The anticancer drug tamoxifen is active against Trypanosoma cruzi in vitro but ineffective in the treatment of the acute phase of Chagas disease in mice

The activity of the antineoplastic drug tamoxifen was evaluated against Trypanosoma cruzi. In vitro activity was determined against epimastigote, trypomastigote and amastigote forms of CL14, Y and Y benznidazole resistant T. cruzi strains. Regardless of the strain used, the drug was active against all life-cycle stages of the parasite with a half maximal effective concentration ranging from 0.7-17.9 µM. Two experimental models of acute Chagas disease were used to evaluate the in vivo efficacy of treatment with tamoxifen. No differences in parasitemia and mortality were observed between control mock-treated and tamoxifen-treated mice.

Rates of antimicrobial resistance in latin america (2004-2007) and in vitro activity of the glycylcycline tigecycline and of other antibiotics

As a part of the Tigecycline Evaluation and Surveillance Trial (T.E.S.T.), Gram-positive and Gram-negative bacterial isolates were collected from 33 centers in Latin America (centers in Argentina, Brazil, Chile, Colombia, Guatemala, Honduras, Jamaica, Mexico, Panama, Puerto Rico, and Venezuela) from January 2004 to September 2007. Argentina and Mexico were the greatest contributors of isolates to this study. Susceptibilities were determined according to Clinical Laboratory Standards Institute guidelines. Resistance levels were high for most key organisms across Latin America: 48.3% of Staphylococcus aureus isolates were methicillin-resistant while 21.4% of Acinetobacter spp. isolates were imipenem-resistant. Extended-spectrum β-lactamase were reported in 36.7% of Klebsiella pneumoniae and 20.8% of E. coli isolates. Tigecycline was the most active agent against Gram-positive isolates. Tigecycline was also highly active against all Gram-negative organisms, with the exception of Pseuodomonas aeruginosa, against which piperacillin-tazobactam was the most active agent tested (79.3% of isolates susceptible). The in vitro activity of tigecycline against both Gram-positive and Gram-negative isolates indicates that it may be an useful tool for the treatment of nosocomial infections, even those caused by organisms that are resistant to other antibacterial agents.

Trypanosoma cruzi benznidazole susceptibility in vitro does not predict the therapeutic outcome of human Chagas disease

Therapeutic failure of benznidazole (BZ) is widely documented in Chagas disease and has been primarily associated with variations in the drug susceptibility of Trypanosoma cruzi strains. In humans, therapeutic success has been assessed by the negativation of anti-T. cruzi antibodies, a process that may take up to 10 years. A protocol for early screening of the drug resistance of infective strains would be valuable for orienting physicians towards alternative therapies, with a combination of existing drugs or new anti-T. cruzi agents. We developed a procedure that couples the isolation of parasites by haemoculture with quantification of BZ susceptibility in the resultant epimastigote forms. BZ activity was standardized with reference strains, which showed IC50 to BZ between 7.6-32 µM. The assay was then applied to isolates from seven chronic patients prior to administration of BZ therapy. The IC50 of the strains varied from 15.6 ± 3-51.4 ± 1 µM. Comparison of BZ susceptibility of the pre-treatment isolates of patients considered cured by several criteria and of non-cured patients indicates that the assay does not predict therapeutic outcome. A two-fold increase in BZ resistance in the post-treatment isolates of two patients was verified. Based on the profile of nine microsatellite loci, sub-population selection in non-cured patients was ruled out.

Antibiosis and dark-pigments secretion by the phytopathogenic and environmental fungal species after interaction in vitro with a Bacillus subtilis isolate

In this work, different reactions in vitro between an environmental bacterial isolate and fungal species were related. The Gram-positive bacteria had terminal and subterminal endospores, presented metabolic characteristics of mesophilic and acidophilic growth, halotolerance, positive to nitrate reduction and enzyme production, as caseinase and catalase. The analysis of partial sequences containing 400 to 700 bases of the 16S ribosomal RNA gene showed identity with the genus Bacillus. However, its identity as B. subtilis was confirmed after analyses of the rpoB, gyrA, and 16S rRNA near-full-length sequences. Strong inhibitory activity of environmental microorganisms, such as Penicillium sp, Aspergillus flavus, A. niger, and phytopathogens, such as Colletotrichum sp, Alternaria alternata, Fusarium solani and F. oxysporum f.sp vasinfectum, was shown on co-cultures with B. subtilis strain, particularly on Sabouraud dextrose agar (SDA) and DNase media. Red and red-ochre color pigments, probably phaeomelanins, were secreted by A. alternata and A. niger respectively after seven days of co-culture.

Chemical constituents of the volatile oil from leaves of Annona coriacea and in vitro antiprotozoal activity

The essential oil of the leaves from Annona coriacea Mart., Annonaceae, was extracted by hydrodistillation in a Clevenger apparatus and analyzed by GC/MS and GC/FID. The oil yield was 0.05% m/m. Sixty compounds were identified, in a complex mixture of sesquiterpenes (76.7%), monoterpenes (20.0%) and other constituents (3.3%). Bicyclogermacrene was its major compound (39.8%) followed by other sesquiterpenes. Most of the monoterpenes were in low concentration (<1%). Only β-pinene and pseudolimonene presented the highest level of 1.6%. The volatile oil presented anti-leishmanial and trypanocidal activity against promastigotes of four species of Leishmania and trypomastigotes of Trypanosoma cruzi, showing to be more active against Leishmania (L.) chagasi (IC50 39.93 µ g/mL) (95% CI 28.00-56.95 µ g/mL).

Marcador in vitro da resposta glicêmica dos alimentos como ferramenta de auxílio à prescrição e avaliação de dietas

As dietas de baixo índice glicêmico e baixa carga glicêmica têm sido associadas à redução do risco de doenças crônicas. Por esse motivo há um interesse crescente na sua aplicação para avaliação e orientação nutricional. No entanto, existem limitações quanto ao uso de dados publicados de índice glicêmico e carga glicêmica, pela variedade e formas de processamento dos alimentos vegetais existentes. Devido à dificuldade de realização de ensaios in vivo, uma vez que são custosos, trabalhosos, invasivos e necessitam de período considerável de experimentação, foram desenvolvidas metodologias in vitro que, a partir da velocidade de digestão dos carboidratos, permitem estimar o índice glicêmico dos alimentos de forma prática, simples e econômica. O presente trabalho apresenta o uso de um marcador in vitro, o índice de hidrólise, na estimativa do índice glicêmico e da carga glicêmica, o método mais empregado por pesquisadores brasileiros, visando à sua aplicação por profissionais da área de Nutrição. Os cálculos e as interpretações para estimativa do Índice glicêmico e da carga glicêmica são apresentados por meio de um exemplo prático com alguns alimentos brasileiros e com o grão de amaranto submetido a diferentes processamentos. Na ausência de dados referentes à resposta glicêmica do alimento de interesse, os valores do marcador in vitro podem ser utilizados para estimar o índice glicêmico e a carga glicêmica dos alimentos. Porém, este marcador não deve ser utilizado indiscriminadamente, uma vez que leva em consideração apenas os fatores intrínsecos aos alimentos que influenciam o aproveitamento dos carboidratos disponíveis.

Perfil de sensibilidade microbiana in vitro de linhagens de Staphylococcus spp. isoladas de vacas com mastite subclínica

Objetivou-se com este estudo avaliar a sensibilidade antimicrobiana in vitro de 291 isolados de Staphylococcus spp. recuperados de amostras de leite de vacas com mastite subclínica, em 15 propriedades rurais localizadas na Região Metropolitana do Recife (A), Agreste (B) e Zona da Mata (C) do estado de Pernambuco. Dos 291 isolados, 170(58,4%) foram classificados como Staphylococcus coagulase negativa (SCN), 84(28,9%) como Staphylococcus aureus e 37(12,7%) como Staphylococcus coagulase positiva (SCP). Para o estudo do perfil de sensibilidade a antimicrobianos empregou-se a técnica de difusão em discos, foram avaliadas 16 drogas antimicrobianas utilizadas no tratamento das mastites. O antibiótico que apresentou melhor eficácia in vitro foi a associação entre neomicina + bacitracina + tetraciclina com percentuais de 98,4%, 99,3%, 89,7% para as regiões A, B e C, respectivamente. O antibiótico menos eficaz foi a ampicilina que apresentou 56,5% de resistência para as amostras da região A, 72,8% para a região B e 71,8% na região C. Os resultados obtidos mostram a necessidade da realização periódica de testes de sensibilidade in vitro, pois existem variações no perfil de sensibilidade e resistência que podem comprometer o tratamento do animal bem como os programas de controle da mastite bovina causada pelo Staphylococcus spp.

pH do meio de cultivo e crescimento de plântulas de ginseng brasileiro cultivadas in vitro

O presente trabalho objetivou avaliar o efeito do pH do meio de cultivo sobre alguns parâmetros de crescimento da Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen cultivada in vitro, bem como checar se o crescimento dos explantes altera o pH do meio ao longo do período de cultivo. Foram testados quatro tratamentos constituídos de distintos valores de pH (3,7; 5,0; 6,0 e 7,5) do meio de cultivo. O pH do meio de cultivo foi ajustado antes da inclusão do agar (6g L-1 - Merck) e da autoclavagem. Como fonte de explantes foram utilizadas segmentos nodais de plantas previamente estabelecidas in vitro em meio MS. Dos nove aos 15 dias após a inoculação (DAI) dos segmentos nodais, verificou-se maior número de raízes em pH 6,0 e o menor no pH 7,5. Aos 35 DAI, o comprimento da maior brotação e o número total de segmentos nodais por planta foram maiores em torno de pH 6,0. Aos 35 DAI, observou-se menor crescimento em biomassa de raízes em pH 3,7. Já a parte aérea apresentou menor biomassa em pH 7,5. Aos 35 DAI, a produção de matéria fresca e seca total da plântula foi maior em pH próximo a 6,0. Concluiu-se que valores de pH do meio de cultivo próximos a 6,0, ajustados antes da autoclavagem, são ideais para o crescimento da P. glomerata cultivada in vitro. Também se verificou que o crescimento da plântula modificou significativamente o pH do meio de cultivo.

Efeito de medicamentos indicados para a prevenção da mastite bovina no período seco sobre a função fagocítica in vitro de leucócitos do leite de caprinos

O uso de medicamentos antimamíticos específicos para vacas no período seco é indicado para prevenção de infecções na lactação seguinte. Não obstante, a ação das células envolvidas no período de secagem tem fundamental importância para a involução da glândula mamária e seu restabelecimento para a lactação subseqüente. A indisponibilidade de tais medicamentos para uso em cabras tem resultado na extrapolação do uso de produtos recomendados para vacas sem que se considerem as particularidades e diferenças anátomo-fisiológicas entre as espécies bovina e caprina. O presente estudo teve por objetivo avaliar a influência de cinco antimamíticos específicos para vacas secas sobre a função dos fagócitos provenientes de leite caprino. Para tal, fez-se o isolamento de células somáticas de 20 amostras de leite provenientes de 10 cabras lactantes, sem antecedentes de tratamento de mamite nos últimos 30 dias, sob condições higiênico-sanitárias de colheita e com resultados negativos ao cultivo microbiológico do leite. As células aderidas a lamínulas de vidro foram confrontadas com formulações contendo princípios ativos disponíveis no mercado como Gentamicina (M1), Cefalônio Anidro (M2), Ampicilina (M3), Cloxacilina Benzatínica (M4) e Cefapirina Benzatínica (M5). Avaliou-se, por microscopia, a fagocitose de partículas de Zymosan. As médias dos índices de fagocitose das células submetidas ao tratamento com M2 (15,12% ± 16,22), M3 (6,02% ± 7,96), M4 (4,54% ± 5,45) e M5 (2,47% ± 4,64) foram menores (p<0,001) que a média dos índices de fagocitose do grupo controle (40,67% ± 19,68). A média dos índices de fagocitose das células submetidas ao tratamento com M2 foi maior (p<0,05) que as médias dos tratamentos com M3, M4 e M5 enquanto estas foram estatisticamente iguais entre si. As amostras celulares submetidas ao medicamento M1 exibiram adesão insuficiente ou ausente às lamínulas, inviabilizando a avaliação da fagocitose por meio da técnica utilizada. Os resultados obtidos permitem concluir que os medicamentos estudados exerceram influência negativa sobre os fagócitos do leite, porém, esta interferência sobre as funções das células somáticas não pode por si só determinar o insucesso da terapia proposta para o período seco, pois deve ser considerada, outrossim, a eficácia do princípio ativo sobre o patógeno causador do processo infeccioso.

Nutritional characteristics and in vitro digestibility of silages from different corn cultivars harvested at two cutting heights

The objective of this study was to evaluate the nutritional traits and in vitro digestibility of silages from different corn cultivars harvested at two cutting heights. It was evaluated 11 cultivars (Dina 766, Dina 657, Dina 1000, P 3021, P 3041, C 805, C 333, AG 5011, FO 01, Dina co 9621 and BR 205) harvest 5 cm above ground (low) and 5 cm below the intersection of the first ear (high). It was used a random block design (three blocks), arranged in a 11 × 2 factorial scheme. Silages from plants harvested at high cutting height presented average content of dry matter significantly superior to silages from plants harvested at low height. Cultivars FO 01, AG 5011, Dina co 9621 and Dina 766 presented greater content of crude protein than cultivars C 805, P 3041 and P 3021, which presented the lowest contents of this nutrient. The raise in the cut height increased in vitro dry matter true digestibility coefficients and in vitro dry matter digestibility of silage evaluated. The increase in cut height improved nutritive value of silages by decreasing concentrations of fibrous fractions and increasing in vitro dry matter digestibility.

Avaliação in vitro da eficácia de desinfetantes comerciais utilizados no pré e pós-dippingfrente amostras de Staphylococcus spp. isoladas de mastite bovina

Objetivou-se com este estudo avaliar a sensibilidade in vitro de Staphylococcus spp.frente a alguns desinfetantes comerciais utilizados no pré e pós-dipping em vacas leiteiras. Foram testados um total de 60 isolados de Staphylococcus spp. identificados como S. aureus (50) e Staphylococcus coagulase positiva (10) recuperados de glândulas mamárias de vacas com mastite subclínica procedentes das regiões Metropolitana do Recife, Agreste e Zona da Mata do Estado de Pernambuco. O estudo da eficácia dos desinfetantes utilizados no pré e pós-dipping foi realizado utilizando-se os seguintes princípios ativos: cloro (2,5%), iodo (0,57%), clorexidine (2,0%), amônia quaternária (4,0%) e ácido lático (2,0%) em quatro tempos distintos (15", 30", 60" e 300"). Observou-se que 100% de S. aureus foram sensíveis ao iodo, 93,3% sensíveis a clorexidine, 80% sensíveis a amônia, 35,6% sensíveis ao ácido lático e 97,8% resistentes ao cloro no tempo de 60". Com relação a Staphylococcus coagulase positiva (SCP), 100% dos isolados foram sensíveis ao iodo, 81,8% sensíveis a amônia quaternária, 99,9% sensíveis ao ácido lático, 72,7% sensíveis a clorexidine e 100% resistentes ao cloro no tempo de 60". Conclui-se que a maior atividade desinfetante in vitro foi verificada para o iodo e clorexidine frente a S. aureus e do iodo e ácido lático frente aos SCP e que há necessidade de avaliação periódica dos desinfetantes utilizados nas propriedades leiteiras nas regiões estudadas, pois, existem variações no perfil de sensibilidade e resistência aos desinfetantes que podem comprometer os programas de controle da mastite bovina causada por Staphylococcus spp.

Produção in vitro de embriões de ovinos: uma visão crítica do método e de seu resultado a campo

A metodologia de produção in vitro de embriões de ovinos implica no desenvolvimento de meios de maturação, fertilização e cultivo que permitam aumentar a taxa de clivagem e desenvolvimento, tanto para o investimento biotecnológico em programas comerciais, quanto para sua utilização em clonagem e transgenia dessa espécie animal. Do ponto de vista da pesquisa, os ovócitos podem ser obtidos pelas técnicas de punção e slicing a partir de ovários oriundos de matadouros, ou através de aspiração folicular por laparoscopia. Como vantagem, este método permite o uso de uma mesma doadora estimulada hormonialmente em intervalos periódicos, mantida sob rigoroso controle sanitário, o que é de vital importância para a produção de biofármacos em programas que utilisem os ovinos como modelo biológico. Por outro lado, em nosso país a demanda pela multiplicação de animais de alto valor genético, seja pela produtividade ou pelo elevado valor comercial dos mesmos, impõe o desenvolvimento, adaptação e otimização das diferentes metodologias desenvolvidas ao longo dos ultimos anos em laboratórios de referência mundiais. Nesse contexto, cresce de importância o perfeito conhecimento da fisiologia dessa espécie e das raças criadas em nosso país, e da problemática da produção in vitro de seus embriões. Respeitando essas premissas, gerar o desenvolvimento de protocolos que permitam não apenas aumentar a população de ovócitos passíveis de maturação in vitro, mas de sua competência ao desenvolvimento ao estágio de blastocisto, ou, alternativamente, sua transferência a receptoras em estágios precoces do desenvolvimento, evitando assim as conhecidas perdas durante o desenvolvimento in vitro, e o baixo percentual de gestações que chegam a termo, com cordeiro saudáveis. Trata-se de um desafio, que já apresenta os primeiros resultados em nosso país, tanto na produção comercial de embriões produzidos in vitro, quanto em programas de clonagem e transgenia.

Garlic (Allium sativum L.) and ready-to-eat garlic products: in vitro antioxidant activity

Garlic contains polyphenol and sulphur compounds, which are responsible for its antioxidant activity (AA). This study aimed at evaluating the AA of fresh garlic and its commercialised products and their shelf life. Fresh garlic (FG) and its products, i.e. chopped with salt (CGS), chopped without salt (CG), fried (FRG) and mixed garlic (FG with dehydrated garlic; MG) antioxidant activity was evaluated by three different methods: DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) assay, ß-carotene/linoleic acid assay and Rancimat® method. Amongst all the analysed products, fried garlic presented the highest antioxidant activity. The free radical-scavenging activity decreased during the shelf life of all analysed products that correlated with the decrease in the total polyphenol content. Our findings suggest that some compounds other than phenol may have contributed towards this outcome

Evaluation of Antiproliferative, Anti-Type 2 Diabetes, and Antihypertension Potentials of Ellagitannins from Strawberries (Fragaria x ananassa Duch.) Using In Vitro Models

Strawberries represent the main source of ellagic acid derivatives in the Brazilian diet, corresponding to more than 50% of all phenolic compounds found in the fruit. There is a particular interest in the determination of the ellagic acid content in fruits because of possible chemopreventive benefits. In the present study, the potential health benefits of purified ellagitannins from strawberries were evaluated in relation to the antiproliferative activity and in vitro inhibition of alpha-amylase, alpha-glucosidase, and angiotensin I-converting enzyme (ACE) relevant for potential management of hyperglycemia and hypertension. Therefore, a comparison among ellagic acid, purified ellagitannins, and a strawberry extract was done to evaluate the possible synergistic effects of phenolics. In relation to the antiproliferative activity, it was observed that ellagic acid had the highest percentage inhibition of cell proliferation. The strawberry extract had lower efficacy in inhibiting the cell proliferation, indicating that in the case of this fruit there is no synergism. Purified ellagitannins had high alpha-amylase and ACE inhibitory activities. However, these compounds had low alpha-glucosidase inhibitory activity. These results suggested that the ellagitannins and ellagic acid have good potential for the management of hyperglycemia and hypertension linked to type 2 diabetes. However, further studies with animal and human models are needed to advance the in vitro assay-based biochemical rationale from this study.

Evaluation of Indigenous Grains from the Peruvian Andean Region for Antidiabetes and Antihypertension Potential Using In Vitro Methods

The health-relevant functionality of 10 thermally processed Peruvian Andean grains (five cereals, three pseudocereals, and two legumes) was evaluated for potential type 2 diabetes-relevant antihyperglycemia and antihypertension activity using in vitro enzyme assays. Inhibition of enzymes relevant for managing early stages of type 2 diabetes such as hyperglycemia-relevant alpha-glucosidase and alpha-amylase and hypertension-relevant angiotensin I-converting enzyme (ACE) were assayed along with the total phenolic content, phenolic profiles, and antioxidant activity based on the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical assay. Purple corn (Zea mays L.) (cereal) exhibited high free radical scavenging-linked antioxidant activity (77%) and had the highest total phenolic content (8 +/- 1 mg of gallic acid equivalents/g of sample weight) and alpha-glucosidase inhibitory activity (51% at 5 mg of sample weight). The major phenolic compound in this cereal was protocatechuic acid (287 +/- 15 mu g/g of sample weight). Pseudocereals such as Quinoa (Chenopodium quinoa Willd) and Kaniwa (Chenopodium pallidicaule Aellen) were rich in quercetin derivatives (1,131 +/- 56 and 943 +/- 35 mu g [expressed as quercetin aglycone]/g of sample weight, respectively) and had the highest antioxidant activity (86% and 75%, respectively). Andean legumes (Lupinus mutabilis cultivars SLP-1 and H-6) inhibited significantly the hypertension-relevant ACE (52% at 5 mg of sample weight). No alpha-amylase inhibitory activity was found in any of the evaluated Andean grains. This in vitro study indicates the potential of combination of Andean whole grain cereals, pseudocereals, and legumes to develop effective dietary strategies for managing type 2 diabetes and associated hypertension and provides the rationale for animal and clinical studies.