927 resultados para EBT2, EBT3, Gafchromic film, In vivo dosimetry, Radiotherapy
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Mmoire numris par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Universit de Montral
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Mmoire numris par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Universit de Montral
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Il est maintenant admis que la composition de la plaque athrosclrotique est un dterminant majeur de sa vulnrabilit se rompre. Vu que la composition de la plaque affecte ses proprits mcaniques, l'valuation locale des proprits mcaniques de la plaque d'athrome peut nous informer sur sa vulnrabilit. L'objectif est de comparer les techniques dlastographie ultrasonores endovasculaire (EVE) et non-invasive (NIVE) en fonction de leur potentiel identifier les composantes calcifies et lipidiques de la plaque. Les acquisitions intravasculaire et extravasculaire ont t effectues sur les artres carotidiennes de neuf porcs hypercholestrolmiques laide dun cathter de 20 MHz et d'une sonde linaire de 7.5 MHz, respectivement. Les valeurs de dformation radiale et axiale, rapports par EVE et NIVE, ont t corrles avec le pourcentage des zones histologiques calcifies et lipidiques pour cinq plaques. Nos rsultats dmontrent une bonne corrlation positive entre les dformations et les composantes calcifies (r2 = 0.82, P = 0.034 valeur par EVE et r2 = 0.80, P = 0.041 valeur par NIVE). Une forte corrlation entre les dformations axiales et les contenus lipidiques par NIVE (r2 = 0.92, P-value = 0.010) a t obtenue. En conclusion, NIVE et EVE sont des techniques potentielles pour identifier les composants de la plaque et aider les mdecins diagnostiquer prcocement les plaques vulnrables.
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La recherche de nouvelles voies de correction de la scoliose idiopathique a une longue histoire. Le traitement conventionnel de la scoliose idiopathique est prsent par le port du corset ou par la correction opratoire de la dformation. Depuis leur introduction, les deux mthodes ont prouv leur efficacit. Cependant, malgr des caractristiques positives videntes, ces mthodes peuvent causer un nombre important d'effets indsirables sur la sant du patient. Les techniques sans fusion pour le traitement de la scoliose semblent tre une alternative perspective de traitement traditionnel, car ils apportent moins de risques et des complications chirurgicales que les mthodes conventionnelles avec la conservation de la mobilit du disque intravertbral. Cependant, l'utilisation de techniques mentionnes exige une connaissance profonde de la modulation de croissance vertbrale. L'objectif principal de la prsente tude est d'estimer le potentiel d'agrafes lAMF de moduler la croissance des vertbres porcines en mesurant la croissance osseuse sur la plaque de croissance de vertbres instrumentes en comparaison avec le groupe contrle. La mthode est base sur la loi de Hueter-Volkmann. Nous avons choisi NiTi agrafes lAMF pour notre tude et les porcs de race Landrace comme un animal exprimental. Les agrafes ont t insrs sur 5 niveaux thoracique de T6 T11. En outre, les radiographies ont t prises toutes les 2 semaines. La prsence d'agrafes en alliage mmoire de forme a produit la cration de courbes scoliotiques significatives dans 4 de 6 animaux chargs et le ralentissement considrable de la croissance osseuse (jusqu' 35,4%) comparativement aux groupes contrle et sham. L'tude a dmontr in vivo le potentiel d'agrafes en alliage mmoire de formes de moduler la croissance des vertbres en crant des courbes scoliotiques sur les radiographies et en ralentissant le taux de croissance sur les plaques de croissance instrument. La position prcise de l'agrafe est essentielle pour la modulation de croissance osseuse et le dveloppement de la scoliose exprimentale.
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Alors que lImagerie par rsonance magntique (IRM) permet dobtenir un large ventail de donnes anatomiques et fonctionnelles, les scanneurs cliniques sont gnralement restreints lutilisation du proton pour leurs images et leurs applications spectroscopiques. Le phosphore jouant un rle prpondrant dans le mtabolisme nergtique, lutilisation de cet atome en spectroscopie RM prsente un norme avantage dans lobservation du corps humain. Cela reprsente un certain nombre de dEis techniques relever dus la faible concentration de phosphore et sa frquence de rsonance diffrente. Lobjectif de ce projet a t de dvelopper la capacit raliser des expriences de spectroscopie phosphore sur un scanneur IRM clinique de 3 Tesla. Nous prsentons ici les diffrentes tapes ncessaires la conception et la validation dune antenne IRM syntonise la frquence du phosphore. Nous prsentons aussi linformation relative ralisation de fantmes utiliss dans les tests de validation et la calibration. Finalement, nous prsentons les rsultats prliminaires dacquisitions spectroscopiques sur un muscle humain permettant didentiEier les diffrents mtabolites phosphoryls haute nergie. Ces rsultats sinscrivent dans un projet de plus grande envergure o les impacts des changements du mtabolisme nergtique sont tudis en relation avec lge et les pathologies.
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Les slnoprotines sont des protines auxquelles des slnocystines, soit le 21e acide amin, sont incorpores durant leur traduction. Plus prcisment, la slnocystine (Sec) est un driv mtabolique de la srine, mais structurellement quivalent une cystine dont on a remplac l'atome de soufre par du slnium. Elle se distingue des autres acides amins puisquelle possde sa propre synthtase qui sert convertir la srine en Sec alors que le rsidu est dj fix lARNt. La position dune Sec sur lARNm est indique par le codon UGA tant habituellement un signal STOP introduisant le concept de recoding. Grce une machinerie mtabolique spcifique l'ARNtSec et la prsence dun SecIS (Selenocystein Insertion Sequence) sur lARNm, ce codon permet la prsence d'une Sec dans la protine. Il est connu que la synthse dbute avec lactylation de lARNt[Ser]Sec par la seryl-ARNt synthtase (SerRS) afin de donner la seryl-ARNt[Ser]Sec. Cette dernire est subsquemment phosphoryle par lO-phosphosryl-ARNt[Ser]Sec kinase (PSTK) qui donnera lO-phosphosryl-ARNt[Ser]Sec. Par la suite, un complexe de plusieurs protines et cofacteurs, agissant comme machinerie pour lincorporation des Sec durant la traduction, sassocie avec lARNt[Ser]Sec puis lARNm et, finalement, les composantes du ribosome. Parmi ces protines, SepSecS catalyse ltape finale de la synthse des Sec en convertissant le O-phosphoseryl-ARNt[Ser]Sec en selenocysteinyl-ARNt[Ser]Sec utilisant le slnophosphate comme source de slnium. Des tudes rcentes montrent que lassociation avec SECp43 serait ncessaire pour que SepSecS joue son rle et soit sgrge au noyau pour sassocier la machinerie de biosynthse des slnoprotines, soit le complexe molculaire qui reconnat le codon UGA. Parmi les protines de la machinerie de biosynthse des slnoprotines que nous avons analyses, il y a eEFSec, RPL30, SPS2, SPS1, SBP2 et NSEP1. Nos rsultats danalyse de la dynamique de linteraction entre les constituants de la machinerie de biosynthse et dincorporation des Sec, confirment plusieurs donnes de la littrature, mais remettent en question le modle jusqu maintenant tabli. Une meilleure comprhension de la dynamique des interactions entre ses constituants et la rgulation de cette dynamique permet dmettre des hypothses quant au rle de la machinerie de biosynthse des slnoprotines et de limportance de sa complexit. Nous avons analys les interactions in vivo dans des cellules HEK293T au moyen de la technique de Protein-Fragment Complementation Assay (PCA) en couplant, par un clonage molculaire, les gnes de chacune des protines dintrt avec des fragments des gnes de la protine lucifrase (hRluc). Nous avons ainsi ralis une fusion en N-terminal et en C-terminal des fragments de lucifrase pour chacune des protines dintrt. Puis, nous avons analys la dynamique des interactions avec les composantes de la machinerie de biosynthse des Sec. Dautres travaux seront essentiels afin de btir sur les rsultats prsents dans cette recherche.
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Dock1 (aussi nomm Dock180) est le membre prototypique de la famille Dock dactivateurs des petites GTPases de la famille Rho. Dock1 agit au sein dune voie de signalisation conserve au cours de lvolution et des tudes gntiques ont dmontr que les orthologues de Dock1, myoblast city (mbc) chez la drosophile et Ced-5 chez le nmatode, activent Rac dans divers processus biologiques. Notamment, mbc est un important rgulateur de la fusion des myoblastes lors de la formation des fibres musculaires de drosophile. Mbc est aussi essentiel la migration collective dun groupe de cellules, appeles cellules de bordures, lors de leur migration dans la chambre de loeuf suite lactivation de rcepteurs activit tyrosine kinase (RTK). La migration collective des cellules de bordures rcapitule certains des vnements observs lorsque des cellules tumorales envahissent le tissu environnant lors de la formation de mtastases. Chez les mammifres, des tudes ralises en lignes cellulaires suggrent que Dock1 est aussi un rgulateur du cytosquelette lors de la migration cellulaire. De plus, certaines tudes ont dmontr que la voie Dock1/Rac agit en aval de RTKs lors de linvasion de cellules de glioblastome. Nanmoins, les fonctions in vivo de Dock1 chez les mammifres demeurent mconnues et le but de cette thse est didentifier et de caractriser certaines de ses fonctions. Guids par la fonction de mbc, nous dmontrons dans lobjectif no 1 un rle essentiel pour ce gne au cours du dveloppement embryonnaire grce la caractrisation dune souris Dock1 knock-out. Des dfauts svres de fusion des myoblastes sont observs en absence de lexpression de Dock1 et ils contribuent la rduction de la masse musculaire des souris mutantes. De plus, nous avons constat une contribution du gne Dock5, un membre de la famille Dock proche de Dock1, au dveloppement des fibres musculaires. Dans lobjectif no 2, nous avons observ que des hauts niveaux dexpression de DOCK1 corrlent avec un mauvais pronostic chez les patientes atteintes de cancer du sein possdant une forte expression du gne codant pour le RTK HER2. Une surexpression ou une amplification du locus codant pour le rcepteur HER2 est associe prs de 20% des cas de cancer du sein. Les cancers de ces patientes dveloppent frquemment des mtastases et sont associs un mauvais pronostic. Des tudes biochimiques ont rvl que DOCK1 interagit avec le rcepteur HER2 dans des cellules de cancer du sein. De plus, DOCK1 est essentiel lactivation de RAC et la migration cellulaire induite par HER2 dans ces cellules. Lutilisation dun modle de cancer du sein mdi par HER2 chez la souris combin avec linactivation du gne Dock1 dans les glandes mammaires, nous a permis didentifier Dock1 et Rac comme de nouveaux effecteurs de la croissance tumorale et de la formation de mtastases rgules par loncogne HER2. Nous concluons que lutilisation de diffrents modles de souris knock-out pour le gne Dock1 nous a permis didentifier des fonctions cls de ce gne. Tout comme son orthologue mbc, Dock1 joue un rle important lors du dveloppement embryonnaire en rgulant notamment la fusion des myoblastes. Nos tudes ont galement contribu dmontrer un important degr de conservation des mcanismes molculaires de fusion entre les espces. De plus, DOCK1 agit en aval du RTK HER2 et son expression dans les cellules pithliales de glandes mammaires contribue au dveloppement tumoral et la formation de mtastases induits par cet oncogne.
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Les amidons non modifies et modifis reprsentent un groupe dexcipients biodgradables et abondants particulirement intressant. Ils ont t largement utiliss en tant quexcipients des fins diverses dans des formulations de comprims, tels que liants et/ou agents de dlitement. Le carboxymthylamidon sodique haute teneur en amylose atomis (SD HASCA) a t rcemment propos comme un excipient hydrophile libration prolonge innovant dans les formes posologiques orales solides. Le carboxymthylamidon sodique haute teneur en amylose amorphe (HASCA) a d'abord t produit par l'thrification de l'amidon de mas haute teneur en amylose avec le chloroactate. HASCA a t par la suite sch par atomisation pour obtenir le SD HASCA. Ce nouvel excipient a montr des proprits prsentant certains avantages dans la production de formes galniques libration prolonge. Les comprims matriciels produits partir de SD HASCA sont peu coteux, simples formuler et faciles produire par compression directe. Le principal objectif de cette recherche tait de poursuivre le dveloppement et l'optimisation des comprims matriciels utilisant SD HASCA comme excipient pour des formulations orales libration prolonge. A cet effet, des tests de dissolution simulant les conditions physiologiques du tractus gastro-intestinal les plus pertinentes, en tenant compte de la nature du polymre ltude, ont t utiliss pour valuer les caractristiques libration prolonge et dmontrer la performance des formulations SD HASCA. Une tude clinique exploratoire a galement t ralise pour valuer les proprits de libration prolonge de cette nouvelle forme galnique dans le tractus gastro-intestinal. Le premier article prsent dans cette thse a valu les proprits de libration prolonge et l'intgrit physique de formulations contenant un mlange comprim de principe actif, de chlorure de sodium et de SD HASCA, dans des milieux de dissolution biologiquement pertinentes. L'influence de diffrentes valeurs de pH acide et de temps de sjour dans le milieu acide a t tudie. Le profil de libration prolonge du principe actif partir d'une formulation de SD HASCA optimise n'a pas t significativement affect ni par la valeur de pH acide ni par le temps de sjour dans le milieu acide. Ces rsultats suggrent une influence limite de la variabilit intra et interindividuelle du pH gastrique sur la cintique de libration partir de matrices de SD HASCA. De plus, la formulation optimise a gard son intgrit pendant toute la dure des tests de dissolution. Ltude in vivo exploratoire a dmontr une absorption prolonge du principe actif aprs administration orale des comprims matriciels de SD HASCA et a montr que les comprims ne se sont pas dsintgrs en passant par l'estomac et quils ont rsist lhydrolyse par les -amylases dans l'intestin. Le deuxime article prsente le dveloppement de comprims SD HASCA pour une administration orale une fois par jour et deux fois par jour contenant du chlorhydrate de tramadol (100 mg et 200 mg). Ces formulations libration prolonge ont prsent des valeurs de duret leves sans ncessiter l'ajout de liants, ce qui facilite la production et la manipulation des comprims au niveau industriel. La force de compression applique pour produire les comprims n'a pas d'incidence significative sur les profils de libration du principe actif. Le temps de libration totale partir de comprims SD HASCA a augment de manire significative avec le poids du comprim et peut, de ce fait, tre utilis pour moduler le temps de libration partir de ces formulations. Lorsque les comprims ont t exposs un gradient de pH et un milieu 40% d'thanol, un gel trs rigide sest form progressivement sur leur surface amenant la libration prolonge du principe actif. Ces proprits ont indiqu que SD HASCA est un excipient robuste pour la production de formes galniques orales libration prolonge, pouvant rduire la probabilit dune libration massive de principe actif et, en consquence, des effets secondaires, mme dans le cas de co-administration avec une forte dose d'alcool. Le troisime article a tudi l'effet de -amylase sur la libration de principe actif partir de comprims SD HASCA contenant de lactaminophne et du chlorhydrate de tramadol qui ont t dvelopps dans les premires tapes de cette recherche (Acetaminophen SR et Tramadol SR). La modlisation mathmatique a montr qu'une augmentation de la concentration d-amylase a entran une augmentation de l'rosion de polymre par rapport la diffusion de principe actif comme tant le principal mcanisme contrlant la libration de principe actif, pour les deux formulations et les deux temps de rsidence en milieu acide. Cependant, mme si le mcanisme de libration peut tre affect, des concentrations d-amylase allant de 0 UI/L 20000 UI/L n'ont pas eu d'incidence significative sur les profils de libration prolonge partir de comprims SD HASCA, indpendamment de la dure de sjour en milieu acide, le principe actif utilis, la teneur en polymre et la diffrente composition de chaque formulation. Le travail prsent dans cette thse dmontre clairement l'utilit de SD HASCA en tant qu'un excipient libration prolonge efficace.
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L'arthrose est une maladie articulaire dgnrative, avec une pathogense inconnue. Des tudes rcentes suggrent que l'activation du facteur de transcription du rcepteur activateur de la prolifration des peroxysomes (PPAR) gamma est une cible thrapeutique pour ce maladie. Les agonistes du PPAR inhibent l'inflammation et rduisent la synthse des produits de dgradation du cartilage in vitro et in vivo. Cependant, des tudes utilisant des agonistes du PPAR nlucident pas les effets exacts mdis par ce gne complexe. En effet, certains de ces agonistes ont la capacit de rgulariser d'autres voies de signalisation indpendantes de PPAR, ainsi entranant des effets secondaires graves. Afin d'obtenir une efficacit thrapeutique avec potentiellement moins de problmes de scurit, il est donc essentiel d'lucider, in vivo, le rle exact de PPAR dans la physiopathologie OA. Mon projet de thse permettra de dterminer, pour la premire fois, le rle spcifique de PPAR in vivo dans la physiopathologie OA. Les souris utilises pour ltude avaient une dltion conditionnelle du gne PPAR dans le cartilage. Ces dernires ont t gnres en employant le systme LoxP/Cre. Pour tester cette hypothse, j'ai gnr deux types de souris avec une dltion au PPAR, (a) une suppression du gne PPAR spcifiquement dans le cartilage germinale pour l'tude de l'arthrose lie au dveloppement et l'ge et (b) la suppression inductible du gne PPAR spcifiquement dans le cartilage chez la souris adulte pour les tudes OA. Ltude prcdente dans notre laboratoire, utilisant ces souris ayant une dltion au gne PPAR germinales, montre que ces souris prsentent des anomalies du dveloppement du cartilage. J'ai galement explor si ces souris qui prsentent des dfauts prcoces du dveloppement ont toutes les modifications phnotypiques dans le cartilage au cours du vieillissement. Mes rsultats ont montr que les souris adultes, ayant une dltion au gne PPAR, ont prsenter un phnotype de l'arthrose spontane associe une dgradation du cartilage, lhypocellularit, la fibrose synoviale. Cette tude a montr que PPAR est un rgulateur essentiel pour le cartilage, et cest le manque (labsence) de ce dernier qui conduit un phnotype de l'arthrose spontane acclre (American Journal of Pathologie). A partir de ce but de l'tude, on na pas pu vrifier si ces souris prsentaient lOA spontane en raison des dfauts de dveloppement ou la suite de la dltion du gne PPAR. Pour contourner les dfauts de dveloppement, j'ai gnr des souris ayant une dltion du gne PPAR spcifiquement dans le cartilage inductible avec le systme Col2rTACre. Ces souris ont t soumises modle de la chirurgie OA (DMM: dstabilisation du mnisque mdial) et les rsultats rvlent que les souris PPAR KO ont une dgradation acclre du cartilage, une hypocellularit, une fibrose synoviale et une augmentation de l'expression des marqueurs cataboliques et des marqueurs inflammatoire. La perte de PPAR dans le cartilage articulaire est un vnement critique qui initie la dgradation de cartilage dans OA. Les tudes rcentes suggrent que le procs dautophagie, une forme de survie cellulaire programme, est altr pendant lOA et peut contribuer vers une protection diminue des cellules, rsultant la dgradation du cartilage. Jai donc explor le rle de PPAR dans la protection des cellules en dterminant leffet de manque de PPAR dans le cartilage par lexpression de mTOR (rgulateur ngatif principal dautophagie) et les gnes dautophagie durant OA. Mes rsultats ont montr que les souris KO PPAR prsentent galement une augmentation sur l'expression de mTOR et une diminution sur lexpression des marqueurs autophagiques en comparaison avec les chondrocytes articulaires isols des souris contrles OA. J'ai suggr l'hypothse que PPAR contrle la rgulation de la signalisation de mTOR/autophagie, et finalement la mort des chondrocytes et lexpression des facteurs cataboliques et les facteurs inflammatoire. Pour tester cette hypothse, jai fait la transfection des chondrocytes arthrosiques PPAR-KO avec le vecteur dexpression de PPAR pour dterminer si la restauration de l'expression de PPAR peut sauver le phnotype des cellules PPAR-KO OA. J'ai observ que la restauration de l'expression de PPAR dans les cellules PPAR-KO en prsence du vecteur d'expression PPAR, a pu considrablement rgulariser ngativement l'expression de mTOR et mettre en rgle positivement l'expression des gnes autophagiques ainsi que le sauvetage significative de l'expression du collagne de type II et laggrecan et de baisser de manire significative l'expression de marqueurs cataboliques critiques et des marqueurs inflammatoires. Pour prouver que laugmentation de la signalisation de mTOR et la diminution de l'autophagie est responsable du phnotype OA acclre observe dans les souris PPAR KO in vivo, j'ai gnr les souris doubles KO PPAR- mTOR inductible spcifique du cartilage en utilisant le systme Col2 - rtTA -Cre et soumis ces souris DMM modle de l'arthrose. Mes rsultants dmontrent que les souris avec PPAR- mTOR doubles KO ont t significativement protgs contre les OA DMM induites associes une protection significative contre la destruction du cartilage, la perte de protoglycanes et la perte de chondro-cellularit par rapport aux souris tmoins. Considrant que mTOR est un rpresseur majeur de l'autophagie, j'ai trouv que l'expression de deux marqueurs de l'autophagie critiques (ULK1 et LC3B) a t significativement plus leve dans les chondrocytes extraits les souris doubles KO PPAR-mTOR par rapport aux souris tmoins. En plus, les tudes de sauvetage in vitro en utilisant le vecteur d'expression PPAR et les tudes in vivo utilisant les souris doubles KO PPAR- mTOR montrent que PPAR est impliqu dans la rgulation de la protine signalant de mTOR/autophagie dans le cartilage articulaire. Ces rsultats contournent PPAR et sa signalisation en aval de mTOR/autophagie en tant que cibles thrapeutiques potentielles pour le traitement de l'arthrose.
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La slnocystine est le 21e acide amin encod gntiquement et on la retrouve travers les trois domaines de la vie. Elle est synthtise sur l'ARNtSec par un processus unique. L'ARNtSec se distingue galement au niveau structural. La tige acceptrice possde 8 (procaryotes) et 9 (eucaryotes) paires de bases, contrairement aux ARNt canoniques qui ont invariablement 7 paires de bases dans la tige acceptrice. De plus, la tige D a 2 paires de bases additionnelles qui remplacent les interactions tertiaires universelles 8-14, 15-48 qui sont absentes chez l'ARNtSec. D'autre part, la longueur de la boucle variable de l'ARNtSec est plus longue que la majorit des ARNt de type II. Dans ce mmoire, on se concentre sur la rgion de la boucle variable de l'ARNtSec . La recherche consiste distinguer les paires de bases de la boucle variable qui sont essentielles la biosynthse et linsertion de la slnocystine. De plus, on regarde si la paire de base additionnelle de la tige acceptrice de l'ARNtSec (procaryote) est essentielle pour l'insertion de la slnocystine. Pour rpondre ces questions, on a utilis l'approche exprimentale volution Instantane qui consiste au criblage in vivo d'ARNtSec fonctionnels chez E. coli. Dans ce travail, on montre que l'insertion de la slnocystine ne ncessite pas une spcificit de la longueur ou de la squence de l'ARNtSec. On montre aussi que ni la longueur de la tige acceptrice ou du domaine tige acceptrice/tige T n'est essentielle pour avoir un ARNtSec fonctionnel.
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Les dendrites sont essentielles pour la rception et lintgration des stimuli affrents dans les neurones. De plus en plus dvidences dune dtrioration dendritique sont associes une axonopathie dans les maladies neurodgnratives. Le glaucome dont la physiopathologie est caractrise par une dtrioration progressive et irrversible des cellules ganglionnaires de la rtine (CGRs) est la premire cause de ccit irrversible dans le monde. Son volution est associe un amincissement graduel des axones et latrophie des somas des CGRs. La majorit des tudes de neuroprotection des neuropathies rtiniennes visent la survie et la protection des somas et des axones. Des tudes rcentes ont dmontr des changements dendritiques associs cette pathologie, toutefois les mcanismes molculaires les rgulant sont mconnus. Lhypothse principale de ma thse stipule quune lsion axonale entrane des altrations prcoces des structures dendritiques. Lidentification de voies de signalisation rgulant ces changements permettrait dlaborer des stratgies de neuroprotection et de rtablir la fonction de ces neurones. Dans la premire tude, nous avons examin leffet prcoce dune lsion axonale aige sur la morphologie dendritique des CGRs in vivo. En utilisant des souris transgniques exprimant la protine fluorescente jaune (YFP) soumises une axotomie, nous avons dmontr un rtrcissement de larbre dendritique des CGRs et une diminution slective de lactivit de mTOR avant le dbut de la mort des CGRs lses. Aussi nous avons dmontr une augmentation de lexpression de la protine Regulated in development and DNA damage response 2 (REDD2), un rgulateur ngatif en amont de la protine mTOR en rponse la lsion du nerf optique in vivo. Nous avons dmontr que la ractivation de mTOR par linhibition de lexpression de REDD2 prserve les arbres dendritiques des CGRs adultes. En effet, linjection de petits ARN dinterfrence contre la REDD2 (siREDD2) stimule lactivit de mTOR dans les CGRs lses et augmente significativement la longueur et la surface dendritique totale. De plus, la rapamycine, un inhibiteur de mTOR, inhibe compltement leffet du siREDD2 sur la croissance et llaboration des dendrites. Lanalyse lectrophysiologique des CGRs dmontre une augmentation de lexcitabilit des CGRs lses qui est restaure en prsence du siREDD2. Par ailleurs, des donnes rcentes ont mis en vidence limplication de la neuro-inflammation dans le glaucome, caractrise par une augmentation de cytokines pro-inflammatoires dont principalement le facteur de ncrose tumorale (TNF). Ainsi dans la deuxime tude nous avons examin leffet du TNF exogne sur la morphologie de larbre dendritique des CGRs et commenc ltude des mcanismes molculaires sous-jacents ces changements. Nos rsultats dmontrent que linjection de TNF recombinante dans le vitre induit une rtraction dendritique prcoce qui corrle une rduction de phospho-S6 suggrant limplication de mTOR dans ces CGRs lses. Ainsi, les tudes prsentes dans cette thse mettent en vidence un nouveau rle de mTOR dans la stabilit et le maintien des dendrites de neurones rtiniennes adultes. Ces tudes ont aussi dmontr leffet prcoce de stress direct ou indirect, cest--dire laxotomie et le TNF respectivement sur la pathologie dendritique et sur leur effet sur la fonction neuronale.
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Deoxynivalenol (DON), also known as vomitoxin, is the most prevalent type B trichothecene mycotoxin worldwide. Pigs show a great sensitivity to DON, and because of the high proportion of grains in their diets, they are frequently exposed to this mycotoxin. The objective of this study was to determine the impact of DON naturally contaminated feed on porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) infection, the most important porcine viral pathogen in swine. Experimental infections were performed with 30 animals. Piglets were randomly divided into three groups of 10 animals based on DON content of diets (0, 2.5 and 3.5 mg/kg DON). All experimental groups were further divided into subgroups of 6 pigs and were inoculated with PRRSV. The remaining pigs (control) were sham-inoculated with PBS. Pigs were daily monitored for temperature, weight and clinical signs for 21 days. Blood samples were collected and tested for PRRSV RNA and for virus specific antibodies. Results of PRRSV infection showed that ingestion of diet highly contaminated with DON greatly increases the effect of PRRSV infection on weight gain, lung lesions and mortality, without increasing significantly viral replication, for which the tendency is rather directed toward a decrease of replication. These results suggest that PRRSV infection could exacerbate anorectic effect of DON, when ingested in large doses. Results also demonstrate a DON negative effect on PRRSV-specific humoral responses. This study demonstrate that high concentrations of DON naturally contaminated feed decreased the immune response against PRRSV and influenced the course of PRRSV infection in pigs.
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Deoxynivalenol (DON) is a mycotoxin produced by Fusarium spp and is a common contaminant of grains in North America. Among farm animals, swine are the most susceptible to DON because it markedly reduces feed intake and decreases weight gain. Porcine circovirus type 2 (PCV2) is the main causative agent of several syndromes in weaning piglets collectively known as porcine circovirus-associated disease (PCVAD). The objectives of this study were to investigate the impact of DON on PCV2 replication in NPTr permissive cell line, and to determine eventual potentiating effects of DON on PCV2 infection in pigs. Noninfected and infected cells with PCV2 were treated with increasing concentrations of DON (0, 70, 140, 280, 560, 1200 ng/mL) and cell survival and virus titer were evaluated 72 h postinfection. Thirty commercial piglets were randomly divided into 3 experimental groups of 10 animals based on DON content of served diets (0, 2.5 and 3.5 mg/kg DON). All groups were further divided into subgroups of 6 pigs and were inoculated with PCV2b virus. The remaining pigs (control) were sham-inoculated with PBS. In vitro results showed that low concentrations of DON could potentially increase PCV2 replication depending on virus genotype. In vivo results showed that even though viremia and lung viral load tend to be higher in animal ingesting DON contaminated diet at 2.5 mg/kg, DON had no significant effect on clinical manifestation of PCVAD in PCV2b infected animals. DON has neither in vitro nor in vivo clear potentiating effects in the development of porcine circovirus infection despite slight increases in viral replication.
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Les rcoltes de crales sont souvent contamines par des moisissures qui se dveloppent pendant la rcolte et lentreposage et produisent des mtabolites secondaires appels mycotoxines. Le porc est reconnu pour tre sensible au doxynivalnol (DON). Linfection virale la plus importante chez le porc est cause par le virus du syndrome reproducteur et respiratoire porcin (VSRRP). Celui-ci provoque un syndrome grippal et des troubles de reproduction. Lobjectif du prsent projet tait de dterminer l'effet in vitro de DON sur la rplication du VSRRP dans de lignes cellulaires permissives, MARC-145 et PAM, et dterminer in vivo l'impact de DON dans des aliments naturellement contamins sur linfection au VSRRP chez le porcelet. Tout dabord, les cellules ont t incubes avec des doses croissantes de DON et ont t infectes avec du VSRRP pour valuer la viabilit et la mortalit cellulaire, la rplication virale et lexpression de cytokines. Les rsultats ont montr que les concentrations de DON de 560ng/ml et plus affectaient significativement la survie des cellules MARC-145 et PAM infectes par le VSRRP. En revanche, il y avait une augmentation significative de la viabilit et une rduction de la mortalit cellulaire des concentrations de DON de 140 280 ng/ml pour les cellules PAM et de 70 280 ng/ml pour les cellules MARC-145 avec une rduction de l'effet cytopathique provoqu parle VSRRP. Au niveau in vivo, 30 porcelets diviss en 3 groupes de 10 porcelets et nourris pendant 2 semaines avec 3 diffrentes dites naturellement ont t contamines avec DON (0; 2,5 et 3,5 mg/kg). Les porcelets ont t subdiviss en 6 groupes, 3 groupes de 6 porcelets et ont t exposs au DON pendant 2 semaines et infects par voie intratrachale et intramusculaire avec le virus. Les 3 autres groupes de 4 porcelets servaient de contrle non infects. Les signes cliniques ont t enregistrs pendant 21 jours. La virmie a t value par PCR. la fin de lexprimentation, les porcelets ont t euthanasis et les lsions pulmonaires ont t values. Les rsultats ont montr que lingestion de DON 3,5 mg/kg a augment leffet du VSRRP sur la svrit des signes cliniques, les lsions pulmonaires et la mortalit. Lingestion de DON 2,5 mg/kg a entrain une augmentation de la virmie au jour 3 aprs linfection mais sans impact sur les signes cliniques et les lsions pulmonaires. Mot cls: DON, VSRRP, MARC-145, PAM, effet cytopathique, cytokines, PCR
Resumo:
Les effets bnfiques des lipoprotines de haute densit (HDL) contre l'athrosclrose ont t attribus, en grande partie, leur composante protique majeure, l'apolipoprotine A-I (apoA-I). Cependant, il y a des indications que l'apoA-I peut tre dgrade par des protases localises dans les plaques athrosclrotiques humaines, ce qui pourrait rduire l'efficacit des thrapies bases sur les HDL sous certaines conditions. Nous dcrivons ici le dveloppement et l'utilisation d'une nouvelle sonde bioactivatable fluorescente dans le proche infrarouge, apoA-I-Cy5.5, pour l'valuation des activits protolytiques spcifiques qui dgradent l'apoA-I in vitro, in vivo et ex vivo. La fluorescence basale de la sonde est inhibe par la saturation du fluorophore Cy5.5 sur la protine apoA-I, et la fluorescence mise par le Cy5.5 (proche infrarouge) est rvle aprs clivage de la sonde. La protolyse in vitro de l'apoA-I par des protases a montr une augmentation de la fluorescence allant jusqu' 11 fois (n=5, P 0.05). En utilisant notre nouvelle sonde apoA-I-Cy5.5 nous avons pu quantifier les activits protolytiques d'une grande varit de protases, incluant des srines (chymase), des cystines (cathepsine S), et des mtalloprotases (MMP-12). En outre, nous avons pu dtecter l'activation de la sonde apoA-I-Cy5.5 sur des sections d'aorte de souris athrosclrotiques par zymographie in situ et avons observ qu'en prsence d'inhibiteurs de protases large spectre, la sonde pourrait tre protge des activits protolytiques des protases (-54%, n=6, P 0,001). L'infusion in vivo de la sonde apoA-I-Cy5.5 dans les souris athrosclrotiques (Ldlr -/--Tg (apoB humaine)) a rsult en utilisant un systme d'imagerie molculaire combinant la fluorescence molculaire tomographique et la rsonance magntique,en un signal de fluorescence dans l'aorte plus important que celui dans les aortes des souris de type sauvage C57Bl/6J (CTL). Les mesures in vivo ont t confirmes par l'imagerie ex vivo de l'aorte qui a indiqu une augmentation de 5 fois du signal fluorescent dans l'aorte des souris ATX (n=5) par rapport l'aorte des souris (n=3) CTL (P 0,05). L'utilisation de cette sonde pourrait conduire une meilleure comprhension des mcanismes molculaires qui sous-tendent le dveloppement et la progression de l'athrosclrose et l'amlioration des stratgies thrapeutiques base de HDL.
