Professional exposure to fungal pathogens: an update to exposure conditions and exposure measurement

In many occupational settings an exposure to fungi occurs. Fungal exposure may occur for instance in the form of dermatocytes, yeasts or mold. Associated to the fungi themselves an exposure to cell wall components like ß(1 ? 3)-D-glucans, to mycotoxins or to microbial volatile compounds can occur. Health hazards may differ across species because fungi may produce different allergens and mycotoxins, and some species can infect humans. Occupational settings are often characterized by special exposure conditions with respect to duration, frequency and especially to the level of exposure resulting at least sometimes to high or very high fungal exposure. Because of these special conditions occupational settings are suitable for epidemiologic studies. However, the knowledge about occupational exposure to fungi and associated compounds like mycotoxins is still fragmentary and not well disseminated. An indication for a high fungal exposure is for instance the handling of dry natural products like grain, hay or herbal plants with a high specific surface and the tendency to release dust during handling. The fungal components often form the determinative part of such dusts and might be a vehicle to respiratory airways. The authors will present results of exposure measurements of occupational settings and exposure conditions which are only rarely investigated.

Assessment of fungal contamination in a Portuguese maternity unit

A descriptive study was developed to monitor air fungal contamination in one Portuguese maternity. Sixty air samples were collected through impaction method. Air sampling was performed in food storage facilities, kitchen, food plating, canteen, pharmacy, sterilization areas, genecology wards, intensive care unit, operating rooms, urgency and also, outside premises, since this was the place regarded as reference. Besides air samples, forty three samples were collected by swabbing the surfaces using a 10 by 10 cm square stencil. Simultaneously, temperature, relative humidity and particles counting (PM10) were registered. Twenty three species of fungi were identified in air, being the two most commonly isolated the genera Penicillium (41,5%) and Cladosporium (28,4%). Regarding yeasts, only Rhodotorula sp. (45,2%), Trichosporon mucoides (51,6%) and Cryptococcus neoformans (3,2%) were found. Thirteen species of fungi were identified in surfaces, being the most frequent the Penicillium genus (91,6%). Concerning yeasts found in surfaces, four species were identified being Rhodotorula sp. (29,1%) the most frequent. There was no coincidence between prevailing genera indoors and outside premises. Moreover, some places presented fungal species different from the ones isolated outside. In the inside environment, Aspergillus species were isolated in air and surfaces. There was no significant relationship (p>0,05) between fungal contamination and the studied environmental variables. Keywords: air, surfaces, fungal contamination, environmental variables, maternity.

USE OF STARTER CULTURES TO IMPROVE PORTUGUESE TRADITIONAL SAUSAGES

In Mediterranean countries, such as Portugal, traditional dry-fermented sausages are highly appreciated. They are often still being manufactured in small processing units, according to traditional procedures. The aims of the present study were to evaluate the effect of different starter cultures and their optimal concentration, to reduce the microbial load in end-products, with the purpose to improve the sausages’ safety, without deteriorating sensory acceptability. pH, aw, colour, texture and microbiological profile were assessed. On the other hand, a sensory panel evaluated the products. Based on the first results, S. xylosus and L. sakei were chosen to be inoculated together with a yeast strain. In the mixed starter culture experiment, a food safety issue arose probably related to the higher aw value (0.91). The presence of Salmonella spp. detected in a few end-products sausages did not allow a full sensory evaluation in the mixed starter culture experiment. However, in the two preliminary experiments, the use of starter cultures did not depreciate the panellists’ overall appreciation and products acceptability.

Recuperação de carotenóides microbianos por diferentes técnicas de ruptura celular

O objetivo deste trabalho foi utilizar diferentes técnicas químicas (dimetilsulfóxido, ácido clorídrico, acético e lático), técnicas mecânicas (banho ultrassônico, abrasão com pérolas de vidro, maceração com terra diatomácea, ruptor ultrassônico e imersão em nitrogênio líquido) e técnica enzimática (preparado enzimático comercial Glucanex®) para a recuperação de carotenoides a partir da ruptura da parede celular das leveduras Sporidiobolus pararoseus e Rhodotorula mucilaginosa isoladas de amostras ambientais. Para isso a obtenção de biomassa foi realizada através de cultivos submersos no meio YM, a 25 °C, 180 rpm por 168 h. Para a ruptura celular, a operação de congelamento da biomassa (-18°C por 48 h) foi estudada. Os métodos de secagem convencional por ar forçado (35°C/48h) e liofilização (-80°C/48h, em ultrafreezer, seguido de liofilizador até alcançar 2% de umidade da amostra) também foram avaliados. Nas técnicas químicas aplicadas, o dimetilsulfóxido apresentou os melhores resultados para as duas leveduras, porém o seu uso é limitado devido a sua toxicidade. Para S. pararoseus, os maiores valores encontrados foram para o ácido clorídrico, seguido do acético e do lático, sendo detectada diferença entre eles quando aplicado o congelamento. Com R. mucilaginosa, os maiores valores foram encontrados para os ácidos acético e lático, seguido do ácido clorídrico, no qual o congelamento da biomassa também não influenciou a recuperação dos carotenoides. Dentre as técnicas mecânicas estudadas, para a levedura S. pararoseus, o banho ultrassônico e a abrasão com pérolas de vidro apresentaram os resultados mais promissores comparados ao DMSO (84,79±2,34 e 76,87±2,06 μg/g respectivamente), onde o processo de congelamento da biomassa não influenciou positivamente no percentual de extratibilidade e na concentração específica dos carotenoides quando utilizada estas técnicas. Com Rhodotorula mucilaginosa, o banho ultrassônico propiciou a recuperação da maior concentração específica de carotenoides (193,5±25,8 μg/g), sendo que o processo de congelamento também não influenciou positivamente no percentual de extratibilidade e na concentração específica dos carotenoides. Através do Delineamento Central Composto Rotacional (DCCR) 23 foi possível avaliar que a levedura S. pararoseus não demonstrou nenhum efeito sob as variáveis pH, temperatura e concentração de enzima. Assim, a melhor condição de trabalho escolhida foi pH 7,4, 30 ºC e concentração de enzima de 1,0 g/gcs, onde apresentou a concentração específica de 42,6 μg/g e volumétrica de 308 μg/L de carotenoides. Para R. mucilaginosa, a condição ótima foi definida como 1,0 g/gcs, pH 5,0 e temperatura de 30 ºC, onde foi encontrado 115,1±8,1 μg/g e 470,1±38,8 μg/L para a concentração específica e volumétrica de carotenoides, respectivamente. A utilização de técnicas combinadas empregando banho ultrassônico e lise enzimática não proporcionou melhorias nos resultados para ambas as leveduras. A liofilização provocou um ganho de 20% e 13,7% na concentração específica dos carotenoides das leveduras S. pararoseus e R. mucilaginosa, respectivamente, onde o congelamento da biomassa não influenciou significativamente (p<0,05) a recuperação de carotenoides provenientes das duas leveduras, podendo ser eliminada do processo. Assim, para S. pararoseus o banho ultrassônico e as pérolas de vidro apresentaram os melhores resultados na recuperação de carotenoides, e para R. mucilaginosa o melhor resultado foi alcançado com o banho ultrassônico.

Produção de lipídios microbianos a partir de glicerol bruto gerado na síntese de biodiesel

Diante da grande quantidade de glicerol bruto gerado na síntese do biodiesel e seu baixo valor comercial, torna-se fundamental encontrar formas alternativas para converter este substrato em produtos com valor agregado. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo avaliar diferentes leveduras oleaginosas capazes de metabolizar o glicerol bruto, gerado como coproduto na síntese de biodiesel, visando produzir biomassa como fonte de lipídios. Todos os cultivos foram realizados em frascos agitados, em condições estabelecidas de acordo com cada etapa do trabalho, sendo obtidos dados relativos ao crescimento celular e à produção de lipídios, tratados estatisticamente conforme o propósito. Lipomyces lipofer NRRL Y-1155 apresentou diferenças significativas em relação às outras leveduras oriundas de banco de cultura, atingindo 57,64% de lipídios na biomassa. Estas leveduras apresentarem perfis de ácidos graxos diferenciados, semelhantes aos dos principais óleos vegetais utilizadas na síntese de biodiesel, com predominância de ácidos graxos poli-insaturados, especialmente ácido linoleico (68,3% na levedura Rhodotorula glutinis NRRL YB-252). O ácido gama-linolênico, um ácido graxo essencial ω6, foi detectado em todas as leveduras analisadas, sendo que na biomassa de Candida cylindracea NRRL Y-17506 chegou a 23,1%. Através de um planejamento experimental Plackett-Burman, verificou-se que as variáveis concentração de extrato de levedura e de MgSO4.7H20 demonstraram maior influência na produção de lipídios por uma linhagem silvestre de Rhodotorula mucilaginosa. Para esta levedura, a partir da análise de efeitos foi possível estabelecer a seguinte condição para a produção de lipídios: 30,0 g.L-1 glicerol; 5,0 g.L-1 KH2PO4; 1,0 g.L-1 Na2HPO4; 3,0 g.L-1 MgSO4.7H2O; 1,2 g.L-1 extrato de levedura; pH inicial 4,5; temperatura 25°C. Nestas condições conseguiu-se um teor de lipídios de 59,96% e lipídios totais produzidos de 5,51 g.L-1 . Também foi possível observar aumento no teor de lipídios da biomassa ao longo do tempo de cultivo, bem como o aumento do teor relativo do ácido linoleico, que atingiu 52%. Dentre as leveduras isoladas a partir de amostras ambientais do Extremo Sul do Brasil, a levedura identificada como Cryptococcus humicola se destacou das demais, apresentando proporção de 23,5% de ácidos graxos saturados, 14,8% de ácidos graxos monoinsaturados e 54,9% de ácidos graxos poli-insaturados, destacando-se o ácido linoleico. O planejamento Plackett-Burman foi também utilizado para esta levedura, sendo que as variáveis concentração de extrato de levedura e glicerol bruto demonstraram maior influência na produção de lipídios. Posteriormente, um delineamento composto central rotacional (DCCR) foi proposto visando à otimização da produção de lipídios. Os modelos empíricos preditivos obtidos para biomassa máxima e lipídios totais permitiram estabelecer para a produção de lipídios por Cryptococcus humicola a seguinte condição otimizada: 100,0 g.L-1 glicerol; 5,0 g.L-1 KH2PO4; 1,0 g.L-1 Na2HPO4; 4,8 g.L-1 extrato de levedura; pH inicial 4,5; temperatura 25°C. Esta condição representou um incremento de cerca de 2 vezes nos lipídios totais em relação à melhor condição estabelecida pelo planejamento Plackett-Burmann e um acréscimo de cerca de 4,8 vezes em relação às condições testadas inicialmente, atingindo 37,61% de lipídios e 8,85 g.L-1 de lipídios totais. Deste modo, os propósitos de valorização de um coproduto oriundo da síntese de biodiesel, bem como a produção de um óleo com potencial para a produção de biodiesel, foram cumpridos.

Desenvolvimento e caracterização do queijo Santo Giorno, típico do sudoeste do Paraná, produzido com leite cru e fermento endógeno

Two cheese formulations made from raw milk and endogenous yeasts with 30, 60 and 180 days of maturation in two dairy Paraná Southwest were studied to evaluate their quality through physical, physical-chemical, microbiological and sensorial characteristics, as one of the stages of development of a typical regional cheese. The production was accompanied from designing the flowchart processing, where the samples were collected to perform the analysis of proteins, lipids, moisture, ash, carbohydrates, total solids, fat in dry matter, calories; water activity, instrumental texture (hardness, adhesiveness, springiness, cohesiveness, resiliency and chewiness), instrumental color (CIE Lab); microbiological quality was assessed searching for total and thermotolerant coliforms, coagulase positive staphylococci and Salmonella spp.; the acceptance related to sensory characteristics of color, appearance, flavor, texture, taste and purchase intent was evaluated through the structured hedonic scale. This research contributed information relevant to the production process, such as the realization of the viability in freeze-drying lactic acid bacteria yeast isolated from milk in the Southwestern Mesoregion of Parana and the results of the analysis of the cheese showed similarity between formulations, regarding the physical, physical-chemical characterization, moreover good microbiological quality, where the differences between samples of dairy products were not perceived by sensory panelists. Adjustments in standardization related to technological quality control is an extremely important factor for the success of dairy companies and small producers involved in the project and that they have the option of producing the Santo Giorno, a fine cheese, with the great advantage of adding features of region, with high standard of sanitary conditions and with great consumer acceptance of indicative.

Avaliação do potencial probiótico de leveduras isoladas de azeitonas de mesa da cultivar Negrinha de Freixo

Probióticos são definidos como microrganismos vivos, que quando administrados em quantidades adequadas, conferem benefícios à saúde do hospedeiro. Atualmente a pesquisa de microrganismos probióticos a partir da fermentação da azeitona tem-se centrado nas bactérias ácido-lácticas, sendo escassos os estudos envolvendo leveduras. No presente trabalho avaliou-se o potencial probiótico de estirpes de leveduras previamente isoladas durante o processo de fermentação natural de azeitona de mesada cultivar Negrinha de Freixo. Foram avaliadas 16 estirpes em relação à atividade enzimática (catalase, amilase, xilanase, protease e β-glucosidase); ao crescimento a 37ºC; ação inibitória frente a microrganismos patogénicos; capacidade de autoagregação; atividade antioxidante (utilizando o método de DPPH); e resistência ao aparelho digestivo humano, a partir de uma simulação in vitro da digestão gástrica e pancreática. Os resultados apresentados para a atividade enzimática indicaram que em alguns isolados foi detetado fraca atividade das enzimas protease, xilanase e amilase. Já uma atividade forte de lipase foi observada nas estirpes Pichia manshurica e Saccharomyces cerevisiae (15A e 15B). Para a enzima β-glucosidase, identificou-se atividade forte em Rhodotorula graminis, Rhodotorula glutinis, Candida norvegica, Pichia guilliermondii e Galactomyces reessii. Relativamente à capacidade de crescimento à temperatura corporal (37ºC), três estirpes (Saccharomyces cerevisiae 15B; Candida tropicalis 1A; e Pichia membranifaciens 29A) destacaram-se por apresentar maior taxa específica de crescimento. A capacidade bloqueadora dos radicais livres DPPH foi verificada em 10 estirpes, sendo as estirpes de S. cerevisiae as que mais se destacaram dentre as outras. As estirpes C. norvegica e G. reessii (34A) apresentaram capacidade antifúngica frente ao microrganismo patogénico Cryptococcus neoformans. Em relação à capacidade de autoagregação avaliada, as estirpes S. cerevisiae (15A), Candida tropicalis (1A) e C. norvegica (7A) apresentaram ao fim de 24 horas percentagens superiores a 80%. Relativamenteà resistência frente às condições presentes no trato gastrointestinal in vitro, a estirpe P. guilliermondii (25A), destacou-se dentre as demais, por apresentar maior capacidade de sobrevivência em todo o processo digestivo simulado. As estirpes Candida boidinii (37A) e S. cerevisiae (15A) apresentaram menor capacidade de sobrevivência nestas condições. Contudo, serão necessários testes adicionais para complementar estes resultados.

Isolamento, seleção e cultivo de leveduras com potencia biotecnológico para a produção de endo-xilaneses

Xilanases são enzimas que catalisam a hidrólise das xilanas e têm sido em grande parte, obtidas a partir de bolores e bactérias. No entanto poucos estudos têm sido relatados sobre a produção destas enzimas por leveduras. O presente trabalho teve como objetivo isolar leveduras de diferentes fontes vegetais visando à produção de xilanases, além de maximizar sua produção, estudar o uso de diferentes fontes de nitrogênio e cultivar as leveduras em meios contendo coprodutos agroindustriais. As amostras de alimentos e resíduos foram enriquecidas em caldo extrato de malte e levedura e isoladas em Ágar Nutriente Wallerstein, as leveduras isoladas foram, a seguir, avaliadas quanto à capacidade de degradar xilana presente no meio e produzir halos de hidrólise, os quais foram visualizados através do uso do corante vermelho congo. Os micro-organismos selecionados como potenciais produtores de xilanase foram crescidos em meio complexo líquido e as atividades enzimáticas de endoxilanase, β-xilosidase, carboximetilcelulase, celulase total, pH e concentração de biomassa foram avaliadas ao longo de 96 h de cultivo. Dentre as leveduras isoladas, sete foram selecionadas, e a 18Y foi a que apresentou a maior atividade de endo- xilanase (2,7 U.mL-1 ), sendo esta isolada de chicória e identificada como Cryptococcus laurentii. Esta estirpe apresentou capacidade de produzir xilanase com baixos níveis de celulase, sendo assim selecionada neste trabalho. A maximização de endo-xilanase foi avaliada fazendo uso de planejamento experimental onde primeiramente foi realizado um planejamento fracionário 2 6-2 para verificar os efeitos do pH inicial e as concentrações de xilana, peptona, (NH4)2SO4, extrato de levedura e KH2PO4 sobre a atividade enzimática. Após selecionar as variáveis xilana, peptona, pH e extrato de levedura foi realizado um delineamento composto central rotacional (24 ) onde todos os cultivos foram mantidos a 30°C, 150 rpm durante 96 h sendo retiradas alíquotas para determinação das atividades, pH e biomassa. A produção máxima foi de 6,9 U.mL-1 usando 10,0 g.L-1 de extrato de levedura, 10,0 g.L-1 de peptona, 10,0 g.L-1 de xilana, 1,0 g.L-1 de (NH4)2SO4 em pH 6,5 o que permitiu um incremento de mais de 250% sobre a atividade. Posteriormente foram realizados ensaios avaliando diferentes fontes e concentrações de nitrogênio orgânico e inorgânico. A presença de NH4NO3 e (NH₄)₂SO₄ usados na concentração de 3% proporcionaram as maiores atividades de endo-xilanase (6,2 e 6,0 U.mL-1 respectivamente). O sulfato de amônio foi selecionado e fixado em 1 g.L-1 e logo após um planejamento completo 22 foi realizado onde as variáveis xilana e extrato de levedura foram estudadas e as demais fixadas. As condições ótimas estabelecidas para a produção da enzima foram: concentração de xilana de 18,6 g.L-1 , concentração de extrato de levedura de 10 g.L-1 atingindo 14 U.mL-1 . Após a maximização enzimática estudou-se o crescimento de Pichia pastoris NRRL Y-1603 e Cryptococcus laurentti em cinco substratos agroindustriais visando a possibilidade estes substratos substituírem a xilana em cultivos para a produção de endo-xilanase. Os ensaios foram realizados utilizando os subtratos pré-tratados com NaOH 4% e não tratados. Para inserção dos mesmos aos meios de cultivo, estes foram moídos e adicionados na concentração de 2%. O pré-tratamento para todos as fontes de hemicelulose foi eficiente e promoveu aumento nas atividades produzidas. Cryptococcus laurentti apresentou maior atividade enzimática (8,7 U.mL-1 ) em farelo de arroz desengordurado e pré- tratado enquanto que a levedura Pichia pastoris NRRL Y-1603 apresentou sua melhor condição para produção de endo-xilanase quando cultivada em meio contendo casca de aveia e o farelo de arroz pré-tratados, alcançando atividades máximas de 7,6 e 7,5 U.mL-1 .

Fenóis voláteis em vinhos tintos

As leveduras Dekkera/Brettanomyces são responsáveis pela formação de fenóis voláteis em vinhos tintos, tornando-se numa grande preocupação para a produção enológica a nível mundial, devido à dificuldade em controlá-las. Os fenóis voláteis são responsáveis por aromas desagradáveis nos vinhos tintos, diminuindo a sua qualidade e resultando em grandes perdas económicas. Este trabalho teve como principal objectivo estudar um método de preparação de amostra e um método cromatográfico para analisar e quantificar os principais fenóis voláteis (4-etilfenol, 4-etilguaiacol, 4-etilcatecol, 4-vinilfenol e o 4-vinilguaiacol), em meio sintético e em vinhos tintos comerciais. A preparação de amostras foi efectuada através do método de extracção líquido-líquido e a separação dos compostos foi efectuada por cromatografia gasosa com detector de ionização de chama (GC-FID). Os resultados obtidos permitem concluir que é possível detectar e quantificar os fenóis voláteis com este método, incluindo o 4-etilcatecol. O 4-etilfenol foi o composto mais abundante nos vinhos tintos comerciais estudados. ABSTRACT: The yeasts Dekkera I Brettanomyces are responsible for the formation of volatile phenols in red wine, becoming a major concern for the enological production worldwide because of the difficulty in controlling them. The volatile phenols are responsible for unpleasant aromas in red wines, reducing its quality and resulting in great economic lasses. The main objective of this work was to study a sample preparation and a chromatographic method to analyze main volatile phenols (4-ethylphenol, 4-ethylguaiacol, 4-ethylcatechol, 4-vinylphenol and 4-vinylguaiacol) in synthetic wine and red wines. Sample preparation was done by liquid-liquid extraction and compounds separation was achieved by gas chromatography with flame ionization detector (GC­ FID) Results showed that it is possible to detect and quantified volatile phenols with the methodology proposed, including 4-ethylcatechol. 4-ethylphenol was the main compound found in commercial red wines.

EVALUATION OF THE ANTI-FUNGAL PROPERTIES OF EXTRACTS OF Daniella oliveri

The in vitro anti-fungal activity of leaf and stem bark of Daniella oliveri Rolfe was investigated against selected yeasts and moulds including dermatophytes. Water and methanol were used to extract the powdered leaf and stem bark using cold infusion. Antimicrobial activity was assessed by agar-well diffusion. Phytochemical analysis was carried out using standard procedures. The plant extracts were active against the test organisms at concentrations ranging from 3.125-100 mg/mL. The methanol extracts were more active than the aqueous extracts with the highest inhibition against the yeasts, Candida albicans and Candida krusei (MIC values of 3.125 mg/mL and 6.25 mg/mL respectively). Epidermophyton floccosum and Trichophyton interdigitale were the least inhibited of all the fungal strains. Phytochemical screening revealed the presence of tannins, anthraquinones, flavonoids, cardiac glycosides, alkaloids and saponins. The anti-fungal activity of Daniella oliveri as shown in this study indicates that the plant has the potential of utilisation in the development of chemotherapeutic agents for the treatment of relevant fungal infections.

MICROBIOLOGICAL ANALYSIS OF TRADITIONALLY FERMENTED MILK SOLD IN KINIGI SECTOR OF MUSANZE DISTRICT IN RWANDA

A research work entitled: “Microbiological analysis of traditionally fermented milk (Ikivuguto) sold in Kinigi Sector of Musanze District,” was carried out at Higher Learning Institution of Applied Sciences (INES-Ruhengeri) Laboratory of Microbiology located near Volcanoes in the Northern Province of Rwanda. The main objective of this work was to determine the microbiological quality of traditionally fermented milk, which is consumed by Kinigi Center local people. The hypothesis was to analyze if traditionally fermented milk commercialized in Kinigi restaurants contained pathogenic bacteria such as fecal coliforms and Escherichia coli , in addition to staphylococci and yeasts. Milk samples were collected from Kinigi sector and examined in the microbiology laboratory in order to assess the microbiological quality and safety of traditionally fermented milk in rural areas. The samples were analyzed qualitatively and quantitatively for the microbes found in fermented milk sold in Kinigi Center, and the results were as follows: 7.21x107 CFU/ml for total counts; 3.89x107 CFU/ml for Lactobacillus ; 2.77x107 CFU/ml for yeasts; 1.196x105 CFU/ml for total coliforms; 9.63x104 CFU/ml for fecal coliforms and 8.92x103 CFU/ml for staphylococci. Biochemical tests were carried out and the results showed that identified pathogens were E. coli, Providencia alcalifaciens , and the staphylococci group. It was found that fermented milk contained genera and species of Staphylococcus haemolyticus , Staphylococcus aureus , Staphylococcus intermedius , Staphylococcus xylosus and Staphylococcus saprophyticus . Findings showed that the commercial milk samples were cross-contaminated by different pathogens from environment. These contaminations could have been due to improper handling, presence of flies, soil erosion, dust from atmosphere, as well as contaminated milk vessels or pots, stirrers and unpasteurized water. It was concluded that local farmers and milk retailers did not adhere to required hygienic conditions for milk safety. In this regard, the sold traditional fermented milk does not meet health and safety standards because people did not respect good manufacturing practices. The hypothesis and main objective were confirmed, because traditionally fermented milk of Kinigi was cross-contaminated before consumption. Thus, it would be better to train farmers in the areas of product hygiene, sanitation and safety during milking, processing and marketing.

Novel point mutations in the ERG11 gene in clinical isolates of azole resistant Candida species

The azoles are the class of medications most commonly used to fight infections caused by Candida sp. Typically, resistance can be attributed to mutations in ERG11 gene (CYP51) which encodes the cytochrome P450 14α-demethylase, the primary target for the activity of azoles. The objective of this study was to identify mutations in the coding region of the ERG11 gene in clinical isolates of Candida known to be resistant to azoles. We identified three new synonymous mutations in the ERG11 gene in the isolates of Candida glabrata (C108G, C423T and A1581G) and two new nonsynonymous mutations in the isolates of Candida krusei - A497C (Y166S) and G1570A (G524R). The functional consequence of these nonsynonymous mutations was predicted using evolutionary conservation scores. The G524R mutation did not have effect on 14α-demethylase functionality, while the Y166S mutation was found to affect the enzyme. This observation suggests a possible link between the mutation and dose-dependent sensitivity to voriconazole in the clinical isolate of C. krusei. Although the presence of the Y166S in phenotype of reduced azole sensitivity observed in isolate C. krusei demands investigation, it might contribute to the search of new therapeutic agents against resistant Candida isolates.

Effect of nitrogen nutrition on yeast ecology and alcoholic fermentation

Mestrado Vinifera Euromaster - Instituto Superior de Agronomia - UL

Liver injury from ampicillin-induced intestinal microbiota distresses in rats fed carbohydrate- and protein-rich diets

Purpose: To investigate the effect of ampicillin on rat intestinal microflora and liver in the presence of high carbohydrate and protein diets. Methods: Male Wistar albino rats were divided into four groups. The first group served as the control, the second group was treated with ampicillin (50 mg/kg for 3 weeks) and fed with a standard diet, while the third and fourth groups were treated with the same dose of ampicillin and fed with acarbohydrateand protein-rich diets, respectively, to observe the effect of diet on gut flora and liver. Fecal specimens were collected and used for qualitative determination of gut microbiota composition. Serum hepatospecific markers (AST, ALT and ALP) were estimated. The antioxidant status of liver tissues was estimated for GSH, MDA, GST, LDH and vitamin C l, in addition to sodium and potassium. Results: Administration of orogastric dose of ampicillin for 3 weeks induced inhibition of E.coli, yeasts, total anaerobes, and anaerobic lactobacilli with new growth of P. vulgaris and K. pneumonia. The levels of serum AST, ALT and ALP showed significant (p ˂ 0.05) increase to 163, 112.38 and 115.35 %, respectively in ampicillin-treated animals, compared to control. Also significant (p ˂ 0.05) increase in lipid peroxidation (120 %) and LDH (111 %) coupled with significant (p ˂ 0.05) decrease in glutathione (74.57 %), vitamin C (63.49 %) and glutathione S-transferase (41.51 %) were observed in ampicillintreated groups. No significant variation (p ˂ 0.05) in sodium and potassium levels were found between control and the treated group after 3 weeks of treatment. Conclusion: These results confirm that extended ampicillin therapy disrupts gut flora, which results in liver injury; hence, overuse of antibiotics should be avoid.