Novel microbicidal agents derived from Naja atra cardiotoxin 1 (CTX-1)

During my PhD course, I focused my research on antimicrobial peptides (AMPs), in particular on the aspects of their computational design and development. This work led to the development of a new family of AMPs that I designed, starting from the amino acid sequence of a snake venom toxin, the cardiotoxin 1 (CTX-1) of Naja atra. Naja atra atra cardiotoxin 1, produced by Chinese cobra snakes belonging to Elapidae family, is included in the three-finger toxin family and exerts high cytotoxicity and antimicrobial activity too. This toxin family is characterized by specific folding of three beta-sheet loops (“fingers”) extending from the central core and by four conserved disulfide bridges. Using as template the first loop of this toxin, different sequences of 20 amino acids linear cationic peptides have been designed in order to avoid toxic effects but to maintain and strengthen the antimicrobial activity. As a result, the sequence NCP-0 (Naja Cardiotoxin Peptide-0) was designed as ancestor and subsequently other 4 variant sequences of NCP0 were developed. These variant sequences have shown microbicidal activity towards a panel of reference strains of Gram-positive and Gram-negative bacteria, fungi and an enveloped virus. In particular, the sequence designed as NCP-3 (Naja Cardiotoxin Peptide-3) and its variants NCP-3a and NCP-3b have shown the best antimicrobial activity together with low cytotoxicity against eukaryotic cells and low hemolytic activity. Bactericidal activity has been demonstrated by minimum bactericidal concentration (MBC) assay at values below 10 μg/ml for Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Acinetobacter baumannii ( clinical isolates), Moraxella catharralis ATCC 25238, MRSA ATCC 43400, while towards Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus hirae ATCC 10541 and Streptococcus agalactiae ATCC 13813 the bactericidal activity was demonstrated even below 1.6 μg/ml concentration. This potent antimicrobial activity was confirmed even for unicellular fungi Candida albicans, Candida glabrata and Malassezia pachydermatis (MBC 32.26-6.4 μg/ml), and also against the fast-growing mycobacteria Mycobacterium smegmatis DSMZ 43756 and Mycobacterium fortuitum DSMZ 46621 (MBC 100 μg/ml). Moreover, NCP-3 has shown a virucidal activity on the enveloped virus Bovine Herpesvirus 1 (BoHV1) belonging to herpesviridae family. The bactericidal activity is maintained in a high salt concentration (125 and 250 mM NaCl) medium and PB +20% Mueller Hinton Medium for E. coli, MRSA and Pseudomonas aeruginosa reference strains. Considering these in vitro obtained data, we propose NCP-3 and its variants NCP-3a and NCP-3b as promising antimicrobial candidates. For this reason, the whole novel AMPs family has been protected by a national patent (n°102015000015951).

Banho de clorexidina para prevenção de colonização e infecção por micro-organismos multirresistentes na unidade de transplante de células tronco e hematopoiéticas

Introdução: Infecções relacionadas à assistência de saúde (IRAS) representam hoje um dos principais desafios da qualidade do cuidado do paciente, principalmente em pacientes submetido a transplante de células tronco e hematopoiéticas (TCTH) O banho diário com a clorexidina (CHG) degermante a 2% tem sido proposto principalmente em unidades de terapia intensivas (UTIs) para diminuir a colonização bacteriana do paciente e assim diminuir IRAS. O objetivo deste estudo foi avaliar o impacto do banho com CHG degermante a 2% em unidade de internação de TCTH na incidência de infecção e colonização por patógenos multirresistentes e ainda avaliar seu impacto na sensibilidade das bactérias ao antisséptico. Métodos: Foi realizado um estudo quasi-experimental, com duração de 9 anos, com início em janeiro/2005 até dezembro/2013. A intervenção foi iniciada em agosto de 2009, sendo que os períodos pré e pós-intervenção tiveram duração de 4,5 anos. As taxas de IRAS, infecção por gram-negativos multirresistentes e infecção e colonização por enterococo resistente a vancomicina (VRE) foram avaliadas através de série temporal, para estudar o impacto da intervenção. As concentrações inibitórias mínimas (CIM) das bactérias para a CHG com e sem o inibidor de bomba de efluxo (CCCP) foram avaliadas nos dois períodos. Os genes de resistência a CHG foram estudados por meio da PCR e a clonalidade dos isolados por eletroforese em campo pulsátil. Resultados: Foi observada redução significativa na incidência de infecção e colonização de VRE na unidade no período pós-intervenção (p: 0,001). Essa taxa permaneceu estável em outras UTIs clínicas do hospital. Contudo as taxas de infecção por Gram negativos multirresistentes aumentou nos últimos anos na unidade. Não ocorreu diminuição na taxa de IRAS na unidade. As CIMs testadas de CHG aumentaram nas amostras de VRE e K. pneumoniae após o período de exposição ao antisséptico, com queda importante da CIM após o uso do CCCP, revelando ser a bomba de efluxo, um importante mecanismo de resistência à CHG. As amostras de A. baumannii e P. aeruginosa não apresentaram aumento da CIM após período de exposição à clorexidina. As bombas de efluxo Ade A, B e C estiveram presentes na maioria dos A. baumannii do grupo controle (66%). A bomba cepA foi encontrada em 67% de todas as K. pneumoniae testadas e em 44,5% das P. aeruginosas do grupo pré intervenção. Observamos uma relação positiva entre a presença da CepA nas amostras de K. pneumoniae e a resposta ao CCCP: de todas as 49 amostras CepA positivas 67,3% obtiveram redução do seu MIC em 4 diluições após adição do CCCP. A avaliação de clonalidade demonstrou padrão policlonal das amostras de VRE, K. pneumoniae e A. baumannii avaliadas. Em relação às amostras de P. aeruginosa foi observado que no período pós-intervenção ocorreu predominância de um clone com > 80% semelhança em 10 das 22 amostras avaliadas pelo dendrograma. Conclusões: O banho de clorexidina teve impacto na redução da incidência de infecção e colonização por VRE na unidade de TCTH, e não teve o mesmo impacto nas bactérias gram-negativas. Os mecanismos moleculares de resistência à clorexidina estão intimamente ligados à presença de bomba de efluxo, sendo provavelmente o principal mecanismo de resistência e tolerância das bactérias ao antisséptico

Hemoculturas positivas num serviço de pediatria: 2003-2012

Introdução: Em situações clínicas selecionadas é aconselhada investigação complementar da criança com febre, nomeadamente realização de hemocultura. Objetivos: Analisar as hemoculturas positivas por bactérias patogénicas num serviço de pediatria, nomeadamente agentes mais frequentes, sua evolução, respetivos antibiogramas e correlação com dados clínicos. Material e Métodos: Estudo retrospetivo de dados micro- biológicos das bactérias patogénicas isoladas em hemoculturas e dados clínicos de crianças com idade entre um mês e 17 anos, admitidas num serviço de pediatria, entre 2003 e 2012. Resultados: No período estudado, a percentagem anual de hemoculturas positivas por bactérias potencialmente patogénicas variou entre 0,8% e 2,9%. No total isolaram-se 158 bactérias patogénicas, sendo mais frequentes: Staphylococcus aureus (29,1%), Streptococcus pneumoniae (27,8%), Escherichia coli (10,1%), Enterococcus faecalis (8,2%), Neisseria meningitidis (5,7%) e Streptococcus pyogenes (5,7%). Nenhuma Neisseria meningitidis foi resistente à resistente à ampicilina, 9% dos Streptococcus pneumoniae tiveram resistência intermédia à penicilina, 8,7% dos Staphylococcus aureus tiveram resistência à meticilina e 6,3% das Escherichia coli tinham resistência à amoxicilina/ácido clavulânico. Sessenta e sete porcento das hemoculturas positivas por bactérias patogénicas correspondiam a crianças com idade inferior a 36 meses. Os diagnósticos mais relevantes foram: bacteriémia oculta, pneumonia, sépsis, meningite e pielonefrite. Ocorreu um óbito devido a choque sético (Streptococcus pneumoniae). Conclusão: Nos 10 anos analisados, as bactérias mais frequentes foram: Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae e Escherichia coli. Verificou-se diminuição da incidência da Neisseria meningitidis após 2005 e do Streptococcus pneumoniae após 2007. As suscetibilidades das diferentes bactérias patogénicas aos antimicrobianos mantiveram-se estáveis. Enfatiza-se a importância epidemiológica e clínica da monitorização de dados microbiológicos.

Atividade antibacteriana de sementes de açaí (Euterpe oleracea Mart.)

O presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antibacteriana de um extrato aquoso de sementes de açaí (Euterpe oleracea Mart.), proveniente do Brasil, em isolados clínicos. O extrato revelou atividade antibacteriana em todos os isolados clínicos testados com a exceção de Escherichia coli e de Klebsiella pneumoniae. Os melhores valores de CMIs (concentrações mínimas inibitórias) foram observados para Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) (0,25 mg/mL), Staphylococcus aureus sensível à meticilina (MSSA), Enterococcus faecalis e Streptococcus agalactiae com um valor de 0,5 mg/mL. O extrato testado parece ser uma opção a explorar no combate de bactérias resistentes.

Rugulotrosins A and B: Two new antibacterial metabolites from an Australian isolate of a penicillium sp.

Two new antibacterial agents, rugulotrosin A (1) and B (2), were obtained from cultures of a Penicillium sp. isolated from soil samples acquired near Sussex Inlet, New South Wales, Australia. Rugulotrosin A (1) is a chiral symmetric dimer, and its relative stereostructure was determined by spectroscopic and X-ray crystallographic analysis. Rugulotrosin B (2) is a chiral asymmetric dimer isomeric with 1. Its structure was determined by spectroscopic analysis with comparison to the co-metabolite 1 and previously reported fungal metabolites. Both rugulotrosins A and B displayed significant antibacterial activity against Bacillus subtilis, while rugulotrosin A was also strongly active against Enterococcus faecalis and B. cereus.

In vitro antibacterial activity of Australian native herb extracts against food-related bacteria

The antibacterial activities of water, ethanol and hexane extracts of five Australian herbs (Backhousia citriodora, Anetholea anisata, Eucalyptus staigerana, Eu. olida and Prostanthera incisa) against seven food-related bacteria (Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella Enteritidis, Sal. Typhimurium and Staphylococcus aureus) were determined by the microtitre broth microdilution assay. The water extracts of all the herbs displayed no or low antimicrobial activity against all of the bacteria tested with the exception of S. aureus. Relatively high levels of activity (minimum inhibitory concentrations of 125-15.6 mu g ml(-1)) against this pathogen were present in water extracts from all herbs except P. incisa. The ethanol and hexane extracts of all herbs displayed some activity against a number of the bacteria tested, with no one particular herb displaying an obviously higher level or range of activity. Staphylococcus aureus proved to be the most sensitive of the bacteria tested against the solvent extracts with all extracts displaying activity ranging from 125 to 7.8 mu g ml(-1), while E. coli and L. monocytogenes, on the other hand, proved the least sensitive with only five of 15 herb/extract combinations displaying any activity against these pathogens. The extracts of the Australian native herbs examined in this study have potential for application in foods to increase shelf-life or promote safety. (c) 2005 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Active membrane transport and receptor proteins from bacteria

A general strategy for the expression of bacterial membrane transport and receptor genes in Escherichia coli is described. Expression is amplified so that the encoded proteins comprise 5-35% of E. coli inner membrane protein. Depending upon their topology, proteins are produced with RGSH6 or a Strep tag at the C-terminus. These enable purification in mg quantities for crystallization and NMR studies. Examples of one nutrient uptake and one multidrug extrusion protein from Helicobacter pylori are described. This strategy is successful for membrane proteins from H. pylori, E. coli, Enterococcus faecalis, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Microbacterium liquefaciens, Brucella abortus, Brucella melitensis, Campylobacter jejuni, Neisseria meningitides, Streptomyces coelicolor and Rhodobacter sphaeroides. ©2005 Biochemical Society.

Studies on the mode of action and beta-lactamase inhibitory properties of novel oxapenem compounds

Four novel oxapenem compounds were evaluated for their ß-lactamase inhibitory and antibacterial properties. Two (AM-112 and AM-113) displayed intrinsic antibacterial activity with MICs of between 2 to 16µg/ml and 0.5-2µg/ml against Escherichia coli and methicillin-sensitive and -resistant Staphylococcus aureus, respectively. The isomers of these compounds, AM-115 and AM-114 did not display significant antibacterial activity. Combination of the oxapenems with ceftazidime afforded protection against ß-lactamase-producing strains, including hyperproducers of class C enzymes and extended-spectrum ß-lactamase enzymes. A fixed 4µg/ml concentration of AM-112 protected a panel of eight cephalosporins against hydrolysis by class A and class C ß-lactamase producers. In vivo studies confirmed the protective effect of AM-112 for ceftazidime against ß-lactamase producing S. aureus, Enterobacter cloacae and E. coli strains in a murine intraperitoneal infection model. Each of the oxapenems inhibited class A, class C and class D ß-lactamases isolated from whole cells and purified by isoelectric focusing. AM-114 and AM-115 were as effective as clavulanic acid against class A enzymes. AM-112 and AM-113 were less potent against these enzymes. Class C and class D enzymes proved very susceptible to inhibition by the oxapenems. Molecular modelling of the oxapenems in the active site of the class A. TEM-1 and class C P99 enzymes identified a number of potential sites of interaction. The modelling suggested that Ser-130 in TEM-1 and Tyr-150 in P99 were likely candidates for cross-linking of the inhibitor, leading to inhibition of the enzyme. Morphology studies indicated that sub-inhibitory concentrations of the oxapenems caused the formation of round-shaped cells in E. coli DC0, indicating inhibition of penicillin-binding protein 2 (PBP2). The PBP affinity profile of AM-112 was examined in isolated cell membranes of E. coli DC0, S. aureus NCTC 6571, Enterococcus faecalis SFZ and E. faecalis ATCC 29213, in competition with a radiolabelled penicillin. PBP2 was identified as the primary target for AM-112 in E. coli DC0. Studies on S. aureus NCTC 6571 failed to identify a binding target. AM-112 bound to all the PBPs of both E. faecalis strains, and a concentration of 10µg/ml inhibited all the PBPs except PBP3.

Desinfeção aplicada aos cones de guta-percha

Introdução: Ao longo do tempo o Tratamento Endodôntico Não Cirúrgico tem sido das áreas da Medicina Dentária que mais tem evoluído. Todos os passos do tratamento têm sido revistos de forma a aumentar a taxa de sucesso. O controlo microbiológico é crucial para que o tratamento seja um sucesso a curto, médio e longo prazo. A assepsia deve ser mantida em todas as fases deste tratamento para que este seja um sucesso. Objetivo: Ao longo do meu percurso académico pude concluir que a fase da descontaminação dos cones, aquando a obturação (fase final do Tratamento Endodôntico Não Cirúrgico) era desvalorizada, o que me levou a efetuar uma revisão bibliográfica de modo a poder melhorar os meus conhecimentos e técnica. Material e Métodos: Para a elaboração deste trabalho foi realizada uma pesquisa bibliográfica recorrendo aos seguintes motores de busca: B-on, PubMed, Scielo e ScienceDirect, com as seguintes palavras-chave: “decontamination in endodontics”;” disinfection in endodontics”; “root canal irrigants”; “endodontics microbiology”; “Candida albicans“; “Enterococcus faecalis”; “sodium hypochlorite ”; “alcohol”; “contamination during Obturation”; “clorohexidine”; “filling materials endodontics”; “termoplastic gutta-percha”; “obturation material”; “Mineral Trioxide Aggregate”; “resilon”; “resin cement”; “resin material for root canal obturation”; “resin sealer”; “root canal”; “root canal sealing”; “root canal filling materials”; “condensation in endodontics”; “lateral condensation”; “gutta-percha”; “microlekeage”; “system B”; “fluid filtration model”;“dye penetration”. Como critério de inclusão estabeleceu-se que os artigos deveriam ser em Português, Inglês ou Espanhol e publicados entre 1995 e 2015. Dos resultados apresentados foram utilizados 110 artigos, pesquisados entre Maio de 2015 e 20 de Outubro de 2015. Foram ainda consultados livros de referência nestes mesmos locais. Conclusão: a presença de bactérias e os seus subprodutos no sistema tridimensional de canais está diretamente implicado com o insucesso do Tratamento Endodôntico. A descontaminação dos cones de guta-percha, é, portanto, um processo importante no Tratamento Endodôntico pois impede que os cones sejam colocados nos canais radiculares, estando contaminados por microorganismos que inviabilizam o tratamento efetuado. A submersão dos cones durante um minuto em clorohexidina a 2% ou hipoclorito a 5,25% está indicado e comprovado como um processo eficiente de desinfeção dos cones.

Agentes etiológicos de infecções urinárias em ambulatório

As infeções do trato urinário (ITU), depois das infeções respiratórias, são as mais comuns na comunidade, sendo a Escherichia coli o principal agente etiológico. Afeta predominantemente o sexo feminino e, anualmente, estima-se que ocorram em todo o Mundo cerca de 150 milhões de episódios de ITU, sendo responsável por 15% dos antibióticos prescritos em ambulatório. Os objetivos deste estudo foram caracterizar os agentes etiológicos das ITU e determinar o seu padrão de resistência aos antimicrobianos na região litoral norte de Portugal, de modo a contribuir para o uso racional na terapêutica empírica. Foi realizado um estudo observacional, descritivo e transversal, sendo obtidos 80 967 resultados de uroculturas de um Laboratório de Análises Clínicas de prestação de serviços à comunidade, relativos ao período entre Abril de 2007 e Março de 2015. Registaram-se 13 541 bacteriúrias positivas (16,72%). Escherichia coli foi o microrganismo mais isolado (71,62%), seguida de Klebsiella pneumoniae (12,41%), Proteus mirabilis (7,84%), Enterococcus. faecalis (3,97%) e Pseudomonas aeruginosa (1,42%), tendo-se observado diferenças estatisticamente significativas entre sexos e idades. Verificou-se uma diminuição da resistência aos antimicrobianos a partir do ano de 2012. E. coli apresentou em 2015 a menor taxa de resistência respetivamente de 4,46% e 12,37% para a fosfomicina e nitrofurantoína. A combinação de amoxicilina+ácido clavulânico registou uma taxa de resistência superior a 20% (22,03%). O baixo nível de resistência à fosfomicina permite que este antibiótico se apresente como a opção terapêutica de primeira linha no tratamento empírico de ITU não complicada na mulher em ambulatório, pelo que, estes resultados permitem corroborar as indicações de 2011 da Direção Geral de Saúde sobre a substituição de fluoroquinolonas por fosfomicina.

Metabolomics as a tool to explore the staphylococcal biofilm

Orthopaedic infections can be polymicrobial existing as a microbiome. Infections often incorporate staphylococcal species, including Staphylococcus aureus. Such infections can lead to life threatening illness and implant failure. Furthermore, biofilm formation on the implant surface can occur, increasing pathogenicity, exacerbating antibiotic resistance and altering antimicrobial mechanism of action. Bacteria change dramatically during the transition to a biofilm growth state: phenotypically; transcriptionally; and metabolically, highlighting the need for research into molecular mechanisms involved in biofilm formation. Metabolomics can provide a tool to analyse metabolic changes which are directly related to the expressed phenotype. Here, we aimed to provide greater understanding of orthopaedic infection caused by S. aureus and biofilm formation on the implant surface. Through metagenome analysis by employing: implant material extraction; DNA extraction; microbial enrichment; and whole genome sequencing, we present a microbiome study of the infected prosthesis to resolve the causative species of orthopaedic hip infection. Results highlight the presence of S. aureus as a primary cause of orthopaedic infection along with Enterococcus faecium and the presence of secondary pathogen Clostridium difficile. Although results were hindered by the presence of host contaminating DNA even after microbial enrichment, conclusions could be made over the potential increased pathogenicity caused by the presence of a secondary pathogen and highlight method and sample preparation considerations when undertaking such a study. Following this finding, studies were focused on an orthopaedic clinical isolate of S. aureus and a metabolome extraction method for staphylococcal biofilms was developed using cell lysis through bead beating and solvent metabolome extraction. The method was found to be reproducible when coupled with liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) and bioinformatics, allowing for the detection of significant changes in metabolism between planktonic and biofilm cultures to be identified and drug mechanism of actions (MOA) to be studied. Metabolomics results highlight significant changes in a number of metabolic pathways including arginine biosynthesis and purine metabolism between the two cell populations, evidence of S. aureus responding to their changing environment, including oxygen availability and a decrease in pH. Focused investigations on purine metabolism looking for biofilm modulation effects were carried out. Modulation of the S. aureus biofilm phenotype was observed through the addition of exogenous metabolites. Inosine increased biofilm biomass while formycin B, an inosine analogue, showed a dispersal effect and a potential synergistic effect in biofilm dispersal when coupled with gentamycin. Changes in metabolism between planktonic cells and biofilms highlight the requirement for antimicrobial testing to be carried out against planktonic cells and biofilms. Untargeted metabolomics was used to study the MOA of triclosan in S. aureus. The triclosan target and MOA in bacteria has already been characterised, however, questions remain over its effects in bacteria. Although the use of triclosan has come under increasing speculation, its full effects are still largely unknown. Results show that triclosan can induce a cascade of detrimental events in the cell metabolism including significant changes in amino acid metabolism, affecting planktonic cells and biofilms. Results and conclusions provide greater understanding of orthopaedic infections and specifically focus on the S. aureus biofilm, confirming S. aureus as a primary cause of orthopaedic infection and using metabolomic analysis to look at the changing state of metabolism between the different growth states. Metabolomics is a valuable tool for biofilm and drug MOA studies, helping understand orthopaedic infection and implant failure, providing crucial insight into the biochemistry of bacteria for the potential for inferences to be gained, such as the MOA of antimicrobials and the identification of novel metabolic drug targets.

Aplicação de porfirinas como fotossensibilizadores para a inativação fotodinâmica de microrganismos da cavidade oral

A cavidade oral é um habitat favorável ao desenvolvimento de microrganismos, alguns dos quais podem causar doenças, sendo Enterococcus faecalis uma bactéria frequentemente encontrada em biofilmes instalados em diferentes nichos da cavidade oral. Este trabalho teve como objetivo testar a aplicabilidade da inativação fotodinâmica (PDI), usando porfirinas como fotossensibilizadores, como estratégia de controlo de biofilmes da cavidade oral, tomando E. faecalis como microrganismo modelo. Como fotossensibilizadores, foram testadas as porfirinas catiónicas Tetra-Py+-Me, Tri-Py+-Me-PF, PCat 2, PCat 3, PCat 4 e o corante azul de toluidina O (TBO), incluído como fotossensibilizador de referência. Os biofilmes de E. faecalis foram irradiados com luz branca (270 J.cm-2) a uma intensidade de 150 mW.cm-2, na presença de até 50 µM de porfirina ou até 20 µM de TBO. A cinética de inativação foi caracterizada pela variação da concentração de células viáveis ao longo da experiência. Foi também testada a inativação de células na forma livre, em condições equivalentes. Os biofilmes de E. faecalis mostraram-se muito resistentes à PDI com qualquer dos PS testados, não tendo sido conseguidos fatores de inativação superiores a 2 log com a concentração máxima de PS (50 µM) e a dose máxima de luz (270 J.cm-2). Na forma livre as células foram inativadas até ao limite de quantificação com concentrações de PS de 0,5 µM e doses de luz até 108 J.cm-2, com uma intensidade de 10 mW.cm-2. No entanto, a eficiência de ligação dos PS às células livres não foi maior do que aos biofilmes. Embora os fatores de inativação obtidos não permitam ainda considerar que a PDI com os compostos testados seja uma abordagem antimicrobiana eficiente contra biofilmes de E. faecalis, o facto de se confirmar uma relação entre as propriedades químicas e físicas do PS e a sua eficiência, bem como os resultados muito promissores obtidos com uma das famílias de porfirinas testadas apenas em células livres, justifica a prossecução do desenvolvimento de novos PS para o controle de biofilmes bacterianos na cavidade oral.

Resistencia antimicrobiana de Staphylococcus aureus en pacientes con pie diabético que asisten a la consulta externa del Hospital Nacional Dr. Jorge Arturo Mena de Santiago de María, departamento de Usulután en el período de junio a agosto de 2014

La resistencia bacteriana es uno de los problemas de Salud Pública más graves, los microorganismos que causan enfermedades infecciosas han dejado de responder a los antibióticos de uso común; en la investigación el objetivo fue determinar la resistencia antimicrobiana de Staphylococcus aureus en pacientes con pie diabético que asistieron a la Consulta Externa del Hospital Nacional Dr. Jorge Arturo Mena de Santiago de María, departamento de Usulután en el período de junio a agosto de 2014; a los antibióticos Eritromicina, Clindamicina, Ampicilina, Ciprofloxacina, Ceftriaxona, Cotrimoxazol; utilizados en el tratamiento de infecciones por bacterias grampositivas, para lo cual se observaron y analizaron 30 muestras de personas con pie diabético para obtener una población de 10 personas a quienes se les aisló la bacteria Staphylococcus aureus y se les realizó el respectivo antibiograma. Metodología fue un estudio de tipo prospectivo, transversal, descriptivo y de campo; los datos obtenidos fueron ordenados y tabulados en donde se obtuvieron las siguientes Resultados se determinó que existe resistencia antimicrobiana de Staphylococcus aureus a los antibióticos: Eritromicina 70%, Clindamicina 60%, Ampicilina 60%, Ciprofloxacina 50%, Ceftriaxona 40% y Crotrimoxazol 20%; en pacientes con pie diabético que asistieron a la Consulta Externa del Hospital Nacional Dr. Jorge Arturo Mena de Santiago de María; mediante la utilizando la técnica de Kirby-Bauer y se cumplió con la norma del CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute). La población en estudio manifestó no conocer que el no tomar el tratamiento completo puede producir resistencia bacteriana 60%, el 90% recibió tratamiento con el antibiótico Ciprofloxacina, 70% Eritromicina, 50% Clindamicina y Ampicilina; el 60% no recordaba cuantas veces había recibido tratamiento con los antibióticos mencionados, factores que contribuyen a las complicaciones de quienes padecen pie diabético y son tratados por infecciones bacterianas.También se obtuvo resistencia antimicrobiana de otras bacterias aisladas en el estudio, donde: Enterococcus sp presentó una resistencia en un 100% a los antibióticos Cotrimoxazol, Ceftriaxona y Ciprofloxacina, al igual que Pseudomonas sp que es una bacteria nosocomial, manifestó ser resistente en un 50% a los 3 antibióticos; Escherichia coli presentó un 41.7% de resistencia al antibiótico Cotrimoxazol, Ciprofloxacina 33.3% y Ceftriaxona 25%; a diferencia de Proteus sp y Staphylococcus coagulasa negativa que no presentaron resistencia. Conclusiones: Staphylococcus aureus presento mayor resistencia al antibiótico Eritromicina 70%; uno de los factores que influye puede ser que la población en estudio manifestó en un 60% no saber que el abandonar los tratamientos producen resistencias bacteriana.