Mass culture of Undaria gametophyte clones and their use in sporeling culture

Undaria pinnatifida (Harv.) Sur. is one of the three main seaweed species under commercial cultivation in China. In the mid-1990s the annual production was about 20000 tons dry. The supply of healthy sporelings is key to the success of commercial cultivation of Undaria. Previous studies demonstrated that instead of the zoospore collection method, sporelings can be cultured through the use of gametophyte clones. This paper reports the experimental results on mass culture of clones and sporeling raising in commercial scale. Light had an obvious effect on growth of gametophyte clones. Under an irradiance of 80 mumol m(-2) s(-1) and favorable temperature of 22-25degreesC, mean daily growth rate may reach as high as 37%. Several celled gametophyte fragments were sprayed onto the palm rope frame. Gametogenesis occurred after 4-6 days. Juvenile sporeling growth experiments showed that nitrate and phosphate concentrations of 2.9 10(-4) mol 1(-1) and 1.7 10(-5) mol 1(-1) were sufficient to enable the sporelings to maintain a high daily growth rate. Sporelings can reach a length of 1 cm in a month. Since 1997, extension of the clone technique has been carried out in Shandong Province. Large-scale production of sporelings for commercial cultivation of 14 and 31 hectares in 1997 and 1998 had been conducted successfully.

A new method of Laminaria japonica strain selection and sporeling raising by the use of gametophyte clones

One-celled female and male gametophytes of three Laminaria japonica strains were isolated, cultured and gametophyte clones were formed. A technique combining strain selection with sporeling raising by the use of these female and male gametophyte clones was studied. Experiments on 9 different crossing combinations was conducted in November of 1997 in Qingdao, P. R. China. The main economic characteristics, frond length and fresh weight, of sporophytes of different crossing combinations were measured. F-1 sporophytes of No. 2 showed a higher fresh weight and longer length, therefore, No. 2 (Wh860 + x Lid) was selected as a good combination. Its parental female and male gametophyte clones are being mass cultured for sporeling production. By this method, the time needed for strain selection was shortened from 5-6 to 2 years. As compared with the routine method of sporeling raising by the collection of zoospores, the time of sporeling raising of this method decrease by 50%, and the production cost is also reduced by 50%. It is believed that this method will be labour and time saving and a more economic way for strain selection and sporeling raising in L. japonica cultivation industry.

Construction and characterization of two bacterial artificial chromosome libraries of Zhikong scallop, Chlamys farreri Jones et Preston, and identification of BAC clones containing the genes involved in its innate immune system

Large-insert bacterial artificial chromosome (BAC) libraries are necessary for advanced genetics and genomics research. To facilitate gene cloning and characterization, genome analysis, and physical mapping of scallop, two BAC libraries were constructed from nuclear DNA of Zhikong scallop, Chlamys farreri Jones et Preston. The libraries were constructed in the BamHI and MboI sites of the vector pECBAC1, respectively. The BamHI library consists of 73,728 clones, and approximately 99% of the clones contain scallop nuclear DNA inserts with an average size of 110 kb, covering 8.0x haploid genome equivalents. Similarly, the MboI library consists of 7680 clones, with an average insert of 145 kb and no insert-empty clones, thus providing a genome coverage of 1.1x. The combined libraries collectively contain a total of 81,408 BAC clones arrayed in 212 384-well microtiter plates, representing 9.1x haploid genome equivalents and having a probability of greater than 99% of discovering at least one positive clone with a single-copy sequence. High-density clone filters prepared from a subset of the two libraries were screened with nine pairs of Overgos designed from the cDNA or DNA sequences of six genes involved in the innate immune system of mollusks. Positive clones were identified for every gene, with an average of 5.3 BAC clones per gene probe. These results suggest that the two scallop BAC libraries provide useful tools for gene cloning, genome physical mapping, and large-scale sequencing in the species.

Characterization of eastern oyster (Crassostrea virginica Gmelin) chromosomes by fluorescence in situ hybridization with bacteriophage P1 clones

Chromosome identification is an essential step in genomic research, which so far has not been possible in oysters. We tested bacteriophage P1 clones for chromosomal identification in the eastern oyster Crassostrea virginica, using fluorescence in situ hybridization (FISH). P1 clones were labeled with digoxigenin-11-dUTP using nick translation. Hybridization was detected with fluorescein-isothiocyanate-labeled anti-digoxigenin antibodies and amplified with 2 layers of antibodies. Nine of the 21 P1 clones tested produced clear and consistent FISH signals when Cot-1 DNA was used as a blocking agent against repetitive sequences. Karyotypic analysis and cohybridization positively assigned the 9 P1 clones to 7 chromosomes. The remaining 3 chromosomes can be separated by size and arm ratio. Five of the 9 P1 clones were sequenced at both ends, providing sequence-tagged sites that can be used to integrate linkage and cytogenetic maps. One sequence is part of the bone morphogenetic protein type 1b receptor, a member of the transforming growth factor superfamily, and mapped to the telomeric region of the long arm of chromosome 2. This study shows that large-insert clones such as P1 are useful as chromosome-specific FISH probes and for gene mapping in oysters.

Imunização de bovinos com MSP1a e MSP2 recombinantes de Anaplasma marginale com CpG ODN 2006 como adjuvante, e desafio com isolado heterólogo.

A anaplasmose é uma importante enfermidade de bovinos de áreas tropicais e subtropicais do mundo, causada pela riquétsia intra-eritrocítica Anaplasma marginale. A vacinação tem sido a forma mais econômica e eficiente de controlar a anaplasmose bovina. Nos últimos anos, esses estudos têm se concentrado nas proteínas de membrana da riquétsia, sobretudo MSP1a e MSP2. Este trabalho teve como objetivos avaliar o grau de proteção induzido pelas proteínas de membrana MSP1a e MSP2 recombinantes de A. marginale, associadas com adjuvante CpG ODN 2006, perante desafio heterólogo e avaliar a resposta imune gerada. Novilhos da raça Aberdeen Angus foram imunizados três vezes com 200 ?g de MSP1a e/ou MSP2 recombinantes, associadas com CpG ODN 2006 e alúmen. Posteriormente, foram desafiados com 3 x 107 eritrócitos infectados com isolado heterólogo de A. marginale. Os animais experimentais apresentaram quadro clínico de anaplasmose (redução do volume globular, febre e riquetsemias detectáveis por distensões sangüíneas coradas). Não foram detectadas diferenças significativas entre os grupos imunizados e os controles quanto ao percentual de redução do volume globular, riquetsemias máximas e temperaturas retais máximas, indicando que as imunizações não foram protetoras. A despeito da significativa produção de IgG total contra MSP1a e MSP2, detectada no dia do desafio, os animais imunizados apresentaram produção significativa de IgG2 apenas contra MSP1a. As razões para as possíveis falhas de proteção são discutidas. Neste trabalho, é relatada a imunização de bovinos com MSP1a e MSP2 recombinantes de A. marginale, associadas com alúmen e CpG ODN 2006, e posterior desafio com isolado heterólogo, bem como a avaliação da resposta imune gerada.

Caracteristicas de brotacoes de tuberculos de clones de batata resistentes a pinta-preta.

1999

Avaliação de clones de seringueiras implantados em solos sob Cerrado-Minas Gerais.

2002

Clones de guaranazeiro para o Estado do Amazonas.

Resultados de 23 anos de pesquisa de guaraná em Manaus-AM (Brasil), pela Embrapa, tendo sido identificados 41 clones promissores, atualmente, em fase final de avaliacao, apresentando potencial para plantio comercial, e produzindo mais de 1kg de sementes torradas/planta/ano.

Melhoramento genetico do guaranazeiro resultados de ensaios de avaliacao de clones fase produtiva 1985 a 1994.

O objetivo e discriminar os clones quanto a produtividade e ao numero de colheitas baseado nos resultados referentes aos ensaios avancados, ou seja, aqueles que antecedem a recomendacao dos materiais, no periodo de 1985 a 1994. Para isso, foram realizadas analises de variancia individuais, para cada experimento, e uma analise de variancia conjuntas, para cada experimento, e uma analise combinada, envolvendo todos os clones, experimentos e anos.

Novos clones de guaranazeiro para o Estado do Amazonas.

Esses novos clones de guaranazeiro, podem contribuir expressivamente para o desenvolvimento da cultura do guaraná, com aumento em quantidade e qualidade da produção estadual desse fruto, que é considerado de grande importância econômica e social na região.

Guaraná: BRS-Amazonas e BRS-Maués - clones para o Estado do Amazonas.

Clones de guaraná para o Estado do Amazonas. Características agronômicas dos clones BRS-Amazonas e BRS-Maués, recomendados para plantio comercial no Estado do Amazonas.

Desempenho de clones de seringueira sob diferentes sistemas de sangria.

Este trabalho teve como objetivo avaliar o crescimento e a producao da borracha de clones seringueira [Havea brasiliensis ( Wild. Ex Adr. De Juss.) Muell. Arg.] sob diferentes sistemas de sangria, em condição de Cerrado dos Municipios de Barro Alto Goianesia no Estado de Goais. O plantio foi feito em fevereiro de 1992, no espacamento de 8,0 x 2,5 m (500 plantas/ha), em talhoes de 8 a 10 hectares para cada um dos clones RRIM 600, GT 1, PB 217, PB 235, PR 107 e PR 255 os quais receberam as mesmas praticas de manejo. Aos oito anos de idade, foram feitas as seguintes avaliacoes: estande final; circunferencia do caule a 1,20 m do solo; porcentagens de plantas aptas a sangria; producao de borracha acumulada na caneca pesada mensalmente; incidencia de seca de painel. A producao foi avaliada em nove sistemas de sangria em meia espiral (1/2 S), praticados cinco dias por semana (5d/7) e 10 meses ao ano (10m/12), variando na frequência de sangria (d/4 e d/7 = a cada 4 e 7 dias), a concentracao de Ethephon (ET 0,25%, 2,5%,3,3% e 5,0%) e sua frequencia de aplicacao durante o periodo chuvoso ( a cada 22, 28 e 35 dias), como segue: 1) 1/2S, d/7, ET 2,5% a cada 22 dias; 2)1/2S, d/7, ET 2,5% a cada 30 dias (referncia); 3) 1/2S. d/4, ET 2,5% a cada 30 dias; 4) 1/2S, d/7, ET 3,3% a cada 22 dias; 5)1/2S, d/7, ET 3,3% a cada 30 dias; 6) 1/2S. d/7, ET 5,0% a cada 22 dias 7) 1/2S, d/7, ET 5,0% a cada 30 dias; 8) 1/2S, d/7, ET 5,0% a cada 35 dias; 9) 1/2S, d/7, ET 0,25% (pulverizando 10 ml por painel) a cada 22 dias. Nos sistemas 1 a 8, o Ethephon foi pincelado ( 1mL) na canaleta de corte e ate 2 cm acima dela (Pa e La). O delineamento experimental foi de blocos ao acaso, com quatro repeticoes de 10 plantas poe parcela. Cada clone constitui um experimento separado, sendo os resultados de producao acumulada anual submetidos a analise de variancia e, nos caso de significancia, as medias dos sistemas foram comparadas pelo teste Tukey, ao nível de 5% de probabilidade. Nao foi constatada qualquer incidencia de seca de painel e os resultados possibilitaram as seguintes conclusoes para as condicoes da regiao: 1) o sistema 1/2S, d/7, ET 2,5% a cada 30 dias e o mais indicado par a sangria dos clones PR 255, PR 107, PB 235, PB 217 e GT 1; 2) o sistema 1/2S, d/7, ET 3,3% a cada 30 dias e o mais indicado para a sangria do clone RRIM 600; 3) a producao individual de borracha em kg/planta/ano e maior nos clones RRIM 600, PB 217 e PR 255, enquanto a producao total em kg/ha/ano e superior nos clones RRIM 600 e PB 235; 4)os clones PB 217 e PR 255 sao menos adaptados a regiao, apresentando menores valores de estande final, circunferencia do caule, porcentagem de plantas em sangria e de producao total de borracha por hectare.

Avaliação de clones de cajueiro anão precoce em Rio Branco-Acre.

Entre os maiores entraves para a exploração racional da cultura do caju no Estado do Acre, destacam-se os problemas fitossanitários, principalmente a Antracnose, causada pelo fungo Colletotrichum gloesporioides, que encontra na região, condições climáticas favoráveis (altas temperaturas e alta umidade), causando perdas consideráveis na produção e na qualidade da castanha e do pedúnculo. Na população de ocorrência espontânea no Estado, observa-se plantas com diferentes graus de tolerância à doença, principalmente no município de Xapuri, entretanto, estes materiais apresentam características desfavoráveis para o cultivo econômico. A introdução, avaliação e seleção de materiais com características superiores como baixo porte e precocidade na produção, é de primordial importância para o desenvolvimento de uma cajuicultura moderna. Por estas razões, em janeiro de 1996, foi implantada uma coleção de trabalho no Centro de Pesquisa Agroflorestal do Acre - CPAF/AC, com o objetivo de avaliar quatro clones de cajueiro anão precoce, oriundos do Centro Nacional de Agroindústria Tropical.

Novos clones de guaranazeiro para o Estado do Amazonas.

2000

Introdução e avaliação de clones de seringueira no Acre para estudos de combinações copa x painel.

Os seringais de cultivo no Estado do Acre, implantados desde o início da década de 70, foram quase todos abandonados e desativados por apresentarem um desenvolvimento lento e desuniforme devido, principalmente, à falta de um método efetivo de controle do "mal das 4 folhas", causado pelo fungo Microcyclus ulei. As condições climáticas do Estado do Acre são favoráveis a incidência de doenças da seringueira durante o ano todo. No período de estiagem, de junho a setembro, época de troca de folhas, ocorrem surtos epidemiológicos com severos ataques, causando sucessivas quedas de foliolos que resultam na seca dos ponteiros, debilitando a planta e tomando-a predisposta ao ataque de fungos secundários, que agravam ainda mais o problema. A enxertia de copa, utilizando clones de hevea pauciflora, vem sendo apontada como a possível solução, a curto e médio prazo, para a implantação de seringais de cultivo nas áreas amazônicas com problemas fitossanitários graves. Esta espécie possui tolerância ao fungo Microcyclus ulei, principal doença da seringueira na Amazônia, por apresentar algumas características que dificultam o ataque do fungo, destacando-se o fato de possuir elevado índice de área foliar, de caráter perenifólio. Os clones derivados desta espécie, quando enxertados sobre painéis que apresentem como características um alto rendimento e facilidade de escoamento do látex, originam plantas tricompostas que conseguem juntar, num mesmo indivíduo, características que normalmente são antagônicas, ou seja, alta produtividade e resistência ou tolerância às doenças. Este trabalho tem como objetivo principal selecionar plantas tricompostas tolerante às principais doenças e com potencial produtivo superior a 1500 kglha/ano. Para isso, foi implantada uma coleção de clones de copa e painel na Embrapa Acre, a qual está servindo de fonte de material botânico para a instalação de experimentos de avaliação de combinações copa x painel. Os clones introduzidos estão sendo avaliados, quanto a tolerância a doenças, crescimento, vigor e facilidade de pegamento da enxertia.