Measurement of epidermal thickness in a patient with psoriasis by computer-supported image analysis

The aim of the present study was to measure full epidermal thickness, stratum corneum thickness, rete length, dermal papilla widening and suprapapillary epidermal thickness in psoriasis patients using a light microscope and computer-supported image analysis. The data obtained were analyzed in terms of patient age, type of psoriasis, total body surface area involvement, scalp and nail involvement, duration of psoriasis, and family history of the disease. The study was conducted on 64 patients and 57 controls whose skin biopsies were examined by light microscopy. The acquired microscopic images were transferred to a computer and measurements were made using image analysis. The skin biopsies, taken from different body areas, were examined for different parameters such as epidermal, corneal and suprapapillary epidermal thickness. The most prominent increase in thickness was detected in the palmar region. Corneal thickness was more pronounced in patients with scalp involvement than in patients without scalp involvement (t = -2.651, P = 0.008). The most prominent increase in rete length was observed in the knees (median: 491 µm, t = 10.117, P = 0.000). The difference in rete length between patients with a positive and a negative family history was significant (t = -3.334, P = 0.03), being 27% greater in psoriasis patients without a family history. The differences in dermal papilla distances among patients were very small. We conclude that microscope-supported thickness measurements provide objective results.

Hepatitis C virus infection, cryoglobulinemia, and peripheral neuropathy: a case report

Hepatitis C virus (HCV) is essentially hepatotropic but its manifestations can extend beyond the liver. It can be associated with autoimmune diseases, such as mixed cryoglobulinemia, membranoproliferative glomerulonephritis, autoimmune thyroiditis, and lymphoproliferative disorders. The mechanisms that trigger these manifestations are not completely understood. We describe a 48-year-old man with chronic HCV infection (circulating HCV RNA and moderate hepatitis as indicated by liver biopsy), cryoglobulinemia, and sensory and motor peripheral neuropathy. The diagnosis of multineuropathy was confirmed by clinical examination and electromyographic tests. A nerve biopsy revealed an inflammatory infiltrate in the perineurial space and signs of demyelination and axonal degeneration. The patient had no improvement of neurological symptoms with the use of analgesics and neuro-modulators. He was then treated with interferon-alpha (3 million units subcutaneously, 3 times per week) and ribavirin (500 mg orally, twice a day) for 48 weeks. Six months after the end of therapy, the patient had sustained viral response (negative HCV RNA) and remission of neurological symptoms, but cryoglobulins remained positive. A review of the literature on the pathogenesis and treatment of neurological manifestations associated with HCV infection is presented. This report underscores the need for a thorough evaluation of HCV-infected patients because of the possibility of extrahepatic manifestations. Antiviral treatment with interferon and ribavirin can be effective and should be considered in patients with neurological complications associated with HCV infection.

Immunopathology of the duodenal mucosa of HIV-positive patients during combined antiretroviral therapy

The objective of the present study was to evaluate the duodenal mucosa of HIV-infected patients during antiretroviral therapy. This was an observational study conducted on HIV-positive patients and a control group. Group 1 comprised 22 HIV-negative individuals while 38 HIV-positive individuals were classified according to the CDC 1993 classification into group 2 (A1 or A2) or group 3 (B2, A3, B3, C2, C3). All subjects were submitted to upper gastrointestinal endoscopy with duodenal biopsies. Qualitative, semi-quantitative and quantitative histological analyses were performed. Results were considered significant when P < 0.05. A higher prevalence of inflammatory infiltrate and eosinophilia was observed in the HIV group, together with a reduction in mucosal CD4+ lymphocyte (L) counts [median (lower-upper quartiles), 12.82 (8.30-20.33), 6.36 (1.75-11.66) and 1.75 (0.87-3.14) in groups 1, 2 and 3, respectively] which was not correlated with disease stage. The extent of CD4+L count reduction was similar in blood and duodenal mucosa. Normal CD8+L and CD45RO+L counts, and normal numbers of macrophages and antigen-presenting cells were also found in the HIV patients. The cytokine pattern did not differ among groups. Tissue HIV, assessed by p24 antigen, correlated with a higher CD45RO+L count (77.0 (61-79.8) and 43.6 (31.7-62.8) in p24+ and p24-, respectively, P = 0.003), and IL-4 positivity (100 and 48.2% in p24+ and p24-, respectively, P = 0.005). The duodenal mucosa of HIV+ patients showed a relatively preserved histological architecture. This finding may be characteristic of a population without opportunistic infections and treated with potent antiretroviral therapy, with a better preservation of the immune status.

The role of IFN-gamma and IL-4 in gastric mucosa inflammation associated with Helicobacter heilmannii type 1 infection

Although Helicobacter heilmannii infection is less common than H. pylori infection in humans, it is considered to be of medical importance because of its association with gastritis, gastric ulcer, carcinoma, and mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma of the stomach. However, there have been no studies evaluating the role of the Th cell response in H. heilmannii gastric infection. We evaluated the participation of pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines, IFN-gamma and IL-4, in H. heilmannii gastric infection in genetically IFN-gamma- or IL-4-deficient mice. The serum IFN-gamma and IL-4 concentrations were determined by ELISA. The gastric polymorphonuclear infiltrate was higher (P = 0.007) in H. heilmannii-positive than in H. heilmannii-negative wild-type (WT) C57BL/6 mice, whereas no significant inflammation was demonstrable in the stomach of H. heilmannii-positive IFN-gamma-/- C57BL/6 mice. The degree of gastric inflammatory cells, especially in oxyntic mucosa, was also higher (P = 0.007) in infected IL-4-/- than in WT BALB/c mice. Serum IFN-gamma levels were significantly higher in IL-4-/- than in WT BALB/c mice, independently of H. heilmannii-positive or -negative status. Although no difference in serum IFN-gamma levels was seen between H. heilmannii-positive (11.3 ± 3.07 pg/mL, mean ± SD) and -negative (11.07 ± 3.5 pg/mL) WT BALB/c mice, in the group of IL-4-/- animals, the serum concentration of IFN-g was significantly higher in the infected ones (38.16 ± 10.5 pg/mL, P = 0.04). In contrast, serum IL-4 levels were significantly decreased in H. heilmannii-positive (N = 10) WT BALB/c animals compared to the negative (N = 10) animals. In conclusion, H. heilmannii infection induces a predominantly Th1 immune response, with IFN-gamma playing a central role in gastric inflammation.

Computerized invasive measurement of time-dependent intraocular pressure

Several methods have been described to measure intraocular pressure (IOP) in clinical and research situations. However, the measurement of time varying IOP with high accuracy, mainly in situations that alter corneal properties, has not been reported until now. The present report describes a computerized system capable of recording the transitory variability of IOP, which is sufficiently sensitive to reliably measure ocular pulse peak-to-peak values. We also describe its characteristics and discuss its applicability to research and clinical studies. The device consists of a pressure transducer, a signal conditioning unit and an analog-to-digital converter coupled to a video acquisition board. A modified Cairns trabeculectomy was performed in 9 Oryctolagus cuniculus rabbits to obtain changes in IOP decay parameters and to evaluate the utility and sensitivity of the recording system. The device was effective for the study of kinetic parameters of IOP, such as decay pattern and ocular pulse waves due to cardiac and respiratory cycle rhythm. In addition, there was a significant increase of IOP versus time curve derivative when pre- and post-trabeculectomy recordings were compared. The present procedure excludes corneal thickness and error related to individual operator ability. Clinical complications due to saline infusion and pressure overload were not observed during biomicroscopic evaluation. Among the disadvantages of the procedure are the requirement of anesthesia and the use in acute recordings rather than chronic protocols. Finally, the method described may provide a reliable alternative for the study of ocular pressure dynamic alterations in man and may facilitate the investigation of the pathogenesis of glaucoma.

Contribution of CD4+ T cells to the early mechanisms of ischemia- reperfusion injury in a mouse model of acute renal failure

Renal ischemia-reperfusion (IR) injury is the major cause of acute renal failure in native and transplanted kidneys. Mononuclear leukocytes have been reported in renal tissue as part of the innate and adaptive responses triggered by IR. We investigated the participation of CD4+ T lymphocytes in the pathogenesis of renal IR injury. Male mice (C57BL/6, 8 to 12 weeks old) were submitted to 45 min of ischemia by renal pedicle clamping followed by reperfusion. We evaluated the role of CD4+ T cells using a monoclonal depleting antibody against CD4 (GK1.5, 50 µ, ip), and class II-major histocompatibility complex molecule knockout mice. Both CD4-depleted groups showed a marked improvement in renal function compared to the ischemic group, despite the fact that GK1.5 mAb treatment promoted a profound CD4 depletion (to less than 5% compared to normal controls) only within the first 24 h after IR. CD4-depleted groups presented a significant improvement in 5-day survival (84 vs 80 vs 39%; antibody treated, knockout mice and non-depleted groups, respectively) and also a significant reduction in the tubular necrosis area with an early tubular regeneration pattern. The peak of CD4-positive cell infiltration occurred on day 2, coinciding with the high expression of ßC mRNA and increased urea levels. CD4 depletion did not alter the CD11b infiltrate or the IFN-g and granzyme-B mRNA expression in renal tissue. These data indicate that a CD4+ subset of T lymphocytes may be implicated as key mediators of very early inflammatory responses after renal IR injury and that targeting CD4+ T lymphocytes may yield novel therapies.

Cardiac and pulmonary alterations in symptomatic and asymptomatic dogs infectednaturally with Leishmania (Leishmania) chagasi

Fifteen symptomatic and seven asymptomatic dogs infected naturally with Leishmania chagasi were examined in order to identify the presence of parasites and changes in heart and lung. Histopathological, cytological, and immunohistochemical analyses were performed on samples of heart and lung tissues. An inflammatory reaction characterized by inflammatory mononuclear, perivascular and intermuscular infiltrates was observed in both symptomatic and asymptomatic animals on histopathological analysis of the heart. In the lung, there was thickening of the alveolar septa due to congestion, edema, inflammatory infiltrate, and fibroblast proliferation. A focal reaction was observed although a diffuse reaction was present in both groups. On cytological examination, heart and lung imprints revealed amastigotes in two symptomatic animals and heart imprints were found in 1 asymptomatic dog. Immunoperoxidase staining showed amastigotes in the lung and heart of only 1 of 6 symptomatic animals examined. Within the ethical principles and limits of this research, it can be inferred that the study of heart and lung alterations in canine visceral leishmaniasis is increasingly important for understanding the problem related to humans. Dogs with visceral leishmaniasis were a good experimental model, since infection was caused by the same agent and the animals developed clinical, pathological and immunological alterations similar to those observed in humans.

The inflammatory stimulus of a natural latex biomembrane improves healing in mice

The aim of the present study was to compare healing obtained with biomembranes with the natural healing process (sham) using biochemical and immunohistological assays. C57BL/6 mice were divided into 4 groups of 15 mice each and received different subcutaneous implants: natural latex biomembrane (NLB), denatured latex (DL), expanded polytetrafluorethylene (ePTFE), or sham. On the 2nd, 7th, and 14th days post-treatment, 5 mice per group were sacrificed and biopsied for the following measurements: oxidative stress based on malondialdehyde (MDA), myeloperoxidase (MPO) and hydrogen peroxide by the method of ferrous oxidation-xylenol orange (FOX), as well as glutathione and total proteins; histological evaluation to enumerate inflammatory cells, fibroblasts, blood vessels, and collagen, and immunohistochemical staining for inducible nitric oxide synthase, interleukin-1β, vascular endothelial growth factor (VEGF), and transforming growth factor-β1 (TGF-β1). On day 2 post-treatment, NLB stimulated a dense inflammatory infiltrate mainly consisting of polymorphonuclear cells, as indicated by increased MPO (P < 0.05), but oxidative stress due to MDA was not observed until the 7th day (P < 0.05). The number of blood vessels was greater in NLB (P < 0.05) and DL (P < 0.05) mice compared to sham animals on day 14. NLB induced fibroplasia by day 14 (P < 0.05) with low expression of TGF-β1 and collagenesis. Thus, NLB significantly induced the inflammatory phase of healing mediated by oxidative stress, which appeared to influence the subsequent phases such as angiogenesis (with low expression of VEGF) and fibroplasia (independent of TGF-β1) without influencing collagenesis.

Prolonged acceptance of skin grafts induced by B cells places regulatory T cells on the histopathology scene

The participation of regulatory T (Treg) cells in B cell-induced T cell tolerance has been claimed in different models. In skin grafts, naive B cells were shown to induce graft tolerance. However, neither the contribution of Treg cells to B cell-induced skin tolerance nor their contribution to the histopathological diagnosis of graft acceptance has been addressed. Here, using male C57BL/6 naive B cells to tolerize female animals, we show that skin graft tolerance is dependent on CD25+ Treg cell activity and independent of B cell-derived IL-10. In fact, B cells from IL-10-deficient mice were able to induce skin graft tolerance while Treg depletion of the host inhibited 100% graft survival. We questioned how Treg cell-mediated tolerance would impact on histopathology. B cell-tolerized skin grafts showed pathological scores as high as a rejected skin from naive, non-tolerized mice due to loss of skin appendages, reduced keratinization and mononuclear cell infiltrate. However, in tolerized mice, 40% of graft infiltrating CD4+ cells were FoxP3+ Treg cells with a high Treg:Teff (effector T cell) ratio (6:1) as compared to non-tolerized mice where Tregs comprise less than 8% of total infiltrating CD4 cells with a Treg:Teff ratio below 1:1. These results render Treg cells an obligatory target for histopathological studies on tissue rejection that may help to diagnose and predict the outcome of a transplanted organ.

Analysis of Automotive Cybersecurity - Attack surfaces and users’ privacy concerns

Modern automobiles are no longer just mechanical tools. The electronics and computing services they are shipping with are making them not less than a computer. They are massive kinetic devices with sophisticated computing power. Most of the modern vehicles are made with the added connectivity in mind which may be vulnerable to outside attack. Researchers have shown that it is possible to infiltrate into a vehicle’s internal system remotely and control the physical entities such as steering and brakes. It is quite possible to experience such attacks on a moving vehicle and unable to use the controls. These massive connected computers can be life threatening as they are related to everyday lifestyle. First part of this research studied the attack surfaces in the automotive cybersecurity domain. It also illustrated the attack methods and capabilities of the damages. Online survey has been deployed as data collection tool to learn about the consumers’ usage of such vulnerable automotive services. The second part of the research portrayed the consumers’ privacy in automotive world. It has been found that almost hundred percent of modern vehicles has the capabilities to send vehicle diagnostic data as well as user generated data to their manufacturers, and almost thirty five percent automotive companies are collecting them already. Internet privacy has been studies before in many related domain but no privacy scale were matched for automotive consumers. It created the research gap and motivation for this thesis. A study has been performed to use well established consumers privacy scale – IUIPC to match with the automotive consumers’ privacy situation. Hypotheses were developed based on the IUIPC model for internet consumers’ privacy and they were studied by the finding from the data collection methods. Based on the key findings of the research, all the hypotheses were accepted and hence it is found that automotive consumers’ privacy did follow the IUIPC model under certain conditions. It is also found that a majority of automotive consumers use the services and devices that are vulnerable and prone to cyber-attacks. It is also established that there is a market for automotive cybersecurity services and consumers are willing to pay certain fees to avail that.

Étude comparative de l'anatomie des plaies de greffe de cornée par tomographie de cohérence optique (OCT)

Cette thèse porte sur l’étude de l’anatomie de la cornée après 3 techniques de greffe soient, la greffe totale traditionnelle (GTT) et des techniques de greffe lamellaire postérieur (GLP) telles que la greffe lamellaire endothéliale profonde (DLEK) et la greffe endothélium/membrane de Descemet (EDMG) pour le traitement des maladies de l’endothélium, telles que la dystrophie de Fuchs et de la kératopathie de l’aphaque et du pseudophaque. Dans ce contexte, cette thèse contribue également à démontrer l’utilité de la tomographie de cohérence optique (OCT) pour l’étude de l’anatomie des plaies chirurgicales la cornée post transplantation. Au cours de ce travail nous avons étudié l'anatomie de la DLEK, avant et 1, 6, 12 et 24 mois après la chirurgie. Nous avons utilisé le Stratus OCT (Version 3, Carl Zeiss, Meditec Inc.) pour documenter l’anatomie de la plaie. L'acquisition et la manipulation des images du Stratus OCT, instrument qui à été conçu originalement pour l’étude de la rétine et du nerf optique, ont été adaptées pour l'analyse du segment antérieur de l’oeil. Des images cornéennes centrales verticales et horizontales, ainsi que 4 mesures radiaires perpendiculaires à la plaie à 12, 3, 6 et 9 heures ont été obtenues. Les paramètres suivants ont été étudiés: (1) Les espaces (gap) entre les rebords du disque donneur et ceux du receveur, (2) les dénivelés de surface postérieure (step) entre le les rebords du disque donneur et ceux du receveur, (3) la compression tissulaire, (4) le décollement du greffon, 6) les élévations de la surface antérieure de la cornée et 7) la pachymétrie centrale de la cornée. Les mesures d’épaisseur totale de la cornée ont été comparées et corrélées avec celles obtenues avec un pachymètre à ultra-sons. Des mesures d’acuité visuelle, de réfraction manifeste et de topographie ont aussi été acquises afin d’évaluer les résultats fonctionnels. Enfin, nous avons comparé les données de DLEK à celles obtenues de l’EDMG et de la GTT, afin de caractériser les plaies et de cerner les avantages et inconvénients relatifs à chaque technique chirurgicale. Nos résultats anatomiques ont montré des différences importantes entre les trois techniques chirurgicales. Certains des paramètres étudiés, comme le sep et le gap, ont été plus prononcés dans la GTT que dans la DLEK et complètement absents dans l’EDMG. D’autres, comme la compression tissulaire et le décollement du greffon n’ont été observés que dans la DLEK. Ceci laisse entrevoir que la distorsion de la plaie varie proportionnellement à la profondeur de la découpe stromale du receveur, à partir de la face postérieure de la cornée. Moins la découpe s’avance vers la face antérieure (comme dans l’EDMG), moins elle affecte l’intégrité anatomique de la cornée, le pire cas étant la découpe totale comme dans la GTT. Cependant, tous les paramètres d’apposition postérieure sous-optimale et d’élévation de la surface antérieure (ce dernier observé uniquement dans la GTT) finissent par diminuer avec le temps, évoluant à des degrés variables vers un profil topographique plus semblable à celui d’une cornée normale. Ce processus paraît plus long et plus incomplet dans les cas de GTT à cause du type de plaie, de la présence de sutures et de la durée de la cicatrisation. Les valeurs moyennes d’épaisseur centrale se sont normalisées après la chirurgie. De plus, ces valeurs moyennes obtenues par OCT étaient fortement corrélées à celles obtenues par la pachymétrie à ultra-sons et nous n’avons remarqué aucune différence significative entre les valeurs moyennes des deux techniques de mesure. L’OCT s’est avéré un outil utile pour l’étude de l’anatomie microscopique des plaies chirurgicales. Les résultats d’acuité visuelle, de réfraction et de topographie des techniques de GLP ont montré qu’il existe une récupération visuelle rapide et sans changements significatifs de l’astigmatisme, contrairement à la GTT avec et sans suture. La GLP a permis une meilleure conservation de la morphologie de la cornée, et par conséquence des meilleurs résultats fonctionnels que la greffe de pleine épaisseur. Ceci nous permet d’avancer que la GLP pourrait être la technique chirurgicale à adopter comme traitement pour les maladies de l’endothélium cornéen.

Immuno-oncology of human prostate cancer : phenotypical characterization and study of the tumor-derived, androgen-regulated immunosuppressive microenvironment

Le cancer de la prostate est le cancer le plus fréquemment diagnostiqué chez les hommes canadiens et la troisième cause de décès relié au cancer. Lorsque diagnostiqué à un stade précoce de la maladie, le cancer de la prostate est traité de manière curative par chirurgie et radiothérapie. Par contre, les thérapies actuelles ne peuvent éradiquer la maladie lorsqu’elle progresse à des stades avancés. Ces thérapies, comme la chimiothérapie et l’hormonothérapie, demeurent donc palliatives. Il est primordial d’optimiser de nouvelles thérapies visant l’élimination des cellules cancéreuses chez les patients atteints des stades avancés de la maladie. Une de ces nouvelles options thérapeutiques est l’immunothérapie. L’immunothérapie du cancer a fait des progrès considérables durant les dernières années. Cependant, les avancements encourageants obtenus lors d’essais précliniques ne se sont pas encore traduits en des résultats cliniques significatifs. En ce qui concerne le cancer de la prostate, les résultats négligeables suivants des interventions immunothérapeutiques peuvent être causés par le fait que la plupart des études sur le microenvironnement immunologique furent effectuées chez des modèles animaux. De plus la majorité des études sur l’immunologie tumorale humaine furent effectuées chez des patients atteints d’autres cancers, tels que le mélanome, et non chez les patients atteints du cancer de la prostate. Donc, le but central de cette thèse de doctorat est d’étudier le microenvironnement immunologique chez les patients atteints du cancer de la prostate afin de mieux définir les impacts de la tumeur sur le développement de la réponse immunitaire antitumorale. Pour réaliser ce projet, nous avons établi deux principaux objectifs de travail : (i) la caractérisation précise des populations des cellules immunitaires infiltrant la tumeur primaire et les ganglions métastatiques chez les patients atteints du cancer de la prostate; (ii) l’identification et l’étude des mécanismes immunosuppressifs exprimés par les cellules cancéreuses de la prostate. Les résultats présentés dans cette thèse démontrent que la progression du cancer de la prostate est associée au développement d’un microenvironnement immunosuppressif qui, en partie, est régulé par la présence des androgènes. L’étude initiale avait comme but la caractérisation du microenvironnement immunologique des ganglions drainant la tumeur chez des patients du cancer de la prostate. Les résultats présentés dans le chapitre III nous a permis de démontrer que les ganglions métastatiques comportent des signes cellulaires et histopathologiques associés à une faible réactivité immunologique. Cette immunosuppression ganglionnaire semble dépendre de la présence des cellules métastatiques puisque des différences immunologiques notables existent entre les ganglions non-métastatiques et métastatiques chez un même patient. La progression du cancer de la prostate semble donc associée au développement d’une immunosuppression affectant les ganglions drainant la tumeur primaire. Par la suite, nous nous sommes intéressés à l’impact de la thérapie par déplétion des androgènes (TDA) sur le microenvironnement immunologique de la tumeur primaire. La TDA est associée à une augmentation marquée de l’inflammation prostatique. De plus, les protocoles d’immunothérapies pour le cancer de la prostate actuellement évalués en phase clinique sont dirigés aux patients hormonoréfractaires ayant subi et échoué la thérapie. Cependant, peu d’information existe sur la nature de l’infiltrat de cellules immunes chez les patients castrés. Il est donc essentiel de connaître la nature de cet infiltrat afin de savoir si celui-ci peut répondre de manière favorable à une intervention immunothérapeutique. Dans le chapitre IV, je présente les résultats sur l’abondance des cellules immunes infiltrant la tumeur primaire suivant la TDA. Chez les patients castrés, les densités de lymphocytes T CD3+ et CD8+ ainsi que des macrophages CD68+ sont plus importantes que chez les patients contrôles. Nous avons également observé une corrélation entre la densité de cellules NK et une diminution du risque de progression de la maladie (rechute biochimique). Inversement, une forte infiltration de macrophages est associée à un plus haut risque de progression. Conjointement, durant cette étude, nous avons développé une nouvelle approche informatisée permettant la standardisation de la quantification de l’infiltrat de cellules immunes dans les échantillons pathologiques. Cette approche facilitera la comparaison d’études indépendantes sur la densité de l’infiltrat immun. Ces résultats nous ont donc permis de confirmer que les effets pro-inflammatoires de la TDA chez les patients du cancer de la prostate ciblaient spécifiquement les lymphocytes T et les macrophages. L’hypothèse intéressante découlant de cette étude est que les androgènes pourraient réguler l’expression de mécanismes immunosuppressifs dans la tumeur primaire. Dans le chapitre V, nous avons donc étudié l’expression de mécanismes immunosuppressifs par les cellules cancéreuses du cancer de la prostate ainsi que leur régulation par les androgènes. Notre analyse démontre que les androgènes augmentent l’expression de molécules à propriétés immunosuppressives telles que l’arginase I et l’arginase II. Cette surexpression dépend de l’activité du récepteur aux androgènes. Chez les patients castrés, l’expression de l’arginase II était diminuée suggérant une régulation androgénique in vivo. Nous avons observé que l’arginase I et l’arginase II participent à la prolifération des cellules du cancer de la prostate ainsi qu’à leur potentiel immunosuppressif. Finalement, nous avons découvert que l’expression de l’interleukin-8 était aussi régulée par les androgènes. De plus, l’interleukin-8, indépendamment des androgènes, augmente l’expression de l’arginase II. Ces résultats confirment que les androgènes participent au développement d’une microenvironnement immunosuppressif dans le cancer de la prostate en régulant l’expression de l’arginase I, l’arginase II et l’interleukin-8. En conclusion, les résultats présentés dans cette thèse témoignent du caractère unique du microenvironnement immunologique chez les patients atteints du cancer de la prostate. Nos travaux ont également permis d’établir de nouvelles techniques basées sur des logiciels d’analyse d’image afin de mieux comprendre le dialogue entre la tumeur et le système immunitaire chez les patients. Approfondir les connaissances sur les mécanismes de régulation du microenvironnement immunologique chez les patients atteint du cancer de la prostate permettra d’optimiser des immunothérapies mieux adaptées à éradiquer cette maladie.

Étude de la sortie du virus herpès simplex de type 1 (HSV 1) hors du noyau

Le virus herpès simplex de type 1 (HSV 1) affecte la majorité de la population mondiale. HSV 1 cause de multiples symptômes délétères dont les plus communs sont les lésions orofaciales usuellement appelées feux sauvages. Le virus peut aussi causer des effets plus sérieux comme la cécité ou des troubles neurologiques. Le virus réside de façon permanente dans le corps de son hôte. Malgré l’existence de nombreux traitements pour atténuer les symptômes causés par HSV 1, aucun médicament ne peut éliminer le virus. Dans le but d’améliorer les connaissances concernant le cycle viral de HSV 1, ce projet cible l’étude du transport du virus dans la cellule hôte. Ce projet aura permis la collecte d’informations concernant le modus operandi de HSV 1 pour sortir des compartiments cellulaires où il séjourne. Les différentes expérimentations ont permis de publier 3 articles dont un article qui a été choisi parmi les meilleurs papiers par les éditeurs de « Journal of Virology » ainsi qu’un 4e article qui a été soumis. Premièrement, un essai in vitro reproduisant la sortie de HSV 1 du noyau a été mis sur pied, via l’isolation de noyaux issus de cellules infectées. Nous avons démontré que tout comme dans les cellules entières, les capsides s’évadent des noyaux isolés dans l’essai in vitro en bourgeonnant avec la membrane nucléaire interne, puis en s’accumulant sous forme de capsides enveloppées entre les deux membranes nucléaires pour finalement être relâchées dans le cytoplasme exclusivement sous une forme non enveloppée. Ces observations appuient le modèle de transport de dé-enveloppement/ré-enveloppement. Deuxièmement, dans le but d’identifier des joueurs clefs viraux impliqués dans la sortie nucléaire du virus, les protéines virales associées aux capsides relâchées par le noyau ont été examinées. La morphologie multicouche du virus HSV 1 comprend un génome d’ADN, une capside, le tégument et une enveloppe. Le tégument est un ensemble de protéines virales qui sont ajoutées séquentiellement sur la particule virale. La séquence d’ajout des téguments de même que les sites intracellulaires où a lieu la tégumentation sont l’objet d’intenses recherches. L’essai in vitro a été utilisé pour étudier cette tégumentation. Les données recueillies suggèrent un processus séquentiel qui implique l’acquisition des protéines UL36, UL37, ICP0, ICP8, UL41, UL42, US3 et possiblement ICP4 sur les capsides relâchées par le noyau. Troisièmement, pour obtenir davantage d’informations concernant la sortie de HSV 1 des compartiments membranaires de la cellule hôte, la sortie de HSV 1 du réseau trans golgien (TGN) a aussi été étudiée. L’étude a révélé l’implication de la protéine kinase D cellulaire (PKD) dans le transport post-TGN de HSV 1. PKD est connue pour réguler le transport de petits cargos et son implication dans le transport de HSV 1 met en lumière l’utilisation d’une machinerie commune pour le transport des petits et gros cargos en aval du TGN. Le TGN n’est donc pas seulement une station de triage, mais est aussi un point de rencontre pour différentes voies de transport intracellulaire. Tous ces résultats contribuent à une meilleure compréhension du processus complexe de maturation du virus HSV 1, ce qui pourrait mener au développement de meilleurs traitements pour combattre le virus. Les données amassées concernant le virus HSV 1 pourraient aussi être appliquées à d’autres virus. En plus de leur pertinence dans le domaine de la virologie, les découvertes issues de ce projet apportent également de nouveaux détails au niveau du transport intracellulaire.

Déficit familial de la LCAT au Québec : description d’une première mutation et contribution du génotype de l’APO E sur le phénotype lipoprotéique

Le déficit familial de LCAT (FLD) est une maladie caractérisée par un défaut de l’activité de l’enzyme lecithin:cholesterol acyltransferase (LCAT). Ce défaut résulte en une concentration plasmatique de C-HDL extrêmement basse, des opacités cornéennes prématurées, la présence d’anémie, de protéinurie et d’insuffisance rénale. Nous avons identifié les premiers patients canadiens-français atteints de déficit familial de LCAT. Deux frères, présentant les signes classiques de FLD étaient homozygotes pour une nouvelle mutation du gène de la LCAT: la mutation c.102delG. Cette mutation se traduit au niveau protéique par un changement du cadre de lecture au niveau du codon His35 et l’insertion d’un codon stop en position 61 entraînant une abolition de l’activité LCAT in vitro et in vivo. La présence de cette mutation cause une réduction importante du C-HDL chez les hétérozygotes (22%) et les homozygotes (88%) ainsi qu’une baisse du C-LDL chez les hétérozygotes (35%) et les homozygotes (58%). De plus, le profil lipidique différait de manière importante entre les deux frères atteints de FLD qui présentaient des génotypes APOE différents. Nous suggérons que APOE est un gène qui modifie le phénotype du FLD et pourrait expliquer l’hétérogénéité des profils lipidiques chez les patients atteints de FLD. Nos résultats suggèrent également que l’association du génotype LCAT-/- a un allèle APOE ε2 est un nouveau mécanisme conduisant à la dysbétalipoproteinemie. Finalement nous avons montré des différences importantes dans les sous-populations des HDL chez les deux sujets atteints de FLD. Le porteur de l’allèle APOE ε2 présentait une proportion beaucoup plus importante de HDL immatures (preβ discoïdaux) par rapport a son frère (77.9% vs. 31.0%).

Les mécanismes d’oxygénation sanguine de l’œil en corrélation avec le système respiratoire

Sommaire L’oxygène fait partie intégrante de l’environnement et ceci jusqu’au fonctionnement même des structures cellulaires qui composent le corps humain. Deux systèmes sont intimement liés à la distribution de l’oxygène, ce sont les systèmes cardiovasculaire et respiratoire. La transparence du système optique de l’œil peut être exploitée afin de mesurer de façon non invasive la concentration en oxyhémoglobine du sang qui alimente le système nerveux central. L’oxygénation capillaire de l’œil a été mesurée par spectro-réflectométrie dans deux régions de l’œil: d’une part les capillaires de la zone du nerf optique qui représentent principalement la circulation rétinienne; d’autre part, les capillaires du limbe cornéen. Cinq sujets volontaires, non fumeurs, sains, âgés de 20 à 45 ans et cinq sujets volontaires, fumeurs, sains, âgés de 20 à 40 ans ont participé à cette étude. Tous ces sujets ont été exposés à des conditions d’hyper et d’hypo oxygénation. Une séance d’expérimentations était composée d’un enregistrement continu de 360 secondes. Durant la première étape de 60 secondes, le sujet respirait de l’air ambiant. Durant une deuxième étape de 180 secondes, le sujet était exposé soit à une condition d’hyper (60% O2) soit, à une condition d’hypo oxygénation (15% O2), tandis que les 120 dernières secondes de la séance de mesure permettait d’exposer le sujet, une fois de plus à l’air ambiant. Le rythme cardiaque et les changements d’oxygénation artérielle au niveau du doigt étaient mesurés pendant ce temps vec le sphygmo-oxymètre. Les variations du taux d’oxyhémoglobine du sang au niveau capillaire de l’œil (nerf optique ou sclérotique) étaient toujours en corrélation directe avec les variations du taux d’oxyhémoglobine artériel. Toutefois, les capillaires du nerf optique offrent plus de précision pour les mesures d’oxygénation, relativement aux mesures d’oxygénation du sang contenu dans les capillaires de la sclérotique. La précision de la mesure de la concentration d’oxyhémoglobine obtenue dans cette étude par spectro-réflectométrie de l’œil, en fait un instrument utile au diagnostic d’une grande partie des pathologies pulmonaires ou oculaires.