997 resultados para Transtornos linfoproliferativos crônicos. Imunofenotipagem. Sistema imune. Linfoma.
Resumo:
Universidade Estadual de Campinas . Faculdade de Educao Fsica
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Studies evaluating immune function in obese humans and experimental animals indicate that the excess adiposity is associated with impaired in immune responses. Obesity is related to a higher rate of infections and to some types of cancer. Nutritional, metabolic and endocrine factors are implicated in the immunological changes. The adipose tissue directly produces substances with various functions related to immune system. Furthermore, some investigations suggest that certain types of weight reduction strategies can alter the immune function. Nevertheless, long-term studies should be carried out to address whether these changes positively affects the ability of these obese individuals to control infections and tumor development.
Host-symbiont interactions in the deep-sea vent mussel Bathymodiolus azoricus : a molecular approach
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Tese de Doutoramento, Cincias do Mar, especialidade de Biologia Marinha, 19 de Dezembro de 2015, Universidade dos Aores.
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Com uma incidncia de 3 a 10% dos casos e letalidade prxima a 70%, o comprometimento pulmonar constitui uma das manifestaes mais graves da malria por Plasmodium falciparum. Embora sua patognese no esteja perfeitamente esclarecida, reconhece-se que a hiperativao do sistema imune por antgenos liberados pelo Plasmodium falciparum desempenhe um importante papel no desencadeamento e agravamento das leses. A estrutura alvo parece ser o endotlio capilar, responsvel pelo fluxo de lquidos para o espao intersticial. Essas clulas so ativadas por ao de citocinas, produzidas por linfcitos e macrfagos durante a resposta imune, e passam a expressar em sua membrana celular receptores e molculas de aderncia que facilitam a sequestrao de eritrcitos parasitados e tambm a aderncia de clulas capazes de produzir mediadores inflamatrios. A reao inflamatria e a leso endotelial que se seguem, juntamente com as alteraes hemodinmicas induzidas pelo bloqueio capilar devido ao acmulo local de eritrcitos e clulas inflamatrias causam alteraes de permeabilidade vascular e, consequentemente, acmulo de lquido nos espaos intersticiais e alvolos. Nos casos mais graves, as manifestaes clnicas assemelham-se s do quadro da Sndrome do desconforto respiratrio do adulto. Comprometimento pulmonar grave pode se instalar rapidamente em qualquer estgio da evoluo clnica da malria, mesmo aps a cura parasitolgica, desconhecendo-se os fatores desencadeantes. Hiperparasitismo, insuficincia renal e gravidez constituem fatores predisponentes. O prognstico depender da rapidez com que o diagnstico for estabelecido e o correto tratamento institudo. Alm do tratamento institudo contra o parasita, especial ateno dever ser dispensada monitorizao hemodinmica, se possvel atravs de cateter de Swan-Ganz, manuteno de adequada oxigenao e balano hdrico, e ao controle de outras complicaes, frequentemente associadas ao comprometimento pulmonar. O esclarecimento da patogenia do comprometimento pulmonar associado malria dever concorrer para a racionalizao da conduta teraputica e, consequentemente, melhorar o prognstico dos indivduos acometidos por esta complicao
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Dois pacientes HIV-soronegativos com doena criptoccica refratria terapia antifngica convencional foram submetidos a estudo do sistema imune. Hipogamaglobulinemia foi evidenciada em ambos e associada alterao funcional da imunidade mediada por clulas. Hipogamaglobulinemia considerada como um possvel fator predisponente para infeco criptoccica. A importncia dos anticorpos no controle da infeco por Cryptococcus neoformans discutida.
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Taxonomia bacteriana ? aspectos atuais e perspectivas. Aggregatibacter actinomycetemcomitans: fatores de virulncia e modulao do sistema imune. Escherichia coli diarreiognica em animais. Fatores de virulncia em escherichia coli patognica Extraintestinal. Enterococcus sp em alimentos: paradigmas. Resistncia a carbapenmicos em enterobactrias. Resistncia em Staphylococcus aureus. Relao mtua entre Candida albicans e imunidade. Switching fenotpico em Candida spp Phytomonas spp.: modelo para estudo de processos biolgicos da famlia Trypanosomatidae? Rotavirus. Antimicrobianos naturais produzidos por microrganismos: da busca identificao. Antivirais naturais. Nanopartculas metlicas com atividade antimicrobiana. Plantas medicinais: A busca de novos frmacos no tratamento de doenas causadas por protozorios tripanossomatdeos. Introduo, estabelecimento e adaptao de Bradirrizbios simbiontes da soja em solos brasileiros. Microrganismos e processos microbianos como bioindicadores de qualidade ambiental.
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A identificao e caracterizao de processos mediados por metaloproteinases de uma grande variedade de eucariotas est a avanar rapidamente, tanto a nvel molecular como celular e os muitos papis que as proteases desempenham nestes organismos esto a ser trazidas para o foco. As metaloproteinases de matriz executam tarefas de housekeeping comuns a muitos organismos, bem como funcionam a um nvel muito mais especfico no ciclo de vida dos parasitas, por exemplo. Papis pivotais foram propostos em diferentes processos, como invaso e egresso de clulas, enquistao e desenquistao, catabolismo de protenas, diferenciao, progresso do ciclo celular, citoaderncia, e ainda estimulao e evaso ao sistema imune. No presente estudo, feito o reconhecimento e a caracterizao de metaloproteinases de dois diferentes extractos de parasitas protozorios: Trypanosoma brucei brucei e Leishmania infantum. A classificao de metaloproteases foi obtida a partir da inibio diferencial da actividade destas proteases sobre diferentes substratos (gelatina e casena), tendo sido efectuada uma prospeco de inibidores selectivos com potencial para serem empregues em novas estratgias de quimioterpeutica contra estes agentes. Adicionalmente, feito um estudo bioinformtico sobre uma metaloproteinase comum aos parasitas aqui abordados, alargando o estudo a outros organismos relacionados. Os resultados obtidos demonstram a presena de metaloproteinases capazes de degradar protenas de matriz em ambos os extractos estudados, sendo possvel inibir a sua actividade com concentraes relativamente moderadas de inibidores. Alm disso, sugerem que em todos os eventos patolgicos abordados neste estudo, a presena de metaloproteinases activas estvel no seu ciclo de vida e provavelmente na progresso da patologia provocada pelos diferentes agentes em estudo. A anlise de todos os resultados e observaes poder possivelmente levar identificao e integrao de elementos comuns nos processos de invaso celular e progresso parasitria aqui abordados. Por essa razo, a compreenso destas interaces permanece um desafio importante.
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O objetivo do presente estudo foi analisar a freqncia de oocistos de Cryptosporidium spp em amostras fecais de crianas, de 1 a 14 anos, de uma creche pblica localizada em uma comunidade carente da cidade do Recife, Pernambuco. A pesquisa foi realizada no perodo de 28 de junho de 2006 a 3 de abril de 2007, e envolveu 182 crianas. Das amostras analisadas 59 (32,4%) foram positivas quanto presena de oocistos de Cryptosporidium spp, e a faixa etria mais acometida foi a de 3 a 5 anos de idade (54,2%). A alta freqncia de amostras positivas para Cryptosporidium spp obtidas neste estudo comprovam que creches so ambientes propcios a essa ocorrncia devido ao contato direto entre criana-criana, crianas e funcionrios. A maior via de infeco por Cryptosporidium spp a transmisso interpessoal, que bem ilustrada em creches. A imaturidade, deficincias do sistema imune e hbitos higinicos inadequados so fatores que tambm contribuem para esse tipo de infeco.
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INTRODUO: AIDS uma doena causada pelo HIV que compromete o sistema imune do organismo. O advento da terapia antirretroviral (TARV) altamente eficaz promoveu melhora substancial do prognstico da doena e da qualidade de vida dos pacientes com HIV/AIDS. Durante seu tratamento prolongado, notam-se algumas alteraes hematolgicas, dentre elas, anemia e macrocitose, bem como carncias de micronutrientes, tais como, de vitamina B12 e cido flico. O objetivo do presente trabalho relacionar a macrocitose e anemia ao uso de TARV, ou deficincia de vitamina B12 ou de cido flico. MTODOS: Foram avaliados 110 pacientes HIV positivos, comparando-se aqueles em uso de TARV com zidovudina (AZT) (grupo 1), TARV sem AZT (grupo 2) ou sem uso de TARV (grupo 3). RESULTADOS: Os pacientes dos trs grupos no apresentaram diferenas estatsticas significativas quanto aos nveis de hemoglobina (p = 0,584) e de cido flico (p = 0,956). Os pacientes do grupo 1 (G1) apresentaram volume corpuscular mdio (VCM) aumentado quando comparado ao grupo 3 (G3) (p < 0,05), bem como do grupo 2 (G2) em relao ao G3 (p < 0,001). As dosagens de vitamina B12 do G1 e G3 foram menores do que as encontradas pelo G2 (p = 0,008). CONCLUSES: Conclui-se que os indivduos em uso de TARV apresentaram macrocitose, embora no pudesse ser relacionada ao tipo de TARV ou a deficincia de vitamina B12. Entretanto, a deficincia de cido flico no esteve relacionada ao uso de TARV e nem macrocitose.
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RESUMO: O processo de glicosilao a modificao ps-traducional de protenas mais comum e est envolvido em vrios processos fisiolgicos e patolgicos. Especificamente, certos perfis glicosdeos esto correlacionados a estados especficos de diferenciao celular, e podem modular vrios eventos celulares, como sinalizao celular, migrao celular e interaes hospedeiro-patognio. Assim sendo, a glicosilao desempenha um papel crucial na modulao de vrios processos imunolgicos. No entanto, permanece por esclarecer como as estruturas glicosdicas influenciam a imunidade. Especificamente, algumas estruturas glicosdicas terminais que esto modificadas pela ligao de cido silico desempenham um papel importante em vrias funes do sistema imune, nomeadamente migrao leucocitria em contexto de inflamao e ativao de clulas imunes. Como tal, este trabalho teve como objectivo investigar como a expresso de certos glicanos influencia componentes importantes da resposta imune inata e adaptativa. Este trabalho est dividido em trs componentes principais: 1) A imunidade est amplamente dependente da habilidade das clulas circulantes migrarem para os tecidos inflamados, sendo que a ligao de leuccitos Eselectina endotelial o primeiro passo. Assim, ns analismos a estrutura e funo dos ligandos de E-selectina que so expressos pelas clulas humanas mononucleares de sangue perifrico (PBMCs), fornecendo novos conhecimentos para a compreenso dos intervenientes moleculares que mediam a ligao dos moncitos, clulas CD4+ e CD8+T e clulas B ao endotlio vascular. Surpreendentemente, os moncitos apresentaram maior capacidade de ligao E-selectina comparativamente aos linfcitos. Esta observao pode ser explicada pelo facto de os moncitos humanos expressarem, uniformemente, um vasto reportrio de glicoprotenas que exibem afinidade de ligao E-selectina, nomeadamente: as glicoformas do CD43 (CD43E) e do CD44 (HCELL), em adio j previamente reportada glicoforma da PSGL-1 (CLA). Consistentemente, a diferente capacidade que as diversas populaes linfocitrias apresentam de se ligar E-selectina, est integralmente relacionada com a sua expresso de glicoprotenas com afinidade de ligao E-selectina. Enquanto que as clulas CD4+T apresentam uma elevada reatividade E-selectina, as clulas CD8+T e B demonstram pouca ou nenhuma capacidade de ligao E-selectina. Esta atividade de ligao E-selectina das clulas CD4+T conferida pela expresso de HCELL, em adio s j previamente reportadas CLA e CD43E. As clulas CD8+ T no expressam HCELL e apenas expressam pequenas quantidades de CLA e CD43E, enquanto que as clulas B no expressam ligandos de Eselectina. Mais, a exofucosilao da superfcie destas clulas, levou ao dramtico aumento da expresso dos ligandos de E-selectina em todos as populaes leucocitrias, verificando-se que a criao de certos ligandos de E-selectina est dependente do tipo de clula, aps fucosilao. Colectivamente, estes resultados redefinem o nosso conhecimento acerca dos mecanismos moleculares que governam o trfico das clulas mononucleares de sangue perifrico em contexto de inflamao. 2) A habilidade das clulas dendrticas (DCs) para extravasarem em locais de inflamao crucial para o sucesso da terapia com DCs. Assim, analismos a estrutura e funo das molculas de adeso que mediam a migrao transendotelial (TEM) das DCs. Para isso, foram usadas DCs geradas a partir da diferenciao de moncitos (mo-DCS), obtidos quer pelo mtodos de separao imuno-magntica de clulas CD14+ (CD14-S) ou por isolamento por aderncia ao plstico (PA-S). Os resultados obtidos indicam que as glicoformas de ligao Eselectina de PSGL-1, CD43 e CD44 so expressas pelas CD14-S mo-DCs, enquanto que as PA-S mo-DCs expressam apenas CLA. importante notar que a ligao do CD44 nas mo-DCs, mas no nas PA-S mo-DCs, desencadeia a ativao e consequente adeso da VLA-4 ao endotlio na ausncia de um gradiente de quimiocinas. Procedeu-se tambm anlise dos ligandos E-selectina expressos em mo-DCs geradas a partir de moncitos do sangue do cordo umbilical (UCB) e, inesperadamente, as UCB mo-DCs no expressam qualquer glicoprotena com reatividade E-selectina. Alm disso, a exofucosilao das mo- DCs humanas utilizando uma (1,3)-fucosiltransferase aumenta significativamente a expresso de HCELL e, portanto, estas clulas apresentam uma capacidade aumentada para se ligarem E-selectina em condies de fluxo hemodinmico. Estes resultados destacam o papel do HCELL no desencadeamento do TEM das CD14-S mo-DCs e sugerem que estratgias para potenciar a expresso de HCELL podero impulsionar o recrutamento de mo-DCs para locais de inflamao. 3) Outro obstculo para alcanar o sucesso promissor de vacinas baseadas em DCs o estabelecimento de abordagens eficientes que podero melhorar o estado de maturao e apresentao antignica das DCs. Por conseguinte, foram investigadas abordagens alternativas que podem superar este obstculo. Atravs da remoo de cido silico de superfcie celular das DCs, conseguiu-se induzir a maturao de DC humanas e de ratinhos. Notavelmente, tanto as DCs humanas como as de ratinho, ao serem desialiladas mostraram uma capacidade aumentada para induzir a proliferao de clulas T, para secretar citocinas Th1 e para induzir a morte especfica de clulas tumorais. Em adio, as DCs desialiladas apresentam uma maior capacidade de apresentao cruzada de antignios tumorais s clulas T citotxicas. Colectivamente, o presente estudo oferece uma viso chave para optimizar a capacidade das DCs em induzir respostas imunitrias anti-tumorais, e indica que o tratamento com sialidase uma nova tecnologia para melhorar a eficcia e aplicabilidade das vacinas baseadas em DCs. Coletivamente, os nossos resultados demostram como a glicosilao e a sua manipulao podem modular a imunidade. Concretamente, atravs de uma reao de exofucosilao conseguimos aumentar fortemente a capacidade de os leuccitos extravasarem para os tecidos afectados, enquanto que a remoo dos nveis de cido silico da superfcie celular das DCs, induz potentes respostas anti-tumorais mediadas por clulas T citotxicas. ------------------------------------ ABSTRACT: Glycosylation is the most widely form of protein post-translational modification and is involved in many physiological and pathological processes. Specifically, certain patterns of glycosylation are associated with determined stages of cell differentiation and can modulate processes like cell-signaling and migration and host-pathogen interactions. As such, glycosylation plays a crucial role in the modulation of several immune events. However, how glycans execute this immune-modulation and, therefore, influence immunity is still poorly unknown. Specifically, some terminal sialic acid-modified determinants are known to be involved in several physiological immune processes, including leukocyte trafficking into sites of inflammation and cell immune activation. Therefore, in this work, we sought to investigate more deeply how the expression of these glycosidic structures affects events form both innate and adaptive immune responses. To this end, we divided our work into three main parts: 1) Immunity critically depends on the ability of sentinel circulating cells to infiltrate injured sites, of which leukocyte binding to endothelial E-selectin is the critical first step. Thus, we first analyzed the structure and function of the E-selectin ligands expressed on native human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), providing novel insights into the molecular effectors governing adhesion of circulating monocytes, and of circulating CD4+T, CD8+T and B cells, to vascular endothelium under hemodynamic shear conditions. Strikingly, monocytes show a higher ability to tether and roll on endothelial cells than lymphocyte subsets. This is due to the fact that human circulating monocytes uniformly display a wide repertoire of E-selectin binding glycoproteins, namely the E-selectin-binding glycoforms of CD43 (CD43E) and CD44 (HCELL), in addition to the previously described E-selectin-binding glycoform of PSGL-1 (CLA). In addition, we also observed a differential ability of the different lymphocyte subsets to bind to Eselectin under hemodynamic shear stress conditions, and these differences were highly correlated with their individual expression of E-selectin binding glycoproteins. While CD4+T cells show a robust E-selectin binding ability, CD8+T and B cells show little to no E-selectin reactivity. CD4+T cell potent Eselectin rolling activity is conferred by HCELL expression, in addition to the previously reported E-selectin-binding glycoproteins CD43E and CLA. CD8+T cells display no HCELL and low amounts of CLA and CD43E, whereas B cells lack E-selectin ligand expression. Moreover, enforced exofucosylation of cell surface of these cells noticeably increases expression of functional E-selectin ligands among all leukocytes subsets, with cell type-dependent specificity in the protein scaffolds that are modified. Taken together, these findings redefine our understanding of the molecular mechanisms governing the trafficking patterns of PBMCs that are relevant in the context of acute or chronic inflammatory conditions. 2) The ability of circulating dendritic cells (DCs) to extravasate at inflammatory sites is critical to the success of DC-based therapies. Therefore, we assessed the structure and function of adhesion molecules mediating the transendothelial migration (TEM) of human monocyte derived-DCs (mo-DCs), obtained either by CD14 positive immune-magnetic selection (CD14-S) or by plastic adherence of blood monocytes (PA-S). We report for the first time that the E-selectin binding glycoforms of PSGL-1, CD43 and CD44 are all expressed on CD14-S mo-DCs, in contrast to PA-S mo-DCs that express only CLA. Importantly, CD44 engagement on CD14-S mo-DCs, but not on PA-S mo-DCs, triggers VLA-4-dependent adhesiveness and programs TEM in absence of chemokine gradient. We also analyzed the E-selectin ligands expressed on mo-DCs generated from umbilical cord blood (UCB) monocytes, and unexpectedly, UCB mo-DCs do not express any glycoprotein with E-selectin reactivity. Furthermore, exoglycosylation of human mo-DCs using an (1,3)-fucosyltransferase significantly increases expression of HCELL, and therefore exofucosylated mo-DCs exhibit an augmented ability to bind to E-selectin under hemodynamic shear stress conditions. These findings highlight a role for HCELL engagement in priming TEM of CD14-S mo-DCs, and suggest that strategies to enforce HCELL expression could boost mo-DC recruitment to inflammatory sites. 3) Another obstacle to achieve the promising success of DC-based vaccines is the establishment of efficient approaches that could successfully enhance maturation and cross-presentation ability of DCs. Therefore, we investigated an alternative approach that can overcome this problem. Through removal of sialic acid content from DC cell surface we are able to elicit maturation of both human and mouse DCs. Notably, desialylated human and murine DCs showed enhanced ability to induce autologous T cell to proliferate, to secrete Th1 cytokines and to kill tumor cells. Moreover, desialylated DCs display enhanced cross-presentation of tumor antigens to cytotoxic CD8+ T cells. Collectively, this study offers key insight to optimize the ability of DCs to boost anti-tumor immune responses, and indicates that the treatment with an exogenous sialidase is a powerful new technology to improve the efficacy and applicability of DC-based vaccines. Overall, our findings show how glycosylation and its manipulation can modulate immunity. Concretely, through an exofucosylation reaction we are able to greatly augment the ability of leukocytes to extravasate into injured tissues, while removal of sialic acid moieties from cell surface of DCs, significantly potentiate their ability to induce anti-tumor cytotoxic T cell-mediate responses.
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RESUMO:O processo de glicosilao a modificao ps-traducional de protenas mais comum e est envolvido em vrios processos fisiolgicos e patolgicos. Especificamente, certos perfis glicosdeos esto correlacionados a estados especficos de diferenciao celular, e podem modular vrios eventos celulares, como sinalizao celular, migrao celular e interaes hospedeiro-patognio. Assim sendo, a glicosilao desempenha um papel crucial na modulao de vrios processos imunolgicos. No entanto, permanece por esclarecer como as estruturas glicosdicas influenciam a imunidade. Especificamente, algumas estruturas glicosdicas terminais que esto modificadas pela ligao de cido silico desempenham um papel importante em vrias funes do sistema imune, nomeadamente migrao leucocitria em contexto de inflamao e ativao de clulas imunes. Como tal, este trabalho teve como objectivo investigar como a expresso de certos glicanos influencia componentes importantes da resposta imune inata e adaptativa. Este trabalho est dividido em trs componentes principais: 1) A imunidade est amplamente dependente da habilidade das clulas circulantes migrarem para os tecidos inflamados, sendo que a ligao de leuccitos Eselectina endotelial o primeiro passo. Assim, ns analismos a estrutura e funo dos ligandos de E-selectina que so expressos pelas clulas humanas mononucleares de sangue perifrico (PBMCs), fornecendo novos conhecimentos para a compreenso dos intervenientes moleculares que mediam a ligao dos moncitos, clulas CD4+ e CD8+T e clulas B ao endotlio vascular. Surpreendentemente, os moncitos apresentaram maior capacidade de ligao E-selectina comparativamente aos linfcitos. Esta observao pode ser explicada pelo facto de os moncitos humanos expressarem, uniformemente, um vasto reportrio de glicoprotenas que exibem afinidade de ligao E-selectina, nomeadamente: as glicoformas do CD43 (CD43E) e do CD44 (HCELL), em adio j previamente reportada glicoforma da PSGL-1 (CLA). Consistentemente, a diferente capacidade que as diversas populaes linfocitrias apresentam de se ligar E-selectina, est integralmente relacionada com a sua expresso de glicoprotenas com afinidade de ligao E-selectina. Enquanto que as clulas CD4+T apresentam uma elevada reatividade E-selectina, as clulas CD8+T e B demonstram pouca ou nenhuma capacidade de ligao E-selectina. Esta atividade de ligao E-selectina das clulas CD4+T conferida pela expresso de HCELL, em adio s j previamente reportadas CLA e CD43E. As clulas CD8+ T no expressam HCELL e apenas expressam pequenas quantidades de CLA e CD43E, enquanto que as clulas B no expressam ligandos de Eselectina. Mais, a exofucosilao da superfcie destas clulas, levou ao dramtico aumento da expresso dos ligandos de E-selectina em todos as populaes leucocitrias, verificando-se que a criao de certos ligandos de E-selectina est dependente do tipo de clula, aps fucosilao. Colectivamente, estes resultados redefinem o nosso conhecimento acerca dos mecanismos moleculares que governam o trfico das clulas mononucleares de sangue perifrico em contexto de inflamao. 2) A habilidade das clulas dendrticas (DCs) para extravasarem em locais de inflamao crucial para o sucesso da terapia com DCs. Assim, analismos a estrutura e funo das molculas de adeso que mediam a migrao transendotelial (TEM) das DCs. Para isso, foram usadas DCs geradas a partir da diferenciao de moncitos (mo-DCS), obtidos quer pelo mtodos de separao imuno-magntica de clulas CD14+ (CD14-S) ou por isolamento por aderncia ao plstico (PA-S). Os resultados obtidos indicam que as glicoformas de ligao Eselectina de PSGL-1, CD43 e CD44 so expressas pelas CD14-S mo-DCs, enquanto que as PA-S mo-DCs expressam apenas CLA. importante notar que a ligao do CD44 nas mo-DCs, mas no nas PA-S mo-DCs, desencadeia a ativao e consequente adeso da VLA-4 ao endotlio na ausncia de um gradiente de quimiocinas. Procedeu-se tambm anlise dos ligandos E-selectina expressos em mo-DCs geradas a partir de moncitos do sangue do cordo umbilical (UCB) e, inesperadamente, as UCB mo-DCs no expressam qualquer glicoprotena com reatividade E-selectina. Alm disso, a exofucosilao das mo- DCs humanas utilizando uma (1,3)-fucosiltransferase aumenta significativamente a expresso de HCELL e, portanto, estas clulas apresentam uma capacidade aumentada para se ligarem E-selectina em condies de fluxo hemodinmico. Estes resultados destacam o papel do HCELL no desencadeamento do TEM das CD14-S mo-DCs e sugerem que estratgias para potenciar a expresso de HCELL podero impulsionar o recrutamento de mo-DCs para locais de inflamao. 3) Outro obstculo para alcanar o sucesso promissor de vacinas baseadas em DCs o estabelecimento de abordagens eficientes que podero melhorar o estado de maturao e apresentao antignica das DCs. Por conseguinte, foram investigadas abordagens alternativas que podem superar este obstculo. Atravs da remoo de cido silico de superfcie celular das DCs, conseguiu-se induzir a maturao de DC humanas e de ratinhos. Notavelmente, tanto as DCs humanas como as de ratinho, ao serem desialiladas mostraram uma capacidade aumentada para induzir a proliferao de clulas T, para secretar citocinas Th1 e para induzir a morte especfica de clulas tumorais. Em adio, as DCs desialiladas apresentam uma maior capacidade de apresentao cruzada de antignios tumorais s clulas T citotxicas. Colectivamente, o presente estudo oferece uma viso chave para optimizar a capacidade das DCs em induzir respostas imunitrias anti-tumorais, e indica que o tratamento com sialidase uma nova tecnologia para melhorar a eficcia e aplicabilidade das vacinas baseadas em DCs. Coletivamente, os nossos resultados demostram como a glicosilao e a sua manipulao podem modular a imunidade. Concretamente, atravs de uma reao de exofucosilao conseguimos aumentar fortemente a capacidade de os leuccitos extravasarem para os tecidos afectados, enquanto que a remoo dos nveis de cido silico da superfcie celular das DCs, induz potentes respostas anti-tumorais mediadas por clulas T citotxicas. ---------------------------- ABSTRACT: Glycosylation is the most widely form of protein post-translational modification and is involved in many physiological and pathological processes. Specifically, certain patterns of glycosylation are associated with determined stages of cell differentiation and can modulate processes like cell-signaling and migration and host-pathogen interactions. As such, glycosylation plays a crucial role in the modulation of several immune events. However, how glycans execute this immune-modulation and, therefore, influence immunity is still poorly unknown. Specifically, some terminal sialic acid-modified determinants are known to be involved in several physiological immune processes, including leukocyte trafficking into sites of inflammation and cell immune activation. Therefore, in this work, we sought to investigate more deeply how the expression of these glycosidic structures affects events form both innate and adaptive immune responses. To this end, we divided our work into three main parts: 1) Immunity critically depends on the ability of sentinel circulating cells to infiltrate injured sites, of which leukocyte binding to endothelial E-selectin is the critical first step. Thus, we first analyzed the structure and function of the E-selectin ligands expressed on native human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), providing novel insights into the molecular effectors governing adhesion of circulating monocytes, and of circulating CD4+T, CD8+T and B cells, to vascular endothelium under hemodynamic shear conditions. Strikingly, monocytes show a higher ability to tether and roll on endothelial cells than lymphocyte subsets. This is due to the fact that human circulating monocytes uniformly display a wide repertoire of E-selectin binding glycoproteins, namely the E-selectin-binding glycoforms of CD43 (CD43E) and CD44 (HCELL), in addition to the previously described E-selectin-binding glycoform of PSGL-1 (CLA). In addition, we also observed a differential ability of the different lymphocyte subsets to bind to Eselectin under hemodynamic shear stress conditions, and these differences were highly correlated with their individual expression of E-selectin binding glycoproteins. While CD4+T cells show a robust E-selectin binding ability, CD8+T and B cells show little to no E-selectin reactivity. CD4+T cell potent Eselectin rolling activity is conferred by HCELL expression, in addition to the previously reported E-selectin-binding glycoproteins CD43E and CLA. CD8+T cells display no HCELL and low amounts of CLA and CD43E, whereas B cells lack E-selectin ligand expression. Moreover, enforced exofucosylation of cell surface of these cells noticeably increases expression of functional E-selectin ligands among all leukocytes subsets, with cell type-dependent specificity in the protein scaffolds that are modified. Taken together, these findings redefine our understanding of the molecular mechanisms governing the trafficking patterns of PBMCs that are relevant in the context of acute or chronic inflammatory conditions. 2) The ability of circulating dendritic cells (DCs) to extravasate at inflammatory sites is critical to the success of DC-based therapies. Therefore, we assessed the structure and function of adhesion molecules mediating the transendothelial migration (TEM) of human monocyte derived-DCs (mo-DCs), obtained either by CD14 positive immune-magnetic selection (CD14-S) or by plastic adherence of blood monocytes (PA-S). We report for the first time that the E-selectin binding glycoforms of PSGL-1, CD43 and CD44 are all expressed on CD14-S mo-DCs, in contrast to PA-S mo-DCs that express only CLA. Importantly, CD44 engagement on CD14-S mo-DCs, but not on PA-S mo-DCs, triggers VLA-4-dependent adhesiveness and programs TEM in absence of chemokine gradient. We also analyzed the E-selectin ligands expressed on mo-DCs generated from umbilical cord blood (UCB) monocytes, and unexpectedly, UCB mo-DCs do not express any glycoprotein with E-selectin reactivity. Furthermore, exoglycosylation of human mo-DCs using an (1,3)-fucosyltransferase significantly increases expression of HCELL, and therefore exofucosylated mo-DCs exhibit an augmented ability to bind to E-selectin under hemodynamic shear stress conditions. These findings highlight a role for HCELL engagement in priming TEM of CD14-S mo-DCs, and suggest that strategies to enforce HCELL expression could boost mo-DC recruitment to inflammatory sites.3) Another obstacle to achieve the promising success of DC-based vaccines is the establishment of efficient approaches that could successfully enhance maturation and cross-presentation ability of DCs. Therefore, we investigated an alternative approach that can overcome this problem. Through removal of sialic acid content from DC cell surface we are able to elicit maturation of both human and mouse DCs. Notably, desialylated human and murine DCs showed enhanced ability to induce autologous T cell to proliferate, to secrete Th1 cytokines and to kill tumor cells. Moreover, desialylated DCs display enhanced cross-presentation of tumor antigens to cytotoxic CD8+ T cells. Collectively, this study offers key insight to optimize the ability of DCs to boost anti-tumor immune responses, and indicates that the treatment with an exogenous sialidase is a powerful new technology to improve the efficacy and applicability of DC-based vaccines. Overall, our findings show how glycosylation and its manipulation can modulate immunity. Concretely, through an exofucosylation reaction we are able to greatly augment the ability of leukocytes to extravasate into injured tissues, while removal of sialic acid moieties from cell surface of DCs, significantly potentiate their ability to induce anti-tumor cytotoxic T cell-mediate responses.
Resumo:
A malria uma doena infecciosa com um efeito devastador nas reas afectadas. provocada pelo protozorio Plasmodium e transmitida pelo insecto vector do gnero Anopheles. As fmeas hematfagas ao alimentar-se de um hospedeiro infectado vo dar continuidade ao ciclo de vida do parasita e transmiti-lo a um novo hospedeiro na prxima refeio sangunea. O intestino mdio dos mosquitos um rgo imunocompetente, onde a presena de microrganismos vai activar o sistema imunitrio, determinando a sua capacidade vectorial. Novas abordagens de controlo biolgico de doenas transmitidas por vectores parecem ganhar terreno. P. aeruginosa uma bactria Gram-negativa, potencialmente patognica, em especial as estirpes produtoras de muco, sendo um microrganismo modelo em estudos de biofilmes. Estes so caracterizados por conferir tolerncia a antibiticos e resistncia ao sistema imune do hospedeiro. Com este trabalho pretendeu-se analisar o efeito da influncia da flora bacteriana, nomeadamente isolados de Pseudomonas aeruginosa produtores de muco e no produtores, presentes no tracto digestivo de Anopheles sp. e a sua relao com a infeco por P. berghei. Com este estudo possvel afirmar a existncia de uma proporcionalidade directa entre a taxa de infeco por P. berghei e a ausncia da Microbiota. A presena de Pseudomonas produtoras de muco no intestino mdio dos mosquitos demonstrou conferir algum grau de proteco no estabelecimento da infeco, bem como na intensidade da mesma. Contudo, mais estudos necessitam ser realizados e com um maior nmero de mosquitos, de forma a ultrapassar as limitaes impostas pelo tratamento antibacteriano. Possivelmente, a sobreposio de respostas imunes anti-bacterianas e anti-Plasmodium, vo provocar um incremento no sistema imune e limitao das infeces por Plasmodium. Biofilmes bacterianos tm demonstrado a capacidade de aderir e inibir o crescimento de protozorios Uma melhor compreenso do papel da flora microbiana face ao sistema de defesa do hospedeiro poder contribuir para o desenvolvimento de novas estratgias de controlo da transmisso da malria.
Resumo:
Terapias de imunossupresso, a que pacientes transplantados devem ser submetidos, os expe a um alto risco de desenvolver desordens linfoproliferativas ps-transplante (PTLD). Descrevemos o caso de uma criana submetida a transplante cardaco aos sete meses de idade e que acabou desenvolvendo PTLD, aos nove anos, diagnosticada por meio de retirada de ndulo pulmonar.
Resumo:
Trata-se de um caso de uma paciente de 30 anos do sexo feminino, com prtese biolgica valvar mitral em razo de estenose mitral sintomtica e antecedentes de infarto agudo do miocrdio, episdios de convulses tnico-clnicas generalizadas, alucinaes visuais, eventos tromboemblicos cerebrais, apresentando no momento coreia e cardite aguda. Foram diagnosticados na paciente febre reumtica em atividade, lpus eritematoso sistmico e sndrome do anticorpo antifosfolipdeo. A combinao de trs diagnsticos incomuns em um mesmo paciente torna esse caso nico, modificando o tratamento e seu prognstico.
Papel da Coagulao na Resposta do Mosquito Anopheles Gambiae ao Parasita da malria Plasmodium Berghei
Resumo:
Malria uma doena parasitria infecciosa aguda ou crnica, causada pelo protozorio do gnero Plasmodium que transmitido ao homem atravs de picada de mosquitos fmeas do gnero Anopheles. Causa a morte a milhes de pessoas por ano, na sua maioria crianas at aos 5 anos de idade. A inexistncia de estratgias eficazes, contra a transmisso da malria, deve-se sobretudo falta de conhecimento de molculas cruciais ao desenvolvimento do parasita no vector. Mecanismos de reconhecimento do parasita e a resposta imune do mosquito infeco so claramente alvos de novas estratgias de controlo da malria. O ciclo natural de transmisso de Plasmodium requer a concluso com sucesso, do ciclo esporognico no intestino mdio e nas glndulas salivares do mosquito Anopheles, um processo que demora cerca de duas semanas. Este processo de desenvolvimento pode ser bloqueado pelo sistema imune inato do mosquito, resultando assim na eliminao do parasita do vector. A resposta imunolgica envolve vrios mecanismos como a fagocitose, encapsulao, nodulao, sntese de pptidos antimicrobianos e coagulao, que so acompanhadas pela activao proteoltica da pr-fenoloxidase presente na hemolinfa.O sistema imune um factor determinante da capacidade vectorial do mosquito, pelo que vrios estudos tm sido feitos para melhor compreender as respostas do mosquito Anopheles, principal vector da malria, ao parasita Plasmodium. Uma das principais respostas desencadeadas pelo sistema imune do mosquito a coagulao. Estudos recentes demonstram que a coagulao da hemolinfa de Anopheles requer actividade da fenoloxidase e difere de Drosophila s.p na formao, estrutura e composio. O objectivo deste trabalho estudar o papel da coagulao na resposta do mosquito Anopheles gambiae ao parasita da malria Plasmodium berghei, atravs do estudo da transglutaminase. Para tal foi feita a caracterizao dos genes que codificam para a transglutaminases em A. gambiae, atravs da sequenciao destes genes e dos seus transcritos, verificando-se alguns polimorfismos quando comparada com a sequncia do genoma disponvel na base de dados. Para caracterizar do papel desta enzima durante a infeco com P. berghei, foi feita a inibio da actividade enzimtica dos genes AGAP009097 e AGAP009098 que codificam para a transglutaminases. Foi feita a descrio da dinmica de transcrio durante a infeco e o silenciamento destes mesmos genes usando dsRNA. Observou-se um aumento da taxa de infeco e do nmero mdio de oocistos por intestino mdio nos mosquitos em que as transglutaminases foram inibidas quimicamente bem como naqueles que possuam os genes silenciados, quando comparados com os grupos controlo. Com este trabalho espera-se ter contribudo para uma melhor compreenso do funcionamento da capacidade imunolgica dos mosquitos na resposta ao parasita da malria e a possibilidade de manipular o sistema imune dos mesmos de modo a eliminar o parasita e contribuir para a diminuio/irradicao da malria, uma das principais doena e causa de morte a nvel mundial.
