Isolation and Estimation of Cytokinins and Cytokinin-Containing Transfer RNAs from Cucumis

N6-({Delta}2-Isopentenyl) adenosine antibodies were used for the isolation of free cytokinins and cytokinin-containing tRNAs from parts of Cucumis sativus L. var. Guntur seedlings and for the estimation of cytokinins in them. Immobilized N6-({Delta}2-isopentenyl) adenosine antibodies retained tRNAs containing N6-({Delta}2-isopentenyl) adenosine and N6-(4-hydroxy-3-methylbut-2-enyl) adenosine with equal efficiencies. There were at least five cytokinins in the free form in cucumber seedlings. N6-(4-Hydroxy-3-methylbut-2-enyl) adenosine, N6-({Delta}2-isopentenyl) adenosine, and N6-({Delta}2-isopentenyl) adenine were present at least to the extent of 80, 23, and 9 nanograms, respectively, in the cotyledons and 40, 6, and 3 nanograms, respectively, in the decotyledonated seedlings per gram of tissue. Only two cytokinins were found in the tRNAs of cucumber cotyledons, namely N6-({Delta}2-isopentenyl) adenosine and N6-(4-hydroxy-3-methylbut-2-enyl) adenosine in amounts of 12 and 318 nanograms, respectively, per gram of tissue. Immunoaffinity chromatographic analysis of radiolabeled aminoacyl tRNAs from cucumber cotyledons showed that tRNAPhe and tRNATyr contained cytokinins whereas tRNAAla did not.

Proteolytic susceptibility and methionine modification of monodeamidated ribonuclease A

The susceptibility of a monodeamidated RNAaseA (RNAaseAa1) towards carboxypeptidaseA , alpha-chymotrypsin and pepsin has been studied. Similar to RNAaseA, the C-terminal of RNAaseAa1 is not available for carboxypeptidaseA hydrolysis. The thermal stability of RNAaseAa1 as probed through chymotryptic digestion is found to be less than that of RNAaseA. Preliminary chromatographic analysis of the digested material, however, suggests that the nature of thermal transition might be the same in the two proteins. Pepsin inactivates RNAaseAa1 more slowly than does RNAaseA. Accordingly, less peptide bonds, almost half that of RNAaseA, are cleaved by pepsin in RNAaseAa1. The accumulation of RNAase-P type intermediates is not evident during peptic digestion of RNAaseAa1. Reaction with O-benzoquinone at low pH shows that methionines of the deamidated protein seem to have higher reactivities. These observations indicate a different structure for RNAaseAa1 at elevated temperature and low pH.

TRANSFER OF ANALYTICAL METHODS FOR THE CHARACTERISATION OF NATURAL PRODUCTS TO R&D PROCESSES OF IDOKI

IDOKI SCF Technologies S.L. is a technology-based company, set up on September 2006 in Derio (Biscay) with the main scope of developing extraction and purification processes based on the use of supercritical fluid extraction technology (SFE) in food processing, extraction of natural products and the production of personal care products. IDOKI¿s researchers have been working on many different R&D projects so far, most of them using this technology. However, the optimization of a SFE method for the different matrices cannot be performed unless we have an analytical method for the characterisation of the extracts obtained in each experiment. The analytical methods are also essential for the quality control of the raw materials that are going to be used and also for the final product. This PhD thesis was born to tackle this problem and therefore, it is based on the development of different analytical methods for the characterisation of the extracts and products. The projects that we could include in this thesis were the following: the extraction propolis, the recovery of agroindustrial residues (soy and wine) and the dealcoholisation of wine.On the one hand, for the extraction of propolis, several UV-Vis spectroscopic methods were used in order to measure the antioxidant capacity and the total polyphenol and flavonoid content of the extracts. A SFC method was also developed in order to measure more specific phenolic compounds. On the other hand, for the recovery of agroindustrial residues UV-Vis spectroscopy was used to determine the total polyphenol content and two SFC methods were developed to analyse different phenolic compounds. Extraction methods such as MAE, FUSE and rotary agitation were also evaluated for the characterisation of the raw materials.Finally, for the dealcoholisation of wine, the development of a SBSE-TD-GC-MS and DHS-TD-GC-MS methods for the analysis of aromas and a NIR spectroscopic method for the determination of ethanol content with the help of chemometrics was necessary. Most of these methods are typically used in IDOKI¿s lab as routine analyses apart from others not included in this PhD thesis.

LC-MS based methods for phytosterols determination in oenological matrices. Targeted metabolomic study of Rioja grape varieties

221 p.+ anexos

Avaliação das concentrações de BTEX em ambiente indoor: estudo de caso da sala de spinning de uma academia de ginástica Rio de Janeiro / RJ.

Muitos dos locais onde as atividades são realizadas nas academias de ginásticas são salas pequenas e fechadas com sistema de climatização artificial, freqüentados por um grande número de alunos realizando seus exercícios e profissionais auxiliando as atividades. Com isso, há uma intensa transpiração desses indivíduos, uma freqüente rotina de limpeza do piso e de equipamentos com pequenos intervalos, possibilitando a alterações da qualidade do ar indoor. O presente trabalho busca mostrar as tendências de variações nos valores das concentrações dos poluentes atmosféricos BTEX em ambiente indoor, especificamente na sala de spinning de uma academia de ginástica do Rio de Janeiro. Para o monitoramento da qualidade do ar foram utilizados cartuchos de carvão ativado SKC, acoplado a uma bomba KNF com vazão de 1l min. Para a extração de cada amostra foi feita a análise cromatográfica com cromatógrafo a gás modelo 6890 acoplado a um espectrômetro de massa modelo 5973 da marca Agilent. Foram analisadas 34 amostras coletadas na salas de spinning durante as aulas com atividades aeróbicas, o que intensificava a respiração dos indivíduos, possibilitando uma maior inalação destes COVs. Em contrapartida, também foram coletadas 5 amostras outdoor, 4 delas pareadas indoor/ outdoor para uma análise comparativa das concentrações destes poluentes. Dentre os compostos orgânicos voláteis analisados, o tolueno é o BTEX mais abundante obtido neste trabalho, representando 81% destes COVs indoor. Todas as amostras medidas em pares indoor/ outdoor tiveram concentrações maiores no interior, exceto para o benzeno no dia 3/12/2010. Simples atividades usualmente realizadas pelo homem, como a inserção de piso emborrachado, manutenção do sistema de climatização artificial, e limpeza podem alterar o ar indoor. As conclusões alcançadas após as medições das concentrações de BTEX foram de que o ar indoor estava mais poluído do que o outdoor. Este monitoramento da qualidade do ar indoor ainda é escasso no Brasil. Alguns esforços tem sido feito em relação a ambientes confinados como a Portaria n˚3523 do Ministério da Saúde, regulamentando o controle dos ambientes climatizados e a Resolução n˚9 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária, além da Resolução CONAMA n ˚3 estabelecendo padrões de qualidade do ar para alguns compostos químicos, porém muitos compostos químicos ainda não são legislados ou não possuem a devida atenção, não sendo suficientes para contemplar a complexidade do assunto

Produção de carotenoides em culturas in vitro de Cleome rosea Vahl ex DC (Capparaceae) e avaliação de sua toxicidade e potencial antioxidante

A produção e a otimização de substâncias de valor medicinal têm sido alcançadas pelo uso das técnicas de cultura de tecidos vegetais, que têm apresentado grande relevância quando se considera o status de conservação de uma espécie ou sua ocorrência em ambientes ameaçados. No presente trabalho foi avaliada a produção de carotenoides em culturas de calos e células em suspensão de Cleome rosea Vahl ex DC, espécie nativa encontrada em áreas de restinga nos estados do Rio de Janeiro e de São Paulo. Plantas micropropagadas obtidas a partir de raízes produzidas in vitro foram usadas como fonte de explantes para o início das culturas de calos. A produção de massa calogênica foi avaliada em meio MS suplementado com diferentes concentrações das auxinas ácido 2,4-diclorofenoxiacético e ácido 4-amino- 3,5,6-tricloropicolínico, na presença de luz ou no escuro. O uso de diferentes meios básicos de cultura (B5, Nitsch, White) também foi avaliado. A calogênese foi induzida em todos os tratamentos, entretanto a maior produção de biomassa foi alcançada pelas culturas mantidas na presença de luz. A maior produção de massa calogênica foi obtida em culturas iniciadas no meio MS suplementado com 0,2 mg.L-1 de 2,4-D. A exposição das culturas à luz foi um fator essencial para a produção de carotenoides, que só ocorreu nas culturas mantidas nessa condição. Culturas de calos foram submetidas a tratamentos com substâncias elicitoras (extrato de levedura, metil jasmonato, quitosana) em diferentes concentrações e por um período de exposição de sete ou 14 dias visando otimizar a produção do pigmento. A maior produção de carotenoides nas culturas elicitadas foi alcançada com o tratamento com metil jasmonato (MJ) na concentração de 300 μM, independentemente do tempo de exposição ao elicitor. Análises cromatográficas mostraram que o processo de elicitação com MJ induziu ao aumento na produção de β-caroteno. Calos elicitados nessa condição foram usados para iniciar culturas de células em suspensão (CCS). Estas culturas foram acompanhadas por três subculturas realizadas a cada 20 dias, durante a fase exponencial de crescimento. Embora as CCS tenham mantido uma produção de biomassa constante ao longo das subculturas, os valores de produção de carotenoides foram inferiores àqueles alcançados pelas culturas de calos e não houve diferenças estatísticas significativas quando comparadas às CCS iniciadas a partir de calos não elicitados. Extratos de calos produzidos em meio MS suplementado com 0,2 mg.L-1 de 2,4-D foram avaliados quanto à sua capacidade antioxidante por meio da incubação dos extratos com DNA plasmidial em presença de cloreto estanoso (SnCl2), um potente agente redutor capaz de produzir quebras na molécula de DNA. Os extratos foram avaliados em concentrações crescentes (25 - 500 μg.mL-1) e apresentaram uma proteção dose dependente à ação do SnCl2. Estudos de toxicidade com o modelo de Artemia salina demonstraram que os extratos não apresentaram toxicidade nas concentrações avaliadas. Os resultados alcançados mostram que a elicitação foi eficiente para a otimização da produção de β-caroteno nas culturas in vitro e que os extratos obtidos a partir desses materiais apresentaram atividade antioxidante, indicando o êxito das técnicas de cultura de tecidos para a produção deste metabólito sob condição in vitro.

Ecotoxicidade aguda, crônica e genotoxicidade de solo contaminado por óleo lubrificante usado e biorremediado para Eisenia andrei.

O objetivo do presente deste trabalho foi avaliar a toxicidade aguda, crônica e a genotoxicidade sobre E. andrei causadas por solo recém-contaminado com óleo lubrificante usado e após biorremediação por diferentes estratégias, após 22 meses, e paralelamente ao estudo de ecotoxicidade, foi conduzida uma investigação comparativa de três métodos de extração de HTP e HPA de solos para análise cromatográfica. A comparação das técnicas de extração evidenciou que para HTP, a técnica de extração acelerada por solvente-ASE foi a que melhor recuperou n-alcanos; já para as frações HRP e MCNR as técnicas soxhlet e micro-ondas-MARS não apresentaram diferenças significativas e foram melhores que ASE. Para HPA, a técnica de extração por soxhlet foi a que apresentou melhor recuperação em todos os solos. O teste de mortalidade apresentou, aos 14 dias, taxas crescentes de mortalidade de 10 6%, 20 0%, 73 25%, 93 12% e 100 0% para amostras de CONT (solo controle, sem contaminação artificial), BIOS (solo contaminado com 5% de OLU e biorremediado por bioestimulo), BIOA1 (solo contaminado com 5% de OLU e biorremediado por bioestimulo + bioaumento com adição de 10% de RSU maturado), e BIOA2 (solo contaminado com 5% de OLU e biorremediado por bioestimulo + bioaumento com adição de 10% de RSU semi-maturado) e OLU (solo contaminado com 5% de OLU), respectivamente. Aos 28 dias, entretanto, BIOS e OLU apresentaram taxas de mortalidade de 97 % 6 % e de 100 % 0 % respectivamente, valores estes significativamente superiores ao CONT. Foram observadas deformações anatômicas nos indivíduos mantidos em BIOS e OLU, assim como diminuição da biomassa em todas as amostras, evidenciando efeitos crônicos. O teste de reprodução, aos 28 dias, foram observadas grandes quantidades de indivíduos jovens nos solos biorremediados e recém-contaminado. No entanto, aos 56 dias houve uma diminuição dessas formas e o controle (CONT) exibiu uma quantidade maior de formas juvenis. O teste de densidade e viabilidade celular mostrou ser indicador sensível para toxicidade crônica apresentando queda nos solos BIOS e OLU em relação ao CONT com diferenças significativas (p <0.05). Não foram observados micronúcleos nos solos em estudo. Tal observação reforça a necessidade de testes de ecotoxicidade para avaliar a real eficácia de tecnologias de tratamento.

Ecotoxicidade aguda, crônica e genotoxicidade de solo contaminado por óleo lubrificante usado e biorremediado para Eisenia andrei.

O objetivo do presente deste trabalho foi avaliar a toxicidade aguda, crônica e a genotoxicidade sobre E. andrei causadas por solo recém-contaminado com óleo lubrificante usado e após biorremediação por diferentes estratégias, após 22 meses, e paralelamente ao estudo de ecotoxicidade, foi conduzida uma investigação comparativa de três métodos de extração de HTP e HPA de solos para análise cromatográfica. A comparação das técnicas de extração evidenciou que para HTP, a técnica de extração acelerada por solvente-ASE foi a que melhor recuperou n-alcanos; já para as frações HRP e MCNR as técnicas soxhlet e micro-ondas-MARS não apresentaram diferenças significativas e foram melhores que ASE. Para HPA, a técnica de extração por soxhlet foi a que apresentou melhor recuperação em todos os solos. O teste de mortalidade apresentou, aos 14 dias, taxas crescentes de mortalidade de 10 6%, 20 0%, 73 25%, 93 12% e 100 0% para amostras de CONT (solo controle, sem contaminação artificial), BIOS (solo contaminado com 5% de OLU e biorremediado por bioestimulo), BIOA1 (solo contaminado com 5% de OLU e biorremediado por bioestimulo + bioaumento com adição de 10% de RSU maturado), e BIOA2 (solo contaminado com 5% de OLU e biorremediado por bioestimulo + bioaumento com adição de 10% de RSU semi-maturado) e OLU (solo contaminado com 5% de OLU), respectivamente. Aos 28 dias, entretanto, BIOS e OLU apresentaram taxas de mortalidade de 97 % 6 % e de 100 % 0 % respectivamente, valores estes significativamente superiores ao CONT. Foram observadas deformações anatômicas nos indivíduos mantidos em BIOS e OLU, assim como diminuição da biomassa em todas as amostras, evidenciando efeitos crônicos. O teste de reprodução, aos 28 dias, foram observadas grandes quantidades de indivíduos jovens nos solos biorremediados e recém-contaminado. No entanto, aos 56 dias houve uma diminuição dessas formas e o controle (CONT) exibiu uma quantidade maior de formas juvenis. O teste de densidade e viabilidade celular mostrou ser indicador sensível para toxicidade crônica apresentando queda nos solos BIOS e OLU em relação ao CONT com diferenças significativas (p <0.05). Não foram observados micronúcleos nos solos em estudo. Tal observação reforça a necessidade de testes de ecotoxicidade para avaliar a real eficácia de tecnologias de tratamento.

Estabelecimento de culturas de raízes in vitro e avaliação da produção de metabólitos secundários de Cleome spinosa Jacq. (Cleomaceae)

Cleome spinosa é uma espécie herbácea de uso na medicina popular, especialmente no Nordeste do Brasil. A cultura in vitro de raízes adventícias da espécie foi iniciada com segmentos radiculares (0,5 e 1,0 cm) obtidos a partir de duas fontes de explantes: plantas propagadas in vitro e plantas oriundas do processo de germinação in vitro. Os explantes foram inoculados em meio MS líquido suplementado ou não com as auxinas ANA, AIA e AIB em diferentes concentrações (0,5; 1,0; 1,5; 3,0; 5,0 mg.L-1). As culturas foram mantidas em sala de crescimento, sob agitação (100 rpm) e sob fotoperíodo de 16h ou no escuro, com subculturas a cada 45 dias. Explantes oriundos de plantas propagadas in vitro também foram cultivados em meio contendo a citocinina BAP em associação com auxinas, na presença de sorbitol (isoladamente ou em associação com sacarose), em meio MS contendo redução na concentração total de sais minerais (MS1/2 e MS1/4) e em meio sólido. Os resultados mostraram que a adição de auxinas ao meio de cultura foi essencial à multiplicação das raízes, uma vez que em meio MS0 ocorreu significativo desenvolvimento de brotos. A suplementação com ANA não foi eficiente para a produção de raízes e acarretou no calejamento dos explantes, enquanto que a presença de AIA e AIB resultaram na multiplicação das raízes. Ainda assim, independentemente das manipulações realizadas no meio de cultivo, a capacidade de multiplicação mostrou-se reduzida. Uma expressiva multiplicação de raízes foi observada em culturas iniciadas a partir de explantes oriundos de plantas obtidas por germinação in vitro. A maior produção de biomassa foi alcançada em culturas iniciadas com segmentos radiculares de plantas obtidas por germinação in vitro cultivadas em meio contendo com 3,0 mg.L-1 de AIB e mantidas no escuro. Culturas estabelecidas nas melhores condições para acúmulo de biomassa foram acompanhadas por três subculturas, sendo avaliados períodos de cultura de 45 dias e de 60 dias. Culturas mantidas a intervalos de 45 dias apresentaram maior produção de raízes durante a segunda subcultura, enquanto que para o intervalo de 60 dias, embora tenha sido observada a capacidade de multiplicação das raízes, a maior produção de biomassa ocorreu nos primeiros 60 dias de cultivo. A partir de materiais in vivo e in vitro foram realizadas extrações com solventes de polaridade crescente (hexano, diclorometano, acetato de etila e metanol) e os extratos foram submetidos a avaliações cromatográficas. As análises por cromatografia em camada delgada mostraram a presença de terpenos nos extratos obtidos com hexano e diclorometano, tanto em material obtido a campo como naqueles produzidos in vitro e de compostos fenólicos nos extratos em acetato de etila obtidos a partir de material de campo. Pelas análises por cromatografia líquida associada à espectrometria de massas foi possível observar a presença de flavonoides nas culturas in vitro, não detectados no material de campo. As análises por cromatografia de fase gasosa associada à espectrometria de massas apontaram a presença de esteroides nos extratos em hexano de raízes coletadas a campo e nas culturas in vitro de raízes. Os resultados obtidos mostraram a viabilidade da produção de culturas de raízes in vitro para a espécie C. spinosa e o potencial deste material para a produção de substâncias bioativas, algumas não encontradas em material coletado a campo

Produção de plantas e metabólitos de Cleome dendroides Schult. & Schult. f. (Cleomaceae) utilizando diferentes sistemas de cultivo in vitro

Cleome dendroides é uma espécie endêmica da Mata Atlântica dos estados do Rio de Janeiro e Espírito Santo, bioma alterado por intensa atividade antrópica, o que constitui uma ameaça à preservação de suas populações. Não existem estudos dos pontos de vista fisiológico, biotecnológico, fitoquímico ou farmacológico sobre a espécie. Considerando-se o perfil fitoquímico e o potencial medicinal do gênero, torna-se relevante definirem-se protocolos para a produção de plantas e metabólitos de C. dendroides utilizando diferentes sistemas de cultivo in vitro. No presente trabalho, foram realizados estudos sobre a germinação in vivo da espécie, avaliando-se a influência do substrato, temperatura e luz. Não se observou qualquer tipo de dormência, sendo as temperaturas de 20, 25 e 20-30C, em areia ou vermiculita, apropriadas para a germinação in vivo. Definiu-se também uma metodologia eficiente de germinação sob condições in vitro, e as plântulas obtidas foram utilizadas como fonte de explantes para os estudos de propagação in vitro. A resposta morfogênica foi avaliada considerando-se a origem e tipo do explante, tipos e concentrações de reguladores de crescimento e número de subculturas. A metodologia empregada mostrou-se eficiente para a produção de brotos e manutenção de estoques de plantas in vitro que serviram como fonte de explantes. A melhor condição para a propagação in vitro foi definida em meio solidificado contendo BA, independentemente do tipo de explante e da origem. Os brotos obtidos foram alongados, enraizados e aclimatizados. Também foi estabelecida a cultura de raízes e a regeneração de brotos a partir destas culturas. Avaliou-se o efeito da origem do explante, assim como dos tipos e concentrações de fitorreguladores sobre a proliferação de raízes e a regeneração de brotos. O fitorregulador AIB propiciou maior multiplicação das raízes, enquanto BA mostrou-se eficiente na regeneração de brotos a partir das raízes recém-formadas. Foi estabelecido ainda um protocolo de cultura de calos e de suspensões celulares. Avaliou-se o efeito da origem e do tipo de explante, dos tipos e das concentrações de fitorreguladores sobre a calogênese. A combinação de PIC com KIN foi a mais eficiente para a indução de calos em explantes de plântulas obtidas a partir de germinação in vitro, produzindo calos que foram mantidos por pelo menos dois anos. As suspensões celulares também foram estabelecidas em meio contendo PIC + KIN, mantendo uma produção de biomassa de cerca de cinco vezes o peso fresco inicial por três sucessivas subculturas. Análises histoquímicas e fitoquímicas revelaram a presença de alcaloides nos calos e nas suspensões celulares. Foram realizadas análises fitoquímicas de plantas de campo, plantas aclimatizadas, plantas mantidas em estoque in vitro e culturas de raízes, as quais indicaram a presença de derivados de glicosinolatos. Os resultados demonstraram a viabilidade de produção de material vegetal de C. dendroides por meio de métodos biotecnológicos e a produção in vitro de metabólitos de importância medicinal

Avaliação de um biorreator piloto de lodo ativado no controle de odores.

Apesar da importância das estações de tratamento de efluentes industriais (ETEIs) na conservação dos ecossistemas, estas podem ser geradoras de gases com maus odores contendo compostos orgânicos voláteis - COVs. Os maus odores têm sido motivos de protestos e reclamações por parte da população circunvizinha às fontes emissoras. Em virtude da conscientização ambiental, e dos impactos sobre a saúde do homem, o objetivo geral deste trabalho é avaliar a eficiência de um biorreator aeróbio piloto no controle de gases odoríferos emitidos em estação de tratamento de efluentes de indústrias de alimentos. Foi desenvolvido um sistema de difusão de ar odorífero em um reator aeróbio de lodo ativado, hermeticamente fechado, operado no regime de batelada sequencial, durante os dias 14, 21, 23, e 30 do mês de julho.Foram realizadas análises dos parâmetros físico-químicos do lodo ativado utilizado no reator aeróbio piloto, como determinação dos sólidos, DBO5, DQO, OD, pH, temperatura e IVL. A atividade da biomassa do lodo ativado foi avaliada por meio do teste de Respirometria. A eficiência do reator quanto à redução da DQO dos gases foi analisada por meio da absorção dos gases em solução de dicromato de potássio. Para avaliação da mensuração dos odores utilizou-se o método de cromatografia gasosa e espectrometria de massa, quantificando amostras de gases odorantes adsorvidas em tubos de carvão ativado, na entrada e na saída dobiorreator. Os resultados obtidos confirmaram o potencial do sistema de difusão em lodos ativados para o tratamento de gases odoríferos em ETEI, com eficiência de remoção dos COV`s variando de 97,3% a 98,9%.

水菖蒲的化学成分研究和忍冬属植物的色谱分析

本论文由三章组成。第一章阐述了藏药水菖蒲的化学成分研究，共分离鉴定了39个化学成分，其中6个为新化合物。第二章报道了几种忍冬属植物的HPLC、HPLC-MS、GC分析以及抑菌活性、重金属含量测定结果。第三章概述了菖蒲属植物的研究进展。 第一章报道了水菖蒲(Acorus calamus L.)化学成分的分离纯化与结构鉴定。采用正、反相硅胶柱层析等分离方法，从水菖蒲的根中共分离出41个化合物，通过红外、质谱、核磁共振及X-ray单晶衍射等波谱方法和模拟计算方法鉴定了其中39个化合物的结构，主要为倍半萜、苯丙素、甾体类化合物。其中含有5个新的倍半萜类化合物和1系列新的甾体皂苷衍生物。经波谱分析将它们的结构鉴定为 1b, 7a(H)-cadinane-4a, 6a, 10a-triol (1), (2R,6R,7S,9S)-1(10), 4-cadinadiene-2, 9-diol (2), 1a, 5b-guaiane-10a-O-ethyl-4b, 6b-diol (7), 6b, 7b(H)-cadinane-1a, 4a, 10a-triol (13)，(1R,4R,6S,10R)-1-hydroxy-7(11)-cadinen-5, 8-dione (14)， 4′-O-正n碳酰基-3-O- β-D-葡萄糖基谷甾醇(n=14, 16, 18, 22) (15)。 第二章包括四个部分。第一部分报道了忍冬属三种植物40个样品的HPLC测定和对主要活性成分绿原酸的定量分析结果，以及运用HPLC-MS技术对色谱图中8个峰进行指认。在此基础上，考察了种植和采收多个因素对绿原酸含量的影响。第二部分报道了忍冬属三种植物27个样品的GC分析，根据样品的挥发性成分的保留时间对不同样品进行了定性比较，并考察了花期及海拔高度对植物挥发性成分的影响。第三、四部分分别阐述了灰毡毛忍冬和红腺忍冬的体外抑菌活性研究和重金属含量测定结果。 第三章全面系统地概述了菖蒲属植物的化学成分和药理活性研究进展。 This dissertation is composed by three chapters. The first chapter elaborates the phytochemical investigation of Acorus calamus L. Thirty-nine compounds including six new compounds were isolated and identified. The second chapter reports the research on genus Lonicera by HPLC, HPLC-MS and GC. Antifungal activity and heavy metals measurement of genus Lonicera were reported. The third chapter is a review about the research progress on the plant family of Acorus. The first chapter focuses on the isolation and identification of chemical constituents from Acorus calamus L.. Forty-one compounds were isolated from the root of Acorus calamus L. by repeat column chromatography over normal and reversed phase silica gel, the structure of thirty-nine compounds was identified by spectroscopic methods and computational methods, including IR, MS, NMR and X-ray. Those compounds mainly belonged to sesquiterpene, phenylpropanoid and steroid. Among them, five are new sesquiterpenes and one series are new steroid glycoside derivatives. Their structure were suggested as 1b, 7a(H)-cadinane-4a, 6a, 10a-triol (1), (2R,6R,7S,9S)-1(10), 4-cadinadiene-2, 9-diol (2), 1a, 5b-guaiane-10a-O-ethyl-4b, 6b- diol (7), 6b, 7b(H)-cadinane-1a, 4a, 10a-triol (13), (1R,4R,6S,10R)-1-hydroxy-7(11)- cadinen-5, 8-dione (14), 4′-O-carbonyl-3-O-β-D-glucosyl-sitosterol (carbonyl = tetradecanoyl, hexadecanoyl, octadecyl, docosanoyl) (15). The second chapter consists of four parts. The first part reports the HPLC analysis of forty samples of the genus Lonicera, and the quantitative investigation of chlorogenic acid in these samples by HPLC analysis. Relationship between the content of chlorogenic acid in different samples and their planting conditions and harvesting time were discussed. Furthermore, eight compounds were identified or tentatively characterized based on their mass spectra and UV spectra profiles. The second part is about qualitative analysis of the volatile constituent in twenty-seven samples of genus Lonicera by GC. The effect of planting altitude and harvesting time on the volatile constituent was also investigated. The third and fourth parts describe the antifungal activity and content of some kinds of heavy metals of L. macranthoides Hand.-Mazz. and L. hypoglauca Miq.. The third chaspter is a review about the research progress of the plant family of Acorus.

Effect of La3+ on structure and electrochemical reaction of microperoxidase-11 in imitated physiological solution

In this paper, the interaction mechanism between La3+ and microperoxidase-11 (MP-11) in the imitated physiological solution was investigated with the electrochemical and spectroscopic methods. It was found that when the molar ratio of La3+, and MP-11 is low, such as 2, La3+ can coordinate with oxygen in the propionic acid group of the heme group in the MP-11 molecule, forming the La-MP-11 complexes and leading to the increase in the non-planarity of the porphyrin cycle in the heme group and then the increase in the extent of exposure of the electrochemically active center, Fe(I I I) in the porphyrin cycle of the heme group. The increase in the extent of exposure of the electrochemically active center, Fe(III) in the porphyrin cycle of the heme group would increase the reversibility of the electrochemical reaction of the La-MP-11 complexes and its electrocatalytic activity for the reduction of H2O2. The results of the chromatographic analysis demonstrated that the average molar ratio of La3+ and MP-11 in the La-MP-11 complexes is 1.62.When the molar ratio of La3+ and MP-11 is high, such as 3, La3+ would shear some amino acid residues of the peptide of MP-11. Therefore, many La3+ ions can bind to the oxygen- and/or nitrogen-containing groups in the sheared amino acid residues except coordinating with the sheared and non-sheared MP-11 molecules.

生物－热催化过渡带沉积成岩演化及其成烃作用研究

The biothermocatalytic transitional zone gas is a new type of natural gas genetic theory, and also an clean, effective and high quality energy with shallow burial depth, wide distribution and few investment. Meanwhile, this puts biothermocatalytic transitional zone gas in important position to the energy resource and it is a challenging front study project. This paper introduces the concept, the present situation of study and developmental trend about biothermocatalytic transitional zone gas in detail. Then by using heat simulating of source rocks and catalysis mechanism analysis in the laboratory and studying structural evolution, sedimentation, diagenesis and the conditions of accumulation formation and so on, this paper also discusses catalytic mechanism and evolutionary model of the biothermocatalytic transitional zone gas formation, and establishes the methods of appraisal parameter and resources prediction about the biothermocatalytic transitional zone gas. At last, it shows that geochemical characteristics and differentiated mark of the biothermocatalytic transitional zone gas, and perfect natural gas genetic theory, and points out the conditions of accumulation formation, distribution characteristics and potential distribution region on the biothermocatalytic transitional zone gas m China. The paper mainly focuses on the formation mechanism and the resources potential about the biothermocatalytic transitional zone gas. Based on filed work, it is attached importance to a combination of macroscopic and microcosmic analysis, and the firsthand data are obtained to build up framework and model of the study by applying geologic theory. Based on sedimentary structure, it is expounded that structural actions have an effect on filling space and developmental cource of sediments and evolution of source rocks. Carried out sedimentary environment, sequence stratigraphy, sedimentary system and diagenesis and so on, it is concluded that diagenesis influences developmental evolution of source rocks, and basic geologic conditions of the biothermocatalytic transitional zone gas. Applying experiment simulating and catalytic simulating as well as chemical analysis, catalytic mechanism of clay minerals is discussed. Combined diagenecic dynamics with isotope fractionation dynamics, it is established that basis and method of resource appraisal about the biothermocatalytic transitional zone gas. All these results effectively assess and predict oil&gas resources about the biothermocatalytic transitional zone gas-bearing typical basin in China. I read more than 170 volumes on the biothermocatalytic transitional zone gas and complete the dissertation' summary with some 2.4 ten thousand words, draw up study contents in some detail and set up feasible experimental method and technologic course. 160 pieces of samples are obtained in oilfield such as Liaohe, Shengli, Dagang and Subei and so on, some 86 natural gas samples and more than 30 crude oil samples. Core profiles about 12 wells were observed and some 300 geologic photos were taken. Six papers were published in the center academic journal at home and abroad. Collected samples were analysised more than 1000 times, at last I complete this dissertation with more than 8 ten thousand words, and with 40 figures and 4 plates. According to these studies, it is concluded the following results and understandings. 1. The study indicates structural evolution and action of sedimentary basin influence and control the formation and accumulation the biothermocatalytic transitional zone gas. Then, the structural action can not only control accommodation space of sediments and the origin, migration and accumulation of hydrocarbon matters, but also can supply the origin of energy for hygrocarbon matters foramtion. 2. Sedimentary environments of the biothermocatalytic transitional zone gas are lake, river and swamp delta- alluvial fan sedimentary systems, having a warm, hot and humid climate. Fluctuation of lake level is from low to high., frequency, and piling rate of sedimentary center is high, which reflect a stable depression and rapidly filling sedimentary course, then resulting in source rocks with organic matter. 3. The paper perfects the natural gas genetic theory which is compound and continuous. It expounds the biothermocatalytic transitional zone gas is a special gas formation stage in continuous evolutionary sequence of organic matter, whose exogenic force is temperture and catalysis of clay minerals, at the same time, having decarbxylation, deamination and so on. 4. The methodology is established which is a combination of SEM, TEM and Engery spectrum analysis to identify microstructure of crystal morphology about clay minerals. Using differential thermal-chromatographic analysis, it can understand that hydrocarbon formation potential of different typies kerogens and catalytic method of all kinds of mineral matrix, and improve the surface acidity technology of clay minerals measured by the pyridine analytic method. 5. The experiments confirm catalysis of clay minerals to organic matter hygrocarbon formation. At low temperature (<300 ℃), there is mainly catalysis of montmorillonite, which can improve 2-3 times about produced gas of organic matters and the pyrolyzed temperature decreased 50 ℃; while at the high temperature, there is mainly catalysis of illite which can improve more than 2 times about produced gas of organic matters. 6. It is established the function relationship between organic matter (reactant) concentration and temperature, pressure, time, water and so on, that is C=f (D, t). Using Rali isotope fractionation effect to get methane isotope fractionation formula. According to the relationship between isotope fractionation of diagenesis and depth, and combined with sedimentary rate of the region, it is estimated that relict gas of the biothermocatalytic transitional zone gas in the representative basin. 7. It is revealed that hydrocarbon formation mechanism of the biothermocatalytic transitional zone gas is mainly from montmorillonite to mixed minerals during diagenesis. In interlayer, a lot of Al~(3+) substitute for Si~(4+), resulting in a imbalance between surface charge and interlayer charge of clay minerals and the occurrence of the Lewis and Bronsted acid sites, which promote to form the carbon cation. The cation can form alkene or small carbon cation. 8. It is addressed the comprehensive identification mark of the biothermo - catalytic transitional zone gas. In the temproal-spatial' distribution, its source rocks is mainly Palaeogene, secondly Cretaceous and Jurassic of Mesozoic, Triassic, having mudy rocks and coal-rich, their organic carbon being 0.2% and 0.4% respectively. The vitrinite reflection factor in source rocks Ro is 0.3-0.65%, a few up to 0.2%. The burial depth is 1000-3000m, being characterized by emerge of itself, reservoir of itself, shallow burial depth. In the transitional zone, from shallow to deep, contents of montmorillonites are progressively reduced while contents of illites increasing. Under SEM, it is observed that montmorillonites change into illite.s, firstly being mixed illite/ montmorillonite with burr-like, then itlite with silk-like. Carbon isotope of methane in the biothermocatatytic transitional zone gas , namely δ~(13)C_1-45‰- -60 ‰. 9. From the evolutionary sequence of time, distribution of the biothermocatalytic transitional zone gas is mainly oil&gas bearing basin in the Mesozoic-Neozoic Era. From the distribution region, it is mainly eastern stuctural active region and three large depressions in Bohaiwang basin. But most of them are located in evolutionary stage of the transitional zone, having the better relationship between produced, reservoir and seal layers, which is favorable about forming the biothermocatalytic transitional zone gas reservoir, and finding large gas (oil) field.

Microcoulometric Determination Of Total Organo-Chlorinepesticide And Polychlorinated Biphenyl Residues In Grey Seal (Halichoerus-Grypus) Blubber

A procedure for estimating total organochlorine pesticide and PCB residue in seal blubber at concentrations of greater than 1μg g-1 of lipid is described. Lipid is cleaned up by alumina column chromatography, and the halogen concentration of the resulting hexane eluace is determined by combustion and microcoulometry. Results are similar to those obtained by gas chromatographic analysis and can be used to interpolate between results so obtained when data on specific organochlorine compounds is not required for each sample. The organochlorine residues recovered in this manner did not constitute all the halogen determined by combustion and microcoulometry of seal lipid. Analysis by the total halogen procedure was 2.5 tunes faster than the rate achieved with a combination of liquid and gas chromatography operated manually; the requirements for laboratory equipment and space for sample preparation are reduced.