OX133, a monoclonal antibody recognizing protein-bound N-ethylmaleimide for the identification of reduced disulfide bonds in proteins

In vivo, enzymatic reduction of some protein disulfide bonds, allosteric disulfide bonds, provides an important level of structural and functional regulation. The free cysteine residues generated can be labeled by maleimide reagents, including biotin derivatives, allowing the reduced protein to be detected or purified. During the screening of monoclonal antibodies for those specific for the reduced forms of proteins, we isolated OX133, a unique antibody that recognizes polypeptide resident, N-ethylmaleimide (NEM)-modified cysteine residues in a sequence-independent manner. OX133 offers an alternative to biotin-maleimide reagents for labeling reduced/alkylated antigens and capturing reduced/alkylated proteins with the advantage that NEM-modified proteins are more easily detected in mass spectrometry, and may be more easily recovered than is the case following capture with biotin based reagents.

Intracellular trafficking, localization, and mobilization of platelet-borne thiol isomerases

OBJECTIVE: Thiol isomerases facilitate protein folding in the endoplasmic reticulum, and several of these enzymes, including protein disulfide isomerase and ERp57, are mobilized to the surface of activated platelets, where they influence platelet aggregation, blood coagulation, and thrombus formation. In this study, we examined the synthesis and trafficking of thiol isomerases in megakaryocytes, determined their subcellular localization in platelets, and identified the cellular events responsible for their movement to the platelet surface on activation. APPROACH AND RESULTS: Immunofluorescence microscopy imaging was used to localize protein disulfide isomerase and ERp57 in murine and human megakaryocytes at various developmental stages. Immunofluorescence microscopy and subcellular fractionation analysis were used to localize these proteins in platelets to a compartment distinct from known secretory vesicles that overlaps with an inner cell-surface membrane region defined by the endoplasmic/sarcoplasmic reticulum proteins calnexin and sarco/endoplasmic reticulum calcium ATPase 3. Immunofluorescence microscopy and flow cytometry were used to monitor thiol isomerase mobilization in activated platelets in the presence and absence of actin polymerization (inhibited by latrunculin) and in the presence or absence of membrane fusion mediated by Munc13-4 (absent in platelets from Unc13dJinx mice). CONCLUSIONS: Platelet-borne thiol isomerases are trafficked independently of secretory granule contents in megakaryocytes and become concentrated in a subcellular compartment near the inner surface of the platelet outer membrane corresponding to the sarco/endoplasmic reticulum of these cells. Thiol isomerases are mobilized to the surface of activated platelets via a process that requires actin polymerization but not soluble N-ethylmaleimide-sensitive fusion protein attachment receptor/Munc13-4-dependent vesicular-plasma membrane fusion.

Balancing the role of the dental school in teaching, research and patient care; including care for underserved areas

Inequalities within dentistry are common and are reflected in wide differences in the levels of oral health and the standard of care available both within and between countries and communities. Furthermore there are patients, particularly those with special treatment needs, who do not have the same access to dental services as the general public. The dental school should aim to recruit students from varied backgrounds into all areas covered by the oral healthcare team and to train students to treat the full spectrum of patients including those with special needs. It is essential, however, that the dental student achieves a high standard of clinical competence and this cannot be gained by treating only those patients with low expectations for care. Balancing these aspects of clinical education is difficult. Research is an important stimulus to better teaching and better clinical care. It is recognized that dental school staff should be active in research, teaching, clinical work and frequently administration. Maintaining a balance between the commitments to clinical care, teaching and research while also taking account of underserved areas in each of these categories is a difficult challenge but one that has to be met to a high degree in a successful, modern dental school.

Linha é dentro?: uma discussão sobre valores, esportes e significados

O presente trabalho busca estudar o modo como brasileiros que moram no Rio de Janeiro valorizam produtos e atividades esportivas. A partir da tipologia proposta por Holbrook (1999), procuramos caracterizar comportamentos de consumo esportivo, produzindo, desta forma, observações que servissem como subsídios para estratégias de marketing. Os perfis de consumo apresentados poderão ser fontes de informações importantes não só para organizações do setor esportivo como também do setor de entretenimento. Os dados analisados neste estudo foram coletados em entrevistas em profundidade, de acordo com o método descrito por McCracken (1988). Nestas entrevistas, exploramos os aspectos experienciais do consumo esportivo e suas relações com comportamentos de compra dos entrevistados. Realizadas as entrevistas, recorremos ao modelo de tipologia de valores do consumidor proposto por Holbrook (1999) para categorizar os tipos de consumo esportivo. Concluiu-se que quatro dos valores propostos por Holbrook são recorrentes no discurso dos entrevistados.

A falsa ilusão de ter: investigando os tipos de valores para o consumidor de falsificações

To better understand the way counterfeit consumers value their consumptions the present work will take the Typology of Consumer Value proposed by Holbrook (1994, 1996, 1999 and 2006) as the chosen approach, given its ability to capture the nature of consumption experiences e, therefore, to identify the types of value in the consumer experience. The analysis presented on this work was based on in-deep interviews with Brazilian counterfeit consumers and the most frequent aspects presented during the interviews were the consumer value as play, followed by esteem and status, and while the values excellence, efficiency, ethics and spirituality were observed with a lower frequency, the value aesthetics was not observed during the interviews. These results suggest the possibility of further studies on the subject.

A narrativa do mito: observando o consumo do luxo como espiritualidade

O consumo como espiritualidade de acordo com Holbrook (1999) e o consumo do luxo de acordo com Alléres (2000) foram os temas iniciais usados neste trabalho como forma de buscar conhecer o que o consumidor tem a dizer a respeito de suas experiências de compras especiais e marcantes. A partir da Taxonomia do Valor de Consumo de Holbrook (1999), este trabalho procurou responder à seguinte pergunta: como a narrativa do mito descreve o consumo enquanto eSpiritualidade? Nas entrevistas realizadas foi usada uma abordagem interpretativa onde os informantes pudessem fazer emergir livremente suas considerações sobre o assunto. Pelos dados levantados, a narrativa do mito parece ser usada como metáfora para descrever o consumo como espiritual idade. As categorias êmicas encontradas sugerem um direcionamento para os esforços de marketing de quem pretende proporcionar uma experiência relevante ao consumidor, principalmente a partir de uma perspectiva metafórica.

Valor percebido pelo consumidor : um estudo exploratório em relação às lojas onde realiza compras de alimentos

No Brasil, os varejos de grande escala estão perdendo espaço para os formatos menores como pequenos supermercados, mercadinhos, feiras, padarias, entre outros. Além disso, a inflação baixa e os preços sem grandes diferenças nos vários formatos de varejo criaram opções para os consumidores comprarem em várias lojas. Estes buscam realizar suas compras em locais que diminuam o ônus e aumentem o bônus na realização das compras. Portanto, os diversos formatos varejistas devem adquirir conhecimento a respeito do que os seus consumidores percebem como sacrifício (o ônus) ou benefício (o bônus) destas atividades, para poderem oferecer proposições mercadológicas coerentes com as demandas existentes. Para oferecer subsídios para melhor compreensão desse fenômeno, formulou-se o seguinte problema de pesquisa: quais os ônus e bônus que os consumidores percebem existir na escolha de um determinado formato de loja para realizarem suas compras de alimentos? Uma revisão do conhecimento a respeito de valor percebido e de seus antecedentes se fez necessária para responder a essa questão. A qualidade percebida e o sacrifício percebido (esforços e riscos) foram estudados. Também foi efetuado um estudo da evolução dos modelos de valor percebido apresentados ao longo dos anos, com o intuito de estabelecer o relacionamento dos construtos e variáveis presentes nos modelos. Uma pesquisa exploratória foi conduzida junto a consumidores destes estabelecimentos em uma média cidade brasileira que possui em seu território a diversidade de formatos varejistas presentes no país. Foram feitas entrevistas em profundidade com 51 donas-de-casa que realizam a compra de alimentos de suas residências e têm escolaridade acima da 4ª série, sendo 26 de baixa e 25 de alta renda. Os resultados apontaram a grande preocupação das consumidoras principalmente com a questão do preço e do tempo de viagem (proximidade), os quais são considerados como dois esforços pela literatura. Os valores de Holbrook (1999) também foram analisados segundo a ótica das consumidoras. Além do tempo de viagem, os outros esforços não-monetários de tempo foram categorizados, sendo que um dos mais destacados foi o tempo de espera (filas), seguido pelos tempos de compra e de monitoramento. Diversos riscos foram percebidos pelas consumidoras de alimentos, destacando-se aqueles relacionados tanto à loja varejista quanto aos produtos comprados, bem como outros associados à manipulação dos produtos pelos varejistas. Os diversos formatos varejistas apresentaram peculiaridades, sendo que as consumidoras se valem desses atributos positivos e negativos para realizarem suas escolhas. Muitas delas estão pautadas também nas características sócio-econômicas e nos recursos disponíveis às pessoas para que consigam ter acesso aos tipos de lojas. Na conclusão do trabalho são apresentadas limitações e sugestões para novas pesquisas.

Investigando a experiência da fruição do futebol : estádio versus televisão

A pesquisa procura estudar a forma como o espetáculo futebol é percebido e valorizado por espectadores no estádio e na televisão. O modelo proposto por Holbrook (1999) sustenta a análise de narrativas que relatam comportamentos dos consumidores nos dois ambientes: arquibancada e sofá. Com base na abordagem sugerida por McCracken (1988), os dados foram coletados por entrevistas pessoais, em profundidade, que possibilitaram explorar as experiências dos entrevistados como espectadores regulares de futebol na televisão e no estádio. Foram analisados os tipos de valor do modelo de Holbrook (1999) mais representativos encontrados nos relatos. As narrativas indicaram substantivas diferenças entre os valores percebidos ao longo das experiências na arquibancada e no sofá. Esta dualidade serviu de fio condutor para a emergência de outros duplos conceituais extraídos das entrevistas - que se revelam subsídios para o desenvolvimento de estratégias de marketing. Concluiu-se que a valorização da partida de futebol é influenciada pela forma com a qual o espectador constrói os significados na experiência de consumo. Percebeu-se, desta forma, uma associação entre a abordagem semiológica (Eco, 2001), para a qual o valor (da informação) decorre das possibilidades de significados possíveis; e a proposição de Holbrook, para o qual o valor de consumo se sustenta numa vivência interativa. Impõe-se ao gestor, portanto, a missão de executar a tabelinha sofá-arquibancada. De maneira a potencializar seus respectivos atributos para o consumo - como a riqueza simbólica e a riqueza referencial - e a reforçar os traços complementares apontados nas entrevistas.

Loja de experiência, trabalho emocional e consumo: o trabalho dos vendedores e gerente da loja para a transmissão da experiência da marca Chilli Beans

O objetivo desta dissertação é compreender a forma como se estrutura o trabalho dos vendedores e gerente de uma loja de experiência para a transmissão da experiência da marca. O embasamento teórico que deu sustentação à pesquisa aborda discussões sobre o aspecto experiencial do consumo (Holbrook & Hirchsman, 1982b Pine & Gilmore, 2000), experiência da marca (Brakus et al., 2009) e trabalho emocional (Hochschild, 1982; Korczysnki, 2005). Este estudo buscou, através dos métodos shadowing e etnografia de curto prazo, analisar o trabalho dos vendedores e gerente de uma loja de experiência de marca brasileira Chilli Beans, para identificar como estes trabalhadores transmitem a experiência da marca aos consumidores. Os resultados foram coletados durante 45 dias de pesquisa em campo, realizada na loja de experiência da marca Chilli Beans localizada na Rua Oscar Freire, em São Paulo. Ao longo da pesquisa de campo foi possível obter informações sobre a rotina dos trabalhadores, treinamentos, reuniões de avaliação de desempenho e eventos, que proporcionaram a compreensão sobre o trabalho realizado na loja de experiência. Além disso, foram realizadas entrevistas com cinco funcionários da loja, do sexo feminino e masculino, entre 18 e 26 anos, residentes na cidade de São Paulo. Os resultados demonstraram que os trabalhadores utilizam o trabalho emocional para a transmissão da experiência da marca. O trabalho destes vendedores se caracteriza pela busca do atendimento pleno do consumidor, mediante interação emocional, soberania e encantamentos que direcionam o consumidor à aquisição de seus produtos. Para isso, a marca lança mão de treinamentos que objetivam desenvolver as habilidades e técnicas dos vendedores para envolver emocionalmente o consumidor, a fim de direcioná-lo à compra do produto.

CMS physics technical design report, volume II: Physics performance

CMS is a general purpose experiment, designed to study the physics of pp collisions at 14 TeV at the Large Hadron Collider ( LHC). It currently involves more than 2000 physicists from more than 150 institutes and 37 countries. The LHC will provide extraordinary opportunities for particle physics based on its unprecedented collision energy and luminosity when it begins operation in 2007. The principal aim of this report is to present the strategy of CMS to explore the rich physics programme offered by the LHC. This volume demonstrates the physics capability of the CMS experiment. The prime goals of CMS are to explore physics at the TeV scale and to study the mechanism of electroweak symmetry breaking - through the discovery of the Higgs particle or otherwise. To carry out this task, CMS must be prepared to search for new particles, such as the Higgs boson or supersymmetric partners of the Standard Model particles, from the start- up of the LHC since new physics at the TeV scale may manifest itself with modest data samples of the order of a few fb(-1) or less. The analysis tools that have been developed are applied to study in great detail and with all the methodology of performing an analysis on CMS data specific benchmark processes upon which to gauge the performance of CMS. These processes cover several Higgs boson decay channels, the production and decay of new particles such as Z' and supersymmetric particles, B-s production and processes in heavy ion collisions. The simulation of these benchmark processes includes subtle effects such as possible detector miscalibration and misalignment. Besides these benchmark processes, the physics reach of CMS is studied for a large number of signatures arising in the Standard Model and also in theories beyond the Standard Model for integrated luminosities ranging from 1 fb(-1) to 30 fb(-1). The Standard Model processes include QCD, B-physics, diffraction, detailed studies of the top quark properties, and electroweak physics topics such as the W and Z(0) boson properties. The production and decay of the Higgs particle is studied for many observable decays, and the precision with which the Higgs boson properties can be derived is determined. About ten different supersymmetry benchmark points are analysed using full simulation. The CMS discovery reach is evaluated in the SUSY parameter space covering a large variety of decay signatures. Furthermore, the discovery reach for a plethora of alternative models for new physics is explored, notably extra dimensions, new vector boson high mass states, little Higgs models, technicolour and others. Methods to discriminate between models have been investigated. This report is organized as follows. Chapter 1, the Introduction, describes the context of this document. Chapters 2-6 describe examples of full analyses, with photons, electrons, muons, jets, missing E-T, B-mesons and tau's, and for quarkonia in heavy ion collisions. Chapters 7-15 describe the physics reach for Standard Model processes, Higgs discovery and searches for new physics beyond the Standard Model.

The CMS experiment at the CERN LHC

The Compact Muon Solenoid (CMS) detector is described. The detector operates at the Large Hadron Collider (LHC) at CERN. It was conceived to study proton-proton (and lead-lead) collisions at a centre-of-mass energy of 14 TeV (5.5 TeV nucleon-nucleon) and at luminosities up to 10(34)cm(-2)s(-1) (10(27)cm(-2)s(-1)). At the core of the CMS detector sits a high-magnetic-field and large-bore superconducting solenoid surrounding an all-silicon pixel and strip tracker, a lead-tungstate scintillating-crystals electromagnetic calorimeter, and a brass-scintillator sampling hadron calorimeter. The iron yoke of the flux-return is instrumented with four stations of muon detectors covering most of the 4 pi solid angle. Forward sampling calorimeters extend the pseudo-rapidity coverage to high values (vertical bar eta vertical bar <= 5) assuring very good hermeticity. The overall dimensions of the CMS detector are a length of 21.6 m, a diameter of 14.6 m and a total weight of 12500 t.