Lipoprotein-associated phospholipase A2 (Lp-PLA2) as a therapeutic target to prevent retinal vasopermeability during diabetes

Lipoprotein-associated phospholipase A2 (Lp-PLA2) hydrolyses oxidized low-density lipoproteins into proinflammatory products, which can have detrimental effects on vascular function. As a specific inhibitor of Lp-PLA2, darapladib has been shown to be protective against atherogenesis and vascular leakage in diabetic and hypercholesterolemic animal models. This study has investigated whether Lp-PLA2 and its major enzymatic product, lysophosphatidylcholine (LPC), are involved in blood-retinal barrier (BRB) damage during diabetic retinopathy. We assessed BRB protection in diabetic rats through use of species-specific analogs of darapladib. Systemic Lp-PLA2 inhibition using SB-435495 at 10 mg/kg (i.p.) effectively suppressed BRB breakdown in streptozotocin-diabetic Brown Norway rats. This inhibitory effect was comparable to intravitreal VEGF neutralization, and the protection against BRB dysfunction was additive when both targets were inhibited simultaneously. Mechanistic studies in primary brain and retinal microvascular endothelial cells, as well as occluded rat pial microvessels, showed that luminal but not abluminal LPC potently induced permeability, and that this required signaling by the VEGF receptor 2 (VEGFR2). Taken together, this study demonstrates that Lp-PLA2 inhibition can effectively prevent diabetes-mediated BRB dysfunction and that LPC impacts on the retinal vascular endothelium to induce vasopermeability via VEGFR2. Thus, Lp-PLA2 may be a useful therapeutic target for patients with diabetic macular edema (DME), perhaps in combination with currently administered anti-VEGF agents.

Thromboxane A2 receptor (TBXA2R) is a potent survival factor for triple negative breast cancers (TNBCs)

Triple Negative Breast Cancer (TNBC) is defined by the lack of ERα, PR expression and HER2 overexpression and is the breast cancer subtype with the poorest clinical outcomes. Our aim was to identify genes driving TNBC proliferation and/or survival which could represent novel therapeutic targets. We performed microarray profiling of primary TNBCs and generated differential genelists based on clinical outcomes following the chemotherapy regimen FEC (5-Fluorouracil/Epirubicin/Cyclophosphamide -‘good’ outcome no relapse > 3 years; ‘poor’ outcome relapse < 3 years). Elevated expression of thromboxane A2 receptor (TBXA2R) was observed in ‘good’ outcome TNBCs. TBXA2R expression was higher specifically in TNBC cell lines and TBXA2R knockdowns consistently showed dramatic cell killing in TNBC cells. TBXA2R mRNA and promoter activities were up-regulated following BRCA1 knockdown, with c-Myc being required for BRCA1-mediated transcriptional repression. We demonstrated that TBXA2R enhanced TNBC cell migration, invasion and activated Rho signalling, phenotypes which could be reversed using Rho-associated Kinase (ROCK) inhibitors. TBXA2R also protected TNBC cells from DNA damage by negatively regulating reactive oxygen species levels. In summary, TBXA2R is a novel breast cancer-associated gene required for the survival and migratory behaviour of a subset of TNBCs and could provide opportunities to develop novel, more effective treatments.

Konnektorer i inlärarsvenska på CEFR-nivåerna A1, A2 och B1 – en longitudinell analys ur ett funktionellt perspektiv

Syftet med avhandlingen har varit att granska finska inlärares konnektorbruk på CEFR-nivåerna A1, A2 och B1 longitudinellt ur ett funktionellt perspektiv. Jag har studerat vad som är kännetecknande för konnektorbruket på dessa CEFR-nivåer och i vilken funktion konnektorerna har använts på dessa nivåer. Vidare har jämförts konnektorbruket i materialet med det som sägs i CEFR-kriterierna. Slutligen har jag också granskat hur konnektorbruket utvecklas. Som material har jag använt berättande texter (n=303) skrivna av 101 finskspråkiga grundskolelever och gymnasister. Materialet ingår i projektet Topling – Inlärningsgångar i andraspråket vid Jyväskylä universitet. I avhandlingen har använts såväl kvantitativa som kvalitativa metoder. Jag har räknat konnektorernas och konnektorkategoriernas frekvenser samt analyserat i vilka funktioner konnektorerna har använts. I den funktionella analysen har använts systemisk-funktionell lingvistik (Halliday & Matthiessen 2004) samt Labovs (1972) modell om berättelsestrukturen. Analysen har visat att konnektorbruket skiljer sig mellan CEFR-nivåerna A1, A2 och B1. Antalet konnektorer ökar såväl från nivå A1 till A2 som från nivå A2 till nivå B1 och andelen additiva och målspråksavvikande konnektorer minskar medan andelen temporala, kausala och komparativa konnektorer samt att ökar. Konnektorerna har använts först och främst i deras prototypiska funktioner på alla dessa CEFR-nivåer. Vissa konnektorer (när, eftersom, att) verkar även ha en funktion i berättelsestrukturen. Om man jämför konnektorbruket med CEFR-kriterierna kan man konstatera att inlärare på nivå A1 använder pronomenet den i stället för sedan även om denna konnektor nämns i CEFR-kriterierna på nivå A1. Konnektorbruket verkar utvecklas på det sättet att antalet konnektorer samt andelen additiva, temporala och komparativa konnektorer samt att ökar. Andelen additiva konnektorer och målspråksavvikande konnektorer minskar. Vidare börjar inlärare använda mera olika konnektorer och på nivå B1 även mindre frekventa konnektorer som om och fast. I fortsättningen borde man granska konnektorbruket i olika texttyper samt studera om explicit undervisning påverkar inlärares konnektorbruk.

Caraterização molecular de anemias hipocrómicas e microcíticas com HB A2 normal

Introdução - As anemias hipocrómicas e microcíticas, não sideropénicas, são, na sua maioria, de origem talassémica. As talassémias são hemoglobinopatias caraterizadas pela redução ou ausência da produção de cadeias globínicas, provocadas por mutações nos genes globínicos. A β-talassémia está mais frequentemente associada a mutações pontuais e pequenas deleções ou inserções no gene HBB, enquanto que a α-talassémia normalmente resulta de deleções que eliminam os genes HBA2 e/ou HBA1. Deleções de um só gene, -α3.7 e -α4.2, são frequentes entre africanos, mediterrânicos e asiáticos enquanto que grandes deleções que removem ambos os genes alfa, como a deleção do Sudeste Asiático (--SEA), são comuns nas populações asiáticas. Grandes deleções nos clusters alfa e beta são condições raras, geralmente associadas a fenótipos severos. A identificação destas deleções é realizada através da técnica de MLPA (multiplex ligation-dependent probe amplification). Objetivos - O objetivo principal deste trabalho foi estudar um grupo de indivíduos com hipocromia e microcitose e Hb A2 normal, com suspeita de possuirem deleções nos clusters α ou β. Pretendeu-se, ainda, caraterizar a extensão das deleções encontradas e, quando possível, determinar a localização dos seus breakpoints. Materiais e Métodos - Cinquenta e oito indivíduos (28 homens e 30 mulheres), com hipocromia e microcitose de origem desconhecida, seguidos na Consulta de Hematologia do Hospital Pediátrico e do Hospital Geral do CHC, ou enviados de outros centros, foram testados para a presença de deleções nos clusters α e β. Foram efetuados hemogramas a todas as amostras e os estudos de hemoglobina foram realizados por cromatografia líquida de alta performance (HPLC). Os estudos moleculares incluiram GAP-PCR, MLPA, sequenciação genética e PCR / hibridização reversa. Resultados - Foi possível obter o padrão do rácio das sondas MLPA para as deleções α e β conhecidas ou já caraterizadas. Foram encontradas 6 deleções HBA desconhecidas que removem os genes α ou as regiões reguladoras desse cluster. Detetou-se, também, uma deleção no cluster β, que elimina praticamente todos os seus genes. Conclusões - A identificação de grandes delções nos clusters α e β-globínicos em indivíduos com hipocromia e microcitose, com HbA2 normal, é crucial para o aconselhamento genético. A metodologia de MLPA é uma abordagem simples e fiável, muito útil para o diagnóstico de casos de talassemia, em que não são detetadas mutações α ou β através das técnicas convencionais

Effect of umbelliferone (7-hydroxycoumarin, 7-HOC) on the enzymatic, edematogenic and necrotic activities of secretory phospholipase A2 (sPLA2) isolated from Crotalus durissus collilineatus venom

Flavonoids, coumarins and other polyphenolic compounds are powerful antioxiants both in hydrophilic and lipophylic environments with diverse pharmacological properties including anti-inflammatory activity. Despite being widely used as powerful therapeutic agents for blood coagulation disorders, more specifically to control some serine protease enzymes, the mechanism of anti-inflammatory activity of coumarins is unknown, unlike that of flavonoids. Although their controlling effect on serine proteases is well acknowledged, their action on secretory phospholipase A2 (sPLA2) remains obscure. The present study describes the interaction between umbelliferone (7-HOC) and the sPLA2 from Crotalus durissus collilineatus venom. In vitro inhibition of sPLA2 enzymatic activity by 7-HOC was estimated using 4N3OBA as substrate, resulting in an irreversible decrease in such activity proportional to 7-HOC concentration. The biophysical interaction between 7-HOC and sPLA2 was examined by fluorescent spectral analysis and circular dichroism studies. Results from both techniques clearly showed that 7-HOC strongly modified the secondary structure of this enzyme and CD spectra revealed that it strongly decreased sPLA2 alphahelical conformation. In addition, two-dimensional electrophoresis indicated an evident difference between HPLC-purified native and 7-HOC-treated sPLA2s, which were used in pharmacological experiments to compare their biological activities. In vivo anti-inflammatory activity was assessed by the sPLA2-induced mouse paw edema model, in which 7-HOC presented an effect similar to those of dexamethasone and cyproheptacline against the pro-inflammatory effect induced by native sPLA2 on the mouse paw edema, mast cell degranulation and skin edema. on the other hand, 7-HOC exhibited a more potent inhibitory effect on sPUL2 than that of p-bromophenacyl bromide (p-BPB). Our data suggest that 7-HOC interacts with sPLA2 and causes some structural modifications that lead to a sharp decrease or inhibition of the edematogenic and myotoxic activities of this enzyme, indicating its potential use to suppress inflammation induced by sPLA2 from the snake venom. (C) 2008 Published by Elsevier Ltd.

The effect of phospholipase A2 from Crotalus durissus collilineatus on Leishmania (Leishmania) amazonensis infection

In this study, the effect of phospholipase A2 (PLA2) derived from Crotalus durissus collilineatus was evaluated in vitro and in vivo on experimental cutaneous leishmaniasis. The promastigote and amastigote forms treated with PLA2 presented increased growth rate. In vivo studies showed that PLA2-treated Leishmania (Leishmania) amazonensis promastigotes increased the size of lesions in BALB/c mice, and histopathological analysis showed numerous necrotic regions presenting a higher density of polymorphonuclear, mononuclear, and amastigote cells. Additionally, infected macrophages treated with PLA2 were able to generate prostaglandin E2 (PGE2). Cytokine quantification showed that the supernatant from infected macrophages presented moderate and high amounts of IL-2 and IL-10, respectively. However, in PLA2-treated infected macrophages, suppression of IL-2 levels occurred, but not of IL-10 levels. Observation also revealed that both the supernatant and lysate of L. (L.) amazonensis promastigotes exhibited PLA2 activity, which, in the presence of dexamethasone, showed no reduction in their activities; while glucocorticoid maintained the ability of promastigote forms to infect macrophages, which presented values similar to controls. In conclusion, the results indicate that PLA2 may be a progression factor for cutaneous leishmaniasis, since the PLA2 effect suppressed IL-2 levels and generated PGE2, an inflammatory lipid mediator.

Estudo do papel desempenhado pelo heterotetrâmero de anexina A2 em células de cancro da mama hipóxicas

Dissertação de Mestrado, Biologia Molecular e Microbiana, Faculdade de Ciências e Tecnologia, Universidade do Algarve, 2014

Digital storytelling: promoting writing literacy skills at an A2 level

El propósito de este proyecto de graduación es dar a conocer cómo la influencia de la tecnología hoy en día puede llegar a ser una herramienta útil a la hora de aprender una lengua extranjera, como lo es en éste caso el Inglés. Mediante la herramienta llamada Storybird los estudiantes tienen la capacidad de crear, imaginar y escribir historias que les ayuda a mejorar su destreza enfocado a la escritura. Para esto se analiza tres estudios de caso, los mismos que utilizan como herramienta principal Storybird. Dichos estudios son realizados en diferentes lugares del mundo, y a la vez dirigidos a estudiantes con diferente tipo de destrezas. El propósito de estos estudios es mejorar su escritura por medio de narraciones digitales, conocidos en el ámbito extranjero como Digital Storytelling, dando asíuna alternativa diferente de enseñanza para los estudiantes. Por último, se desarrolla una Guía de Aprendizaje dirigido a docentes, con el propósito de facilitar y brindar nuevos instrumentos de aprendizaje, con el uso de Storybird, para estudiantes que desempeñan un nivel A2 dentro del Marco de Referencia Europeo para las Lenguas.

Operações Anfíbias em ambiente A2/AD

Com o fim da Guerra Fria e a dissolução do Pacto Militar de Varsóvia, a Rússia deixou de ser uma ameaça à hegemonia militar norte-americana e da NATO. Assim, desde esse momento para cá que se tem assistido a um quase total acesso, livre de verdadeira oposição, a qualquer teatro de operações. Durante a Guerra do Golfo, em 1990-91, e posteriormente no Afeganistão e Iraque a partir de 2001, no que constituem os dois grandes conflitos armados pós-Guerra Fria, os EUA em conjunto com a NATO, conseguiram alcançar a vitória através de um total acesso operacional aos teatros de operações, e com um grau de ameaça bastante reduzido. Contudo, este cenário de ameaça reduzida e acesso global está claramente comprometido. Isto porque um sem número de meios e tecnologias têm sido desenvolvidas e aplicadas exatamente com este propósito. Assim, em 2003 surgiu o acrónimo A2/AD – “Anti-Access/Area Denial”, para qualificar estes meios e estratégias para os empregar, por forma a negar o acesso ao cenário de conflito, ou limitar a facilidade de movimentação no teatro de operações. Estas estratégias de A2/AD diminuem a capacidade de projeção de poder, negando a facilidade de movimentação e capacidade de ação, permitindo ainda uma miríade de abordagens operacionais. Os inúmeros adversários dos EUA/NATO não irão cometer os mesmos erros que Saddam Hussein cometeu na primeira Guerra do Golfo. Em particular, a China tem desenvolvido grande parte da sua capacidade de A2/AD com base em exemplos retirados deste conflito. A proliferação deste tipo de capacidades e meios ao longo de um espectro bastante significativo de atores estatais e não-estatais obriga a que tanto os EUA como a NATO desenvolvam formas inovadoras de lhes fazer face. As operações anfíbias poderão ser uma resposta bastante capaz a este cenário de A2/AD. A capacidade única de operar transversalmente em diversos domínios, com um custo relativamente baixo e juntando forças dos vários ramos, respondendo de forma rápida a qualquer situação e providenciando uma presença avançada num cenário de conflito tornam as Operações Anfíbias numa resposta bastante válida à questão estratégica do A2/AD.

Quercetin as an inhibitor of snake venom secretory phospholipase A2

As polyphenolic compounds isolated from plants extracts, flavonoids have been applied to various pharmaceutical uses in recent decades due to their anti-inflammatory, cancer preventive, and cardiovascular protective activities. In this study, we evaluated the effects of the flavonoid quercetin on Crotalus durissus terrificus secretory phospholipase A2 (sPLA2), an important protein involved in the release of arachidonic acid from phospholipid membranes. The protein was chemically modified by treatment with quercetin, which resulted in modifications in the secondary structure as evidenced through circular dichroism. In addition, quercetin was able to inhibit the enzymatic activity and some pharmacological activities of sPLA2, including its antibacterial activity, its ability to induce platelet aggregation, and its myotoxicity by approximately 40%, but was not able to reduce the inflammatory and neurotoxic activities of sPLA2. These results suggest the existence of two pharmacological sites in the protein, one that is correlated with the enzymatic site and another that is distinct from it. We also performed molecular docking to better understand the possible interactions between quercetin and sPLA2. Our docking data showed the existence of hydrogen-bonded, polar interactions and hydrophobic interactions, suggesting that other flavonoids with similar structures could bind to sPLA2. Further research is warranted to investigate the potential use of flavonoids as sPLA2 inhibitors. (C) 2010 Elsevier B.V. All rights reserved.