Isolation of a cDNA encoding human holocarboxylase synthetase by functional complementation of a biotin auxotroph of Escherichia coli.

Holocarboxylase synthetase (HCS) catalyzes the biotinylation of the four biotin-dependent carboxylases in human cells. Patients with HCS deficiency lack activity of all four carboxylases, indicating that a single HCS is targeted to the mitochondria and cytoplasm. We isolated 21 human HCS cDNA clones, in four size classes of 2.0-4.0 kb, by complementation of an Escherichia coli birA mutant defective in biotin ligase. Expression of the cDNA clones promoted biotinylation of the bacterial biotinyl carboxyl carrier protein as well as a carboxyl-terminal fragment of the alpha subunit of human propionyl-CoA carboxylase expressed from a plasmid. The open reading frame encodes a predicted protein of 726 aa and M(r) 80,759. Northern blot analysis revealed the presence of a 5.8-kb major species and 4.0-, 4.5-, and 8.5-kb minor species of poly(A)+ RNA in human tissues. Human HCS shows specific regions of homology with the BirA protein of E. coli and the presumptive biotin ligase of Paracoccus denitrificans. Several forms of HCS mRNA are generated by alternative splicing, and as a result, two mRNA molecules bear different putative translation initiation sites. A sequence upstream of the first translation initiation site encodes a peptide structurally similar to mitochondrial presequences, but it lacks an in-frame ATG codon to direct its translation. We anticipate that alternative splicing most likely mediates the mitochondrial versus cytoplasmic expression, although the elements required for directing the enzyme to the mitochondria remain to be confirmed.

Increased sensitivity to gamma irradiation in bacteria lacking protein HU.

The heterodimeric HU protein, isolated from Escherichia coli, is associated with the bacterial nucleoid and shares some properties with both histones and HMG proteins. It is the prototype of small bacterial DNA binding proteins with a pleiotropic role in the cell. HU participates in several biological processes like cell division, initiation of DNA replication, transposition, and other biochemical functions. We show here that bacteria lacking HU are extremely sensitive to gamma irradiation. Expression of either one of the subunits of HU in the hupAB double mutant nearly restores the normal survival rate. This shows that the sensitivity is due to the absence of HU rather than being the result of a secondary mutation occurring in the hupAB cells or a modification of the SOS repair system, since SOS genes are induced normally in the absence of HU. Finally, in vitro studies give an indication of its potential role: HU protects DNA against cleavage by gamma-rays.

Regulatory region in choline acetyltransferase gene directs developmental and tissue-specific expression in transgenic mice.

Acetylcholine, one of the main neurotransmitters in the nervous system, is synthesized by the enzyme choline acetyltransferase (ChAT; acetyl-CoA:choline O-acetyltransferase, EC 2.3.1.6). The molecular mechanisms controlling the establishment, maintenance, and plasticity of the cholinergic phenotype in vivo are largely unknown. A previous report showed that a 3800-bp, but not a 1450-bp, 5' flanking segment from the rat ChAT gene promoter directed cell type-specific expression of a reporter gene in cholinergic cells in vitro. Now we have characterized a distal regulatory region of the ChAT gene that confers cholinergic specificity on a heterologous downstream promoter in a cholinergic cell line and in transgenic mice. A 2342-bp segment from the 5' flanking region of the ChAT gene behaved as an enhancer in cholinergic cells but as a repressor in noncholinergic cells in an orientation-independent manner. Combined with a heterologous basal promoter, this fragment targeted transgene expression to several cholinergic regions of the central nervous system of transgenic mice, including basal forebrain, cortex, pons, and spinal cord. In eight independent transgenic lines, the pattern of transgene expression paralleled qualitatively and quantitatively that displayed by endogenous ChAT mRNA in various regions of the rat central nervous system. In the lumbar enlargement of the spinal cord, 85-90% of the transgene expression was targeted to the ventral part of the cord, where cholinergic alpha-motor neurons are located. Transgene expression in the spinal cord was developmentally regulated and responded to nerve injury in a similar way as the endogenous ChAT gene, indicating that the 2342-bp regulatory sequence contains elements controlling the plasticity of the cholinergic phenotype in developing and injured neurons.

Evolution of the chalcone synthase gene family in the genus Ipomoea.

The evolution of the chalcone synthase [CHS; malonyl-CoA:4-coumaroyl-CoA malonyltransferase (cyclizing), EC 2.3.1.74] multigene family in the genus Ipomoea is explored. Thirteen CHS genes from seven Ipomoea species (family Convolvulaceae) were sequenced--three from genomic clones and the remainder from PCR amplification with primers designed from the 5' flanking region and the end of the 3' coding region of Ipomoea purpurea Roth. Analysis of the data indicates a duplication of CHS that predates the divergence of the Ipomoea species in this study. The Ipomoea CHS genes are among the most rapidly evolving of the CHS genes sequenced to date. The CHS genes in this study are most closely related to the Petunia CHS-B gene, which is also rapidly evolving and highly divergent from the rest of the Petunia CHS sequences.

Extratos de Ascophyllum nodosum no tratamento de sementes de milho e soja: avaliações fisiológicas e moleculares

A obtenção de uma lavoura com população adequada de plantas depende da utilização de diferentes práticas agronômicas, estando o sucesso condicionado ao uso de sementes de boa qualidade. No entanto, a semeadura dificilmente é realizada em condições ideais o que resulta em problemas na emergência das plantas. Grande é a procura por alternativas que melhorem a germinação e o desenvolvimento inicial dos cultivos resultando em uniformidade de emergência, garantindo o estande e culminando em produção. O tratamento de sementes com agroquímicos fitossanitários é uma solução parcial no combate de agentes fitopatológicos e pragas, mas poucas são as soluções adotadas para melhorar o desenvolvimento vegetal inicial, que pode levar a desuniformidade e falhas no estande gerando prejuízos econômicos. Os extratos de algas já demonstraram em diversos estudos sua eficiência no desenvolvimento vegetal quando aplicados em plantas. Porém poucos são os estudos voltados para os efeitos dos extratos de algas na germinação e emergência. Assim, o intuito deste trabalho foi testar o extrato comercial de Ascophyllum nodosum, e diferentes fracionamentos do mesmo, no tratamento de sementes de soja e milho. Avaliou-se o efeito de diferentes doses no desenvolvimento das plântulas e as doses de melhor resposta foram utilizadas no tratamento de sementes de soja a fim de associar as respostas obtidas à expressão gênica de 9 genes relacionados ao processo germinativo em 24 e 48h de embebição. Sementes de soja tratadas com o extrato comercial resultaram em plântulas menos desenvolvidas o que pode estar relacionado ao alto teor de sais contidos no produto. O tratamento com as demais frações favoreceu o desenvolvimento das plântulas, principalmente o desenvolvimento radicular. Sementes de milho tratadas não apresentaram desenvolvimento tão satisfatório quanto as sementes de soja tratadas. A análise da expressão gênica relativa demonstrou que o tratamento com frações do extrato comercial é capaz de regular algumas vias do metabolismo hormonal, como a isopentenil transferase e a GA20 oxidase 2, e do catabolismo de reservas, como a acil-CoA oxidase. Em condições ótimas, o tratamento de sementes de soja com frações do extrato comercial de A. nodosum favoreceu o desenvolvimento inicial das plântulas de soja, no entanto não ocasionou grandes alterações no desenvolvimento de milho. Este estudo demonstrou a possibilidade de utilização de frações do extrato de A. nodosum no favorecimento do desenvolvimento inicial de plântulas de soja. Maiores estudos são necessários quanto às respostas em campo e na atenuação de estresses para viabilizar seu uso como um bioestimulante em sementes.

Cultura organizacional de cursos de ciências contábeis: um estudo em duas universidades públicas

O objetivo geral deste trabalho foi compreender o atual estágio da Cultura Organizacional Acadêmica (COA) em duas Instituições de Ensino Superior (IES) brasileiras, visando identificar possíveis relações entre a cultura e os resultados decorrentes do desempenho dessas IES. A revisão da literatura contemplou as principais teorias sobre cultura organizacional (CO), principalmente as abordagens de Schein (2009), Denison et al. (2012) e Hofstede (2003), além de referenciais empíricos de pesquisadores que se basearam nas abordagens desses autores. A metodologia utilizada teve predomínio qualitativo, com base em etnografia, elementos da observação participante e uso de entrevistas, tanto em profundidade quanto semiestruturadas, que foram gravadas para posterior transcrição e edição. Para o tratamento dos conteúdos das entrevistas, utilizou-se a técnica do Discurso do Sujeito Coletivo (DSC) de Fernando Lefevre e Ana Lefevre (2012), com o emprego do software Qualiquantisoft. O campo empírico abrangeu dois cursos de Ciências Contábeis de duas universidades públicas estaduais, contatadas por acessibilidade. Estes cursos foram o do Departamento de Contabilidade e Atuária da Faculdade de Economia, Administração e Contabilidade da Universidade de São Paulo [FEA/USP] e o do Departamento de Ciências Sociais Aplicadas da Universidade Estadual de Feira de Santana, na Bahia [DCIS/UEFS]. Foram entrevistados 10 docentes do curso da FEA/USP e oito docentes do curso do DCIS/UEFS. Também foi aplicado um questionário para 122 alunos do curso da FEA/USP e 84 alunos do curso do DCIS/UEFS. Os resultados principais são que o atual estágio da COA nos dois cursos das duas IES apresenta-se em polos diametralmente opostos, ou seja, há força na COA do curso da USP, que se reflete na responsabilidade de manter, no presente, os padrões alcançados no passado, e buscar aumentar essa alta referência e visibilidade do curso no país e na América Latina, com orientação estratégica para internacionalização. Em contrapartida, a situação do curso da UEFS é oposta, na qual, de acordo com seus docentes, ele atravessa um período de queda na sua COA, a qual se mantém basicamente adormecida frente às mudanças do ambiente externo, que se reflete em queda dos níveis de qualidade do curso e dos níveis de motivação dos alunos e docentes. Em síntese, os resultados decorrentes do desempenho do curso têm forte dependência da força e solidez de sua COA, materializada na responsabilidade, qualificação e empenho de seus membros (docentes e gestores).

Análise de processos de aprendizagem do tipo bottom-up e seus resultados nas organizações

Com este estudo procurou se identificar os resultados produzidos pela aprendizagem do tipo Bottom-Up (BU) em organizações, tendo-se em vista que as variáveis Cultura Organizacional de Aprendizagem (COA), Mecanismos de Coordenação e Integração (MCI) e Liderança (LID) podem interferir na relação entre o método de aprendizagem e os resultados obtidos pela organização. Para se compreender o fenômeno, após uma pesquisa bibliográfica, foi desenvolvido um estudo multicaso pela metodologia proposta por Yin (2009). Foram pesquisadas quatro organizações atuantes em segmentos distintos, nomeadas neste estudo como \"Empresa X\" (setor farmacêutico), \"Empresa Y\" (setor alimentício/franquia), \"Empresa Z\" (indústria e comércio de calçados) e \"Empresa W\" (setor farmacêutico). Nestas empresas foram inquiridos o Diretor, o Vendedor e os responsáveis pelo setor da inovação, produção, comercial, financeiro e RH. Os respondentes foram entrevistados e preencheram um questionário, além de ter existido coleta prévia de dados secundários para maior compreensão dos fatos relacionados às empresas. Como resultado, constatou-se que nos casos analisados, aparentemente existe uma combinação entre o fator MCI e os constructos LID e COA, que possibilita a existência da aprendizagem do tipo BU. Os resultados provenientes desta combinação tendem a se manifestar em termos financeiros, competitivos e mercadológicos. A combinação do fator e os constructos não necessariamente conduzem à inovatividade da organização.

Whole-exome sequencing reveals ZNF408 as a new gene associated with autosomal recessive retinitis pigmentosa with vitreal alterations

Retinitis pigmentosa (RP) is a group of progressive inherited retinal dystrophies that cause visual impairment as a result of photoreceptor cell death. RP is heterogeneous, both clinically and genetically making difficult to establish precise genotype–phenotype correlations. In a Spanish family with autosomal recessive RP (arRP), homozygosity mapping and whole-exome sequencing led to the identification of a homozygous mutation (c.358_359delGT; p.Ala122Leufs*2) in the ZNF408 gene. A screening performed in 217 additional unrelated families revealed another homozygous mutation (c.1621C>T; p.Arg541Cys) in an isolated RP case. ZNF408 encodes a transcription factor that harbors 10 predicted C2H2-type fingers thought to be implicated in DNA binding. To elucidate the ZNF408 role in the retina and the pathogenesis of these mutations we have performed different functional studies. By immunohistochemical analysis in healthy human retina, we identified that ZNF408 is expressed in both cone and rod photoreceptors, in a specific type of amacrine and ganglion cells, and in retinal blood vessels. ZNF408 revealed a cytoplasmic localization and a nuclear distribution in areas corresponding with the euchromatin fraction. Immunolocalization studies showed a partial mislocalization of the p.Arg541Cys mutant protein retaining part of the WT protein in the cytoplasm. Our study demonstrates that ZNF408, previously associated with Familial Exudative Vitreoretinopathy (FEVR), is a new gene causing arRP with vitreous condensations supporting the evidence that this protein plays additional functions into the human retina.

Gesundheit, Sozialhilfe, Sport

Im Rahmen der Strategie "Gesundheit2020" wurden weitere Massnahmen verabschiedet. - Der Gegenvorschlag zur Initiative "Ja zur Hausarztmedizin" wurde deutlich angenommen. - Im Bereich e-Health wurde mit der Projektierung des elektronischen Patientendossiers ein weiterer Schritt vorgenommen. - Das Medizinalberufegesetz (MedBG) beschäftigte die eidgenössischen Räte. - Das Heilmittelgesetz (HMG) stellte sich als harter Brocken heraus und konnte noch nicht abschliessend behandelt werden. - Die Alkoholgesetzgebung nahm klare Formen an. - Für die Sozialhilfe beginnt sich ein neues Rahmengesetz abzuzeichnen. - Im Sportbereich bezog die Landesregierung deutliche Positionen und lancierte eine "Gesamtschau Sport Schweiz".

Humic acids in bottom sediments of the Western Pacific

Elemental composition, functional groups, and molecular mass distribution were determined in humic acids from the Western Pacific abyssal and coastal bottom sediments. Humic acid structure was studied by oxidative degradation with alkaline nitrobenzene and potassium permanganate, p-coumaric, guaiacilic, and syringilic structural units typical for lignin of terrestrial plants were identified in humic acids by chromatographic analysis of oxidation products. Polysubstituted and polycondensed aromatic systems with minor proportion of aliphatic structures were basic structural units of humic acids in abyssal sediments.

Nueva ley de concordatos preventivos, promulgada el día 25 de enero de 1916, con las modificaciones introducidas por Ley de diciembre 29 de 1916.

Mode of access: Internet.

Lake bed grants.

WI docs. no: Coa.6/2:G 7/L 3

Application for a Second Year Grant to Department of Commerce, Office of Coastal Environment, NOAA /

WI docs. no.: Coa.1:1976

Aerobic cultivation of Streptococcus zooepidemicus and the role of NADH oxidase

A metabolic flux model was developed for Streptococcus zooepidemicus to compare the metabolism of glucose and maltose during aerobic batch cultivation. Lactic acid was the main product of glucose metabolism whereas acetic acid was the main product of maltose metabolism. This difference was chiefly attributed to the two-fold higher flux through NADH oxidase in maltose-grown cells that enabled the ATP generation rate to remain high despite a slower maltose consumption rate. The two-fold higher flux was matched by a two-fold increase in NADH oxidase activity, 2.53 +/- 0.1 mumol NADH min(-1) mg(-1) protein on maltose versus 1.07 +/- 0.04 Rmol NADH min(-1) mg(-1) protein on glucose, indicating that NADH oxidase activity is regulated by the energy status of the cell. Surprisingly, the energy status of the cell had little impact on hyaluronic acid (HA) yield and molecular weight. (C) 2003 Elsevier Science B.V. All rights reserved.

Effect of atorvastatin on cyclosporine pharmacokinetics in liver transplant recipients

BACKGROUND: The development of hyperlipidemia after liver transplant is frequently treated with hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibitors (statins) such as atorvastatin. As atorvastatin and the primary immunosuppressant drug, cyclosporine, are metabolized by the same pathway, there is the potential for an interaction. OBJECTIVE: To determine the effect of atorvastatin on cyclosporine pharmacokinetics in liver transplant recipients. METHODS: Six stable, long-term adult liver transplant recipients from a single center who developed posttransplant dyslipidemia were recruited to participate in a 14-day, open-label study of atorvastatin 10 mg/d coadministered with standard posttransplant immunosuppression using constant oral doses-of cyclosporine and corticosteroids. A 10-point pharmacokinetic profile was performed prior to and on day 14 after commencement of atorvastatin therapy. Cyclosporine concentrations were measured by HPLC-electrospray-tandem mass spectrometry. The AUC was calculated by the linear trapezoidal rule, with other parameters determined by visual inspection. RESULTS: Atorvastatin coadministration increased the cyclosporine AUC by 9% (range 0-20.6%; 3018 vs 3290 ng(.)h/mL; p = 0.04). No significant change was evident for other cyclosporine pharmacokinetic parameters. Total cholesterol and low-density lipoprotein cholesterol levels were significantly lower on day 14 than at baseline (p < 0.02). One patient developed a twofold increase in transaminases after 2 weeks of atorvastatin therapy, but no other clinical or biochemical adverse events were recorded. CONCLUSIONS: Atorvastatin coadministration increases the cyclosporine AUC by approximately 10% in stable liver transplant recipients. This change in systemic exposure to cyclosporine is of questionable clinical significance. Atorvastatin is effective in reducing cholesterol levels in liver transplant recipients.