A liquid phase blocking ELISA for the detection of antibodies against infectious bronchitis virus

A liquid phase blocking ELISA (LPB-ELISA) was developed for the detection and measurement of antibodies against infectious bronchitis virus (IBV). The purified and nonpurified virus used as antigen, the capture and detector antibodies, and the chicken hyperimmune sera were prepared and standardized for this purpose. A total of 156 sera from vaccinated and 100 from specific pathogen-free chickens with no recorded contact with the virus were tested. The respective serum titers obtained in the serum neutralization test (SNT) were compared with those obtained in the LPB-ELISA. There was a high correlation (r2 = 0.8926) between the two tests. The LPB-ELISA represents a single test suitable for the rapid detection of antibodies against bronchitis virus in chicken sera, with good sensitivity (88%), specificity (100%) and agreement (95.31%).

Direct detection of infectious bursal disease virus from clinical samples by in situ reverse transcriptase-linked polymerase chain reaction

The presence of the very virulent (vv) Brazilian strain of infectious bursal disease virus (IBDV) was determined in the bursa of Fabricius, thymus and liver of 2-week-old broilers from a flock with a higher than expected mortality. For this purpose, a direct in situ reverse transcriptase (RT)-linked polymerase chain reaction (PCR) method was developed using specific primers for vvIBDV. Unlabelled forward and reverse biotinylated oligonucleotides were used for RT-PCR in a one-step method and the respective products were revealed by a direct enzymatic reaction. The results were compared with those obtained by standard RT-PCR using general primers for IBDV and virus isolation. The virus isolation, RT-PCR and in situ RT-PCR revealed positive results on the bursa of Fabricius in 86%, 80% and 100%, respectively. The in situ RT-PCR detected vvIBDV in all tested thymus and liver samples, whereas the standard RT-PCR detected virus in 80% and 90% of the samples, respectively. After three consecutive passages on chicken embryonated eggs, IBDV was isolated from 64% of the thymus samples and 30% of the liver samples. In the present study, no classical or antigenic variants of IBDV were detected. The developed in situ RT-PCR assay was able to detect the very virulent strain of IBDV with a higher sensitivity than the conventional RT-PCR and virus isolation.

Influence of Steroidal Anti-Inflammatory Drugs on Viability and Fertility of Equine Semen

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Emerging infectious diseases in cetaceans worldwide and the possible role of environmental stressors

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

The influence of hydroxyurea on oxidative stress in sickle cell anemia

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Relationship between oxidative stress, glutathione S-transferase polymorphisms and hydroxyurea treatment in sickle cell anemia

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Serum melatonin level and oxidative stress in sickle cell anemia

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Molecular epidemiology and evolution of avian infectious bronchitis virus

Mutation and recombination processes are involved in the genetic and phenotypic variations of RNA viruses, leading to the emergence of new variant strains, and give rise to virus population diversity to be modeled by the host, particularly by the immune system, as occurred with infectious bronchitis virus (IBV) in chickens. The consequence is a continuous emergence of new IBV variants with regard to pathotypes, serotypes, and protectotypes. Nucleotide sequencing and subsequent genetic analysis of the S1 and N protein gene sequences provide a fast and accurate method to classify and predict IBV genotype, and a powerful instrument to monitor phylogenetic and epidemiological evolution of IBV variants. Despite the use of vaccination programmes, infectious bronchitis has become a serious problem in Brazil. Thus, a significant number of IBV field variants have been identified circulating in the Brazilian commercial poultries between 2000 to 2006 and more recently in Argentina. These viruses seem to be indigenous, because they demonstrated a low genetic relatedness with the majority of the reference strains from North America, Europe and Asia, but were moderately to highly related one to another. In summary, indigenous field IBV variants were evolving and circulating in the field in Brazil and Argentina, and should be considered as initial candidates for protection against current IBV infectious in chickens. However, in vitro and in vivo studies are needed to determine the pathogenicity and immunogenecity of these new isolates, before defining a new vaccine strain.

Rabies laboratory diagnosis: peculiar features of samples from equine origin

O diagnóstico laboratorial da raiva é realizado através de métodos de pesquisa do corpúsculo de Negri, imunofluorescência direta e inoculação em camundongos. Na maioria dos casos, quando a amostra é bem coletada, bem conservada e o profissional responsável possui experiência, verifica-se concordância entre as técnicas utilizadas. A Seção de Raiva e Encefalomielite do Instituto Biológico ao comparar a sensibilidade das três técnicas diagnósticas, em 3713 amostras (córtex cerebral, cerebelo e hipocampo) recebidas no período de 1980-1994, sendo 3010 da espécie bovina (983 positivas) e 703 da espécie eqüina (111 positivas), observou que, no caso da raiva eqüina, esta concordância não é mantida. Verificou-se, nesta espécie, que somente em algumas oportunidades foi possível identificar, pelo método histopatológico, o corpúsculo de Negri. em relação à prova de imunofluorescência pode-se afirmar que a mesma detectou uma porcentagem menor de amostras positivas, provenientes da espécie equina, em compração com as da espécie bovina, sendo esta diferença estatisticamente significativa. A prova biológica foi a mais sensível, porém houve uma diferença, também significativa, entre o período de incubação em camundongos das amostras de origem bovina e das de origem eqüina. A presença pouco frequente de corpúsculos de Negri e o período de incubação em camundongos mais prolongado, das amostras de origem eqüina, sugerem que devem ser intensificados os estudos da patogenia da raiva nesta espécie.

Cara inchada of cattle, an infectious, apparently soil antibiotics-dependant periodontitis in Brazil

O objetivo desta revisão das pesquisas sobre a cara inchada dos bovinos (CI), realizadas no decorrer dos últimos 30 anos, é de elucidar melhor a sua etiologia. A CI geralmente tem sido considerada de origem nutricional, causada primariamente por deficiência ou desequilíbrio mineral. A doença caracteriza-se por uma periodontite rapidamente progressiva, que afeta os tecidos peridentários a nível dos premolares e molares no período de erupção dos dentes e que se inicia geralmente em bezerros jovens. A doença causou grandes perdas econômicas aos pecuaristas da Região Centro-Oeste do Brasil, nas décadas de 1960 e 1970, com a ocupação de novas terras para criação de gado. O freqüente abaulamento lateral dos ossos maxilares nos bezerros, que deu à doença o nome popular de cara inchada, foi demonstrado ser conseqüente à periostite crônica ossificante resultante da alveolite purulenta da CI. Das lesões peridentárias foi isolado, em grande número, Bacteroides melaninogenicus, sempre junto com Actinomyces (Corynebacterium) pyogenes. Bactérias classificadas como pertencentes ao grupo sacarolí-tico e não-sacarolítico dos pigmentados de negro Bacteroides melaninogenicus e Bacteroides spp também foram isoladas, em pequeno número, de bovinos jovens sadios de fazendas CI-negativas. Ensaios in vitro mostraram que os antibióticos estreptomicina e actinomicina, bem como os sobrenadantes de cultivos de actinomicetos do solo de fazendas CI-positivas, aplicadas nas bactérias ensaiadas em concentrações subinibidoras, aumentaram significativamente (até 10 vezes) a aderência de B.melaninogenicus a células epiteliais da gengiva bovina. Esses antibióticos são produzidos no solo em conseqüência de um aumento do número de actinomicetos, incluindo os do gênero Streptomyces, quando há modificação de sua microbiota em áreas previamente ocupadas por mata virgem ou vegetação natural de Cerrado, que foram cultivadas pela primeira vez na formação de pastagem para o gado. em face da epidemiologia da CI, há fortes evidências de que a ingestão desses antibióticos pelos bovinos, junto com a forrageira, seja importante fator desencadeante para o desenvolvimento da periodontite. Através do aumento da aderência de B. melaninogenicus ao epitélio da gengiva marginal, em face da ingestão dos antibióticos pelos animais, as bactérias conseguem colonizar, formar a placa bacteriana e tornar-se patogênicas. Há evidência de que o fator desencadeante (aparentemente, os antibióticos) esteja também presente no leite de vacas-mães de bezerros afetados pela CI. Foi demonstrado que as bactérias envolvidas na periodontite produzem enzimas e endotoxinas capazes de ação destrutiva sobre os tecidos peridentários. A epidemiologia da CI, com a diminuição de sua incidência e o seu desaparecimento no decorrer dos anos, pode ser explicada pelo fato de que o prévio equílibrio da microbiota no solo virgem foi alcançado novamente e a produção dos antibióticos se reduziu. Desta maneira, a CI deve ser considerada como uma periodontite infecciosa multifatorial, causada sobretudo por bactérias anaeróbias pertencentes ao grupo Bacteroides melaninogenicus e, ao que tudo indica, desencadeada pela ingestão contínua, com a forrageira, de concentrações subinibidoras de antibióticos de solos recentememente cultivados. Esta hipótese é reforçada pela observação recente de novos surtos de CI, em áreas anteriormente positivas para a doença, em conseqüência da reforma de pastagens e capineiras após muitos anos. A natureza infecciosa da CI-periodontite foi confirmada através de experimento, em que virginiamicina mostrou-se eficaz no tratamento oral de bovinos afetados pela doença. Os antibióticos espiramicina e virginiamicina, usados como aditivos em suplementos minerais no campo, mostraram-se eficientes na prevenção da CI.

Genetic grouping of avian infectious bronchitis virus isolated in Brazil based on RT-PCR/RFLP analysis of the S1 gene

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)