Efficacy of an eradication protocol in case of Pseudomonas aeruginosa primo-infections in children with cystic fibrosis

Introduction: Patients with cystic fibrosis (CF) are more susceptible to pathogens like P. aeruginosa (PA). PA primo-­‐infections require particular attention, as with failure in eradication, there is accelerated lung deterioration. The main aim of this study is to assess the rate of PA eradication according to our particular protocol with inhaled tobramycin and oral ciprofloxacin, as there is no consensus in the literature on what eradication protocol the best is. Methods: Retrospective single centre study with data analysis from June 1st 2007 to June 1st 2011 of patients who had primo-­‐infections exclusively treated by 3 x 28 days of inhaled tobramycin and oral ciprofloxacin for the first and last 21 days. Success in eradication is defined by ≥ 3 negative bacteriologies for 6 months after the beginning of the protocol. If ≥ 1 bacteriology is positive, we consider the eradication as a failure. Results: Out of 41 patients, 18 were included in our analysis. 7 girls (38.9%) and 11 boys (61.1%) followed the eradication protocol. Boys had 12 primo-­‐infections and girls had 8. Among these 20 primo-­‐infections, 16 (80%) had an all-­‐overall success in eradication and 4 (20%) a failure. No significant statistical difference for age between these groups (t-­‐test = 0.07, p = 0.94), neither for FEV1% (t-­‐test = 0.96, p = 0.41) nor BMI (t-­‐test = 1.35, p = 0.27). Rate of success was 100% for girls and 66.6% for boys. Conclusion: Our protocol succeeded in an overall eradication rate of 80%, without statistical significant impact on FEV1 % and BMI values. However, there is a sex difference with eradication rates in girls (100%) and boys (66.6%). A sex difference has not yet been reported in the literature. This should be evaluated in further studies.

Inspeção dos Programas de Controle de Infecção Hospitalar dos Serviços de Saúde pela Vigilância Sanitária: diagnóstico de situação

Estudo de diagnóstico de situação, que buscou reconhecer e comparar as condições de inspeção sanitária de Programas de Controle de Infecção Hospitalar (PCIH), junto a agentes de dois Grupos Técnicos de Vigilância Sanitária, em 2002, por meio de questionários. Os resultados mostraram que os agentes possuíam algum conhecimento sobre IH, mas a maioria não inspecionava PCIH, não realizou treinamento, não utilizava roteiro específico e outros recursos. A estrutura física foi o tipo de inspeção mais citado, seguindo-se atas e estatísticas do PCIH. Concluiu-se que as principais dificuldades para a inspeção de PCIH concentram-se na insuficiência de pessoal, recursos, motivação e capacitação técnica. Observou-se, também, heterogeneidade, nesses resultados, entre os Grupos.

Auxiliares e Técnicos de enfermagem e controle de infecção hospitalar em centro cirúrgico: mitos e verdades

Este estudo analítico descritivo objetivou detectar conceitos que traduzem mitos e verdades relativos à infecção hospitalar entre auxiliares e técnicos de enfermagem no centro cirúrgico de três hospitais. O instrumento para coleta de dados possui 28 afirmações (15 verdadeiras e 13 falsas) contemplando fatores relacionados ao paciente, equipe cirúrgica, ambiente, procedimentos. As afirmações contêm escala em três pontos (concordo, tenho dúvida, discordo). Obtivemos respostas adequadas em 72% e não adequadas em 28%, indicando o satisfatório conhecimento da enfermagem perioperatória relacionadas ao controle infecção hospitalar . Nos itens uso de pro-pé, alianças e outros objetos, pêlo como patógeno, escovação das mãos, uso de avental e campo cirúrgico umedecidos, cirurgia infectada e rotina de limpeza, doenças ocupacionais, infecção hospitalar, infecção sítio cirúrgico e tempo operatório, pudemos detectar mitos e rituais referentes ao controle de infecção, que estão relacionados sobretudo à cultura de quem os praticam, perpetuando resistência a mudanças.

Mechanisms of antagonism of Pseudomonas fluorescens EPS62e against Erwinia amylovora, the causal agent of fire blight

Pseudomonas fluorescens EPS62e was selected during a screening procedure for its high efficacy in controlling infections by Erwinia amylovora, the causal agent of fire blight disease, on different plant materials. In field trials carried out in pear trees during bloom, EPS62e colonized flowers until the carrying capacity, providing a moderate efficacy of fire-blight control. The putative mechanisms of EPS62e antagonism against E. amylovora were studied. EPS62e did not produce antimicrobial compounds described in P. fluorescens species and only developed antagonism in King’s B medium, where it produced siderophores. Interaction experiments in culture plate wells including a membrane filter, which physically separated the cultures, confirmed that inhibition of E. amylovora requires cell-to-cell contact. The spectrum of nutrient assimilation indicated that EPS62e used significantly more or different carbon sources than the pathogen. The maximum growth rate and affinity for nutrients in immature fruit extract were higher in EPS62e than in E. amylovora, but the cell yield was similar. The fitness of EPS62e and E. amylovora was studied upon inoculation in immature pear fruit wounds and hypanthia of intact flowers under controlled-environment conditions. When inoculated separately, EPS62e grew faster in flowers, whereas E. amylovora grew faster in fruit wounds because of its rapid spread to adjacent tissues. However, in preventive inoculations of EPS62e, subsequent growth of EPS101 was significantly inhibited. It is concluded that cell-to-cell interference as well as differences in growth potential and the spectrum and efficiency of nutrient use are mechanisms of antagonism of EPS62e against E. amylovora

Infecção de sítio cirúrgico em hospital universitário: vigilância pós-alta e fatores de risco

Objetivou-se determinar a incidência da Infecção do Sítio Cirúrgico (ISC) em pacientes submetidos à cirurgia do aparelho digestivo (CAD), durante a internação e após alta, verificar a ocorrência de associação entre a ISC e o tipo de cirurgia, tempo de internação, condição clínica do paciente, classificação e duração da cirurgia. Tratou-se de um estudo prospectivo e descritivo realizado em um hospital universitário de agosto de 2001 a março de 2002. De 357 pacientes sub-metidos à CAD, 64 ISC foram notificados, 16 na internação e 48 pós-alta, incidência de 4,5% e 13,9%, respectivamente. Verificou-se uma associação da ISC com o tempo de internação pré-operatório e a classificação da ferida operatória. A taxa global da ISC foi de 18,0%. Observou-se um aumento da ISC em quatro vezes quando a vigilância pós-alta foi realizada. Chama atenção que, caso a vigilância pós-alta não fosse realizada, a taxa global da ISC seria fortemente subnotificada.

Mães portadoras do HIV/Aids: percepções acerca da severidade da infecção

A complexidade da aids envolve não somente o lado cognitivo do conhecimento, mas também os fatores psicossociais que influenciam o comportamento das pessoas. Este estudo teve como objetivo identificar as percepções das mães soropositivas para o HIV acerca da severidade da infecção. Estudo qualitativo em que foram entrevistadas 14 mães soropositivas que tiveram filho no ano de 2004. Os dados foram interpretados utilizando-se o método da Análise de Conteúdo e o Modelo de Crenças em Saúde. As categorias que emanaram dos dados não pensar na doença e medo da morte, refletem a fase atual da epidemia em que os medicamentos anti-retrovirais transformaram a aids em uma doença crônica, ao mesmo tempo em que o medo é uma constante devido ao fato da associação entre aids e morte persistir nas representações populares. O conhecimento das percepções maternas acerca da doença pode proporcionar aos profissionais de saúde maior compreensão de seus comportamentos.

Vigilância pós-alta e o seu impacto na incidência da infecção do sítio cirúrgico

As infecções do sítio cirúrgico (ISC) por sua elevada incidência e repercussões associadas, representam importante problema dentre as infecções hospitalares. Objetivou-se neste estudo determinar a incidência da ISC de pacientes submetidos à cirurgia para obesidade mórbida (COM) e gástrica por outras causas (CGOC), durante a internação e após alta. Foram acompanhados em dois hospitais terciários, de ensino da cidade de São Paulo, entre agosto de 2001 e março de 2002, conforme metodologia NISS, 158 pacientes, sendo 81 submetidos à COM e 77 à CGOC, por um período de 30dias. Notificou-se 64 ISC, 6,3% durante a internação e 34,1% após a alta. Durante a internação, a incidência de ISC foi de 5,0% no grupo COM e de 7,8% no CGOC e com a vigilância pós-alta, estas taxas aumentaram para 55,6% e 24,7%, respectivamente, demonstrando que vigilância pós-alta no pacientes cirúrgico é uma importante ferramenta para obter dados confiáveis e redirecionar as políticas de prevenção e controle da ISC.

Global GacA-steered control of cyanide and exoprotease production in Pseudomonas fluorescens involves specific ribosome binding sites.

The conserved two-component regulatory system GacS/GacA determines the expression of extracellular products and virulence factors in a variety of Gram-negative bacteria. In the biocontrol strain CHA0 of Pseudomonas fluorescens, the response regulator GacA is essential for the synthesis of extracellular protease (AprA) and secondary metabolites including hydrogen cyanide. GacA was found to exert its control on the hydrogen cyanide biosynthetic genes (hcnABC) and on the aprA gene indirectly via a posttranscriptional mechanism. Expression of a translational hcnA'-'lacZ fusion was GacA-dependent whereas a transcriptional hcnA-lacZ fusion was not. A distinct recognition site overlapping with the ribosome binding site appears to be primordial for GacA-steered regulation. GacA-dependence could be conferred to the Escherichia coli lacZ mRNA by a 3-bp substitution in the ribosome binding site. The gene coding for the global translational repressor RsmA of P. fluorescens was cloned. RsmA overexpression mimicked partial loss of GacA function and involved the same recognition site, suggesting that RsmA is a downstream regulatory element of the GacA control cascade. Mutational inactivation of the chromosomal rsmA gene partially suppressed a gacS defect. Thus, a central, GacA-dependent switch from primary to secondary metabolism may operate at the level of translation.

Revisão sistemática sobre aventais cirúrgicos no controle da contaminação/infecção do sítio cirúrgico

O avental cirúrgico é confeccionado com materiais de tecido e não-tecido. O estudo teve como objetivo verificar se há evidências científicas, pela revisão sistemática, que fundamentem a prática do uso de aventais em cirurgias, conforme seu material de confecção. Consideraram-se estudos básicos de intervenção, que investigaram a contaminação e ou a infecção do sítio cirúrgico com uso de aventais cirúrgicos reutilizáveis e ou de uso-único, utilizando como população pessoas submetidas a cirurgias, em situações reais ou simuladas, em qualquer período, sem limitação de idioma. Para localizar os estudos, utilizou-se estratégia de busca nas bases de dados eletrônicas. Constata-se, com isso, dificuldade de isolar o objeto de intervenção de outros inúmeros fatores que podem interferir nos desfechos, em estudos desta natureza. Dois estudos (E1, E2) obtiveram forte evidência de recomendação, concluindo pela não diferença de contaminação e infecção do sítio cirúrgico entre aventais e campos de tecido e não-tecido.

Anaerobic activation of the entire denitrification pathway in Pseudomonas aeruginosa requires Anr, an analog of Fnr.

The Pseudomonas aeruginosa gene anr, which encodes a structural and functional analog of the anaerobic regulator Fnr in Escherichia coli, was mapped to the SpeI fragment R, which is at about 59 min on the genomic map of P. aeruginosa PAO1. Wild-type P. aeruginosa PAO1 grew under anaerobic conditions with nitrate, nitrite, and nitrous oxide as alternative electron acceptors. An anr deletion mutant, PAO6261, was constructed. It was unable to grow with these alternative electron acceptors; however, its ability to denitrify was restored upon the introduction of the wild-type anr gene. In addition, the activities of two enzymes in the denitrification pathway, nitrite reductase and nitric oxide reductase, were not detectable under oxygen-limiting conditions in strain PAO6261 but were restored when complemented with the anr+ gene. These results indicate that the anr gene product plays a key role in anaerobically activating the entire denitrification pathway.

A repeated GGA motif is critical for the activity and stability of the riboregulator RsmY of Pseudomonas fluorescens.

The riboregulator RsmY of Pseudomonas fluorescens strain CHA0 is an example of small regulatory RNAs belonging to the global Rsm/Csr regulatory systems controlling diverse cellular processes such as glycogen accumulation, motility, or formation of extracellular products in various bacteria. By binding multiple molecules of the small regulatory protein RsmA, RsmY relieves the negative effect of RsmA on the translation of several target genes involved in the biocontrol properties of strain CHA0. RsmY and functionally related riboregulators have repeated GGA motifs predicted to be exposed in single-stranded regions, notably in the loops of hairpins. The secondary structure of RsmY was corroborated by in vivo cleavage with lead acetate. RsmY mutants lacking three or five (out of six) of the GGA motifs showed reduced ability to derepress the expression of target genes in vivo and failed to bind the RsmA protein efficiently in vitro. The absence of GGA motifs in RsmY mutants resulted in reduced abundance of these transcripts and in a shorter half-life (< or = 6 min as compared with 27 min for wild type RsmY). These results suggest that both the interaction of RsmY with RsmA and the stability of RsmY strongly depend on the GGA repeats and that the ability of RsmY to interact with small regulatory proteins such as RsmA may protect this RNA from degradation.

Adesão ao tratamento por indivíduos com a co-infecção HIV/tuberculose: revisão integrativa da literatura

Trata-se de revisão integrativa cujo objetivo foi avaliar as evidências disponíveis na literatura sobre os fatores associados à adesão ao tratamento por pacientes com a co-infecção HIV/TB. Foram levantados artigos publicados no período de 2002 a 2008, nas bases de dados LILACS e MEDLINE. O material foi categorizado de acordo com ano de publicação, periódico, local do estudo e fatores relacionados à adesão. A amostra final foi composta por oito artigos. Os fatores encontrados, associados à adesão ao tratamento da co-infecção HIV/TB, relacionam-se: ao indivíduo e ao estilo de vida (tratamento prévio de TB, receio de estigma e discriminação, uso de substâncias químicas, depressão, suporte social), à doença e aos medicamentos (tipo de regime medicamentoso, uso de outros medicamentos, efeitos colaterais, dificuldade de diagnóstico de TB nestes pacientes), e aos serviços de saúde (problemas operacionais para acompanhar o tratamento, treinamento dos profissionais, supervisão, locais distintos para atendimento de TB e de HIV).

Identificação de contaminação bacteriana no sabão líquido de uso hospitalar

O estudo realizou a análise bacteriológica de sabões líquidos utilizados para lavagem das mãos dos profissionais de saúde. Trata-se de estudo exploratório transversal, desenvolvido nas unidades de internação de hospital de médio porte em Fortaleza/CE. Os dados foram colhidos no período de maio a julho de 2007. Do total de 59 frascos com sabão líquido, 33 continham os seguintes microorganismos: Burkholderia cepacia (n=14), Pseudomonas putidas (9), Pseudomonas aeruginosa (3), Klebsiella pneumoniae (3), Enterobacter cloacae (2), Pseudomonas luteola (2). As unidades com maior número de amostras contaminadas foram a clínica cirúrgica (n=7) e a clínica dermatológica (n=4). A contaminação também foi verificada em frasco original do mesmo lote de sabão líquido usado para abastecer as saboneteiras. Podemos concluir ser necessário disciplinar e controlar a qualidade desses produtos nas linhas de produção tanto quanto nas fases de uso nos serviços de saúde, sobretudo porque sua utilidade se presta à prevenção de infecção hospitalar.

A Th17- and Th2-skewed Cytokine Profile in Cystic Fibrosis Lungs Represents a Potential Risk Factor for Pseudomonas aeruginosa Infection.

Rationale: Cystic fibrosis (CF) is characterized by progressive pulmonary inflammation that is infection-triggered. Pseudomonas aeruginosa represents a risk factor for deterioration of lung function and reduced life expectancy. Objectives: To assess T-cell cytokine/chemokine production in clinically stable children with CF and evaluate the association between T-cell subtypes and susceptibility for infection with P. aeruginosa. Methods: T-cell cytokine/chemokine profiles were measured in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) from children with CF (n = 57; 6.1 ± 5.9 yr) and non-CF control subjects (n = 18; 5.9 ± 4.3 yr). Memory responses to Aspergillus fumigatus and P. aeruginosa were monitored. High-resolution computed tomography-based Helbich score was assessed. In a prospective observational trial the association between BALF cytokine/chemokine profiles and subsequent infection with P. aeruginosa was studied. Measurements and Main Results: Th1- (INF-γ), Th2- (IL-5, IL-13), Th17- (IL-17A), and Th17-related cytokines (IL-1β, IL-6) were significantly up-regulated in airways of patients with CF. IL-17A, IL-13, and IL-5 were significantly higher in BALF of symptomatic as compared with clinically asymptomatic patients with CF. IL-17A and IL-5 correlated with the percentage of neutrophils in BALF (r = 0.41, P < 0.05 and r = 0.46, P < 0.05, respectively). Th17- (IL-17A, IL-6, IL-1β, IL-8) and Th2-associated cytokines and chemokines (IL-5, IL-13, TARC/CCL17), but not IFN-γ levels, significantly correlated with high-resolution computed tomography changes (Helbich score; P < 0.05). P. aeruginosa- and A. fumigatus-specific T cells from patients with CF displayed significantly higher IL-5 and IL-17A mRNA expression. IL-17A and TARC/CCL17 were significantly augmented in patients that developed P. aeruginosa infection within 24 months. Conclusions: We propose a role for Th17 and Th2 T cells in chronic inflammation in lungs of patients with CF. High concentrations of these cytokines/chemokines in CF airways precede infection with P. aeruginosa.

Use of green fluorescent protein-based reporters to monitor balanced production of antifungal compounds in the biocontrol agent Pseudomonas fluorescens CHA0.

AIMS: To develop reporter constructs based on stable and unstable variants of the green fluorescent protein (GFP) for monitoring balanced production of antifungal compounds that are crucial for the capacity of the root-colonizing Pseudomonas fluorescens strain CHA0 to control plant diseases caused by soil-borne pathogenic fungi. METHODS AND RESULTS: Pseudomonas fluorescens CHA0 produces the three antifungal metabolites 2,4-diacetylphloroglucinol (DAPG), pyoluteorin (PLT) and pyrrolnitrin (PRN). The gfp[mut3] and gfp[AAV] reporter genes were fused to the promoter regions of the DAPG, PLT and PRN biosynthetic genes. The reporter fusions were then used to follow the kinetics of expression of the three antifungal metabolites in a microplate assay. DAPG and PLT were found to display an inverse relationship in which each metabolite activates its own biosynthesis while repressing the synthesis of the other metabolite. PRN appears not to be involved in this balance. However, the microbial and plant phenolic metabolite salicylate was found to interfere with the expression of both DAPG and PLT. CONCLUSIONS: The results obtained provide evidence that P. fluorescens CHA0 may keep the antifungal compounds DAPG and PLT at a fine-tuned balance that can be affected by certain microbial and plant phenolics. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: To our knowledge, the present study is the first to use stable and unstable GFP variants to study antibiotic gene expression in a biocontrol pseudomonad. The developed reporter fusions will be a highly valuable tool to study in situ expression of this bacterial biocontrol trait on plant roots, i.e. at the site of pathogen suppression.