Evolução temporal da resistência in vitro do Plasmodium falciparum às drogas antimaláricas em duas áreas da amazônia brasileira com distintas características sócio-econômicas e geográficas

Avaliou-se a evolução temporal da resistência in vitro do Plasmodium falciparum às drogas cloroquina, amodiaquina, quinino e mefloquina em duas áreas com distintas características sócio-econômicas e geográficas: Lourenço, no Estado do Amapá e Paragominas no Estado do Pará. A primeira caracteriza-se por ser uma área de garimpos a céu aberto e a segunda uma área de colonização, pecuária e extrativismo de madeiras. O estudo revela alta prevalência de resistência à cloroquina nas duas áreas (79,8% em Lourenço e 68,4% em Paragominas), enquanto que para amodiaquina e quinino observamos uma certa flutuação nas respostas para essas drogas, dependendo do período em que foi avaliada, fá para mefloquina, não foram obsewadas cepas resistentes, mas uma perda da sensibilidade ao longo do período estudado.

Avaliação in vitro e in vivo da atividade antimalárica dos trioxolanos NAC89, LDC67 e LC50 em estirpes sensíveis e resistentes à artemisinina e ao artesunato.

A malária mantem-se como uma das doenças mais importantes do mundo, causando a morte de mais de 1 milhão de pessoas anualmente e elevada morbilidade. Face à propagação da resistência do Plasmodium falciparum à maioria dos medicamentos antimaláricos disponíveis, a Organização Mundial de Saúde (OMS), desde 2006, recomenda a utilização de terapias combinadas com artemisinina (ACTs) como tratamento de primeira linha para a malária não complicada. Em 2008, relatórios clínicos revelaram a falha terapêutica dos ACTs na fronteira Tailândia-Camboja e uma vez que não existem alternativas para o tratamento da malária é fundamental manter linhas de investigação sobre novos e eficazes fármacos. A partir da artemisinina (ART) surgiram novos peróxidos designados trioxolanos que apresentam como farmacóforo a função 1,2,4-trioxano. A acessibilidade, a preparação relativamente económica e a estabilidade da função 1,2,4-trioxano permite a síntese de derivados com estruturas diversas, alargando a possibilidade de desenvolvimento de novos fármacos. Foram realizados testes in vitro de triagem com o MARK III (OMS micro-ensaio), com controlos positivos (artemisinina e dihidroartemisinina) e controlo negativo (sem fármaco). Foram efetuados ensaios diversos com 3 compostos, aqui denominados NAC89, LCD67 e LC50 em culturas da estirpe de P. falciparum (Dd2) para avaliação da atividade antimalárica dos compostos, bem como ensaios utilizando o modelo de malária de murino, Plasmodium chabaudi, com 4 estirpes, denominadas AS-3CQ, AS-ATN, respectivamente sensível e resistente ao artesunato (ATN) e AS-30CQ e AS-ART respectivamente sensível e resistente à (ART). Também foi avaliada a citotoxicidade dos compostos, utilizando células HepG2 de hepatoma humano pelo ensaio com método colorimétrico metil-tiazol-tetrazólico (MTT). No modelo murino compararam-se também duas vias de administração dos novos compostos, sendo uma por via subcutânea nos 3 compostos e outra por via tópica apenas para LC50. A verificação de cura foi efetuada por observação microscópica de esfregaços sanguíneos corados pelo método de Giemsa e determinação da parasitemia. Os resultados observados foram: a) baixa citotoxicidade dos três compostos; b) o composto LC50 eliminou a parasitémia nos ensaios in vitro em cultivos de P. falciparum bem como eliminou P. chabaudi nos tratamentos por via subcutânea e tópica na dose de 50 mg/kg e na dose de 10 mg/Kg na via subcutânea; c) o NAC89 mostrou boa atividade no mesmo ensaio in vivo, na dose de 10 mg/Kg e 50 mg/Kg por via subcutânea; d) fraca atividade para LCD67 na dose de 50 mg/Kg. O LC50 e o NAC89 foram muito eficazes contra parasitas resistentes ao ATN e à ART sugerindo novos mecanismos de ação. Assim, este trabalho de investigação trouxe resultados promissores na àrea de potenciais novos antimaláricos.

Efeitos toxicológicos e ineficiência in vitro de deltametrina sobre larvas de Rhipicephalus sanguineus, de Goiânia, Goiás, Brasil

Observou-se que formulações de deltametrina, desenvolvidas para desinsetizar ambientes infestados ou para combate de artrópodes parasitas de bovinos e equinos, têm sido freqüentemente utilizadas por cinofilistas para combater carrapatos em seus cães, sem critério científico em relação às dosagens e formas de aplicação, nos canis e ambientes onde vivem. Com a finalidade de avaliar a atividade deste produto sobre Rhipicephalus sanguineus, realizaram-se bioensaios com larvas a 27±1°C, UR>80% e fotofase de 12h. A mortalidade e os efeitos toxicológicos foram observados durante 30h, a cada 6h. Constataram-se efeitos toxicológicos importantes nas larvas, tais como incoordenação, Knock-down e paralisia seguida por morte, todavia a capacidade letal do produto após 30h foi baixa, com mortalidade média de 34%, 40,2%, 46% e 57,6%, respectivamente, para as dosagens de 0,5ml, 1ml, 2ml, 3ml. Não houve mortalidade no grupo controle. Os resultados obtidos contra-indicam o uso da deltametrina nas dosagens testadas como medida eletiva para controle de R. sanguineus.

In vitro study on thiabendazole action on viability of Ascaris lumbricoides (Lineu, 1758) eggs

The in vitro activity of thiabendazole on Ascaris lumbricoides eggs, which were recovered from uteri of worm excreted after chemotherapeutic treatment, was studied. Four concentrations of the drug were used: 1 -- 2.5 -- 5 -- and 10 ppm during 24, 48 and 72 hours of exposure. Subsequently, the eggs were centrifuged, washed three times and H2SO4 0.1N was added. The eggs were maintained in an incubator for 20 days at 28°C. Finally, the percentage of embryonated eggs was determined under a lightmicroscope at a 100X magnification. After 48 and 72 hours of thiabendazole exposure, at a concentration of 10ppm, the drug showed complete inhibition of egg embryonation.

The value of in vitro cell culture of granulocytes in the detection of Ehrlichia

Peripheral blood leukocytes from different animals were isolated from whole blood and maintained in Dulbeco's medium containing homologous serum without antibiotics. After 72 hrs microscopic examination of these cells showed that most animals were infected with Ehrlichia. Observation of thin blood smears from the same animals showed that only two were positive for Ehrlichia. The results of this investigation show that leukocyte culture is superior to the traditional thin blood film method in the detection of Ehrlichia and that asymptomatic carriers are easily detected. The method is inexpensive and does not require specific cell lines although it is necessary to use sterile sera.

Sensitivity of polymerase chain reaction for detection of known aliquots of Trypanosoma cruzi in the blood of mice: an in vitro study

To evaluate the sensitivity of polymerase chain reaction (PCR) to reveal known number of trypomastigote in the blood of mice, three separate experiments were done. First: To eight samples of 500mul of normal mice blood, one aliquot of 1, 2, 3, 4, 5, 10, and 50 trypomastigotes respectively, were added. Second and third: 10 aliquots with 1 and 10 with 2 trypomastigotes were added to samples of 500mul of normal mice blood. Positive control: 500mul of blood containing 100,000 trypomastigotes. For kDNA minicircles amplification by PCR the primers:S35 and S36 were used. PCR revealed products of 330 b.p in the positive controls. When only one sample with the aliquots of 1 or 2 trypomastigotes was examined, results were negative; results were positive with aliquots of 3 to 50 trypomastigotes. In the 2nd and 3rd experiments, 9/10 aliquots with one parasite and 9/10 with 2 trypomastigotes were positive revealing a high sensitivity of this reaction. In conclusion, the presence of one single parasite in 500mul of blood, is enough for a positive PCR. This method could be used as a complement to the various parasitological cure tests in treated mice, when low volumes of blood are individually examined.

Genetic diversity and differentiation in natural Plasmodium falciparum populations inferred by molecular typing of the merozoite surface proteins 1 and 2

Genetic diversity and differentiation, inferred by typing the polymorphic genes coding for the merozoite surface proteins 1 (Msp-1) and 2 (Msp-2), were compared for 345 isolates belonging to seven Plasmodium falciparum populations from three continents. Both loci yielded similar estimates of genetic diversity for each population, but rather different patterns of between-population differentiation, suggesting that natural selection on these loci, rather than the transmission dynamics of P. falciparum, determines the variation in allele frequencies among populations.

In vitro evaluation of verapamil and other modulating agents in Brazilian chloroquine-resistant Plasmodium falciparum isolates

Verapamil, was assayed to record its modulating effect upon Brazilian Plasmodium falciparum isolates resistant to chloroquine. Other cardiovascular drugs known to be modulating agents in resistant malaria and/or multidrug-resistant neoplasias, including nifedipine, nitrendipine, diltiazem and propranolol, were also evaluated. Concentrations similar to those for cardiovascular therapy were used in the in vitro microtechnique for antimalarial drug susceptibility. Intrinsic antiplasmodial activity was observed from the lowest concentrations without a significant modulating action. Other reported modulating agents, such as the antipsychotic drug trifluoperazine and the antidepressants desipramine and imipramine, demonstrated similar responses under the same experimental conditions. Results suggest a much higher susceptibility of Brazilian strains, as well as an indifferent behaviour in relation to modulating agents.

The Role of the Endoplasmic Reticulum Stress Transducer Ire1 during Photoreceptor Differentiation in Drosophila

Dissertation presented to obtain the Ph.D degree in Biology.

In vitro maintenance of Angiostrongylus costaricensis does not provide physiological conditions for egg laying

Fifteen pairs (male/female) of Angiostrongylus costaricensis were kept in vitro in Waymouth medium for three days to evaluate the amount and duration of egg laying. At 24, 48 and 72 hours, the mean egg counts were 321, 24 and 4 eggs/10 microliters, respectively. Most of the eggs were eliminated within the first 24 hours, suggesting they are expelled under non-physiological conditions. These results indicate that in vitro conditions are not appropriate for drug trials of egg-laying inhibitors for treatment of abdominal angiostrongylosis.

Suscetibilidade in vitro de isolados de Sporothrix schenckii frente à terbinafina e itraconazol

O estudo objetiva determinar a atividade in vitro da terbinafina e itraconazol através da técnica de microdiluição em caldo (NCCLSM27-A2) adaptado para um fungo dimórfico frente a 12 isolados de Sporothrix schenckii, sendo seis de esporotricose felina, três de esporotricose humana, um isolado de cão e dois isolados humanos provenientes do Instituto Oswaldo Cruz (IOC). O inóculo e as concentrações antifúngicas foram distribuídas em microplacas, as quais foram incubadas a 35°C por cinco dias, quando foi realizada a leitura da concentração inibitória mínima. A concentração inibitória mínima para a terbinafina variou de 0,055µg/ml a 0,109µg/ml e para o itraconazol de 0,219µg/ml a 1,75µg/ml, sendo que para ambos os fármacos as CIMs entre os isolados do IOC foi de 0,875µg/ml. O estudo demonstrou uma alta suscetibilidade do Sporothrix schenckii frente à terbinafina, necessitando mais estudos que correlacionem os testes in vitro frente ao fármaco com a resposta clínica em pacientes com esporotricose.