Design and standardization of PCR primers and protocols for detection of clonal immunoglobulin and T-cell receptor gene recombinations in suspect lymphoproliferations: report of the BIOMED-2 Concerted Action BMH4-CT98-3936.

In a European BIOMED-2 collaborative study, multiplex PCR assays have successfully been developed and standardized for the detection of clonally rearranged immunoglobulin (Ig) and T-cell receptor (TCR) genes and the chromosome aberrations t(11;14) and t(14;18). This has resulted in 107 different primers in only 18 multiplex PCR tubes: three VH-JH, two DH-JH, two Ig kappa (IGK), one Ig lambda (IGL), three TCR beta (TCRB), two TCR gamma (TCRG), one TCR delta (TCRD), three BCL1-Ig heavy chain (IGH), and one BCL2-IGH. The PCR products of Ig/TCR genes can be analyzed for clonality assessment by heteroduplex analysis or GeneScanning. The detection rate of clonal rearrangements using the BIOMED-2 primer sets is unprecedentedly high. This is mainly based on the complementarity of the various BIOMED-2 tubes. In particular, combined application of IGH (VH-JH and DH-JH) and IGK tubes can detect virtually all clonal B-cell proliferations, even in B-cell malignancies with high levels of somatic mutations. The contribution of IGL gene rearrangements seems limited. Combined usage of the TCRB and TCRG tubes detects virtually all clonal T-cell populations, whereas the TCRD tube has added value in case of TCRgammadelta(+) T-cell proliferations. The BIOMED-2 multiplex tubes can now be used for diagnostic clonality studies as well as for the identification of PCR targets suitable for the detection of minimal residual disease.

The detection of contaminating clonal cells in apheresis products is related to response and outcome in multiple myeloma undergoing autologous peripheral blood stem cell transplantation.

In the present paper, we report on the use of the heteroduplex PCR technique to detect the presence of clonally rearranged VDJ segments of the heavy chain immunoglobulin gene (VDJH) in the apheresis products of patients with multiple myeloma (MM) undergoing autologous peripheral blood stem cell (APBSC) transplantation. Twenty-three out of 31 MM patients undergoing APBSC transplantation with VDJH segments clonally rearranged detected at diagnosis were included in the study. Samples of the apheresis products were PCR amplified using JH and VH (FRIII and FRII) consensus primers and subsequently analyzed with the heteroduplex technique, and compared with those obtained at diagnosis. 52% of cases yielded positive results (presence of clonally rearranged VDJH segments in at least one apheresis). The presence of positive results in the apheresis products was not related to any pretransplant characteristics with the exception of response status at transplant. Thus, while no one patient with positive apheresis products was in complete remission (CR), negative immunofixation, before the transplant, five cases (46%) with negative apheresis were already in CR at transplant (P = 0.01). The remaining six cases with heteroduplex PCR negative apheresis were in partial remission before transplant. Patients with clonally free products were more likely to obtain CR following transplant (64% vs 17%, P= 0.02) and a longer progression-free survival, (40 months in patients transplanted with polyclonal products vs 20 with monoclonal ones, P = 0.03). These results were consistent when the overall survival was considered, since it was better in those patients with negative apheresis than it was in those with positive (83% vs 36% at 5 years from diagnosis, P= 0.01). These findings indicate that the presence of clonality rearranged VDJH segments is related to the response and outcome in MM transplanted patients.

MULTIPLICAÇÃO E ALONGAMENTO IN VITRO DE CLONES HÍBRIDOS DE Eucalyptus globulus

Os híbridos de Eucalyptus globulus representam uma excelente alternativa para o setor de celulose e papel, em razão dos ganhos em qualidade da madeira para a fabricação de celulose. Entretanto, estes híbridos têm apresentado recalcitrância ao enraizamento adventício. Assim, a micropropagação é apontada como a técnica para o rejuvenescimento desses híbridos adultos, viabilizando a propagação clonal dos mesmos. O presente trabalho avaliou o cultivo in vitro de três clones de Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus e de três clones de Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus, em relação à multiplicação in vitro, no meio MS suplementado com 0,5 mg L-1 de BAP e 0,01 mg L-1 de ANA, bem como o efeito das concentrações de 0,25; 0,50; 0,75 e 1,0 mg L-1 de AIB e dos meios de cultura MS e JADS no alongamento in vitro das brotações. Os clones diferiram quanto à multiplicação in vitro das brotações e apresentaram uma taxa de multiplicação média dos clones de 3,0 tufos de brotações em cada subcultivo, ao longo dos 25 subcultivos realizados. No alongamento in vitro, os clones diferiram quanto às concentrações de AIB adequadas para provocar o alongamento, bem como em relação aos meios de cultura MS e JADS. O intervalo médio entre 0,40 e 0,80 mg L-1 de AIB proporcionou o maior número e comprimento das brotações alongadas in vitro e com maior vigor.

Forestación, territorio y ambiente : 25 años de silvicultura trasnacional en Uruguay, Brasil y Argentina

International audience

Simulating the effects of vegetation and landscape structure on fire behavior in northeastern Portugal: the case of holm oak (Quercus rotundifolia)

O fogo é um processo frequente nas paisagens do norte de Portugal. Estudos anteriores mostraram que os bosques de azinheira (Quercus rotundifolia) persistem após a passagem do fogo e ajudam a diminuir a sua intensidade e taxa de propagação. Os principais objetivos deste estudo foram compreender e modelar o efeito dos bosques de azinheira no comportamento do fogo ao nível da paisagem da bacia superior do rio Sabor, localizado no nordeste de Portugal. O impacto dos bosques de azinheira no comportamento do fogo foi testado em termos de área e configuração de acordo com cenários que simulam a possível distribuição destas unidades de vegetação na paisagem, considerando uma percentagem de ocupação da azinheira de 2.2% (Low), 18.1% (Moderate), 26.0% (High), e 39.8% (Rivers). Estes cenários tiveram como principal objetivo testar 1) o papel dos bosques de azinheira no comportamento do fogo e 2) de que forma a configuração das manchas de azinheira podem ajudar a diminuir a intensidade da linha de fogo e área ardida. Na modelação do comportamento do fogo foi usado o modelo FlamMap para simular a intensidade de linha do fogo e taxa de propagação do fogo com base em modelos de combustível associados a cada ocupação e uso do solo presente na área de estudo, e também com base em fatores topográficos (altitude, declive e orientação da encosta) e climáticos (humidade e velocidade do vento). Foram ainda usados dois modelos de combustível para a ocupação de azinheira (áreas interiores e de bordadura), desenvolvidos com base em dados reais obtidos na região. Usou-se o software FRAGSATS para a análise dos padrões espaciais das classes de intensidade de linha do fogo, usando-se as métricas Class Area (CA), Number of Patches (NP) e Large Patches Index (LPI). Os resultados obtidos indicaram que a intensidade da linha de fogo e a taxa de propagação do fogo variou entre cenários e entre modelos de combustível para o azinhal. A intensidade média da linha de fogo e a taxa média de propagação do fogo decresceu à medida que a percentagem de área de bosques de azinheira aumentou na paisagem. Também foi observado que as métricas CA, NP e LPI variaram entre cenários e modelos de combustível para o azinhal, decrescendo quando a percentagem de área de bosques de azinheira aumentou. Este estudo permitiu concluir que a variação da percentagem de ocupação e configuração espacial dos bosques de azinheira influenciam o comportamento do fogo, reduzindo, em termos médios, a intensidade da linha de fogo e a taxa de propagação, sugerindo que os bosques de azinhal podem ser usados como medidas silvícolas preventivas para diminuir o risco de incêndio nesta região.

2C-Cas9: a versatile tool for clonal analysis of gene function.

CRISPR/Cas9-mediated targeted mutagenesis allows efficient generation of loss-of-function alleles in zebrafish. To date, this technology has been primarily used to generate genetic knockout animals. Nevertheless, the study of the function of certain loci might require tight spatiotemporal control of gene inactivation. Here, we show that tissue-specific gene disruption can be achieved by driving Cas9 expression with the Gal4/UAS system. Furthermore, by combining the Gal4/UAS and Cre/loxP systems, we establish a versatile tool to genetically label mutant cell clones, enabling their phenotypic analysis. Our technique has the potential to be applied to diverse model organisms, enabling tissue-specific loss-of-function and phenotypic characterization of live and fixed tissues.

Análise da silvicultura na bacia hidrográfica do rio Jaguarão (Brasil-Uruguai) : diagnóstico para a gestão geoambiental em bacia transfronteiriça

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Humanas, Departamento de Geografia, 2015.

Evaluación de la germinación de semillas y propagación vegetativa de Conocarpus erectus (L) con fines de conservación y manejo, en el Área Natural Protegida Complejo Barra de Santiago, sector Barra de Santiago, Departamento de Ahuachapán

El estudio de la evaluación de la germinación de semillas y propagación vegetativa de Conocarpus erectus (L) con fines de conservación y manejo, se llevó a cabo en el Área Natural Protegida Complejo Barra de Santiago, sector Barra de Santiago, Departamento de Ahuachapán, entre los meses de enero a septiembre de 2013. Se evaluaron 100 estacas y 100 acodos aéreos, a los que se les aplicó dos dosis de regulador de crecimiento Kelpak y una dosis del antifúngico Cupravit. En ambas técnicas se utilizó suelo esterilizado. Posteriormente se recolectó un aproximado de 10,000 semillas que se dividieron equitativamente entre dos tratamientos, el tratamiento 1: suelo de manglar y el tratamiento 2: suelo de manglar con excretas de Cardisoma crassum (L) “cangrejo azul”. Para realizar la siembra fue necesario preparar 10 cajas por cada tratamiento y en cada una se sembraron 500 semillas en cada caja. Según los resultados obtenidos después de 15 días, solamente 44 estacas lograron un establecimiento exitoso por que se observaron brotes apicales. Luego de 3 meses solamente se establecieron 19 estacas. En el caso de los acodos aéreos los primeros registros de producción de raíces adventicias se observaron a los 15 días, cuando aún estaban en los árboles, solamente en 30 de los 100 acodos aéreos que se montaron, se establecieron con éxito en el vivero.

Propagação de Camellia sinensis: efeito do genótipo, estaca, substrato, recipiente e ácido indolbutírico

Tem sido relatado que as estacas de Camellia sinensis possuem baixa capacidade de emitir raízes, motivando assim a realização de estudos básicos para otimização do processo de propagação por estacas. Assim sendo, o presente trabalho objetivou quantificar o potencial rizogênico de diferentes genótipos e o efeito da posição da estaca no ramo e incisão na base, do substrato, tamanho do recipiente e ácido indolbutírico no enraizamento de estacas semi-lenhosas dessa espécie. Para tal, foram coletados ramos dos genótipos IAC 259, F15 e Comum, em Pariquera-Açu-SP, no inverno de 2010. em seguida, preparadas as estacas, contendo uma gema e uma folha, foram mantidas em viveiro com 70% de sombreamento. Estacas da posição basal e mediana dos ramos são as mais adequadas para estaquia devido a menor mortalidade e maior enraizamento. A injúria na base da estaca não afeta a mortalidade e o enraizamento das estacas, porém induz à formação de calo. Também não houve diferenças na mortalidade e no enraizamento das estacas quando as mesmas foram mantidas em recipiente de 50, 90 e 120 cm³. Comparado com vermiculita, areia e casca de arroz carbonizada, o solo foi o melhor substrato para estaquia, que na presença do ferimento, juntamente com o tratamento das estacas com 10 g L-1 de AIB promoveu a maior porcentagem de enraizamento. Todavia, ainda nessa condição a mortalidade média das estacas foi de 42%. O potencial de enraizamento do genótipo Comum foi superior ao do IAC 259 e F15.

Rare sex or out of reach equilibrium? The dynamics of F-IS in partially clonal organisms

Background: Partially clonal organisms are very common in nature, yet the influence of partial asexuality on the temporal dynamics of genetic diversity remains poorly understood. Mathematical models accounting for clonality predict deviations only for extremely rare sex and only towards mean inbreeding coefficient (F-IS) over bar < 0. Yet in partially clonal species, both F-IS < 0 and F-IS > 0 are frequently observed also in populations where there is evidence for a significant amount of sexual reproduction. Here, we studied the joint effects of partial clonality, mutation and genetic drift with a state-and-time discrete Markov chain model to describe the dynamics of F-IS over time under increasing rates of clonality. Results: Results of the mathematical model and simulations show that partial clonality slows down the asymptotic convergence to F-IS = 0. Thus, although clonality alone does not lead to departures from Hardy-Weinberg expectations once reached the final equilibrium state, both negative and positive F-IS values can arise transiently even at intermediate rates of clonality. More importantly, such "transient" departures from Hardy Weinberg proportions may last long as clonality tunes up the temporal variation of F-IS and reduces its rate of change over time, leading to a hyperbolic increase of the maximal time needed to reach the final mean (F-IS,F-infinity) over bar value expected at equilibrium. Conclusion: Our results argue for a dynamical interpretation of F-IS in clonal populations. Negative values cannot be interpreted as unequivocal evidence for extremely scarce sex but also as intermediate rates of clonality in finite populations. Complementary observations (e.g. frequency distribution of multiloci genotypes, population history) or time series data may help to discriminate between different possible conclusions on the extent of clonality when mean (F-IS) over bar values deviating from zero and/or a large variation of F-IS over loci are observed.

Modelagem da propagação sonora em dutos : abordagem matemática no domínio da frequência e do tempo utilizando transformada de laplace

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade UnB Gama, Faculdade de Tecnologia, Programa de Pós-graduação em Integridade de Materiais da Engenharia, 2016.

Structural Basis for Clonal Diversity of the Public T Cell Response to Dominant Epitopes from Cytomegalovirus and Influenza

A diverse T cell receptor (TCR) repertoire is a prerequisite for effective viral clearance. However, knowledge of human TCR repertoire to defined viral antigens is limited. Recent advances in high-throughput sequencing (HTS) and single-cell sorting have revolutionized the study of human TCR repertoires to different types of viruses. In collaboration with the laboratory of Dr. Nan-ping Weng (National Institute on Aging, NIH), we applied unique molecular identifier (UMI)-labelled HTS, single-cell paired TCR analysis, surface plasmon resonance, and X-ray crystallography to exhaustively interrogate CD8+ TCR repertoires specific for cytomegalovirus (CMV) and influenza A (Flu) in HLA-A2+ humans. Our two CMV-specific TCR-pMHC structures and two Flu-specific TCR-pMHC structures provide a plausible explanation for the much higher diversity of CMV-specific than Flu-specific TCR repertoires in humans. Our comprehensive biochemical and structural portrait of two different anti-viral T cell responses may contribute to the future development of predictors of immunity or disease at the individual level.

Institutos de geología y silvicultura y recursos renovables

Por medio de un acuerdo del Consejo Universitario, fueron creados hace treinta años los Institutos de Geología y Silvicultura y Recursos Renovables en el municipio de Linares con la condicionante de establecer previamente a su oferta académica, la infraestructura física y humana necesaria.