银鲫ZP3的表达特征和卵壳ZP3蛋白的分离

克隆得到银鲫(Carassius auratus gibelio)ZP3基因全长cDNA,在体外表达出银鲫的ZP3融合蛋白,并制备出多抗血清;通过免疫印迹和RT-PCR分析,研究了银鲫ZP3在卵子发生过程中的表达特征和在早期发育胚胎中的状态变化。研究结果表明,银鲫ZP3的转录发生在卵黄发生以前,而ZP3蛋白的翻译起始于卵黄形成阶段,且随着卵母细胞进一步成熟,其含量不断增加。ZP3蛋白的存在状态在受精后和早期胚胎发育过程中发生了明显变化。在受精后5—30min期间,抽提液中原始的ZP3蛋白带迅速消失,取而代

雌核发育银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎差异表达基因的呈现

构建了雌核发育银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎间的抑制性差减杂交cDNA质粒文库。对原肠期739个 和尾芽期816个PCR阳性克隆进行斑点杂交,得到72个原肠期和98个尾芽期斑点杂交阳性克隆。测序和基因 数据库比对结果表明:72个原肠期斑点杂交阳性克隆中,包括19个已知基因的cDNA片段和31个没有同源性的 cDNA片段;98个尾芽期斑点杂交阳性克隆中,包括52个已知基因的cDNA片段和37个没有同源性的cDNA片 段。采用虚拟Northern杂交和RT PCR证实了部分基因在银鲫胚胎发育过程中的差异表达。这些

鲫鱼蛋白激酶PKR-like的Zα结构域与聚肌胞苷酸的结合

根据鲫鱼类PKR蛋白激酶基因(CaPKR-like)的全长cDNA序列,克隆CaPKR-likeZα结构域cDNA(Zα1、Zα2和Zα1Zα2),原核表达成功获得3种融合蛋白PZα1、PZα2和PZα1Zα2。凝胶阻滞实验结果显示:PZα1、PZα2、PZα1和PZα2混合表达蛋白不能与聚肌胞苷酸(PolyI∶C)结合,而表达完整的Zα结构域的PZα1Zα2与PolyI∶C有明显的结合现象。另外,3种表达多肽PZα1、PZα2和PZα1Zα2在体外分别都能聚合形成二聚体。与PZα1相比,PZα2和PZα

黄鳝DEAD-box家族PL10基因的克隆与序列分析

通过PCR克隆的方法,从黄鳝(Monopterus albus)中得到两个PL10 基因的cDNA片段Mo PL10A和Mo PL10B,长度均为1.127 kb,推测其编码375个氨基酸的蛋白片段.结合其他PL10类同源物序列,对这两条cDNA进行了分析和初步的功能推测.根据此片段的氨基酸序列构建的系统发育树与形态分类结果一致.在不同组织中的RT PCR结果表明Mo PL10A和Mo PL10B的mRNA在各组织中的分布有差异.

鲤鱼两个cGnRH-Ⅱ基因的发现及其在成熟个体的表达分析

促性腺激素释放激素(GnRH)是一个保守的神经十肽家族,在调节脊椎动物的性腺发育和控制性成熟中起至关重要的作用.用RACE和RT-PCR方法,从鲤鱼脑组织克隆得到两个差异的cGnRH-Ⅱ cDNAs序列,其长度分别为622,578 bp.两个cDNA编码的cGnRH-Ⅱ前体均为86个氨基酸,包括一个信号肽、cGnRH-Ⅱ十肽和一个由蛋白水解位点(Gly-Lys-Arg)连接的GnRH相关肽.内含子捕获和Southern杂交证实鲤鱼基因组中有两个cGnRH-Ⅱ编码基因,且两个基因都可能以单拷贝形式存在.鲤鱼

草鱼补体C3基因的克隆及在感染大中华鳋草鱼个体的表达分析

利用抑制差减杂交技术 ,构建了草鱼与大中华鳋感染相关的差减文库 ,测序得到一些免疫相关基因 ,其中包含与鲤补体C3高度同源的片段 .根据此片段设计引物 ,采用RACE(rapidamplificationofcDNAends)技术 ,克隆了草鱼补体C3的cDNA ,其全长5 171bp ,编码 16 77个氨基酸 .与已报道的补体C3一样 ,草鱼补体C3同样具有在功能上比较重要的残基以及保守的硫酯区 .草鱼补体C3与高等脊椎动物鸡、小鼠以及人的C3在氨基酸序列上有着相近的相同率 (37.9%～39.1%

斜带石斑鱼生长激素/催乳素家族基因cDNAs的分子克隆及其进化意义

从斜带石斑鱼垂体提取总RNA ,再取其 5 0ng合成SMARTcDNA。从所构建的垂体SMARTcDNA质粒文库中筛选到生长激素 /催乳素基因家族的 2个成员的全长cDNA片段 :生长激素 (GH )基因全长为 938bp ,编码 2 0 4个氨基酸 ;催乳素基因 (PRL)全长为 14 2 9bp ,编码 2 12个氨基酸。采用计算机软件Mega 2和CLUSTALW1 6 4b对 9种鱼的生长激素 /催乳素基因家族的 3个成员 (GH、PRL和生长催乳素SL)的氨基酸序列进行系统分析 ,构建NJ分支

草鱼生长激素在毕赤酵母中的高效分泌表达

为大量获得具有生物学活性的草鱼生长激素 ,对草鱼生长激素cDNA在毕赤酵母中的表达进行了研究。将草鱼生长激素cDNA克隆入毕赤酵母表达载体pGAPZ α B ,构建表达载体pGAPZ α B GH。在三磷酸甘油醛脱氢酶 (GAP)启动子的调控作用下 ,一个类似于天然生长激素大小、分子量约 2 2kD的蛋白获得表达 ,其表达量约 5 0mg L。Western杂交表明 :表达的蛋白与兔抗草鱼生长激素的多克隆抗体特异结合 ,证实该表达蛋白为草鱼生长激素 ;受体夹心式ELISA检测表明 :表达的草鱼生长激素具生

从灭活病毒诱导的培养细胞中鉴定鱼类抗病毒相关基因

紫外线灭活的草鱼出血病病毒(GCHV)能诱导鲫鱼囊胚培养细胞(CAB)产生高滴度的干扰素并抵抗病毒入侵,其机制可能是通过诱导一组抗病毒相关基因的表达,而使寄主细胞建立起抗病毒状态.利用抑制性差减杂交技术,构建了灭活病毒诱导鱼类培养细胞基因差异表达的差减cDNA文库.从差减文库中筛选鉴定出272个差异cDNA片段,测序分析发现它们为69个基因,其中46个为已知基因的同源物,23个为未知的假定基因.已知基因包括I型干扰素信号通路的基因Statl和JakI,抗病毒基因Mx和Viperin,以及一系列干扰素激活基

鳜免疫球蛋白轻链基因在大肠杆菌中的表达

通过RT-PCR技术从鳜(Siniperca chuatsi)头肾总RNA中获得了免疫球蛋白轻链cDNA,克隆到pGEM-T载体上并测序,测序的2个克隆其可变区cDNA序列相同率为97.3％,属于鳜的同一个轻链可变区基因家族,其变异主要存在于互补性决定区,根据鳜与其他辐鳍鱼类轻链氨基酸序列的多重对准,鳜同鲑(Salmo salar)的可变区的相似性最高(65.7％),而在恒定区,鳜同花狼鳚(Anarhichas minor)的相似性最高(96.3％),都存在特有的连续的丝氨酸残基;鳜同虹鳟(On-corh

鱼类生长激素基因工程研究

生长激素是鱼体生长发育最重要的内分泌激素.20世纪30年代以来,在对生长激素生物化学功能研究的基础上,对鱼类生长激素的生理功能和作用机制进行了系统深入的探讨,为鱼类生长激素基因工程研究奠定了基础.随着分子生物学技术的发展,40多种鱼类的生长激素基因及其cDNA被克隆,鱼类生长激素基因工程研究取得了一系列重要进展:应用DNA重组和基因转移技术,获得了多种转生长激素基因鱼,由于重组生长激素基因的“内源性”表达,转基因鱼获得生长快、饵料转化效率高等优良生产性状,显示了生长激素基因在鱼类基因工程育种中的广阔应用前

草鱼出血病病毒873株基因组外发现缺损性干扰颗粒的亚基因组成份

草鱼出血病病毒基因组由 11条dsRNA片段组成。最近在研究其基因组时发现 ,在病毒基因组外存在许多核酸成份 ,但在核苷酸数量上少于基因组成份 ,表现为较小分子量的RNA片段。在完整地克隆了这些片段的全长cDNA后 ,测定了其中两个克隆的序列组成 ,发现它们为病毒基因组经剪切后的部分片段 ,已经重新装配 ,而且都含有原基因组某一片段 3′端和 5′端的保守区和倒转重复区 ,缺失中间部分。根据其特点来看 ,它们应为目前病毒学研究的重要材料———缺损性干扰颗粒的亚基因组成份。

四倍体鱼的种质改良研究

β—actin基因启动子驱动的草鱼生长激素基因cDNA—“全鱼”基因 pCAgcGHc用显微注射方法导入四倍体鱼卵 ,获得了生长快 ,个体硕壮的转基因四倍体鱼。 2 4 0日龄时 ,转基因鱼平均体重为 30 2 7g ,是对照鱼的 3 1倍 ,平均体长是对照的 1 34倍 ,并可从部分转基因雄鱼挤出精液 ,而对照鱼尚无此现象。对 19尾转基因四倍体雄鱼的精液和尾鳍DNA做PCR检测 ,外源基因的阳性率分别为 94 7%和 52 6%。最后 ,展望了转基因四倍体鱼在转基因鱼产业化方面的应用前景

天然雌核发育银鲫与两性生殖彩鲫卵母细胞中蛋白激酶基因表达差异的比较

采用mRNA差异显示方法 ,以蛋白激酶基因家族保守区设计 5′引物 ,比较天然雌核发育银鲫和两性生殖彩鲫卵母细胞中蛋白激酶基因的表达 .结果表明 ,以引物T12 MA ,T12 MC和T12 MG合成的cDNA第 1链分别再经蛋白激酶特异引物扩增所得到的PCR条带数目和分布模式各不相同 .从胶上总共回收并克隆了 2 1个cDNA片段 ,对其中 3个做了Northern杂交验证 ,有 2个在彩鲫卵母细胞中特异表达 ,另 1个在银鲫中特异表达 .

用逆转录聚合酶链式反应检测草鱼出血病病毒的研究

于1994年5月-1995年7月，根据已克隆的草鱼出血病病毒GCHV-861株cDNA的部分序列，设计合成了两对PCR引物，采用RT-PCR技术对GCHV-861及GCHV-873两病毒株的dsRNA进行扩增。结果表明，两对引物仅能特异地检测出GCHV-861病毒株核酸的存在，而不能对GCHV-873病毒株的核酸进行特异扩增，该方法最小可检测出0.1Pg纯化的GCHV-861病毒dsRNA;采用该方法对GCHV-861人工感染的草鱼和稀有鲫组织进行RT-PCR检测，不仅能检测到发病期显症病鱼中GCHV-8