972 resultados para Angiotensin II
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Macrophage migration inhibitory factor (MIF), a pleiotropic cytokine, plays an important role in the pathogenesis of atrial fibrillation; however, the upstream regulation of MIF in atrial myocytes remains unclear. In the present study, we investigated whether and how MIF is regulated in response to the renin-angiotensin system and oxidative stress in atrium myocytes (HL-1 cells). MIF protein and mRNA levels in HL-1 cells were assayed using immunofluorescence, real-time PCR, and Western blot. The result indicated that MIF was expressed in the cytoplasm of HL-1 cells. Hydrogen peroxide (H2O2), but not angiotensin II, stimulated MIF expression in HL-1 cells. H2O2-induced MIF protein and gene levels increased in a dose-dependent manner and were completely abolished in the presence of catalase. H2O2-induced MIF production was completely inhibited by tyrosine kinase inhibitors genistein and PP1, as well as by protein kinase C (PKC) inhibitor GF109203X, suggesting that redox-sensitive MIF production is mediated through tyrosine kinase and PKC-dependent mechanisms in HL-1 cells. These results suggest that MIF is upregulated by HL-1 cells in response to redox stress, probably by the activation of Src and PKC.
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We examined the contractile responsiveness of rat thoracic aortas under pressure overload after long-term suprarenal abdominal aortic coarctation (lt-Srac). Endothelium-dependent angiotensin II (ANG II) type 2 receptor (AT2R)-mediated depression of contractions to ANG II has been reported in short-term (1 week) pressure-overloaded rat aortas. Contractility was evaluated in the aortic rings of rats subjected to lt-Srac or sham surgery (Sham) for 8 weeks. ANG I and II levels and AT2R protein expression in the aortas of lt-Srac and Sham rats were also evaluated. lt-Srac attenuated the contractions of ANG II and phenylephrine in the aortas in an endothelium-independent manner. However, lt-Srac did not influence the transient contractions induced in endothelium-denuded aortic rings by ANG II, phenylephrine, or caffeine in Ca2+-free medium or the subsequent tonic constrictions induced by the addition of Ca2+ in the absence of agonists. Thus, the contractions induced by Ca2+ release from intracellular stores and Ca2+ influx through stored-operated channels were not inhibited in the aortas of lt-Srac rats. Potassium-elicited contractions in endothelium-denuded aortic rings of lt-Srac rats remained unaltered compared with control tissues. Consequently, the contractile depression observed in aortic tissues of lt-Srac rats cannot be explained by direct inhibition of voltage-operated Ca2+ channels. Interestingly, 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate-induced contractions in endothelium-denuded aortic rings of lt-Srac rats were depressed in the presence but not in the absence of extracellular Ca2+. Neither levels of angiotensins nor of AT2R were modified in the aortas after lt-Srac. The results suggest that, in rat thoracic aortas, lt-Srac selectively inhibited protein kinase C-mediated activation of contraction that is dependent on extracellular Ca2+ entry.
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The rat posterodorsal medial amygdala (MePD) links emotionally charged sensory stimuli to social behavior, and is part of the supramedullary control of the cardiovascular system. We studied the effects of microinjections of neuroactive peptides markedly found in the MePD, namely oxytocin (OT, 10 ng and 25 pg; n=6/group), somatostatin (SST, 1 and 0.05 μM; n=8 and 5, respectively), and angiotensin II (Ang II, 50 pmol and 50 fmol; n=7/group), on basal cardiovascular activity and on baroreflex- and chemoreflex-mediated responses in awake adult male rats. Power spectral and symbolic analyses were applied to pulse interval and systolic arterial pressure series to identify centrally mediated sympathetic/parasympathetic components in the heart rate variability (HRV) and arterial pressure variability (APV). No microinjected substance affected basal parameters. On the other hand, compared with the control data (saline, 0.3 µL; n=7), OT (10 ng) decreased mean AP (MAP50) after baroreflex stimulation and increased both the mean AP response after chemoreflex activation and the high-frequency component of the HRV. OT (25 pg) increased overall HRV but did not affect any parameter of the symbolic analysis. SST (1 μM) decreased MAP50, and SST (0.05 μM) enhanced the sympathovagal cardiac index. Both doses of SST increased HRV and its low-frequency component. Ang II (50 pmol) increased HRV and reduced the two unlike variations pattern of the symbolic analysis (P<0.05 in all cases). These results demonstrate neuropeptidergic actions in the MePD for both the increase in the range of the cardiovascular reflex responses and the involvement of the central sympathetic and parasympathetic systems on HRV and APV.
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Angiotensin II is a key player in the pathogenesis of renovascular hypertension, a condition associated with endothelial dysfunction. We investigated aliskiren (ALSK) and L-arginine treatment both alone and in combination on blood pressure (BP), and vascular reactivity in aortic rings. Hypertension was induced in 40 male Wistar rats by clipping the left renal artery. Animals were divided into Sham, 2-kidney, 1-clip (2K1C) hypertension, 2K1C+ALSK (ALSK), 2K1C+L-arginine (L-arg), and 2K1C+ALSK+L-arginine (ALSK+L-arg) treatment groups. For 4 weeks, BP was monitored and endothelium-dependent and independent vasoconstriction and relaxation were assessed in aortic rings. ALSK+L-arg reduced BP and the contractile response to phenylephrine and improved acetylcholine relaxation. Endothelium removal and incubation with N-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) increased the response to phenylephrine in all groups, but the effect was greater in the ALSK+L-arg group. Losartan reduced the contractile response in all groups, apocynin reduced the contractile response in the 2K1C, ALSK and ALSK+L-arg groups, and incubation with superoxide dismutase reduced the phenylephrine response in the 2K1C and ALSK groups. eNOS expression increased in the 2K1C and L-arg groups, and iNOS was increased significantly only in the 2K1C group compared with other groups. AT1 expression increased in the 2K1C compared with the Sham, ALSK and ALSK+L-arg groups, AT2 expression increased in the ALSK+L-arg group compared with the Sham and L-arg groups, and gp91phox decreased in the ALSK+L-arg group compared with the 2K1C and ALSK groups. In conclusion, combined ALSK+L-arg was effective in reducing BP and preventing endothelial dysfunction in aortic rings of 2K1C hypertensive rats. The responsible mechanisms appear to be related to the modulation of the local renin-angiotensin system, which is associated with a reduction in endothelial oxidative stress.
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Phaseolus lunatus protein concentrates and the proteases Alcalase(R) and Pepsin-Pancreatin were used for the production of protein hydrolysates that inhibit angiotensin-I converting enzyme (ACE). Protein concentrate obtained from germinated and ungerminated seeds flour was hydrolyzed with Alcalase(R) at enzyme/substrate ratio (E/S) 1/10 and during 0.5 and 2.0 h, respectively. On the other hand, protein concentrate obtained from ungerminated (E/S: 1/10) and germinated (E/S: 1/50) seeds flour was sequentially hydrolyzed with Pepsin-Pancreatin during 1.0 and 3.0 h, respectively. Peptide fractions with ACE inhibitory activity in a range of 0.9 to 3.8 µg/mL were obtained by G-50 gel filtration chromatography and high- performance liquid chromatography C18 reverse phase chromatography. The observed amino acid composition suggests a substantial contribution of hydrophobic residues to the peptides’ inhibitory potency, which potentially acts via blocking of angiotensin II production. These results show that P. lunatus seed proteins are a potential source of ACE inhibitory peptides when hydrolyzed with Alcalase(R) and Pepsin-Pancreatin.
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INTRODUCTION: Epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) is a key event in renal fibrosis. The aims of the study were to evaluate acidosis induced EMT, transforming-growth-factor (TGF) β1 role and citrate effect on it. METHODS: HK2 cells (ATCC 2290) were cultured in DMEM/HAM F12 medium, pH 7.4. At 80% confluence, after 24 hr under serum free conditions, cells were distributed in three groups (24 hours): A) Control: pH 7.4, B) Acidosis: pH 7.0 and C) Calcium citrate (0.2 mmol/L) + pH 7.0. Change (Δ) of intracellular calcium concentration, basal and after Angiotensin II (10-6M) exposition, were measured to evaluate cellular performance. EMT was evaluated by the expression of α-smooth muscle actin (α-SMA) and E-cadherin by immunocytochemistry and/or Western blot. TGF-β1 secretion was determined by ELISA in cell supernatant. RESULTS: At pH 7.0 HK2 cells significantly reduced E-cadherin and increased α-SMA expression (EMT). Supernatant TGF-β1 levels were higher than in control group. Calcium citrate decreased acidosis induced EMT and improved cells performance, without reduction of TGF-β production. CONCLUSIONS: Acidosis induces EMT and secretion of TGF-β1 in tubular proximal cells in culture and citrate improves cellular performance and ameliorates acidosis induced EMT.
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Resveratrol (RESV) is a polyphenolic compound found in various plants, including grapes, berries and peanuts, and its processed foods as red wine. RESV possesses a variety of bioactivities, including antioxidant, anti-inflammatory, cardioprotective, antidiabetic, anticancer, chemopreventive, neuroprotective, renal lipotoxicity preventative, and renal protective effects. Numerous studies have demonstrated that polyphenols promote cardiovascular health. Furthermore, RESV can ameliorate several types of renal injury in animal models, including diabetic nephropathy, hyperuricemic, drug-induced injury, aldosterone-induced injury, ischemia-reperfusion injury, sepsis-related injury, and endothelial dysfunction. In addition, RESV can prevent the increase in vasoconstrictors, such as angiotensin II (AII) and endothelin-1 (ET-1), as well as intracellular calcium, in mesangial cells. Together, these findings suggest a potential role for RESV as a supplemental therapy for the prevention of renal injury.
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Objective: The adventitia has been recognized to play important roles in vascular oxidative stress, remodelling and contraction. We recently demonstrated that adventitial fibroblasts are able to express endothelin-1 (ET-1) in response to angiotensin II (ANG II). However, the mechanisms by which ANG II induces ET-1 expression are unknown. It is also unclear whether the ET-1 receptors are expressed in the adventitia. We therefore examined the role of oxidative stress in the regulation of ET-1. We also investigated the expression of both the ETA and ETB receptors and the roles of these two types of receptors in collagen synthesis and ET-1 clearance in adventitial fibroblasts. Methods and Results: Adventitial fibroblasts were isolated and cultured from the thoracic mouse aorta. Cells were treated with ANG II (lOOnM), ET-1 (lOpM), NADPH oxidase inhibitor apocynin (lOOfiM), the superoxide anion scavenger tempol (lOOfiM), the ANG II receptor antagonists (100[aM), losartan (AT| receptor) and PD 1233 19 (AT2 receptor), the ET-1 receptor antagonists (lOOuM), BQ123 (ETA receptor) and BQ788 (ETB receptor), and the ETB receptor agonist (lOOnM) Sarafotoxin 6C. ET-1 peptide levels were determined by ELISA, while ETA ,ETB and collagen levels were determined by Western blot. ANG II increased ET-1 peptide levels in a time-dependent manner reaching significance when incubated for 24 hours. NAD(P)H oxidase inhibitor, apocynin, as well as the superoxide scanverger, tempol, significantly reduced ANG Il-induced ET-1 peptide levels while over-expression of SOD1 (endogenous antioxidant enzyme) significantly decreased ANG Il-induced collagen I expression, therefore implicating reactive oxygen species in the mediation of ET-1. ANG II increased ETA receptor protein as well as collagen in a similar fashion, reaching significance after 4, 6, and 24 hours treatment. ANG II induced collagen was reduced while in the presence of the ETA receptor antagonist suggesting the role of the ETa receptor in the regulation of the extracellular matrix. ANG II treatment also increased ETB receptor protein levels in a time-dependent manner. ANG II treatment in the presence of the ETB receptor antagonist significantly increased ET-1 peptide levels. On another hand, the ETB receptor agonist, Sarafotoxin 6C, significantly decreased ET-1 peptide levels. These data implicate the role of the ETb receptor in the clearance of the ET-1 peptide. Conclusion: ANG II-induced increases of ET-1 peptide appears to be mediated by reactive oxygen species derived from NAD(P)H oxidase. Both the ETA and ETB receptors are expressed in adventitial fibroblasts. The ETA receptor subtype mediates collagen I expression, while the ETB receptor may play a protective role through increasing the clearance of the ET- 1 peptide.
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With the relationship between endothelin-1 (ET-1) stimulation and reactive oxygen species (ROS) production unknown in adventitial fibroblasts, I examined the ROS response to ET-1 and angiotensin (Ang II). ET-1 -induced ROS peaked following 4 hrs of ET-1 stimulation and was inhibited by an ETA receptor antagonist (BQ 123, 1 uM) an extracellular signal-regulated kinase (ERK) 1/2 inhibitor (PD98059, 10 uM), and by both a specific, apocynin (10 uM), and non-specific, diphenyleneiodonium (10 uM), NAD(P)H oxidase inhibitor. NOX2 knockout fibroblasts did not produce an ET-1 induced change in ROS levels. Ang II treatment increased ROS levels in a biphasic manner, with the second peak occurring 6 hrs following stimulation. The secondary phase of Ang II induced ROS was inhibited by an ATi receptor antagonist, Losartan (100 uM) and BQ 123. In conclusion, ET-1 induces ROS production primarily through an ETA-ERKl/2 NOX2 pathway, additionally, Ang II-induced ROS production also involves an ETa pathway.
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Effet de latorvastatine sur la dysfonction endothliale des artres coronaires picardiques associe lhypertrophie ventriculaire gauche dans un modle porcin Forcillo J, Aubin MC, Horn A, Shi YF, Carrier M, Tardif JC, Perrault LP Introduction: Latorvastatine par ses effets pliotropiques pourrait limiter la dysfonction endothliale associe au dveloppement de lHVG. Mthodologie : Un cerclage de laorte ascendante pendant 2 mois entrane le dveloppement dHVG et les groupes ont t traits avec atorvastatine 40 ou 80 mg de 60 90 jours. LHVG est confirme par chographie. La ractivit vasculaire est value en chambres dorgane, la fonction endothliale par la quantification de la GMPc et des nitrites/nitrates plasmatiques. Le stress oxydant est mesur par les niveaux dANG II et de la carbonylation des protines. Rsultats : Aprs 60 et 90 j de cerclage, lHVG est observe chez tous ces groupes. Les courbes concentrations-rponse des anneaux des artres coronaires picardiques des groupes traits avec latorvastatine 40 et 80 mg pour 30 et 60 jours nont dmontr aucune amlioration des relaxations dpendantes de lendothlium. Une exacerbation significative de la dysfonction endothliale a t observe. Les niveaux vasculaires de GMPc sont significativement diminus dans le groupe sans cerclage trait 60 d et ceux dANG II sont fortement augments chez ce dernier groupe ainsi que le groupe trait avec 80 mg pour 30 jours par rapport aux contrles. Lexpression de la carbonylation des protines est augmente dans le groupe tmoin trait avec atorvastatine 80 mg, refltant une augmentation du stress oxydant. Conclusion : Ladministration datorvastatine ne prvient pas le dveloppement de lHVG ni la dysfonction endothliale dans notre modle. Au contraire latorvastatine haute dose a un effet toxique sur les artres coronaires picardiques en augmentant la dysfonction endothliale.
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Contribuant la pathophysiologie des maladies vasculaires comme dans le cas de lhypertension, le remodelage vasculaire est associ une altration de la croissance des cellules musculaires lisses vasculaires (CMLV) (prolifration, taille, etc.). Or la prolifration des CMLV est augmente par les peptides vasoactifs tels que langiotensine II (AngII) et lendothline-1 (ET-1). Ces peptides tant surexprims lors de lhypertension, cette tude fut entreprise pour dterminer leur contribution endogne ainsi que celles du facteur de croissance pidermique (EGF), du facteur de croissance insulinique (IGF-1) et du facteur de croissance driv des plaquettes (PDGF) la prolifration accrue des CMLV et aux mcanismes sous-jacents. Des CMLV A-10 et des CMLV de rats WKY et SHR gs de 12 semaines ont t utilises pour cette tude. La prolifration cellulaire fut dtermine par incorporation de [3H]thymidine. La phosphorylation de ERK 1/2 et du rcepteur de EGF fut dtermine par immunobuvardage. Les CMLV de SHR, compares celles de WKY, ont montr une prolifration accrue qui fut attnue par le losartan, un antagoniste du rcepteur AT1 de lAngII et par le BQ-123 et le BQ-788, antagonistes des rcepteurs ETA et ETB de lET-1. La prolifration accrue des CMLV de SHR fut ramene celle des WKY par les inhibiteurs des rcepteurs au PDGF (AG-1295), au IGF-1 (AG-1024) et au EGF (AG-1478). La phosphorylation du rcepteur au EGF, accrue dans les CMLV de rats SHR compare celle des WKY, fut attnue par le losartan, le BQ-123, le BQ-788 et lAG-1478, mais ne fut pas attnue par lAG-1295 et lAG-1024. De plus, la phosphorylation accrue de ERK 1/2 dans les CMLV de rats SHR fut attnue par le losartan, le BQ-123, le BQ-788 et les inhibiteurs des rcepteurs aux facteurs de croissance. Paralllement, le rle de la transactivation de EGF-R dans la prolifration accrue induite par AngII et ET-1 fut aussi examin dans les CMLV A-10. Laugmentation, induite par AngII et ET-1, de la prolifration et de la phosphorylation de ERK 1/2 dans les CMLV A-10 fut ramene au niveau contrle par AG-1478. Ces donnes suggrent que les peptides vasoactifs endognes induisent la prolifration accrue des CMLV par la signalisation des MAP kinases rsultant de la transactivation de EGF-R.
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Les complications vasculaires telles que laugmentation de la contractilit et la prolifration cellulaire sont les complications les plus communes observes dans le diabte et lhyperglycmie chronique est un facteur important dans ces processus. La voie de signalisation de Gq joue un rle important dans la rgulation du tonus vasculaire et laltration de celle-ci peut contribuer aux complications vasculaires observes dans les cas de diabte et dhyperglycmie. Il a t observ que les taux et lactivit des protines kinase C (PKC) et du diacylglycrol (DAG) sont augments dans ces conditions. Cependant, aucune tude na dmontr limplication de Gq/11 et des PLC, molcules de signalisation en amont de PKC/DAG. Plusieurs tudes rvlent que laugmentation des taux et de lactivit des PKC et du DAG induite par lhyperglycmie dans des cellules du muscle lisse vasculaire (CMLV) est attribue laugmentation du stress oxydatif. De plus, les niveaux de certains peptides vasoactifs, tels que langiotensine II et lendothline-1, augments dans les conditions de diabte/dhyperglycmie, peuvent contribuer laugmentation du stress oxydatif observe. Le travail prsent dans cette thse avait pour but dexaminer les effets de lhyperglycmie sur les niveaux dexpression protique de Gq/11 et de ses molcules associes, ainsi que dtudier le mcanisme molculaire par lequel lhyperglycmie module la voie de signalisation de Gq dans les CMLV. Dans la premire tude, nous avons examin si lhyperglycmie pouvait moduler lexpression des protines Gq, G11, PLC1 et PLC2. Le prtraitement des CMLV A10 avec 26 mM de glucose durant 72 heures augmente lexpression des protines Gq, G11, PLC-1 et PLC-2 en comparaison avec les CMLV tmoins. Le traitement avec des antagonistes aux rcepteurs AT1 de lAng II, et ETA/ETB de lET-1, attnue la hausse de Gq, de G11, de PLC1 et de PLC2 induite par lhyperglycmie. De plus, la formation dIP3 stimule par lET-1 tait plus leve dans les CMLV expose 26 mM de glucose. Le traitement des CMLV A10 avec lAng II et lET-1 augmente galement les niveaux dexpression des protines G q/11 et PLC. Cette augmentation de lexpression est restaure au niveau des CMLV tmoins par les antagonistes des rcepteurs AT1, ETA et ETB. Ces rsultats suggrent que laugmentation de lexpression des protines Gq/11 et PLC dans les CMLV induite par lhyperglycmie est attribue lactivation des rcepteurs AT1, ETA et ETB. Dans la seconde tude, nous avons examin limplication du stress oxydatif dans laugmentation des niveaux dexpression des protines Gq/11 et PLC et de leur signalisation induite par lhyperglycmie. Nous avons galement dtermin le mcanisme responsable de laugmentation du stress oxydatif induite par lhyperglycmie. Laugmentation de lexpression des protines Gq/11 et PLC des CMLV A10 exposes 26 mM de glucose est revenue au niveau basal aprs un traitement avec lantioxydant diphenyleneiodonium (DPI), et la catalase, un chlateur du peroxyde dhydrogne, mais pas par le 111Mn-tetralis(benzoic acid porphyrin) (MnTBAP) ni par lacide urique, des chlateurs du peroxynitrite. De plus, laugmentation de la formation dIP3 stimule par lET-1 dans les CMLV exposes 26 mM de glucose est revenue au niveau basal aprs un traitement avec le DPI et la catalase. Ces rsultats suggrent que laugmentation du stress oxydatif induite par lhyperglycmie contribue laugmentation de lexpression des protines Gq/11 et les molcules associes la voie de signalisation de Gq. De plus, laugmentation de la production danion superoxyde (O2-), de lactivit de la NADPH oxydase et de lexpression des protines p22(phox) et p47(phox) induite par lhyperglycmie est revenue un niveau basal aprs un traitement avec les antagonistes des rcepteurs AT1, ETA et ETB. Ces rsultats suggrent que lhyperglycmie augmente les niveaux endognes de lAng II et de lET-1, ce qui augmente le stress oxydatif par la formation dO2- et de H2O2 et peut contribuer laugmentation des niveaux de Gq/11 et de leurs molcules de signalisation. Puisquil a t observ que lhyperglycmie transactive les rcepteurs aux facteurs de croissance tels que le rcepteur au facteur de croissance pidermique (EGF-R) et le rcepteur au facteur de croissance driv des plaquettes (PDGF-R), nous avons entrepris dexaminer, dans la troisime tude, limplication dEGF-R et de PDGF-R dans laugmentation des niveaux de Gq/11, de PLC et de leur signalisation induite par lhyperglycmie. Laugmentation des niveaux dexpression des protines Gq, G11, PLC-1 et PLC-2 induite par lhyperglycmie est revenue au niveau basal aprs un traitement avec les inhibiteurs dEGF-R (AG1478) et de PDGF-R (AG1295) et par linhibiteur de c-Src, PP2. Laugmentation de la phosphorylation dEGF-R et de PDGF-R induite par lhyperglycmie a t abolie par AG1478, AG1295 et PP2. De plus, laugmentation des niveaux de Gq/11, et de PLC induite par lhyperglycmie est attnue par linhibiteur des MAPK, le PD98059, et par linhibiteur dAKT, le wortmannin. Laugmentation de la phosphorylation dERK et dAKT tait galement attnue par AG1478 et AG1295. Ces rsultats suggrent que la transactivation des rcepteurs aux facteurs de croissance induite par c-Src peut contribuer laugmentation des niveaux de G q/11/PLC et de leur signalisation par la voie des MAPK/PI3K. En conclusion, les tudes prsentes dans cette thse indiquent que lhyperglycmie augmente les niveaux de Gq/11 et de PLC. Nous avons mis des vidences qui dmontrent que laugmentation endogne de lAng II et de lET-1 par lhyperglycmie peut contribuer laugmentation de la production dO2- et de H2O2 rsultant ainsi en une augmentation du stress oxydatif qui pourrait tre responsable de laugmentation de Gq/11/PLC et de leur signalisation dans les conditions dhyperglycmie. Finalement, nous avons dmontr que la transactivation des rcepteurs aux facteurs de croissance induite par lhyperglycmie peut tre responsable de laugmentation de Gq/11/PLC et les molcules associes la voie de signalisation de Gq dans les cas de diabte et dhyperglycmie.
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This work aims at studing the role of tachykinin NK-3 receptor (R) and kinin B1R in central autonomic regulation of blood pressure (BP) and to determine whether the B1R is overexpressed and functional in rat models of hypertension by measuring the effect of a B1R agonist on behavioural activity. Assumptions: (1) NK-3R located in the ventral tegmental area (VTA) modulates the mesolimbic dopaminergic system and has a tonic activity in hypertension; (2) B1R is overexpressed in the brain of hypertensive rats and has a tonic activity, which contributes to hypertension via a dopamine mechanism; (3) the inhibition of NK-3R and B1R with selective antagonists, reduces central dopaminergic hyperactivity and reverses hypertension. A model of genetic hypertension and a model of experimental hypertension were used: spontaneously hypertensive rats (SHR, 16 weeks) and Wistar-Kyoto (WKY) rats infused for 14 days with angiotensin II (Ang II) (200 ng / kg / min, subcutaneous (s.c.) with Alzet mini pump). The age-matched untreated WKY rats served as common controls. In the first study (article # 1), the cardiovascular response in SHR was evaluated following intracebroventricular (i.c.v.) and/or intra-VTA injection of an agonist (senktide) and antagonists (SB222200 and R-820) of NK-3R. These responses have also been characterized using selective dopamine antagonists DA-D1R (SCH23390), DA-D2R (raclopride) or non-selective dopamine DA-D2R (haloperidol). Also the VTA has been destroyed by ibotenic acid. The pressor response induced by senktide and the anti-hypertensive response induced by SB222200 or R-820 were more pronounced by intra-VTA. These responses were prevented by pre-treatment with raclopride and haloperidol. The lesion of the VTA has prevented the pressor response relayed by senktide (i.c.v.) and the anti-hypertensive effect of R-820 (i.c.v.). In addition, SB222200 (intra-VTA) prevented the pressor response of senktide (i.c.v.) and conversely, senktide (i.c.v.) prevented the antihypertensive effect of SB222200 (intra-VTA). The second study (article # 2) showed that the B1R antagonist (SSR240612) administered by gavage or i.c.v. reverses hypertension in both models. This anti-hypertensive effect was prevented by raclopride and haloperidol. In contrast, the two B1R antagonists (R-715 and R-954) injected s.c., which do not cross the blood-brain barrier reduced weakly blood pressure in hypertensive rats. In the third study (article # 3), the i.c.v. injection of a selective kinin B1R agonist Sar[DPhe8][des-Arg9]BK caused behavioural responses in SHR and Ang II-treated rats and had no effect in control WKY rats . The responses elicited by B1R agonist were blocked by an antagonist of NK-1 (RP67580), an antagonist of NMDA glutamate receptor (DL-AP5), an inhibitor of nitric oxide synthase (NOS) (L -NNA) as well as raclopride and SCH23390.The responses were modestly affected by the inhibitor of inducible NOS (iNOS). The B1R mRNA (measured by RT-PCR) was significantly increased in the hypothalamus, the VTA and the nucleus accumbens of hypertensive animals (SHR and treated with Ang II) compared with control rats. These neuropharmacological studies suggest that: (1) the NK-3R from the VTA is involved in the maintenance of hypertension in SHR by increasing DA transmission in the midbrain; (2) the B1R in SHR and Ang II-treated rats contributes to hypertension via a central mechanism involving DA-D2R; (3) the central B1R increases locomotor activity and nocifensive behaviours via the release of substance P (NK-1), DA and nitric oxide in both rat models of hypertension. Thus, the brain tachykinin NK-3R and kinin B1R represent potential therapeutic targets for the treatment of hypertension. The modulation of the mesolimbic/mesocortical dopaminergic pathway by these receptors suggests their involvement in other physiological functions (pleasure, motor activity, coordination of the response to stress) and pathophysiology (anxiety, depression).
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Les cardiomyopathies sont une atteinte du myocarde qui se prsente sous diffrentes formes telles que lhypertrophie ou la dilatation des chambres cardiaques. Ces maladies du muscle cardiaque peuvent affecter la contraction cardiaque et dgnrer en insuffisance cardiaque. Aussi, lhypertrophie et linsuffisance cardiaques sont associes une augmentation de la morbidit et de la mortalit cardiovasculaires principalement due au remodelage lectrique et la survenue darythmies. De plus, le retard de repolarisation, associ une diminution des courants K+, est un des troubles cardiaques les plus couramment observs lors de ces pathologies cardiaques. Langiotensine II (Ang II) et la norpinphrine, principaux effecteurs du systme rnine-angiotensine et du systme nerveux sympathique, peuvent tous deux agir directement sur le cur en liant les rcepteurs de type 1 de lAng II (AT1) et les rcepteurs adrnergiques. LAng II et la norpinphrine sont associes au dveloppement des cardiomyopathies, au remodelage cardiaque et une prolongation de la dure du potentiel d'action cardiaque. Deux modles de souris trangniques surexprimant spcifiquement au niveau cardiaque les rcepteurs AT1 (la souris AT1R) ou les rcepteurs 1B-adrnergiques (la souris 1B-AR) ont t crs afin dtudier les effets de ces stimuli sur le cur. Ces deux modles de souris dveloppent du remodelage cardiaque, soit de lhypertrophie chez les souris AT1R (cardiomyopathie hypertrophique) ou une dilatation des chambres cardiaques chez les souris 1B-AR (cardiomyopathie dilate). Au stade avanc de la maladie, les deux modles de souris transgniques sont insuffisants cardiaques. Des donnes prliminaires ont aussi montr que les souris AT1R et les souris 1B-AR ont une incidence accrue darythmies ainsi quune prolongation de la dure du potentiel daction. De plus, ces deux modles de souris meurent subitement et prmaturment, ce qui laissait croire quen conditions pathologiques, lactivation des rcepteurs AT1 ou des rcepteurs 1B-adrnergiques pouvait affecter la repolarisation et causer lapparition darythmies graves. Ainsi, lobjectif de ce projet tait de caractriser la repolarisation ventriculaire des souris AT1R et 1B-AR afin de dterminer si la suractivation chronique des rcepteurs de lAng II ou des rcepteurs 1B-adrnergiques pouvait affecter directement les paramtres lectrophysiologiques et induire des arythmies. Les rsultats obtenus ont rvl que les souris AT1R et les souris 1B-AR prsentent un retard de repolarisation (prolongation de lintervalle QTc (dans llectrocardiogramme) et de la dure du potentiel daction) caus par une diminution des courants K+ (responsables de la repolarisation). Aussi, lincidence darythmies est plus importante dans les deux groupes de souris transgniques comparativement leur contrle respectif. Finalement, nous avons vu que les troubles de repolarisation se produisent galement dans les groupes de souris transgniques plus jeunes, avant lapparition de lhypertrophie ou du remodelage cardiaque. Ces rsultats suggrent quen conditions pathologiques, lactivation chronique des rcepteurs de lAng II ou des rcepteurs 1B-adrnergiques peut favoriser le dveloppement darythmies en retardant la repolarisation et cela, indpendamment de changements hmodynamiques ou du remodelage cardiaque. Les rsultats de ces tudes pourront servir comprendre les mcanismes responsables du dveloppement darythmies cardiaques lors du remodelage et de linsuffisance cardiaques et pourraient aider optimiser le choix des traitements chez ces patients atteints ou risque de dvelopper de lhypertrophie ou du remodelage cardiaque.
Resumo:
Linflammation est un procd complexe qui vise llimination de lagent causal de dommages tissulaires en vue de faciliter la rparation du tissu affect. La persistance de lagent causal ou lincapacit rsoudre linflammation mne un drglement homostatique chronique qui peut avoir une incidence sur la morbidit et la mortalit. Lathrosclrose est une condition inflammatoire chronique des vaisseaux sanguins dont lorigine est multifactorielle. Lhypertension et ltat infectieux reprsentent respectivement des facteurs de risque classiques et mergents du dveloppement de cette maladie. Les fondements initiaux de linflammation font intervenir limmunit inne, la premire ligne de dfense dont disposent les cellules pour rpondre un signal de danger. Le but de cette thse est dexaminer le rle pro-inflammatoire dune famille de kinases essentielles limmunit inne, soit celle des kinases de IkappaB (IKK) et des kinases IKK-related. Les kinases IKKalpha et IKKbeta forment le complexe IKK avec la molcule adaptatrice NEMO/IKKgamma. Ce complexe est charg deffectuer la phosphorylation de linhibiteur de NF-kappaB, IkappaBalpha, ce qui mne sa dgradation et la libration du facteur de transcription NF-kappaB. Nous montrons que le peptide vasoactif angiotensine II (AngII) induit lactivit phosphotransfrase dIKKbeta dans les VSMC par immunoprcipitation de NEMO puis essai kinase in vitro. Grce une approche ARN interfrence (ARNi) dirige contre IKK, nous montrons que cette kinase est responsable de la phosphorylation de p65/RelA. Nous montrons que le mcanisme dinduction de NF-kappaB par lAngII est atypique, puisquil ne module pas IkappaBalpha, et montrons laide dinhibiteurs pharmacologiques que lactivation de p65 est indpendante des voies MEK-ERK-RSK, PI3K et de la transactivation du rcepteur de lEGF. Les kinases IKK-related Tank-binding kinase 1 (TBK1) et IKK-i sont quant elles principalement actives suite une infection bactrienne ou virale. Ces kinases phosphorylent directement le facteur de transcription interferon regulatory factor (IRF)-3. Nous montrons que le cytomgalovirus humain, un pathogne associ lathrosclrose, a la capacit dinduire lactivation de TBK1 dans les VSMC. Lusage dARNi dirig contre TBK1 et IKKi montre que les 2 kinases sont impliques dans lactivation dIRF-3. De plus, nous montrons laide dune ligne de VSMC exprimant une version dominante ngative dIRF-3 que ce dernier est essentiel la synthse des chimiokines RANTES et IP-10, tel quanalys par RT-PCR. Par ailleurs, il a rcemment t montr que les kinases IKK-related taient troitement lies la transformation oncognique, et que TBK1 tait pro-angiognique. Or, langiogense est le plus souvent module par la rponse hypoxique qui est dailleurs commune la majorit des processus inflammatoires. Le facteur de transcription hypoxia inducible factor (HIF)-1 module langiogense, linflammation et la survie cellulaire. Nous montrons laide de cellules Tbk1 et Ikbke -/- et dune approche lentivirale que TBK1 est spcifiquement implique dans linduction traductionnelle de HIF-1alpha en condition de stress hypoxique. Lexpression de TBK1 est induite sous ces conditions, et cette kinase module la phosphorylation de ERK, RSK, Akt et TSC1. Les rsultats originaux prsents dans cette thse montrent donc que les kinases IKK et IKK-related exercent leurs actions pro-inflammatoires par des mcanismes distincts.
