo: muestreo por cuotas. Resultados: el estudio mostró al igual que lo descrito en la literatura, que los microorganismos Gram positivos son los más frecuentemente identificados en las infecciones relacionadas a diálisis peritoneal, en catéter blando, y aunque a nivel internacional no está descrito el uso también en catéter rígido. Y que cada hospital, dependiendo de sus estudios de susceptibilidad, debe implementar su terapia empírica. Nosotros recomendamos iniciar el tratamiento con Vancomicina y Cefalosporina de cuarta generación o Amikacina, mientras se obtiene el reporte del cultivo del Líquido Ascítico.

Avaliação do potencial anti-inflamatório de composto tipo heparina (cCTH) extraído do caranguejo Goniopsis cruentata em modelo experimental de peritonite

Heparin, a sulfated polysaccharide, was the first compound used as an anticoagulant and antithrombotic agent. Due to their structural characteristics, also has great potential anti-inflammatory, though such use is limited in inflammation because of their marked effects on coagulation. The occurrence of heparin-like compounds that exhibit anticoagulant activity decreased in aquatic invertebrates, such as crab Goniopsis cruentata, sparked interest for the study of such compounds as anti-inflammatory drugs. Therefore, the objective of this study was to evaluate the potential modulator of heparin-like compound extracted from Goniopsis cruentata in inflammatory events, coagulation, and to evaluate some aspects of its structure. The heparin-type compound had a high degree of N-sulphation in its structure, being able to reduce leukocyte migration into the peritoneal cavity at lower doses compared to heparin and diclofenac sodium (anti-inflammatory commercial). Furthermore, it was also able to inhibit the production of nitric oxide and tumor necrosis factor alpha by activated macrophages, inhibited the activation of the enzyme neutrophil elastase in low concentrations and showed a lower anticoagulant effect in high doses as compared to porcine mucosal heparin. Because of these observations, the compound extracted from crab Goniopsis cruentata can be used as a structural model for future anti-inflammatory agents

IL-34- and M-CSF-induced macrophages switch memory T cells into Th17 cells via membrane IL-1α: Immunomodulation

International audience

Preparo de amostras citológicas de efusões, lavados (broncoalveolar e peritoneal) e líquor pelo método “plasma-tromboplastina”

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasilia, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016.

Diez años del Registro Uruguayo de Peritonitis en Diálisis Peritoneal

La peritonitis es una complicación grave de la diálisis peritoneal (DP), por lo que interesa conocer la incidencia y sensibilidad antibiótica de los gérmenes causantes. En Uruguay, desde el 1° de enero de 2004, se realiza un registro nacional de las peritonitis en DP, gérmenes, sensibilidad y evolución. Método: se analizaron los registros desde el 1° de enero de 2004 al 31 de diciembre de 2013. El registro fue aprobado por comités de ética institucionales. Resultados: en el período se registraron 850 peritonitis, con una incidencia que descendió de 0,49/paciente-año (2004-2005) a 0,37/paciente-año (2013). La incidencia de Staphylococcus aureus y Staphylococcus coagulasa negativo (SCoN) fue menor en 2009-2013 vs 2004-2005 (0,2 vs 0,12 peritonitis/paciente-año, test Poisson p<0,05). En 2009-2013: 14/54 S. aureus y 26/71 SCoN fueron meticilinorresistente, similar al período previo. El 98% de los gérmenes gramnegativos fueron sensibles a amikacina. En 145/467 (31%) episodios no se identificó germen. Se logró cura primaria en 71% de las peritonitis por grampositivos y en 45% por gramnegativos (chi2 p<0,05). En 2013 se observó mayor incidencia de peritonitis en los centros en los que no se controló el estado de portador nasal. Comentarios y conclusiones: se justifica implementar el control de portador de Staphylococcus aureus. La incidencia de peritonitis por S. aureus y SCoN meticilinorresistentes, la incidencia sostenida de gérmenes gramnegativos (con peor evolución), y el elevado porcentaje de cultivos sin desarrollo justifica mantener el protocolo antibiótico empírico inicial con vancomicina y amikacina. El descenso de la incidencia de S. aureus + SCoN podría ser atribuido a una mejor educación de los pacientes en DP.