Inflammatory responses of Nile tilapia Oreochromis niloticus to Streptococcus agalactiae: effects of vaccination and yeast diet supplement

This study evaluated the effects of dietary supplementation with 0.3% Saccharomyces cerevisiae yeast cell wall and of vaccination against Streptococcus agalactiae on the cellular component of acute inflammation induced in the coelomic cavity of Nile tilapia Oreochromis niloticus and on survival of the fish after challenge. A total of 84 tilapia of mean (+/- SD) weight 125.0 +/- 1.5 g were distributed among twelve 310 l fiberglass tanks according to a 2 x 2 x 3 factorial design in the following manner: with and without supplementation; 2 stimulations (oily solution without S. agalactiae vaccine and vaccination); 15 d later all fish were intracoelomically challenged with 10(8) CFU ml(-1) of a homologous strain of S. agalactiae, and evaluated after 6, 24 and 48 h, with 7 replicates. The fish received the non-supplemented or supplemented diet for a total of 77 d. The vaccination was performed on the 60th day, intracoelomically, as a single injection of 0.5 ml of the vaccine containing 10(8) CFU ml(-1). Fifteen days later, all the fish were challenged with S. agalactiae by means of an intracoelomic inoculation of 10(8) CFU ml(-1). No mortality was observed among the supplemented fish. The fish that were fed the non-supplemented diet and immunized with the bacterium presented a mortality rate of 28.5%. Among the non-supplemented and non-immunized fish, the mortality rate was 38.09%. Supplementation, in both vaccinated and non-vaccinated fish, induced larger accumulations of thrombocytes, lymphocytes and macrophages at the inflammatory focus. The results suggest that supplementation with 0.3% yeast cell wall, in both vaccinated and non-vaccinated fish, improved the inflammatory response of the fish and protected against the challenge. Vaccination increased the defense response, but the effect was stronger when associated with supplementation with S. cerevisiae.

Inflammation induced by inactivated Aeromonas hydrophila in Nile tilapia fed diets supplemented with Saccharomyces cerevisiae

The inflammatory response and hernatological parameters among Nile tilapia (Oreochromis niloticus) supplemented with Saccharomyces cerevisiae were evaluated six and 24 h after inoculation with inactivated Aeromonas hydrophila into the swim bladder. Six groups were formed (n = 10 each): G1 was treated with non-supplemented feed+injection with 0.65% saline solution; G2 with non-supplemented feed+ inoculation with A. hydrophila: G3 with feed containing 2% yeast+ injection with saline; G4 with feed containing 2% yeast + inoculation with A. hydrophila: G5 with feed containing 0.3% cell wall + injection with saline: and G6 with feed containing 0.3% cell wall + inoculation with A. hydrophila. In the groups inoculated with bacteria, the responses were more intense (P<0.05) than in those injected with saline. The groups receiving supplement that were inoculated with A. hydrophila accumulated a greater total number of cells at the lesion site (P<0.05) than did the non-supplemented groups, after six and 24 h. The groups receiving cell wall presented greater total accumulation of cells (P<0.005) that did those receiving yeast. The differential count showed that there were significantly greater number of thrombocytes (P< 0.05) and lower number of neutrophils, macrophages and lymphocytes (P<0.05) in the groups that received supplement, after 6 and 24 h, in relation to the non-supplemented groups. The values in the erythrocyte count, hemoglobin concentration and blood measurement indices did not differ statistically. The variation in circulating thrombocyte and leukocyte counts suggests that the inflammatory stimulus caused recruitment from reserve compartments to the blood. The groups that received yeast or yeast cell wall supplements presented increased nonspecific acute inflammatory response, thus suggesting that this has a beneficial effect on the immunological defense system. Published by Elsevier B.V.

Experimental infection by Salmonella enterica subsp enterica serovar kottbus in day-old broiler chickens

The strain used in this work was a Salmonella enterica subsp enterica serovar Kottbus (6,8:e,h:1,5) isolated from imported day-old ducklings in Laboratório Nacional Agropecuário (LANAGRO/SP) of the Ministry of Agriculture of Brazil (MAPA). In view of the lack of information available about this Salmonella isolate and also because it was detected in day-old imported birds, this study was carried out to investigate the dissemination of S. Kottbus among newly hatched chicks. The birds were placed in three groups: one group of 20 birds received 0.1 mL of S. Kottbus culture containing 1.2 x 10(8) CFU/mL, the second group of 20 birds was inoculated with 1.2 x 10(5) CFU/mL and the third group of 10 birds was untreated (control group). Results were similar for both infected groups. The bacterium was recovered from cloacal swabs collected from the first day following the experimental infection until the end of the trial (42 days post-inoculation). At 15 and 42 days post-inoculation (dpi), half of the birds of each group were killed for bacteriological examination of cecal contents, liver and spleen. At 15 dpi, viable cell counts of S. Kottbus were obtained in all kinds of samples. At 42 dpi, Salmonella was present in the liver and spleen of few birds, but in large amounts in the cecal contents of almost all birds.

Mechanism of infection and colonization of Rhipicephalus sanguineus eggs by Mertarhizium anisopliae as revealed by scanning eletron microscopy and histopathology

O presente trabalho teve como objetivo verificar a forma de penetração do fungo Metarhizium anisopliae em ovos do carrapato Rhipicephalus sanguineus, assim como as lesões infringidas no interior do ovo. A aderência e penetração do fungo foram estudadas por meio da microscopia eletrônica de varredura e a ação do fungo nos tecidos internos avaliada em secções histológicas convencionais. Para observação destes eventos, realizaram-se infecções experimentais em 11 grupos de ovos do R. sanguineus contendo 25 mg cada. Os ovos foram banhados durante 3 minutos, sob agitação manual, em suspensão com concentração de 10(8) conídios/mL. Nos grupos controle o banho foi realizado apenas no veículo da suspensão. Os ovos foram processados para análise histopatológica e microscopia eletrônica de varredura nos seguintes tempos após a infecção: 1 e 18h, e um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, nove e onze dias. Observou-se grande germinação de conídios em 67% dos ovos 18h após a inoculação e o fungo penetrou em 92,6% dos ovos 5 dias após a infecção. A extrusão do patógeno ocorreu em 87% dos ovos 7 dias após a infecção, chegando a 100% no 9º dia. Nas análises histopatológicas não foram observadas lesões dignas de nota, porem deve-se ressaltar que houve significativa redução (53,9%) na eclosão a partir dos ovos infectados.

Disseminated avian tuberculosis in captive Ara macao

Avian mycobacteriosis was diagnosed in a captive scarlet macaw (Ara macao) that presented multifocal granulomas on subcutaneous tissue, sciatic nerves, infraorbital sinus, trachea, air sacs, muscles, spleen and liver. Microscopically, central areas of caseous necrosis surrounded by epithelioid macrophage, multinucleated giant cells, and lymphocytes were observed. Acid-fast bacilli were demonstrated by Ziehl-Neelsen stain. Inoculation into Lowenstein-Jensen, Stonebrink and Petragnani media, yielded Mycobacterium spp, which was identified as Mycobacterium avium by polymerase chain reaction technique (PCR).

Reaction of sugarcane genotypes to Pratylenchus brachyurus and P. zeae

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Identification of new Bremia lactucae races in lettuce in São Paulo state

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Growth and enzymatic responses of phytopathogenic fungi to glucose in culture media and soil

The effect of inoculation of Aspergillus flavus, Fusarium verticillioides, and Penicillium sp. in Dystrophic Red Latosol (DRL) and Eutroferric Red Latosol (ERL) soils with or without glucose on the total carbohydrate content and the dehydrogenase and amylase activities was studied. The fungal growth and spore production in culture medium with and without glucose were also evaluated. A completely randomized design with factorial arrangement was used. The addition of glucose in the culture medium increased the growth rate of A. flavus and Penicillium sp. but not of F. verticillioides. The number of spores increased 1.2 for F. verticillioides and 8.2 times for A. flavus in the medium with glucose, but was reduced 3.5 times for Penicillium sp. The total carbohydrates contents reduced significantly according to first and second degree equations. The consumption of total carbohydrates by A. flavus and Penicillium sp. was higher than the control or soil inoculated with F. verticillioides. The addition of glucose to soils benefited the use of carbohydrates, probably due to the stimulation of fungal growth. Dehydrogenase activity increased between 1.5 to 1.8 times (p <0.05) in soils with glucose and inoculated with the fungi (except F. verticillioides), in relation to soil without glucose. Amylase activity increased 1.3 to 1.5 times due to the addition of glucose in the soil. Increased amylase activity was observed in the DRL soil with glucose and inoculated with A. flavus and Penicillium sp. when compared to control.

Colonização e lesão em fêmeas ingurgitadas do carrapato Rhipicephalus sanguineus causadas pelo fungo Metarhizium anisopliae

O presente trabalho teve como objetivo verificar a forma de penetração do fungo Metarhizium anisopliae [METSCH. (SOROKIN, 1883)] em carrapatos da espécie Rhipicephalus sanguineus (LATREILLE, 1806), assim como as lesões infringidas nos tecidos internos do ácaro. A forma de aderência e penetração do fungo foi estudada através da microscopia eletrônica de varredura e a ação do fungo nos tecidos internos avaliada em secções histológicas convencionais. Para observação destes eventos, realizaram-se infecções experimentais em 11 grupos de fêmeas ingurgitadas do carrapato R. sanguineus contendo 12 fêmeas ingurgitadas cada. Para tal, as fêmeas ingurgitadas foram banhadas durante 3 minutos, sob agitação manual, em suspensão com concentração 108 conídios/mL. No caso dos grupos controle o banho foi realizado apenas no veículo da suspensão. Os carrapatos foram processados para histopatologia e microscopia eletrônica em diversos tempos após a infecção, a saber: 1 e 18h, e um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, nove e onze dias. Observou-se que a maior parte dos conídios germinou em até 18h após a inoculação e que o fungo penetrou no ácaro através do tegumento 48h após a infecção. Após a penetração, o fungo invadiu o corpo do hospedeiro promovendo uma colonização difusa, sem preferência aparente por tecidos específicos. Dentre as lesões nos tecidos internos do ácaro, ressalta-se o rompimento da parede intestinal e vazamento do conteúdo para a hemocele. A morte do hospedeiro ocorreu entre 96 e 120h pós-infecção, e a esporulação do patógeno sobre o cadáver do ácaro iniciou-se em torno de 120 a 144h pós-infecção. Espera-se, com este trabalho, contribuir para o desenvolvimento e viabilização de técnicas de controle biológico dos carrapatos por fungos como alternativa ao uso de acaricidas.

Controle de larvas de Boophilus microplus por Metarhizium anisopliae em pastagens infestadas artificialmente

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Monitoramento de raças de Bremia lactucae em 2010 e 2011 no Estado de São Paulo

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Eventos externos e internos da infecção de larvas e ninfas de Rhipicephalus sanguineus por Metarhizium anisopliae

Examinaram-se a adesão, a germinação, a penetração e a colonização de larvas e ninfas de Rhipicephalus sanguineus por Metarhizium anisopliae, assim como as lesões infringidas pelo fungo nas respectivas fases do ciclo de vida do ácaro. Realizaram-se infecções experimentais em 11 grupos contendo 250 larvas e 11 grupos contendo 75 ninfas de R. sanguineus, por meio de banho, durante três minutos sob agitação manual, em suspensão contendo 10(8) conídios/ml do fungo. Nos grupos-controles, o banho foi realizado usando o veículo da suspensão. Larvas e ninfas foram processadas para um estudo histopatológico e de microscopia eletrônica de varredura nos seguintes tempos após a infecção: uma e 18 horas, e um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, nove e 11 dias. A germinação dos conídios ocorreu em até 18 horas pós-inoculação, e o fungo penetrou nas larvas e ninfas através do tegumento, dois e três dias após a infecção, respectivamente. Após penetração, o fungo invadiu o corpo das larvas e ninfas, promovendo uma colonização difusa, sem preferência aparente por tecidos específicos. Lesões significativas não foram observadas. A morte das larvas e ninfas ocorreu no terceiro e quarto dias pós-infecção, e a esporulação do patógeno sobre o cadáver foi iniciada no sexto dia pós-infecção.

Avaliação da resistência à Xylella fastidiosa em germoplasma de tangerina e híbridos introduzidos da Itália e Córsega

A Clorose Variegada dos Citros (CVC), causada pela bactéria Xylella fastidiosa, é atualmente uma das doenças que mais afeta a citricultura brasileira, sendo as variedades de laranja-doce as mais afetadas. Ensaio instalado na Estação Experimental de Bebedouro (EECB), em condições de estufa, teve como objetivo avaliar o comportamento em relação à CVC de germoplasma de citros introduzidos pela EECB, Fundecitrus e Cenargen. Os materiais foram multiplicados sobre diversos porta-enxertos e, quando atingiram o tamanho adequado, inoculados por garfagem lateral de ramo doente. Cada variedade constou de quatro plantas, três das quais foram inoculadas, e a outra sem inocular deixada como padrão. As avaliações consistiram na observação de sintomas, teste de ELISA e PCR. Os primeiros sintomas nos materiais contaminados começaram a surgir 7 meses após a inoculação. Encontraram-se 18 variedades positivas no teste de PCR, o que indica sua suscetibilidade à bactéria Xylella fastidiosa. Entretanto, as variedades que foram detectadas pelo teste ELISA e não pelo PCR não foram contadas como suscetíveis e, sim, como falsos positivos.

Patogenicidade de isolados de três fungos entomopatogênicos a soldados de Atta sexdens sexdens (Linnaeus, 1758) (Hymenoptera : Formicidae)

As formigas cortadeiras atacam diversas culturas agrícolas, pastagens e os reflorestamentos, atuando sobre muitas espécies vegetais. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a patogenicidade dos fungos Beauveria bassiana (isolados AM 9 e JAB 06), Metarhizium anisopliae (isolados E 9 e AL) e Paecilomyces farinosus (isolados CG 189 e CG 195) a soldados de Atta sexdens sexdens, em condições de laboratório. Após a coleta em formigueiro isento de produtos fitossanitários, exemplares de soldados foram cuidadosamente separados em grupos de oito indivíduos e, a seguir, banhados em suspensões contendo 1,0 x 10(6), 1,0 x 10(7), 1,0 x 10(8) e 1,0 x 10(9) conídios/mL de cada isolado. em seguida, cada grupo de formigas foi transferido para unidades de câmara úmida e mantido, sem alimentação, a 27 ± 1 ºC. A mortalidade foi verificada diariamente. Os três fungos se mostraram eficientes patógenos, pois provocaram alta mortalidade, matando mais que 80% dos soldados nos quatro primeiros dias após a inoculação. Os melhores isolados foram JAB 06 e AL, na concentração de 1,0 x 10(9) con./mL. Os isolados JAB 06, AL, CG 195 apresentaram maior capacidade de esporular nos cadáveres das formigas e os tempos letais decresceram com o aumento da concentração de conídios usada.

Resistência de pimentas a nematóides de galha e compatibilidade enxerto/porta-enxerto entre híbridos de pimentão e pimentas

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)