977 resultados para Escherichia coli Proteins -- chemistry -- genetics -- isolation
Resumo:
The pst operon of Escherichia coli is composed of five genes that encode a high-affinity phosphate transport system. pst belongs to the PHO regulon, which is a group of genes and operons that are induced in response to phosphate limitation. The pst operon also has a regulatory role in the repression of PHO genes` transcription under phosphate excess conditions. Transcription of pst is initiated at the promoter located upstream to the first gene, pstS. Immediately after its synthesis, the primary transcript of pst is cleaved into shorter mRNA molecules in a ribonuclease E-dependent manner. Other ribonucleases, such as RNase III and MazF, do not play a role in pst mRNA processing. RNase E is thus at least partially responsible for processing the pst primary transcript.
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The 157-kb conjugative plasmid pEO5 encoding alpha-haemolysin in strains of human enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) O26 was investigated for its relationship with EHEC-haemolysin-encoding plasmids of enterohaemorrhagic E. coli (EHEC) O26 and O157 strains. Plasmid pEO5 was found to be compatible with EHEC-virulence plasmids and did not hybridize in Southern blots with plasmid pO157 from the EHEC O157:H7 strain EDL933, indicating that both plasmids were unrelated. A 9227-bp stretch of pEO5 DNA encompassing the entire alpha-hlyCABD operon was sequenced and compared for similarity to plasmid and chromosomally inherited alpha-hly determinants. The alpha-hly determinant of pEO5 (7252 bp) and its upstream region was most similar to corresponding sequences of the murine E. coli alpha-hly plasmid pHly152, in particular, the structural alpha-hlyCABD genes (99.2% identity) and the regulatory hlyR regions (98.8% identity). pEO5 and alpha-hly plasmids of EPEC O26 strains from humans and cattle were very similar for the regions encompassing the structural alpha-hlyCABD genes. The major difference found between the hly regions of pHly152 and pEO5 is caused by the insertion of an IS2 element upstream of the hlyC gene in pHly152. The presence of transposon-like structures at both ends of the alpha-hly sequence indicates that this pEO5 virulence factor was probably acquired by horizontal gene transfer.
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Heat-labile toxins (LT) encompass at least 16 natural polymorphic toxin variants expressed by wild-type enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) strains isolated from human beings, but only one specific form, produced by the reference ETEC H10407 strain (LT1), has been intensively studied either as a virulence-associated factor or as a mucosal/transcutaneous adjuvant. In the present study, we carried out a biological/immunological characterization of a natural LT variant (LT2) with four polymorphic sites at the A subunit (S190L, G196D, K213E, and S224T) and one at the B subunit (T75A). The results indicated that purified LT2, in comparison with LT1, displayed similar in vitro toxic activities (adenosine 3`,5`-cyclic monophosphate accumulation) on mammalian cells and in vivo immunogenicity following delivery via the oral route. Nonetheless, the LT2 variant showed increased adjuvant action to ovalbumin when delivered to mice via the transcutaneous route while antibodies raised in mice immunized with LT2 displayed enhanced affinity and neutralization activity to LT1 and LT2. Taken together, the results indicate that the two most frequent LT polymorphic forms expressed by wild ETEC strains share similar biological features, but differ with regard to their immunological properties.
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Phosphofructokinase-1 and -2 (Pfk-1 and Pfk-2, respectively) from Escherichia coli belong to different homologous superfamilies. However, in spite of the lack of a common ancestor, they share the ability to catalyze the same reaction and are inhibited by the substrate MgATP. Pfk-2, an ATP-dependent 6-phosphofructokinase member of the ribokinase-like superfamily, is a homodimer of 66 kDa subunits whose oligomerization state is necessary for catalysis and stability. The presence of MgATP favors the tetrameric form of the enzyme. In this work, we describe the structure of Pfk-2 in its inhibited tetrameric form, with each subunit bound to two ATP molecules and two Mg ions. The present structure indicates that substrate inhibition occurs due to the sequential binding of two MgATP molecules per subunit, the first at the usual site occupied by the nucleotide in homologous enzymes and the second at the allosteric site, making a number of direct and Mg-mediated interactions with the first. Two configurations are observed for the second MgATP, one of which involves interactions with Tyr23 from the adjacent subunit in the dimer and the other making an unusual non-Watson-Crick base pairing with the adenine in the substrate ATP. The oligomeric state observed in the crystal is tetrameric, and some of the structural elements involved in the binding of the Substrate and allosteric ATPs are also participating in the dimer-dimer interface. This structure also provides the grounds to compare analogous features of the nonhomologous phosphofructokinases from E. coli. (C) 2008 Elsevier Ltd. All rights reserved.
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Neutral trehalase from Neurospora crassa was expressed in Escherichia coli as a polypeptide of similar to 84 kDa in agreement with the theoretical size calculated from the corresponding cDNA. The recombinant neutral trehalase, purified by affinity chromatography exhibited a specific activity of 80-150 mU/mg protein. Optima of pH and temperature were 7.0 and 30 degrees C, respectively. The enzyme was absolutely specific for trehalose, and was quite sensitive to incubation at 40 degrees C. The recombinant enzyme was totally dependent on calcium, and was inhibited by ATP, copper, silver, aluminium and cobalt. K(M) was 42 mM, and V(max) was 30.6 nmol of glucose/min. The recombinant protein was phosphorylated by cAMP-dependent protein kinase, but not significantly activated. Immunoblotting with polyclonal antiserum prepared against the recombinant protein showed that neutral trehalase protein levels increased during exponential phase of N. crassa growth and dropped at the stationary phase. This is the first report of a neutral trehalase produced in E. coli with similar biochemical properties described for fungi native neutral trehalases, including calcium-dependence. (C) 2008 Elsevier Inc. All rights reserved.
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A FarmaUSCS um projeto de extenso do curso de Farmcia da Universidade Municipal de So Caetano do Sul, que tem por finalidade manipular e dispensar medicamentos para a comunidade, alm de servir de campo de estgio e de desenvolvimento de projetos de pesquisa. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a estabilidade fsico-qumica da soluo aquosa de hipoclorito de sdio a 0,5%, utilizada para a desinfeco de ambientes produtivos na FarmaUSCS, bem como sua eficcia como agente bactericida sobre Staphylococcus aureus e Escherichia coli. Para a estabilidade fsico-qumica, amostras da soluo foram submetidas a diferentes condies ambientais e determinado o teor de hipoclorito por iodometria. A eficcia do desinfetante foi realizada pela tcnica da diluio em tubos. Em nenhuma das condies ambientais testadas, houve degradao do teor de hipoclorito de sdio. A soluo aquosa de hipoclorito de sdio a 0,5% foi eficaz diante de S. aureus e E. coli, j a partir do tempo mnimo testado de 2,5 minutos de exposio.
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Foram estudados os efeitos da suplementao de vitamina E (VE) e selnio (Se) sobre a imunidade de galinhas vacinadas contra Escherichia coli (EC) patognica para sunos e com o vrus da encefalomielite aviria (VEA). Foram avaliados peso corporal (PC), peso de ovos (PO) e produo de anticorpos (AcP) em noventa poedeiras (H&N nick chick) com 49 semanas de idade alimentadas vontade com dietas suplementadas com 0, 50, 150, 250 e 250 UI VE/kg + 0,3 ppm de Se. s 51 semanas de idade, metade das galinhas foram vacinadas contra EC e todas as aves foram vacinadas contra VEA. Duas semanas aps, receberam uma segunda dose da vacina contra EC. Amostras de sangue foram coletadas semanalmente e a quantidade de IgY foi determinada por ELISA, como densidade tica (DO). As aves vacinadas apresentaram maior DO do que as aves no vacinadas (P0,05). As DO foram significativamente aumentadas (P0,05) quando as aves vacinadas foram alimentadas com 50 e 150 UI de VE/kg e comparadas com as DO das aves que receberam a dieta de 250 UI de VE + Se. Se no afetou AcP, PC e PO. A vacinao e a VE suplementada no afetaram PC. O PO no foi afetado pela vacinao, mas foi maior (P0,05) nas semanas 3, 5 e 7, quando as poedeiras receberam 250 UI VE/kg e comparados com aquelas que receberam 50, 150 e 0. A AcP contra VEA foi influenciada pela VE (P0,13). Cento e cinqenta UI VE e 0 UI VE aumentaram IgY produzida, quando comparados a 250 UI. Tambm o Se aumentou AcP. Os resultados deste estudo sugerem que nveis mdios de VE aumentam a produo de IgY por poedeiras vacinadas e Se adicionado ao mais alto nvel de VE tambm possui efeito imunomodulador.
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Foi estudado o efeito das gemas de ovos de aves hiperimunizadas contra Escherichia coli patognica para sunos sobre a imunidade passiva (IP) de leites recm-nascidos em uma unidade produtora de leites (UPL). Foram avaliados densidade tica do ELISA (DO), peso corporal (PC) e ocorrncia de diarria diria (OcD) em 137 leites recm-nascidos oriundos de 25 fmeas primparas no vacinadas contra E. coli. De cada fmea, foram separados 6 leites recmnascidos de ambos os sexos, excluindo-se os mais leves e os mais pesados, divididos em 3 tratamentos e 2 repeties. A anlise estatstica para DO e PC foi realizada atravs de ANOVA, a comparao de mdias entre tratamentos pelo Lsmeans e o teste do qui-quadradro para a OcD. As gemas estavam armazenadas -5C, in natura e, minutos antes do fornecimento, foram descongeladas e diludas em 15 mL de uma soluo tampo (PBS). Os tratamentos foram fornecidos via oral, tendo sido os seguintes: T1: 2mL de PBS (controle) em 2 doses, a primeira ao nascer e a segunda 2 horas aps o nascimento; T2: 2mL de gemas de ovos com ttulo de 100.000 de anticorpos (IgY) contra E. coli em 2 doses, ao nascer e 2 horas aps o nascimento; T3: idem ao T2, alm de 2mL de gema de 3 em 3 dias at os leites completarem 12 dias de idade. Foram realizadas duas coletas de sangue em 1 leito/tratamento/porca: a primeira s 24 horas e a segunda aos 14 dias de idade. O ttulo de IgY contra E. coli dos soros foi determinado por ELISA. A DO do ELISA dos leites de T2 e T3 foi significativamente maior s 24 horas e aos 14 dias em relao ao controle (P0,0001). T3, T2 e T1 permaneceram 87, 79 e 72,5% do tempo estudado sem diarria (PX20,0001). Os animais de T3 foram significativamente mais pesados do que os do T1 (P0,08), mas no diferiram de T2. Os resultados deste estudo sugerem que o uso de gemas de aves hiperimunizadas contra E. coli age efetivamente na preveno da diarria dos leites e o seu uso contnuo mais vantajoso do que o fornecimento somente ao nascer.
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Com o objetivo de avaliar a sobrevivncia ao congelamento de microrganismos potencialmente patognicos, hambrgueres de frango foram contaminados com Escherichia coli (ECHC), Staphylococcus aureus (SAFH) e Salmonella Enteritidis (SE86) e armazenados a -18C. Os mesmos microrganismos e ainda E. coli ATCC 25972, S. aureus ATCC 25923, and S. Enteritidis ATCC 13076 tambm foram inoculados em gua peptonada 0,1% e congelados a -18C, a fim de avaliar um possvel efeito protetor dos componentes do hambrguer sobre os microrganismos. A quantificao dos microrganismos foi realizada nos intervalos de 0, 1, 2, 3, 4, 7, 14, 21 e 28 dias de congelamento. Com o propsito de estudar as alteraes nos cidos graxos das clulas microbianas expostas ao congelamento, foram extrados os cidos graxos de cada bactria, congelada e no congelada, e estes foram analisados por cromatografia gasosa. Os resultados demonstraram que, de modo geral, houve uma reduo mdia de menos de 1 unidade logartmica (log10) no nmero de clulas artificialmente inoculadas em hambrgueres de frango. As redues obtidas para cada microrganismo em gua peptonada 0,1% foram significativamente (P0,05) maiores do que as redues observadas em hambrguer de frango, sugerindo a existncia de um efeito crioprotetor dos componentes do hambrguer. Em todos os experimentos, as redues mais expressivas foram observadas nas primeiras semanas de congelamento. Ocorreram alteraes expressivas na composio de cidos graxos de S. aureus (SAFH) e S. aureus ATCC 25923, o que pode indicar que estes microrganismos alteraram a composio dos seus cidos graxos como resposta ao estresse causado pelo congelamento.
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A seqncia de nucleotdeos codificante do peptdeo derivado da hidrlise da canatoxina (jaburetox-2Ec), foi clonada e expressa nos sistema pET101/E. coli BL 21. Neste trabalho, estudamos a estabilidade dos plasmdeos da srie pET contendo a seqncia codificante do jaburetox-2Ec no sistema de expresso E. coli BL 21 (Mulinari, 2004), e as condies para aumentar produo do peptdeo recombinante, avaliando a velocidade de transferncia de oxignio, o controle do pH, e a utilizao da lactose como indutor em substituio ao IPTG. O cultivo da bactria recombinante em incubadora orbital contendo 10 g/l de lactose como indutor produziu 1,26 g de jaburetox-2Ec/mg de protena total aps oito horas de cultivo. A estabilidade do plasmdeo e a expresso do peptdeo recombinante foram estudadas em biorreatores. A expresso do jaburetox-2Ec foi fortemente afetada pelo pH da cultura, com a diminuio de mais de 50 % da concentrao desse peptdeo quando ocorre acidificao do meio de cultura. Da mesma forma, o aumento da aerao e agitao tem efeito negativo sobre a produo do peptdeo, diminuindo em sete vezes a produo do jaburetox-2Ec Apesar do aumento da biomassa devido ao cultivo da E. coli recombinante em meio mnimo, contendo como fonte de carbono a glicose, isto no representou aumento da concentrao do peptdeo recombinante. Contudo, sob a melhor condio de cultivo em biorreator estudada (pH controlado e menor transferncia de oxignio), obteve-se uma produo de 7,14 g de jaburetox-2Ec/mg de protena total, representando em torno de 2 % da protena total da clula. Em todas as bateladas, aps atingir a mxima expresso do peptdeo, essa concentrao diminui provavelmente devido atividade das proteases da clula causando a degradao do peptdeo recombinante. A carga metablica imposta clula devido expresso do jaburetox-2Ec, uma das possveis causas da instabilidade do plasmdeo observada em todas as bateladas.
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O queijo o produto de maior importncia entre os derivados do leite, pelo seu grande valor nutritivo e pelas suas caractersticas organolpticas. Na regio litornea do Rio Grande do Sul, Brasil, existe uma concentrao elevada de comrcio artesanal de queijo. Para a estimativa da qualidade microbiolgica destes produtos, foram coletadas 80 amostras referentes a 29 bancas de estabelecimentos comerciais localizados nas rodovias RS 30 (Osrio-Tramandai), RS 40 (Viamo-Pinhal) e RS 389 (Osrio-Torres). Em 26% das amostras, a contagem de coliformes fecais estava acima da estabelecida pela legislao e em 32% das amostras foi possvel o isolamento de E.coli., sugerindo considervel contaminao e a necessidade de orientar estes produtores para normas bsicas de higiene. Foi confirmada a presena de Listeria sp. em 16% das amostras, sendo 4% L. monocytogenes. No foram isoladas cepas de Brucella sp. As caractersticas do produto analisado como pH, atividade da gua, estocagem, presena de altas contagens de microrganismos competidores, provavelmente, contriburam significativamente para controle de Listeria sp. e Brucella sp. O presente estudo demonstra que este tipo de alimento pode tornar-se um problema de sade pblica, principalmente para os grupos de risco.
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Essa dissertao possui como objetivo traar, uma nova metodologia de classificao de patogenicidade da Escherichia.coli,.atravs de um ndice no qual, alm do nmero de animais mortos, tambm foi considerado o tempo de morte e a capacidade da cepa causar leso compatvel colibacilose em pintos de 1 dia. Para gerar esse critrio, foram utilizadas 300 amostras de E.coli oriundas de lotes com leso de celulite, cama desses mesmos avirios e amostras de quadros respiratrios. Atravs desse experimento foi possvel observar que as amostras de E.coli originadas das camas dos avirios, apresentavam ndice de patogenicidade significativamente menor do que aquelas isoladas das leses cutneas e de quadros respiratrios.Tambm foi associado s cepas de E.coli a capacidade de causar leses de: pericardite, perihepatite, aerossaculite, peritonite e celulite. Dentre as leses citadas somente a celulite foi considerada de apresentao significativamente mais freqente em comparao s outras.
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As infeces do tracto urinrio (ITU) so doenas infecciosas comuns e distinguem-se em dois grandes grupos: o das infeces do tracto urinrio superior e o das infeces do tracto urinrio inferior. O principal agente etiolgico envolvido nas ITU a bactria Escherichia coli (E. coli), representando 80-95% dos invasores do tracto urinrio na populao em geral. mais comum entre os adultos do sexo feminino, principalmente com actividade sexual, embora as crianas, mulheres grvidas e idosos tambm apresentam grande susceptibilidade. Paralelamente, a problemtica da resistncia aos antimicrobianos um tema actual e muito debatido internacionalmente. Como tal, o presente estudo teve como principal objectivo contribuir para a identificao fivel da bactria E. coli em infeces urinrias bem como a determinao do seu perfil de resistncia a antibiticos. Os dados apresentados referem-se a um estudo efectuado entre Outubro de 2008 e Junho de 2009 no Laboratrio de Anlises Clnicas Castro Fernandes MMC. Foram analisadas 6522 amostras de urina, das quais 390 corresponderam a uroculturas positivas. Verificou-se que o sexo feminino tem uma maior propenso para infeces urinrias, havendo uma tendncia para o aumento das ITU com a idade. Na interpretao da cultura revelou-se importante a informao dada pelo exame cultural acerca do nmero de leuccitos. Concluiu-se que nas uroculturas cujo nmero de colnias foi superior a 105 com menos de trs espcies de colnias diferentes na cultura, o nmero de leuccitos foi superior a 30 milhares de clulas por L, o que sugere a existncia de infeco urinria. No estudo do perfil de sensibilidade da bactria E. coli isolada, para a famlia dos betalactmicos (Ampicilina (AMP), Amoxicilina/cido Clavulnico (AMC), Piperacilina/Tazobactam (PIP/TZP)), famlia das cefalosporinas (Cefalotina (KF), Cefuroxima (CXM), Cefuroxima Acetil (CA), Cefotaxima (CTX), Ceftazidima (CAZ), Cefepima (FEP)), famlia dos aminoglicosdeos (Amicacina (AM), Gentamicina (GM), Tobramicina (TOB)) e para as nitrofurantonas (F), verificou-se uma grande sensibilidade e pouca resistncia em termos quantitativos, mas para a famlia das quinolonas (Ciprofloxacina (CIP), Levofloxacina (LEV), Norfloxacina (NOR)) e para os Trimetoprim/Sulfametoxazol (TMP/SMX) verificou-se resistncias quantitativamente superiores aos das famlias anteriormente referidas, sugerindo valores convergentes aos da tendncia europeia. Foram identificados famlias de fentipos tais como: os beta-lactmicos, os aminoglicosdeos, quinolonas, tetraciclinas, furanos e trimetoprim/sulfamidas.E. coli um microganismo cujo fentipo selvagem no tem resistncias intrnsecas. Todas as resistncias so adquiridas. Actualmente, a realizao dos antibiogramas para E. coli tornou-se fundamental tendo em vista os factores ecolgicos, genticos, ambientais e pelo facto de que mais isolados so resistentes maioria dos antibiticos. Como concluso, este estudo permitir alertar para um problema srio que uma grande ameaa Sade Pblica.
Resumo:
Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP)
