Transmissão sexual de Toxoplasma gondii (Nicolle & Manceaux, 1909) em ovinos (Ovis aries)

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Perfil da expressão gênica induzida pela infecção experimental por Brucella ovis em tecidos reprodutivos e linfóides ovinos

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Avaliação de diferentes diluentes na criopreservação de sêmen ovino (Ovis aries)

Durante a criopreservação são inúmeras as alterações sofridas pelas células espermáticas, o que conduz à queda na motilidade e perda da sua viabilidade pós-descongelação. Por este motivo, surge a necessidade de aperfeiçoar os processos de tecnologia do sêmen, principalmente quanto ao uso de diluentes. O objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade de espermatozóides ovinos, submetidos ao processo de diluição e criopreservação, utilizando-se 3 diluentes (TES, TRIS e PBS) e 3 tempos de equilíbrio (4h, 8h e 12h), sendo o estudo dividido em 9 grupos: TES-4h, TES-8h, TES-12h, TRIS-4h, TRIS-8h, TRIS-12h, PBS-4h, PBS-8h e PBS-12h. Após a colheita, o sêmen foi avaliado macro e microscopicamente, e prédiluído nas soluções TES, TRIS e PBS, no entanto sem a adição dos crioprotetores (Solução A), onde permaneceram por 1h. Posteriormente, o sêmen foi diluído com as soluções TES, TRIS e PBS, já contendo os crioprotetores, novamente avaliado, para então ser envasado, sendo submetido aos diferentes tempos de equilíbrio, e em seguida, congelado. Após a descongelação, foi avaliado a motilidade e o vigor, e após o TTR, a motilidade, o vigor e o desprendimento do acrossoma. Na criopreservação com TRIS, a motilidade e o vigor foram estatisticamente similares (p>0,05) no sêmen congelado com equilíbrio de 4h (17,2% e 1,6), 8h (22,4% e 2,1) e 12h (14,8% e 1,6) (p>0,05). Após o TTR não foi observado diferença estatística (p>0,05) para a motilidade e o vigor em 4h (10,4% e 1,1) e em 12h (10,0% e 1,2) de equilíbrio, porém houve um aumento em 8h (15,6% e 1,6) (p<0,05). Não houve diferença estatística (p>0,05) no índice de desprendimento do acrossoma entre 4h (35,1) e 12h (37,6) de equilíbrio, havendo uma redução nestes índices em 8h (30,4) (p<0,05). Na criopreservação com TES, a motilidade do sêmen congelado com equilíbrio de 4h (24,8%) e 12h (27,6%) foram estatisticamente similares (p>0,05), sendo que o tempo de 8h (40,4%) diferiu estatisticamente dos demais. O vigor foi estatisticamente similar (p>0,05) para o sêmen descongelado com equilíbrio de 4h (2,0), 8h (2,6) e 12h (2,3), não diferindo estatisticamente (p>0,05). Após o TTR não foi observado diferença estatística (p>0,05) para a motilidade em 4h (18,8%) e em 12h (17,4%) de equilíbrio, porém houve um aumento em 8h (29,6%) (p<0,05). Em relação ao vigor e ao desprendimento do acrossoma não houve diferença estatística (p>0,05) em 4h (2,0 e 35,8), 8h (2,1 e 33,4) e 12h (1,8 e 42,2) de equilíbrio. Na criopreservação com o PBS, não foram observados motilidade e vigor após a descongelação. Esses resultados indicam que o diluente à base de TES e o tempo de equilíbrio de 8h mostraram-se mais adequados para a diluição e congelação de sêmen ovino.

Estudo de genômica comparativa de corynebacterium pseudotuberculosis linhagem 226 (biovar ovis)

Corynebacterium pseudotuberculosis é uma bactéria Gram-positiva, intracelular facultativa, nãoesporulante, não-capsulada e sem mobilidade, contudo possui fímbria, e pode assumir formas cocóides e filamentosas (pleomórfica), além disto, apresenta crescimento ótimo à 37°C. Este patógeno apresenta dois biovares: ovis que geralmente acomete pequenos ruminantes, e causa a doença linfadenite caseosa, e biovar equi, mais comum em equinos, bovinos, camelídeos, e bubalinos causando a Linfangite ulcerativa. A infecção por esta bactéria pode levar a condenação das carcaças e redução de lã (em ovinos e caprinos), leite e carne destes animais, e consequentemente a perdas econômicas para a indústria agropecuária mundial. Atualmente, ainda não existe uma vacina eficaz para estas doenças. A fim de obter um maior entendimento biológico entre as espécies o presente trabalho tem como objetivo principal analisar, por meio da genômica comparativa a linhagem C. pseudotuberculosis 226 biotipo ovis isolada de um caprino na Califórnia com outras linhagens do biovarar ovis e equi. Na análise de sintenia entre as linhagens foi possível identificar que a linhagem 226 apresenta alta conservação da ordem gênica entre as linhagens do biótipo ovis. Através de análises filogenômicas foi possível identificar que as linhagens I19 e 267 apresentaram maior e menor proximidade filogenética com a linhagem 226. A linhagem 1/06-A foi a que apresentou maior proximidade filogenômica entre as linhagens do biovar equi, quando comparadas a linhagem 226. Foram preditas 8 ilhas de patogenicidade, estando presente na ilha 1 os genes relacionados a virulência de C. pseudotuberculosis mais bem descritos na literatura. Não houveram regiões novas relacionadas a genes de virulência entre nenhuma das linhagens. Foram identificados 248 genes ortólogos entre as linhagens I19, 267 e 226 e 282 genes ortólogos entre as linhagens 258,1/06-A e 226. Com base nesse estudo é possível inferir que as linhagens do biovar ovis possuem um repertório gênico pouco variado e que as linhagens do biovar equi apresentam uma quantidade menor de genes compartilhados com a linhagem 226, corroborando com a diversidade gênica entre os biovares.

Eficácia acaricida de uma emulsão contendo 10% de óleo de nim (Azadirachta indica) no controle de Psoroptes ovis em coelhos naturalmente infestados

O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia de uma emulsão contendo 10% de óleo de nim, Azadirachta indica, no controle de Psoroptes ovis em coelhos naturalmente infestados. Foram utilizados 12 coelhos separados aleatoriamente em dois grupos de seis animais cada. O grupo controle permaneceu sem tratamento, enquanto que o grupo tratado recebeu a formulação em teste, contendo 10% de Nim, borrifando ambos os condutos auditivos, uma vez ao dia, por sete dias consecutivos. Os animais foram avaliados diariamente para observação de possíveis efeitos adversos do produto. Nos dias +3, +7, +14,+21, +28 e +35 foi coletado material de todos os animais para avaliação da presença de ácaros vivos. Os coelhos do grupo controle apresentavam ácaros em ambos os condutos auditivos em todos os dias de observação. O grupo tratado apresentou eficácia de 41,7% no dia +3 e 100% a partir do dia +7 até o dia +35. O produto demonstrou ser eficaz no tratamento da sarna psoróptica em coelhos. Entretanto, todos os animais tratados apresentaram reações dermatológicas, tais como alopecia e hiperemia no local de aplicação do produto, variando de baixa a média severidade.

Prevalência de nematódeos em ovinos (Ovis aries) pertencentes a diferentes microrregiões do estado de São Paulo, Brasil

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Aspects of toxoplasma infection on the reproductive system of experimentally infected rams (ovis aries)

Eight reproductive rams with no prior reproductive disease were distributed into three groups of infection with T. gondii: GI, 3 rams, 2.0 x 10(5) P strain oocysts; GII, 3 rams, 1.0 x 10(6) RH strain tachyzoites; GIII, 2 control rams. Clinical parameters were measured and serological evaluations (IIF) were performed. Presence of the parasite in the semen was investigated by PCR and bioassay techniques. The rams presented clinical alterations (hyperthermia and apathy) related to toxoplasmosis in both groups infected with Toxoplasma gondii. All the inoculated rams responded to antigenic stimulus, producing antibodies against T. gondii from postinoculation day 5 onwards. In ovine groups I and II, the greatest titers observed were 1 : 4096 and 1 : 8192, respectively. In semen samples collected from these two groups, the presence of T. gondii was detected by bioassay and PCR. This coccidian was isolated (bioassay and PCR) in tissue pools (testicles, epididymis, seminal vesicle, and prostrate) from two rams infected presenting oocysts and in one presenting tachyzoites.

Parasitism by Oestrus ovis: Influence of sheep breed and nematode infections

Previous studies showed that Santa Ines (SI) hair sheep were more resistant to gastrointestinal nematode infections (GIN) than Ile de France (IF) sheep. The present experiment aimed to evaluate if that reported resistance difference against GIN also occurred against Oestrus ovis infestation and also to evaluate the influence of O. ovis infestation on the gastrointestinal nematodes (GIN) infections. SI (n = 12) and IF (n = 12) young male lambs were weaned at 2 months of age and moved to a paddock (0.3 ha) with Brachiaria decumbens grass, where they also received concentrate ration. The animals were kept together during the experimental period (September to early December 2009). Fecal and blood samples were taken from all animals every 2 weeks and body weight and nasal discharge score (oestrosis clinic signs) were recorded on the same occasion. In early December 2009, all lambs were sacrificed and O. ovis larvae and GIN were recovered, counted and identified according to the larval stage. All animals were infested by different larval instars of O. ovis without any statistical difference between breeds (P > 0.05). The SI lambs had an average of 24.8 larvae, and the intensity of infection ranged between 14 and 39 larvae, while the IF lambs showed an average of 23.5 larvae with the minimum and maximum from 11 to 36 larvae, respectively. SI lambs presented the lowest nematode fecal egg counts (FECs) and the lowest mean numbers of Haemonchus contort us, Trichostrongylus colubriformis and Strongyloides papillosus, however, there was no significant differences between group means (P > 0.05). Inverse relationship between numbers of O. ovis larvae and gastrointestinal nematodes was observed in both breeds. SI sheep showed a significant increase in blood eosinophils and total IgE serum levels and these variables were negatively correlated with nematode FEC. A negative correlation was observed between total IgE serum level and H. contortus burden in both breeds. In conclusion, there was no breed difference regarding O. ovis infestation and in each breed, animals with more nasal bot fly larvae tended to display smaller worm burden. (C) 2011 Elsevier B.V. All rights reserved.

Molecular cytogenetics and gene mapping in sheep (Ovis aries, 2n = 54)

The development of a completely annotated sheep genome sequence is a key need for understanding the phylogenetic relationships and genetic diversity among the many different sheep breeds worldwide and for identifying genes controlling economically and physiologically important traits. The ovine genome sequence assembly will be crucial for developing optimized breeding programs based on highly productive, healthy sheep phenotypes that are adapted to modern breeding and production conditions. Scientists and breeders around the globe have been contributing to this goal by generating genomic and cDNA libraries, performing genome-wide and trait-associated analyses of polymorphism, expression analysis, genome sequencing, and by developing virtual and physical comparative maps. The International Sheep Genomics Consortium (ISGC), an informal network of sheep genomics researchers, is playing a major role in coordinating many of these activities. In addition to serving as an essential tool for monitoring chromosome abnormalities in specific sheep populations, ovine molecular cytogenetics provides physical anchors which link and order genome regions, such as sequence contigs, genes and polymorphic DNA markers to ovine chromosomes. Likewise, molecular cytogenetics can contribute to the process of defining evolutionary breakpoints between related species. The selective expansion of the sheep cytogenetic map, using loci to connect maps and identify chromosome bands, can substantially contribute to improving the quality of the annotated sheep genome sequence and will also accelerate its assembly. Furthermore, identifying major morphological chromosome anomalies and micro-rearrangements, such as gene duplications or deletions, that might occur between different sheep breeds and other Ovis species will also be important to understand the diversity of sheep chromosome structure and its implications for cross-breeding. To date, 566 loci have been assigned to specific chromosome regions in sheep and the new cytogenetic map is presented as part of this review. This review will also summarize the current cytogenomic status of the sheep genome, describe current activities in the sheep cytogenomics research sector, and will discuss the cytogenomics data in context with other major sheep genomics projects.

Proposal of Histophilus somni gen. nov., sp. nov. for the three species incertae sedis 'Haemophilus somnus', 'Haemophilus agni' and 'Histophilus ovis'

Earlier investigations have shown that 'Haemophilus somnus', 'Haemophilus agni' and 'Histophilus ovis' represent the same species. In the present investigation, the taxonomic position of this species is explored further by sequencing the 16S rRNA and rpoB genes of strains that were investigated previously by DNA-DNA hybridization. These results clearly support the allocation of this species to a novel genus within the family PASTEURELLACEAE: The phenotypic separation of Histophilus somni gen. nov., sp. nov. from other members of the family can, for most strains, be based on capnophilia, yellowish pigmentation and indole production. However, due to phenotypic variation, the use of a species-specific PCR test based on the 16S rRNA gene is included in the species description. This is justified by the high sequence similarity of the 16S rRNA gene within the species and the fact that the highest sequence similarity to any other taxon within the family is 93.4 %. The type strain, 8025(T)=ATCC 43625(T)=CCUG 36157(T), was isolated in the USA from a bovine brain with lesions of thromboembolic meningoencephalitis.

Dinâmica do microbioma ruminal de ovinos (Ovis aries) e sua relação com a degradação de biomassa

Considerando a dieta como um fator modulador do microbioma ruminal, neste trabalho objetivou-se investigar o impacto do bagaço da cana-de-açúcar sobre a composição e funcionalidade das espécies microbianas residentes no rúmen de carneiros (Ovis aries). Foram utilizados seis animais machos fistulados de O. aries, dos quais três foram alimentados com uma dieta composta por 70% de volumoso e 30% de concentrado (tratamento controle) e outros três animais alimentados com uma dieta similar a anterior, mas com 14% do volumoso substituído por bagaço de cana-de-açúcar (tratamento bagaço). O conteúdo ruminal (líquido e fibra) foram amostrados quinzenalmente durante 60 dias. A partir dessas amostras foram acessadas a estrutura e a composição da comunidade microbiana pela extração de DNA total e amplificação das regiões V3 e V6-V7 do gene 16S rRNA bacteriano e a região intergênica fúngica (ITS2). Além disso, foram feitas análises metagenômicas e metatranscriptômicas de comunidade microbianas enriquecidas em fibra ruminal para identificar enzimas lignocelulolíticas expressas. As frações líquida e fibrosa do conteúdo ruminal de O. aries revelaram uma comunidade bacteriana dominada principalmente por Bacteroidetes e Firmicutes ao longo de todo período experimental. Dois gêneros, Prevotella e Ruminococcus representaram 20% e 4% da comunidade bacteriana ruminal, respectivamente. Para a comunidade fúngica o filo Neocallimastigomycota representou 91% das sequências e os principais gêneros deste filo foram Piromyces, Neocallimastix, Orpinomyces, Anaeromyces, Caecomyces e Cyllamyces aderidos a fibra ruminal. O gênero Caecomyces, foi significativamente mais abundante na fibra ruminal de animais que se alimentaram de bagaço de cana-de açúcar. Além disso, foi observado um aumento significativo na frequência de enzimas como, por exemplo, 1,4-α-glucano, α-galactosidase, endo 1,4-β-xilanase, β- xilosidase, xilose isomerase, celobiose fosforilase e α-N-arabinofuranosidase no tratamento com bagaço de cana-de-açúcar. Considerando que a recuperação de enzimas a partir de comunidades microbianas naturalmente selecionadas para a degradação de biomassa é uma estratégia promissora para superar a atual ineficiência da ação enzimática na produção industrial de biocombustíveis, os resultados deste trabalho representam a possibilidade de aumentar a capacidade de recuperação ou descoberta de enzimas a partir de ruminantes, ou ainda, a possibilidade de manipular a estrutura do microbioma do rúmen para usá-lo como fonte de inóculo enriquecido em processos industriais de degradação de biomassa.

OvisOme: atualização da base de dados de Ovis aries

Introduction: The Omics sciences are part of the research and diagnostic routines in human health. However, their application in veterinary sciences is still sparse, albeit the increasing number of proteomics studies published, especially regarding farm animals. The amount of information accumulated by these high throughput techniques, makes the existence of specialized databases fundamental. These databases are essential to store, annotate and make available to the scientific community, all the information gathered by the different omics studies, so that researchers can use it to understand the physio pathological mechanisms underlying sheep diseases, as well as to develop new and improved diagnostic, prognostic and therapeutic strategies. Objetive: The aim of this work is to present the OvisOme database and to demosntrate how it can be used to understand the molecular mechanisms urderlying sheep disease. Methodologies: OvisOme compiles all proteins identified by proteomics studies of Ovis aries. The proteins are annotated as to the sample characterization, the proteomics techniques used and all the data the authors refer regarding the donor sheep’s health. Results: The database currently has 1451 proteins, associated to 8 diseases and 10 breeds. When compared to other proteomics databases, the OvisOme stores and displays more information than other databases not specific for sheep, such as UniProt. Conclusion: OvisOme is a valuable tool for the study of the molecular mechanisms underlying sheep health and disease.