O perfil do utilizador abusivo dos Servi��os de Urg��ncia Portugueses: um estudo no Hospital de S��o Jo��o

A aflu��ncia desmedida aos Servi��os de Urg��ncia �� uma quest��o que acarreta preocupa����es a n��vel financeiro. Contribui para este fato, a mentalidade da popula����o, que acredita que este servi��o oferece mais facilidades de acesso, disp��e de mais recursos e fornece melhores cuidados de sa��de. Novas medidas foram preconizadas, como o aumento das taxas moderadoras, para tentar travar este fen��meno. No entanto, apesar da descida dos epis��dios de urg��ncia em cerca de 10%, em Portugal, estudos apontam para valores na ordem dos 30-35% de epis��dios n��o urgentes. Assim, torna-se importante que n��o s�� se enfatizem as novas medidas, como se eduque a popula����o com vista �� correta utiliza����o destes servi��os, atrav��s de campanhas de sensibiliza����o. Torna-se, assim, necess��rio que se chegue ao perfil do utilizador abusivo. Para a identifica����o de um perfil de abusividade, foram solicitados dados de epis��dios de urg��ncia ocorridos durante um per��odo de 6 meses no Hospital de S��o Jo��o, tendo depois sido estimado um modelo de regress��o log��stica. A metodologia permite identificar quais as caracter��sticas que influenciam uma utiliza����o abusiva do servi��o e quantificar o impacto de cada uma destas caracter��sticas na probabilidade de um utente apresentar um comportamento abusivo. Concluiu-se que, uma mulher entre os 18-30 anos, que resida em Vila Nova de Gaia, recorra �� urg��ncia durante a noite tendo-lhe sido atribu��da uma pulseira azul e seja abrangida pelo Servi��o Nacional de Sa��de, apresenta 91,92% de probabilidade de utilizar este servi��o de forma abusiva. Contrariamente, um homem com mais de 60 anos, residente na Maia, que recorra ao servi��o durante o dia, esteja isento do pagamento de taxas moderadoras e seja abrangido pela ADSE, e lhe seja atribu��da uma pulseira laranja, apresenta apenas 39,93% de probabilidade de ter um comportamento abusivo. Estes resultados s��o importantes para definir campanhas de sensibiliza����o que diminuam comportamentos abusivos.

The expression in saccharomyces cerevisiae of a glucose/xylose symporter from Candida intermedia is affected by the presence of a glucose/xylose facilitator

Microbiology, 154

Metal ions modulate the folding and stability of the tumor suppressor protein S100A2

Febs Journal (2009)276:1776-1786

Natural and amyloid self-assembly of S100 proteins: structural basis of functional diversity

The S100 proteins are 10-12 kDa EF-hand proteins that act as central regulators in a multitude of cellular processes including cell survival, proliferation, differentiation and motility. Consequently, many S100 proteins are implicated and display marked changes in their expression levels in many types of cancer, neurodegenerative disorders, inflammatory and autoimmune diseases. The structure and function of S100 proteins are modulated by metal ions via Ca2+ binding through EF-hand motifs and binding of Zn2+ and Cu2+ at additional sites, usually at the homodimer interfaces. Ca2+ binding modulates S100 conformational opening and thus promotes and affects the interaction with p53, the receptor for advanced glycation endproducts and Toll-like receptor 4, among many others. Structural plasticity also occurs at the quaternary level, where several S100 proteins self-assemble into multiple oligomeric states, many being functionally relevant. Recently, we have found that the S100A8/A9 proteins are involved in amyloidogenic processes in corpora amylacea of prostate cancer patients, and undergo metal-mediated amyloid oligomerization and fibrillation in vitro. Here we review the unique chemical and structural properties of S100 proteins that underlie the conformational changes resulting in their oligomerization upon metal ion binding and ultimately in functional control. The possibility that S100 proteins have intrinsic amyloid-forming capacity is also addressed, as well as the hypothesis that amyloid self-assemblies may, under particular physiological conditions, affect the S100 functions within the cellular milieu.

S100A6 Amyloid Fibril Formation Is Calcium-modulated and Enhances Superoxide Dismutase-1 (SOD1) Aggregation

S100A6 is a small EF-hand calcium- and zinc-binding protein involved in the regulation of cell proliferation and cytoskeletal dynamics. It is overexpressed in neurodegenerative disorders and a proposed marker for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS). Following recent reports of amyloid formation by S100 proteins, we investigated the aggregation properties of S100A6. Computational analysis using aggregation predictors Waltz and Zyggregator revealed increased propensity within S100A6 helices HI and HIV. Subsequent analysis of Thioflavin-T binding kinetics under acidic conditions elicited a very fast process with no lag phase and extensive formation of aggregates and stacked fibrils as observed by electron microscopy. Ca2+ exerted an inhibitory effect on the aggregation kinetics, which could be reverted upon chelation. An FT-IR investigation of the early conformational changes occurring under these conditions showed that Ca2+ promotes anti-parallel ��-sheet conformations that repress fibrillation. At pH 7, Ca2+ rendered the fibril formation kinetics slower: time-resolved imaging showed that fibril formation is highly suppressed, with aggregates forming instead. In the absence of metals an extensive network of fibrils is formed. S100A6 oligomers, but not fibrils, were found to be cytotoxic, decreasing cell viability by up to 40%. This effect was not observed when the aggregates were formed in the presence of Ca2+. Interestingly, native S1006 seeds SOD1 aggregation, shortening its nucleation process. This suggests a cross-talk between these two proteins involved in ALS. Overall, these results put forward novel roles for S100 proteins, whose metal-modulated aggregation propensity may be a key aspect in their physiology and function.

Fibrotic sequelae in pulmonary paracoccidioidomycosis: histopathological aspects in BALB/c mice infected with viable and non-viable Paracoccidioides brasiliensis propagules

Patients with paracoccidioidomycosis often present pulmonary fibrosis and exhibit important respiratory limitations. Based on an already established animal model, the contribution of viable and non-viable P. brasiliensis propagules to the development of fibrosis was investigated. BALB/c male mice, 4-6 weeks old were inoculated intranasally either with 4x10(6 )viable conidia (Group I), or 6.5x10(6) fragmented yeast cells (Group II). Control animals received PBS. Six mice per period were sacrificed at 24, 48, 72h (initial) and 1, 2, 4, 8, 12 and 16 weeks post-challenge (late). Paraffin embedded lungs were sectioned and stained with H&E, trichromic (Masson), reticulin and Grocott��s. During the initial period PMNs influx was important in both groups and acute inflammation involving 34% to 45% of the lungs was noticed. Later on, mononuclear cells predominated. In group I, the inflammation progressed and granulomas were formed and by the 12th week they fussed and became loose. Thick collagen I fibers were observed in 66.6% and 83.3% of the animals at 8 and 12 weeks, respectively. Collagen III, thick fibers became apparent in some animals at 4weeks and by 12 weeks, 83% of them exhibited alterations in the organization and thickness of these elements. In group II mice, this pattern was different with stepwise decrease in the number of inflammatory foci and lack of granulomas. Although initially most animals in this group had minor alterations in thin collagen I fibers, they disappeared by the 4th week. Results indicate that tissue response to fragmented yeast cells was transitory while viable conidia evoked a progressive inflammatory reaction leading to granuloma formation and to excess production and/or disarrangement of collagens I and III; the latter led to fibrosis.

Caracteriza����o da utiliza����o da urg��ncia pedi��trica num hospital da ��rea metropolitana de Lisboa

RESUMO - Introdu����o: Actualmente o uso excessivo dos servi��os de Urg��ncia Pedi��trica hospitalares constitui uma das preocupa����es de gestores e administradores hospitalares. Esta m�� utiliza����o pode contribuir para o aumento descomedido dos custos uma vez que a procura n��o �� adequada para este tipo de servi��o. A procura de respostas r��pidas aos problemas de sa��de contribui para a aflu��ncia exagerada e por vezes injustificada por parte da popula����o. Objectivo: O objectivo deste estudo foi efectuar a caracteriza����o da utiliza����o da urg��ncia pedi��trica num hospital da ��rea metropolitana de Lisboa, no sentido de compreender se existe, ou n��o, procura injustificada de cuidados de sa��de. Material e m��todos: Foi utilizado como suporte metodol��gico uma abordagem quantitativa, num estudo descritivo - correlacional. Foram analisados 36932 epis��dios de Urg��ncia Pedi��trica ocorridos num per��odo de 6 meses (Julho 2010 a Janeiro 2011). Resultados: A amostra �� constitu��da por 53,6% utentes do sexo masculino e por 46,4% do sexo feminino; onde o intervalo de idades mais representativo situa-se entre o 1 ano e 5 anos de idade. O concelho de Sintra apresenta 61% dos epis��dios, no entanto proporcionalmente o concelho de Amadora recorre mais �� Urg��ncia Pedi��trica com 7,48% dos epis��dios. O dia com maior aflu��ncia �� Segunda-feira com 17% dos epis��dios; 75% dos epsi��dios ocorre entre as 8h - 20h, periodo de funcionamento dos Centros de Sa��de. Foram considerados como n��o urgentes, 54,9% dos epis��dios, 88,8% destes s��o encaminhados para o Centro de Sa��de. S��o n��o referenciados 90% dos epis��dios. Existe evid��ncia de utiliza����o injustificada do Servi��o de Urg��ncia Pedi��trica por 49,5% dos utentes. Verifica-se que a utiliza����o do servi��o de urg��ncia depende da resid��ncia dos utentes (p=0,001), a popula����o da Amadora recorre mais �� urg��ncia. Existe evid��ncia de rela����o entre o dia da semana e o acesso injustificado (p <0,001), quinta-feira apresenta 17,3% dos epis��dios n��o justificados. A recorr��ncia injustificada ao servi��o de urg��ncia n��o depende do g��nero (p=0,137). Existe rela����o entre a idade e a recorr��ncia justificada, sendo estatisticamente significativa (p=0,006). Conclus��o: Pode concluir-se que a ���sobre utiliza����o��� e ���inadequa����o��� da procura s��o fen��menos presentes no Servi��o de Urg��ncia Pedi��trica. Assim urgem medidas de conten����o da utiliza����o indevida, passando estas provavelmente por uma consciencializa����o e educa����o da popula����o. - ABSTRACT - Introduction: Currently the overuse of Pediatric Emergency hospital services is a major concern of managers and hospital administrators. This misure may contribute to increased costs because of the inordinate demand is not appropriate for this type of service. The demand for rapid response to health problems contributing to the influx exaggerated and sometimes unjustified by the population. Objective: The aim of this study was carried out to characterize the use of emergency pediatric hospital in the metropolitan area of Lisbon, in order to understand whether there is or not unjustified demand for health care. Methods: We used it as a methodological support a quantitative approach, a descriptive study - correlation. We analyzed 36,932 episodes of pediatric emergency occurring in a period of six months (July 2010 to January 2011). Results: The sample consists of 53.6% of male users and 46.4% female, where the most representative age range is between 1 and 5 years old. The Municipality of Sintra has 61% of the episodes, but the proportion of the county Amadora Pediatric Emergency appeals more to the 7.48% of the episodes. Monday 17% of the episodes is the busiest day, 75% of episodes occurs between 8 am - 20 h period of operation of the Health Centres were considered non-urgent, 54.9% of episodes, 88.8 % of these are referred to the Health Center They are not referenced 90% of episodes. There is evidence of unjustified use of the Pediatric ER for 49.5% of users. It appears that the use of emergency service depends on the residence of users (p = 0.001), the population of Amadora uses more urgency. There is evidence of a relationship between the day of the week and unjustified access (p <0.001), Thursday shows 17.3% of the episodes are not justified. Recurrence unjustified the emergency room does not depend on gender (p = 0.137). There is a relationship between age and recurrence justified statistically significant (p = 0.006). Conclusion: It can be concluded that "on use" and "inadequacy" of demand phenomena are present in the Pediatric ER. So urge measures to curb misuse, these probably passing an awareness and education of the population.

Otimiza����o do Funcionamento da ETAR das Termas de S. Vicente, Penafiel

A ��gua �� um recurso natural ��nico, escasso e essencial a todos os seres vivos, o que a torna um bem de extrema import��ncia. Nos dias de hoje, o desperd��cio deste bem, aliado ao aumento da sua procura, tornou-se um problema devido �� decrescente disponibilidade de ��gua doce no nosso planeta. Todas as ��guas que rejeitamos depois da sua utiliza����o para diversos fins, designadas de ��guas residuais, necessitam de tratamento antes de serem devolvidas ao meio ambiente. O seu tratamento �� realizado numa Esta����o de Tratamento de ��guas Residuais (ETAR) e o processo de tratamento depende das suas caracter��sticas. A ETAR das Termas de S. Vicente, em Penafiel, trabalha no seu limite de capacidade, apresenta uma sobrecarga hidr��ulica gerada por uma aflu��ncia de ��guas pluviais e o processamento das lamas geradas n��o permite uma secagem t��o completa como seria desej��vel. Assim, este trabalho teve como objetivo o estudo do funcionamento desta ETAR com a finalidade de propor solu����es que o possam otimizar. As solu����es propostas para otimizar o funcionamento da ETAR em estudo s��o: i) a substitui����o de grades de limpeza manual por grades de limpeza autom��tica de forma a reduzir a necessidade da interven����o do operador ao n��vel da remo����o e condicionamento dos gradados; ii) a constru����o de um desarenador arejado que al��m de remover areias de di��metro superior a 0,2 mm promove tamb��m a remo����o de gorduras, protegendo desta forma os equipamentos a jusante da abras��o/desgaste prematuros e reduzindo a forma����o de dep��sitos nas tubagens; iii) a constru����o de um tanque de equaliza����o de forma a garantir uma distribui����o mais uniforme dos caudais e da carga poluente; iv) a substitui����o do enchimento do leito percolador por um meio de suporte pl��stico que permite atingir melhores efici��ncias de remo����o neste tratamento biol��gico; v) a altera����o do agente de desinfe����o para radia����o ultravioleta, evitando a adi����o de produtos qu��micos na ��gua residual e poss��vel forma����o de subprodutos prejudiciais ao ambiente, como ocorreria no caso da cloragem; e vi) a substitui����o da desidrata����o de lamas em leitos de secagem por filtros de banda, que �� um processo mais r��pido, que ocupa menos espa��o e permite atingir elevadas efici��ncias de remo����o de humidade. Para cada uma das sugest��es s��o apresentadas as correspondentes especifica����es t��cnicas e dimensionamento. As sugest��es de melhoria apresentadas neste trabalho constituem uma alternativa mais econ��mica do que a amplia����o da ETAR, que genericamente corresponde �� duplica����o da linha de tratamento atual. Devido �� menor complexidade em termos de constru����o, estas sugest��es podem vir a ser implementadas num futuro pr��ximo, prolongando assim um pouco mais a vida ��til da ETAR atual.

Calcium signaling and the novel anti-proliferative effect of the UTP-sensitive P2Y11 receptor in rat cardiac myofibroblasts

During myocardial ischemia and reperfusion both purines and pyrimidines are released into the extracellular milieu, thus creating a signaling wave that propagates to neighboring cells via membrane-bound P2 purinoceptors activation. Cardiac fibroblasts (CF) are important players in heart remodeling, electrophysiological changes and hemodynamic alterations following myocardial infarction. Here, we investigated the role UTP on calcium signaling and proliferation of CF cultured from ventricles of adult rats. Co-expression of discoidin domain receptor 2 and -smooth muscle actin indicate that cultured CF are activated myofibroblasts. Intracellular calcium ([Ca2+]i) signals were monitored in cells loaded with Fluo-4 NW. CF proliferation was evaluated by the MTT assay. UTP and the selective P2Y4 agonist, MRS4062, caused a fast desensitizing [Ca2+]i rise originated from thapsigargin-sensitive internal stores, which partially declined to a plateau providing the existence of Ca2+ in the extracellular fluid. The biphasic [Ca2+]i response to UTP was attenuated respectively by P2Y4 blockers, like reactive blue-2 and suramin, and by the P2Y11 antagonist, NF340. UTP and the P2Y2 receptor agonist MRS2768 increased, whereas the selective P2Y11 agonist NF546 decreased, CF growth; MRS4062 was ineffective. Blockage of the P2Y11receptor or its coupling to adenylate cyclase boosted UTP-induced CF proliferation. Confocal microscopy and Western blot analysis confirmed the presence of P2Y2, P2Y4 and P2Y11 receptors. Data indicate that besides P2Y4 and P2Y2 receptors which are responsible for UTP-induced [Ca2+]i transients and growth of CF, respectively, synchronous activation of the previously unrecognized P2Y11 receptor may represent an important target for anti-fibrotic intervention in cardiac remodeling.

The inhibitory activity of synthetic compounds and ions against transporters of multi-drug resistant bacteria

RESUMO: Sessenta e tr��s derivados de hidanto��na foram utilizados para avaliar poss��veis efeitos de modula����o na actividade das bombas de efluxo (BE) na Salmonella NCTC 13349 utilizando um m��todo fluorim��trico semi-autom��tico. Nenhum dos compostos apresentaram actividade anti-bacteriana at�� concentra����es de 240 mg/L. Entre todos os compostos, SZ-7 demonstrou possuir propriedades de modula����o de effluxo na presen��a de glucose. Para testar esta actividade, estirpes de Salmonella resistentes �� ciprofloxacina, induzidas a elevados n��veis de resist��ncia com sobre-express��o de BE, foram expostas ao SZ-7. Este derivado afectou a susceptibilidade das estirpes �� ciprofloxacina. Uma vez que os 63 compostos estudados apresentaram pouco efeito inibit��rio /cumulativo, apesar de serem conhecidos pelos seus efeitos moduladores de BE-dependentes de i��es em eucariotas, foi questionado o papel dos i��es na regula����o de BE bacterianas, que poder��o influenciar a efic��cia de novos compostos. Para este estudo, utilizamos a Escherichia coli AG100 como modelo, devido ao extenso conhecimento no que respeita a estrutura e actividade das BE. Devido �� import��ncia de i��es de c��lcio (Ca2+) nos canais de transporte membranar e na actividade de ATPases, a sua actividade na modula����o do efluxo foi investigada. De resultados anteriormente obtidos concluiu-se que a pH 5 o efluxo �� independente de energia metab��lica; contudo, a pH 8 �� absolutamente dependente, sendo que o Ca2+ �� indispens��vel para manter a actividade das ATPases bacterianas. A acumula����o/effluxo de EtBr pela E. coli AG100 foi determinada na presen��a/aus��ncia de Ca2+, clorpromazina (inibidor de liga����o de Ca2+ a prote��nas), e ��cido etilenodiamino tetra-ac��tico (quelante de Ca2+). Acumula����o/effluxo aumentou a pH 8, contudo o Ca2+ reverte estes efeitos evidenciando a sua import��ncia no funcionamento das BE bacterianas. Em resumo este trabalho colocou em evid��ncia que muitos aspectos bioqu��micos e bioenerg��ticos devem ser tomados em considera����o no estudo da resist��ncia bacteriana mediada por BE.------- ABSTRACT: Sixty-three hydantoin derivatives were evaluated for their modulating effects on efflux pump (EP) activity of Salmonella NCTC 13349 utilizing a semi-automatic fluorometric method. None of the compounds presented antibacterial activities at concentrations as high as 240 mg/L. Among all compounds, SZ-7 showed possible efflux modulating activity in the presence of glucose, indicative of a potential EP inhibitor. To verify its potential effects, ciprofloxacin-resistant Salmonella strains, induced to high level resistance with over-expressing EPs, were exposed to SZ-7. This derivative affected the susceptibility of the ciprofloxacin-resistant strains. Since the 63 compounds studied had very low inhibitory/accumulative effects, even though their known for being efficient in modulating ion-driven eukaryotic EPs, we questioned whether ions had a leading role in regulating bacterial EPs, influencing the effectiveness of new compounds. For this study we used Escherichia coli AG100 as a model, due to the extensive knowledge on its EPs structure and activity. Owing the importance of calcium ions (Ca2+) for membrane transport channels and activity of ATPases, the role of Ca2+ was investigated. From previous results we concluded that at pH 5 efflux is independent of metabolic energy; however, at pH 8 it is entirely dependent of metabolic energy and the Ca2+ ions are essential to maintain the activity of bacterial ATPases. Accumulation and efflux of ethidium bromide (EtBr) by E. coli AG100 was determined in the presence and absence of Ca2+, chlorpromazine (inhibitor of Ca2+-binding to proteins), and ethylenediaminetetraacetic acid (Ca2+ chelator). Accumulation of EtBr increased at pH 8; however Ca2+ reversed these effects providing information as to the importance of this ion in the regulation of bacterial EP systems. Overall this work puts in evidence that many biochemical and bioenergetic aspects related to the strains physiology need to be taken into consideration in bacterial drug resistance mediated by EPs.

An��lise da estrutura e da fun����o da prote��na morfogen��tica RodZ de Bacillus subtilis

Resumo: RodZ �� um componente do sistema morfogen��tico das c��lulas bacterianas. �� uma prote��na transmembranar que localiza em bandas ao longo do eixo longitudinal da c��lula. Em Bacillus subtilis, RodZ consiste numa por����o citoplasm��tica, RodZn, e em uma parte extra-citoplasm��tica, RodZc. RodZn cont��m um dom��nio em helixturn- helix (HTH), enquanto que RodZc pode ser dividido num dom��nio coiled-coil e num dom��nio terminal C, de fun����o desconhecida. Um segmento transmembranar (TM) ��nico separa RodZn de RodZc. A elimina����o de rodZ causa alongamento do nucle��ide e leva �� produ����o de c��lulas polares nucleadas. Aqui, mostramos que RodZn �� estruturado, est��vel e em h��lice ��. Descobrimos que as substitui����es Y32A e L33A na suposta h��lice de reconhecimento (���3) do motivo HTH, bem como as substitui����es Y49A e F53A, fora do motivo HTH (���4), causam divis��o assim��trica, mas apenas as ��ltimas levam �� deslocaliza����o sub-celular de RodZ. Sugerimos que as h��lices ���3 e ���4 s��o utilizadas para uma interac����o prote��na-prote��na ou prote��na- DNA essencial para divis��o celular enquanto que ���4 deve contactar um componente do citosqueleto, possivelmente MreB, uma vez que a correcta localiza����o sub-celular de RodZ depende desta prote��na. Em todos os mutantes as c��lulas polares s��o anucleadas, pelo que conclu��mos que o alongamento do nucle��ide n��o �� um pr��requisito para divis��o assim��trica. RodZc �� largamente n��o estruturado mas com conte��do de folha ���, sendo estabilizado pelo dom��nio coiled-coil. Mostramos uma rela����o hom��loga entre RodZc e a bomba de transporte Na+/Ca2+ NCX1 e identific��mos dois res��duos no dom��nio C, G265 e N275, essenciais para a manuten����o da forma celular. Estes res��duos fazem parte de um motivo em gancho que pode actuar como um local de interac����o com um ligando desconhecido. RodZn e RodZc s��o monom��ricos em solu����o. Contudo, na membrana, RodZ interage consigo pr��pria num sistema de dois h��bridos (Split-Ubiquitin) em levedura, sugerindo que possa formar mult��meros in vivo.-----------ABSTRACT: RodZ is a transmembrane component of the bacterial core morphogenic apparatus. RodZ localizes in bands long the longitudinal axis of the cell, and it is though to functionally link the cell wall to the actin cytoskeleton. In Bacillus subtilis, RodZ consists of a cytoplasmic moiety, RodZn, and an extracytoplasmic moiety, RodZc. RodZn contains a predicted helix-turn-helix domain, whereas RodZc is thought to contain a coiled-coil region and a terminal C domain of unknown function. A single transmembrane domain separates RodZn from RodZc. Deletion of rodZ causes elongation of the nucleoid and leads to the production of polar minicells containing DNA. Here, we have studied the structure and function of RodZn and RodZc. We show that RodZn is a stable, folded, ���-helical domain. We discovered that the Y32A and L33A substitutions within the presumptive recognition helix (���3) of the HTH motif, as well as the Y49A and F53A substitutions outside of the HTH motif (in ���4) cause asymmetric cell division. However, only the substitutions in ���4 cause sub-celular delocalization of RodZ. We suggest that ���3 and ���4 are used for a protein-protein or protein-DNA interaction important for cell division, whereas ���4 is likely to contact a cytoskeletal component, presumably MreB. The polar cells formed by all the mutants are anucleate. We conclude that nucleoid elongation is not a prerequisite for asymmetric division. RodZc appears to be a largely unstructured domain, with some ���-sheet content, and is stabilized by the coiled-coil region. We show a homology relationship between RodZc and the NCX1 Na+/Ca2+ transporter and we found two residues within the C domain, G265 and N275, that are important for cell shape determination. These residues are predicted to be essential determinants of a claw-like motif, which may act as a binding site for an unknown ligand. Both the isolated RodZn and RodZc proteins are monomeric in solution. However, because full-length RodZ interacts with itself in a split-ubiquitin yeast two-hybrid assay, we suggest that it may dimerize or form higher order multimers in vivo.

DISTINCT CELLULAR MIGRATION INDUCED BY Leishmania infantum chagasi AND SALIVA FROM Lutzomyia longipalpis IN A HEMORRHAGIC POOL MODEL

Recruitment of a specific cell population after Leishmania infection can influence the outcome of the disease. Cellular migration in response to Leishmania or vector saliva has been reported in air pouch model, however, cellular migration induced by Leishmania associated with host's blood and vector saliva in this model has not been described. Herein we investigated cellular migration into air pouch of hamster after stimulation with combination of L. chagasi and host's blood and Lutzomyia longipalpis saliva. Migration induced by saliva was 3-fold more than those induced by L. chagasi alone. Additionally, L. chagasi associated with blood and saliva induced significantly even more leukocytes into air pouch than Leishmania alone. L. chagasi recruited a diverse cell population; however, most of these cells seem to have not migrated to the inflammatory exudate, remaining in the pouch lining tissue. These results indicate that L. chagasi can reduce leukocyte accumulation to the initial site of infection, and when associated with vector saliva in the presence of blood components, increase the influx of more neutrophils than macrophages, suggesting that the parasite has developed a strategy to minimize the initial inflammatory response, allowing an unlimited progression within the host. This work reinforces the importance of studies on the salivary components of sand fly vectors of leishmaniasis in the transmission process and the establishment of the infection.

Adsor����o de ibuprofeno e ��cido clof��brico em carv��es activados

Disserta����o para obten����o do Grau de Mestre em Engenharia Qu��mica e Bioqu��mica

Boosting the suppressive effects of Ascaris suum components in IFN-&#947;-deficient mice

High molecular weight components from Ascaris suum extract suppress ovalbumin-specific immunity in mice. In IFN-&#947;-deficient mice, ovalbumin-specific delayed-type hypersensitivity reactions are more strongly downregulated by these suppressive components. Here, the cellularity of the delayed-type hypersensitivity reaction in IFN-&#947;-deficient mice and the increased downregulation induced by Ascaris suum components were analyzed. IL-12p40-dependent neutrophilic influx was predominant. Suboptimal doses of the suppressive fraction from this nematode completely inhibited the hypersensitivity reaction, thus indicating intensification of the immunosuppression under conditions of intense recruitment of IFN-&#947;-independent neutrophils.

Contribui����o para o estudo da anexina V na apoptose celular em concentrados de eritr��citos

A hemoterapia moderna baseia-se na utiliza����o correcta dos diversos componentes sangu��neos, associados a um maior controle de qualidade do sangue, o que a torna mais segura e, actualmente, muitos doentes sao beneficiados pois, a transfus��o de componentes sanguineos, em situa��oes v��rias, est�� na linha da frente na manuten����o da vida e em casos extremos, o ��ltimo recurso que salva vidas. A qualidade e a seguran��a nas transfus��es de sangue s��o grandes preocupa����es da ��rea m��dica, autoridades de sa��de e doente1. O sangue obtido pelos Centros de Sangue provem de dadores volunt��rios, dotados de uma enorme sensibilidade social, que periodicamente assumem uma postura benevola e altruista e consequentemente mant��m os bancos de sangue providos de um produto imprescindivel no tratamento de diversas patologias. O produto final dispon��vel ��� concentrado de eritr��citos (CE��s), plasma e concentrado plaquet��rio ��� tem de assumir um car��cter seguro e vi��vel de modo a que os riscos para o doente sejam diminutos2. O controlo de qualidade aplicado a todo o sangue doado realiza provas de conformidade nas unidades com especifica����es previamente definidas, sendo a h��molise um dos par��metros importantes na avalia����o da qualidade dos concentrados de eritr��citos, pois, pode ocasionar implica����es clinicas para o receptor. Para al��m disso a avalia����o da concentra����o de hemoglobina (Hg) no sangue doado mostra-se um controlo imprescindivel que salvaguarda a qualidade e seguran��a do componente a transfundir3;4.At�� se obter um CE h�� todo um processo moroso e de responsabilidade vital. Todo o sangue obtido passa por v��rias etapas fundamentais at�� �� obten����o do componente pretendido (analise, produ����o e armazenamento). Os CE���s obtidos quando armazenados, num ambiente de refrigera����o, t��m uma vida ��til de 42 dias. Ap��s este per��odo, o sangue deve ser inutilizado por se verificar altera����es bioqu��micas, biomec��nicas, e imunol��gicas nos CE���s e por consequ��ncia a sua instabilidade vital no que ao tratamento de patologias, para as quais este componente est�� indicado, diz respeito5. Foi realizado um estudo experimental com o objetivo de avaliar a contribui����o da Anexina V na apoptose celular nos concentrados de eritr��citos, constatando a degrada����o dos mesmos ao longo de todo o per��odo de armazenamento e validar o paradigma que a ci��ncia preconiza: ���Os CE���s ap��s os 42 dias armazenados, em condi����es espec��ficas (2 a 6�� cent��grados), s��o inviaveis para transfundir���6;7. A avalia����o dos n��veis de apoptose por citometria de fluxo �� geralmente realizada por m��todos que utilizam Anexina V como marcador vital, que se associa aos res��duos de fosfatidilserina, externalizados no in��cio do processo apopt��tico. A Anexina V �� uma prote��na humana end��gena dependente do i��o Ca+2, amplamente distribu��da intracelularmente em altas concentra����es na placenta e em concentra����es mais baixas nos eritr��citos, plaquetas e mon��citos. Apresenta como principal caracter��stica a capacidade de se ligar �� fosfatidilserina, um fosfolip��do presente na camada interna da bicamada lip��dica, que durante a apoptose celular �� translocada para a camada externa da membrana celular. A determina����o da Anexina V �� normalmente utilizada para verificar se as c��lulas s��o vi��veis, apopt��ticas ou necr��ticas por meio de diferen��as na integridade da membrana plasm��tica. Assim, ao conjugar a Anexina V ao FITC (Isotiocianato de fluoresce��na) �� poss��vel identificar e quantificar as c��lulas apopt��ticas por citometria de fluxo7. Numa amostra de 15 CE���s, a qual foi induzida a hem��lise, verificou-se, por citometria de fluxo, que a viabilidade deste componente se desvanesce ao longo do tempo, confirmando assim que o tratamento, manuseamento e armazenamento do sangue compromete a vitalidade terapeutica deste insubstituivel produto vital.