Indução de metabólitos secundários em plântulas de Hypericum brasiliense Choisy crescendo in vitro

A produção de rutina, quercetina, 1,5-diidroxixantona e ácido betulínico foi investigada em plântulas de H. brasiliense crescendo in vitro, sob a influência de ácido salicílico, polietilenoglicol, NaCl, 24-epibrassinolídeo, benzotiadiazole (BION), metiljasmonato e concentrações aumentadas de boro e nitrogênio no meio líquido de cultura. As avaliações foram feitas após 5 e 10 dias do início dos tratamentos. Os maiores aumentos de conteúdo foram observados com quercetina para boro e ácido salicílico aos 5 dias, e 24-epibrassinolídeo e BION aos 10 dias.

In vitro screening of Amazonian plants for hemolytic activity and inhibition of platelet aggregation in human blood

In the present study, different aerial parts from twelve Amazonian plant species found in the National Institute for Amazon Research's (INPA's) Adolpho Ducke Forest Reserve (in Manaus, Amazonas, Brazil) were collected. Separate portions of dried, ground plant materials were extracted with water (by infusion), methanol and chloroform (by continuous liquid-solid extraction) and solvents were removed first by rotary evaporation, and finally by freeze-drying which yielded a total of seventy-one freeze-dried extracts for evaluation. These extracts were evaluated initially at concentrations of 500 and 100 µg/mL for in vitro hemolytic activity and in vitro inhibition of platelet aggregation in human blood, respectively. Sixteen extracts (23 % of all extracts tested, 42 % of all plant species), representing the following plants: Chaunochiton kappleri (Olacaceae), Diclinanona calycina (Annonaceae), Paypayrola grandiflora (Violaceae), Pleurisanthes parviflora (Icacinaceae), Sarcaulus brasiliensis (Sapotaceae), exhibited significant inhibitory activity towards human platelet aggregation. A group of extracts with antiplatelet aggregation activity having no in vitro hemolytic activity has therefore been identified. Three extracts (4 %), all derived from Elaeoluma nuda (Sapotaceae), exhibited hemolytic activity. None of the plant species in this study has known use in traditional medicine. So, these data serve as a baseline or minimum of antiplatelet and hemolytic activities (and potential usefulness) of non-medicinal plants from the Amazon forest. Finally, in general, these are the first data on hemolytic and inhibitory activity on platelet aggregation for the genera which these plant species represent.

Estudo farmacognóstico e atividade in vitro sobre a coagulação sanguínea e agregação plaquetária das folhas de Passiflora nitida Kunth (Passifloraceae)

O gênero Passiflora (Passifloraceae) é utilizado principalmente para tratar doenças do SNC e cardiovasculares. A espécie Passiflora nitida Kunth é comumente conhecida como “maracujá-do-mato". A literatura relata o consumo in natura dos frutos desta espécie pela população local para distúrbios gastrointestinais. Considerando o potencial farmacológico do gênero, este trabalho teve por objetivo realizar estudo de caracterização fitoquímica desta espécie e estudar os efeitos dos extratos aquoso (EA), etanólico (EE) e hexânico (EH) de suas folhas sobre a coagulação sanguínea e agregação plaquetária. Para a caracterização fitoquímica foram realizados testes de cromatografia em camada delgada e ressonância magnética nuclear. O efeito dos extratos sobre a coagulação foi avaliado pelos testes de tempo de protrombina (TP) e tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa). O efeito sobre a agregação plaquetária foi avaliado em plasma rico em plaquetas por método espectrofotométrico, usando adenosina difosfato (ADP) e adrenalina (ADR) como indutores da agregação. Os extratos EA, EE e EH apresentaram atividade coagulante pelo teste do TP e o EE apresentou atividade anticoagulante para o TTPa. Quando induzidos por ADP, os extratos EA, EE e EH apresentaram valores de concentração inibitória 50% (CI50, µg/mL) de 450,5 ± 50,7; 511,2 ± 35,5 e 394,4 ± 8,9, respectivamente, e quando induzidos por ADR apresentaram valores de 438,7 ± 5,2; 21,0 ± 1,9 e 546,9 ± 49,9, respectivamente. O EE apresentou atividade inibitória sobre a agregação. A caracterização fitoquímica foi sugestiva da presença de flavonóides e cumarinas, aos quais podem ser atribuídos, em parte, os efeitos biológicos estudados.

Efeito de diferentes reguladores de crescimento na regeneração in vitro de pau-rosa (Aniba rosaeodora Ducke)

O objetivo deste trabalho foi estabelecer um protocolo para a regeneração in vitro de pau-rosa (Aniba rosaeodora Ducke), utilizando brotações apicais e segmentos nodais inoculados em meio de cultura com distintas concentrações de diferentes reguladores de crescimento. Explantes esterilizados com soluções de benomyl (4,0 g.L-1) por 24 horas e hipoclorito de sódio a 20% + tween 20 por 20 minutos, foram submetidos a um experimento de indução de broto, raiz e calo em meio MS1 acrescido de 30g.L-1 de sacarose e 9g.L-1 de agar, suplementado com BAP (0,0 e 4,0 mg.L-1), ANA, AIA e 2,4-D (0,0; 3,0 e 6,0 mg.L-1), e suas respectivas combinações. O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado em esquema fatorial 7 X 2, com 14 tratamentos e 15 repetições cada, onde foram analisados o número médio de brotos, raízes e calo. Após 90 dias, os resultados mostraram que a presença de auxinas é fundamental para a formação dos parâmetros induzidos nos explantes de pau-rosa. O meio de cultura contendo 4,0 mg.L-1 de BAP + 6,0 mg.L-1 de AIA apresentou a melhor média para a brotação com 2,13 brotos/explante. Para o enraizamento o meio contendo 3,0 mg.L-1 de ANA foi o mais eficiente, apresentando uma média de 2,53 raízes/explante. Em relação à indução de calo, todos os tratamentos apresentaram calogênese, porém o meio suplementado com 4,0 mg.L-1 de BAP + 6,0 mg.L-1 de 2,4-D, apresentou a melhor média, 1,67 calos/explante.

In vitro anti-Candida activity of Glycyrrhiza glabra L.

The severity and frequency of opportunistic fungal infections still growing, concomitantly to the increasing rates of antimicrobial drugs resistance. Natural matrices have been used over years due to its multitude of health benefits, including antifungal potential. Thus, the present work aims to evaluate the anti-Candida potential of the phenolic extract and individual phenolic compounds of Glycyrrhiza glabra L. (licorice), by disc diffusion assay, followed by determination of the minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal fungicidal concentration (MFC) for both planktonic cells and biofilms. Licorice extract evidenced inhibitory potential against the nineteen tested Candida strains, but no pronounced effect was observed by testing the most abundant individual phenolic compounds. Candida tropicalis strains were the most sensible, followed by Candida glabrata, Candida parapsilosis and, then, Candida albicans. Lower MIC and MFC values were achieved to C. glabrata and C. tropicalis, which confirms its susceptibility to licorice extract; however, for C. tropicalis strains a higher variability was observed. Anti-biofilm potential was also achieved, being most evident in some C. glabrata and C. tropicalis strains. In general, a twice concentration of the MIC was necessary for planktonic cells to obtain a similar potential to that one observed for biofilms. Thus, an upcoming approach for new antifungal agents, more effective and safer than the current ones, is stablished; notwithstanding, further studies are necessary in order to understand its mechanism of action, as also to assess kinetic parameters.

Estabelecimento e multiplicação in vitro de brotos no processo de micropropagação de cultivares de bananeira (Musa spp.)

A banana (Musa spp.) é uma das frutas mais consumidas no mundo, e amplamente cultivada no Brasil, porém doenças como as sigatokas, negra e amarela, vêm reduzindo a sua produção. A disponibilização imediata de novas cultivares resistentes às principais doenças é limitada pela propagação convencional. A micropropagação é uma alternativa para a produção de mudas com qualidade fitossanitária e vegetativa, mas apresenta fatores que dificultam sua aplicação como a contaminação por fungos e bactérias, associada à oxidação dos explantes. O objetivo desse trabalho foi adaptar e/ou otimizar as etapas do processo de micropropagação para diferentes cultivares de bananeira, por meio do controle de oxidação, contaminação, e multiplicação de brotos, sendo utilizadas as cultivares Caipira (AAA), BRS Caprichosa (AAAB), Pacovan Ken (AAAB), Preciosa (AAAB), PV 03-76 (AAAB), Thap Maeo (AAB). No estudo foram utilizados o antibiótico sulfato de estreptomicina e o fungicida Opera® (BASF) visando reduzir a contaminação in vitro provocada por bactérias e fungos, além do anti-oxidante PVP (polivinilpirrolidona) para controlar a oxidação. Houve redução da contaminação com uso do sulfato de estreptomicina à concentração de 100 mg L-1 e da oxidação com PVP a 4 g L-1. Na fase de multiplicação de brotos, as cultivares apresentaram médias que variaram de 1,90 a 4,75 brotos/explante. A cultivar caipira (AAA) destacou-se das demais com a maior taxa de multiplicação de brotos após três subcultivos, média de 41,50 brotos por rizoma.

Desenvolvimento inicial e crescimento in vitro de Cattleya violacea (Kunth) Rolfe em diferentes concentrações de sacarose

O presente estudo teve por objetivo analisar os aspectos da germinação e avaliar o efeito de concentrações de sacarose no crescimento in vitro de Cattleya violacea. Sementes provenientes de cápsulas fechadas foram semeadas em meio de cultura Murashige e Skoog (MS) e a morfologia externa da semente à plântula foi fotodocumentada em estereomicroscópio e microscópio eletrônico de varredura. Plântulas com 90 dias após a semeadura foram repicadas em meio de cultura ½ MS (com metade da concentração de macronutrientes) com diferentes concentrações de sacarose (0, 10, 20, 30 e 40 g L-1), incubadas nas mesmas condições in vitro por mais 150 dias e em seguida as plântulas foram avaliadas quanto ao número de raízes, comprimento da maior raiz, número de folhas, comprimento da parte aérea, massa fresca e seca total. Os dados biométricos foram submetidos à análise estatística e a eles ajustadas curvas de regressão. As sementes apresentaram testa reticulada com uma extremidade micropilar (aberta) e calazal (fechada); o embrião originou uma estrutura tuberiforme clorofilada denominada protocormo que pode apresentar rizóides, folíolos e quando provido de raiz é considerado plântula. A ausência de açúcar ou a maior concentração avaliada de sacarose foram prejudiciais ao crescimento da planta. A concentração de 27 g L-1 proporcionou maior crescimento in vitro possibilitando maior eficiência para a propagação massal dessa espécie de elevado potencial ornamental.

Atividade "in vitro" de extratos de Pycnoporus sanguineus e Lentinus crinitus sobre o fitopatógeno Fusarium sp

O controle alternativo de doenças de plantas tem como objetivo minimizar o impacto ambiental através da utilização de produtos naturais. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade in vitro de extrato aquoso e hidroalcoólico de Pycnoporus sanguineus e Lentinus crinitus contra Fusarium sp., conhecido por causar doenças das culturas. Os fungos foram coletados em áreas urbanas e rurais de Parintins-AM, e testados em diferentes concentrações de extratos, sendo avaliadas a inibição de crescimento micelial, a inibição da germinação de conídios e a inibição da germinação de esclerócios. Os melhores resultados de inibição do crescimento micelial foram obtidos com extratos hidroalcoólicos frios. Extratos de P. sanguineus obtidos em solvente hidroalcoólico frio e extrato aquoso ultrassônico e extrato de L. crinitus de solvente hidroalcoólico frio, inibiram mais de 92% da esporulação de conídios. Extratos aquosos quentes inibiram a germinação de escleródios, bem como o extrato de P. sanguineus hidroalcoólico frio. O consórcio dos fungos inibiram a germinação de escleródios em 1000 µg mL-1.

O efeito da insulina na placentação: estudos in vitro com células HTR8-SVneo

Dissertação de mestrado em Bioquímica Aplicada

The powerful in vitro bioactivity of Euterpe oleracea Mart. seeds and related phenolic compounds

The Euterpe oleracea Mart. (açaí) is a plant from the Amazon region, classified as "super fruit" because of its various functional properties. However, limited investigation has been performed on açaí by-products, such as seeds. Therefore, the aim of this work was to characterized the phenolic compounds of the aqueous extract of açaí seeds and further evaluate its bioactivity (antioxidant and cytotoxic activities. Only proanthocyanidins were detected, being a B-type (epi)catechin tetramer the most abundant; however, procyanidin trimmers were the most predominant form. Açaí seeds extract revealed a high antioxidant (EC50 ranging from 3.6 to 19.4 μg/mL) and cytotoxic activity, being more effective in the cervical carcinoma cell line (HeLa; GI50 = 18 μg/mL); it did not show toxicity for non-tumor cells. Açaí seeds are considered a waste and could have an added economic benefit, through the extraction of natural antioxidants, particularly proanthocyanidins, that could find applications in food and pharmaceutical industries.

Paroxetine and bupropion have no in vitro effects on lynphocyte proliferation and viability

OBJECTIVE: Initial studies with tricyclic antidepressants demonstrated that they jeopardize the immune system activity. Recent studies suggested that selective serotonin reuptake inhibitors would have stimulating immunological effects. Here, we explored the in vitro immunological effects of two antidepressants used in clinical practice, paroxetine (selective serotonin reuptake inhibitor) and bupropion (norepinephrine and dopamine reuptake inhibitor). METHOD: Peripheral blood samples were obtained from 16 healthy volunteers and the peripheral blood mononuclear cells were isolated and cultured in vitro. We evaluated the effects of bupropion and paroxetine on cell viability as well as the ability to suppress phytohemagglutinin-induced lymphocyte proliferation. RESULTS: Both antidepressants produced neither significant effect on cell viability nor on T-cell proliferation. CONCLUSIONS: This could be of valuable information for the clinical practice when these drugs are administered. These results indicate a more favorable effect of such psychopharmacological drugs when compared to reported immunological effects associated with tryciclic antidepressants.

Adipogenic cell sheets to recreate in vitro adipose tissue microenvironments

Cell sheet (CS) engineering, taking advantage of cellular self-matrix organized as in native tissue, has been largely explored, including by us, for different purposes [1â 3]. Herein we propose for the ï¬ rst time, the use of human adipose stem cells (hASCs)-derived CS to create adipose tissue analogues with different levels of maturation. hASCs were cultured on UpCellTM thermo-responsive dishes for 1, 3 and 5 days under basal conditions previously established by us [3]. The inï¬ uence of pre-differentiation time and respective cell number, over CS stability and differentiation was assessed. Mechanically robust CS were only obtained with 5 days pre-differentiation period. Adipogenesis was followed along the culture assessing the variation of expression of mesenchymal (CD73, CD105 but not CD90) and adipogenic (PPARg, FABP4 and LPL) markers by ï¬ ow cytometry, immunocytochemistry and RT-PCR. Increased ratio of differentiated cells was achieved for longer pre-differentiation periods, while maturation degree was modulated by the maintenance medium. Independently of the overall CS differentiation/maturation level, 3D constructs were fabricated by stacking and further culturing 3 CS. Thus, by varying the culture conditions, different 3D adipose tissue-like microenvironments were recreated, enabling future development of new tissue engineering strategies, as well as further study of adipose tissue role in the regeneration of different tissues.

Selective serotonin-reuptake inhibitor and norepinephrine dopamine reuptake inhibitor antidepressants do not affect natural killer cell activity in vitro

OBJECTIVE: This study aims to evaluate the citotoxic activity of two commonly used anti-depressants: paroxetine and bupropion. We also evaluated the in vitro natural killer activity (NKA) after incubating the blood samples with the antidepressants. METHODS: Peripheral blood samples from 15 healthy volunteers were collected and the mononuclear cells (PBMCs) were isolated and incubated for 24h with (or without = control cells) paroxetine and bupropion, in concentrations of 30, 100 and 1000 ng/ml. After the incubation period in both groups, the amount of dead cells was calculated using trypam blue technique. NKA was evaluated using the classic51Cr release assay. CONCLUSIONS: PBMCs dead cells occurred in both groups and in proportion to all pharmacological concentrations. Nevertheless, the NKA was not affected, even with the reduction in the number of effective cells.

In vitro and in vivo studies of temozolomide loading in zeolite structures as drug delivery systems for glioblastoma

Zeolites Y (faujasite) and MOR (mordonite) were used as hosts for temozolomide (TMZ), a current good-standard chemotherapeutic agent used in the treatment of glioblastoma brain tumors. TMZ was loaded into zeolites by liquid-phase adsorption at controlled pH. FTIR, 1H NMR, MS, SEM, UV/vis and chemical analysis demonstrated the successful loading of TMZ into zeolite hosts. The hydrolysis of TMZ in MTIC (TMZ metabolite) after the preparation of drug delivery systems (DDS) was observed in simulated body fluid. The effect of zeolites and DDS were evaluated on the viability of glioblastoma cell lines. Unloaded Y zeolite presented toxicity to cancer cells in contrast to MOR. In accordance, the best results in potentiation of the TMZ effect was obtained with MOR. We found that mordonite loaded with 0.026 mmol of TMZ was able to decrease the half maximal inhibitory concentrations (IC50) at least 3-fold in comparison to free temozolomide both in vitro and in vivo.

Presence of starch enhances in vitro biodegradation and biocompatibility of a gentamicin delivery formulation

The effect of α-amylase degradation on the release of gentamicin from starch-conjugated chitosan microparticles was investigated up to 60 days. Scanning electron microscopic observations showed an increase in the porosity and surface roughness of the microparticles as well as reduced diameters. This was confirmed by 67% weight loss of the microparticles in the presence of α-amylase. Over time, a highly porous matrix was obtained leading to increased permeability and increased water uptake with possible diffusion of gentamicin. Indeed, a faster release of gentamicin was observed with α-amylase. Starch-conjugated chitosan particles are non-toxic and highly biocompatible for an osteoblast (SaOs-2) and fibroblast (L929) cell line as well as adipose-derived stem cells. When differently produced starch-conjugated chitosan particles were tested, their cytotoxic effect on SaOs-2 cells was found to be dependent on the crosslinking agent and on the amount of starch used.