Estudo das células primárias dentais, viabilidade celular e bioatividade de materiais á base de silicato de cálcio

Pós-graduação em Odontologia - FOAR

Análise química, citotoxicidade e biocompatibilidade de cimentos de ionômero de vidro

Objetivo: O presente trabalho, dividido em três estudos, teve como objetivo geral identificar e quantificar a liberação de componentes e avaliar a citotoxicidade e a biocompatibilidade de cimentos de ionômero de vidro (CIVs). Método: Para o estudo 1, extratos dos CIVs Vitrebond (VB), Fuji Lining LC (FL), Vitremer (VM), Fuji II LC (FII), Ketac Fil Plus (KF) e Ketac Molar Easymix (KM) foram obtidos pela imersão de corpos-de-prova em meio de cultura celular (DMEM). Esses extratos (n=9 por grupo) foram analisados por eletrodo específico quanto à presença de flúor e por espectrometria de absorção atômica quanto à presença de alumínio e zinco. HEMA e iodobenzeno foram identificados por CG/EM (n=6). Para o estudo 2, células MDPC-23 foram colocadas em contato com os extratos dos CIVs por 24 horas. Em seguida, foram avaliadas a atividade da desidrogenase succínica (SDH) (n=8), a produção de proteína total (PT) (n=8), a atividade da fosfatase alcalina (FAL) (n=8) e a morfologia celular (n=2). Para o estudo 3, tubos de polietileno (n=24 por grupo) foram preenchidos com os CIVs e implantados no tecido subcutâneo de 42 ratos. Como grupo controle foi utilizada a guta-percha. Após 7 ou 15 dias de pós-operatório, metade dos espécimes de cada grupo e período (n=6) foi preparada para análise histológica, e os demais (n=6) para análise da expressão de genes que codificam para IL-1? e TNF-?. Resultados: Os extratos de todos os CIVs apresentaram uma concentração de flúor significativamente maior do que o meio de cultura DMEM (controle), tendo o VB liberado maior quantidade, estatisticamente significante, do que os demais CIVs. O VB foi, também, o único material que liberou quantidades relativamente altas de alumínio e de zinco. O HEMA foi identificado nos extratos de todos os CIVs modificados por resina (VB, FL, VM e FII), e o iodobenzeno... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Produção de anticorpos monoclonais murinos dirigidos contra células-tronco mesenquimais de coelho

Mesenchymal stem cells (MSCs) are a heterogeneous population of cells that proliferate in vitro as plastic-adherent cells, have fibroblast-like morphology and can differentiate into bone, cartilage and fat cells. Therapeutic potential of MSCs have been studied in experimental models, such as rabbit, in Laboratory of Cell Engineering of Botucatu. However, no specific markers have been reported for expanded rabbit MSCs, which hampers the isolation of pure MSC populations by immunophenotypic characterization. Thus, the objective of this study was to produce monoclonal antibodies (mAbs) to rabbit MSCs. MSCs derived from rabbit bone marrow (BM) were isolated, cultured, expanded ex vivo, and immunized into three BALB/c mices, and spleen cells subsequently harvested were used to generate hibridoma cell lines secreting antibodies against MSCs. Hybridoma cells were screened by flow cytometry and antibody-producing cells were subjected to subsequent rounds of retests. MSC1-160 obtained the best positivity for IgG expression and was cloned by limiting dilutions and micromanipulation. Ascitic fluid from ten best clones was purified by affinity chromatography in Protein A-sepharose CL-4B column and purification control was performed by electrophoresis in agarose gels. The purified IgG were tested against rabbit MSCs, obtaining high positivity by flow Cytometry. In conclusion, we developed 10 mAbs, MSC1-160 A20, A30, A41, A47, A55, A60, A63, A69, A81, and A82, that recognize rabbit MSC cell surface antigens showing potential for immunophenotypic characterization of rabbit MSC cell lines

Expressão de SmNPP5a de Schistosoma mansoni em Pichia pastoris

A esquistossomose é causada pelo Schistosoma mansoni e é considerada uma importante doença parasitária que afeta mais de 200 milhões de pessoas em países em desenvolvimento. Estima-se ainda que aproximadamente 600 milhões de pessoas vivam em áreas de risco e que o número de mortes por ano devido a esta parasitose chegue a 200.000. O tratamento existente hoje é eficiente, mas não previne contra re-infecção e contra as formas jovens dos parasitas. O desenvolvimento de uma vacina utilizando antígenos do parasita produzidos de modo recombinantes é o anseio para o controle da esquistossomose. A fosfodiesterase-5 (SmNPP-5a) é uma enzima presente na interface parasita-hospedeiro e acessível ao sistema imune, sendo portanto considerada um potencial candidato vacinal, sua avaliação se faz necessária. A obtenção de uma SmNPP-5a recombinante enzimaticamente ativa é um passo fundamental no processo de avaliação da sua capacidade protetora e determinação da sua função fisiológica para o parasita. Utilizando o sistema de expressão baseados em leveduras metilotróficas, Pichia pastoris, a proteína recombinante pode ser expressa com as modificações pós traducionais necessárias para ter sua estrutura original mantida, característica fundamental para se obter uma proteína enzimáticamente ativa. Para clonagem e expressão da proteína recombinante utilizamos o vetor pPICZαA, pois este possui um sistema de expressão baseado no promotor álcool oxidase (AOX1 e AOX2). Ele possui ainda, a capacidade de adicionar um peptídeo sinal e uma cauda de histidina, com objetivo de secretar a proteína expressa e facilitar sua purificação, respectivamente. A triagem e confirmação dos clones positivos foram feitas por PCR. A análise das amostras de sobrenadantes coletadas com 24, 48 e 72h de estímulo com metanol foi feita por SDS-PAGE e Western blot para verificação da expressão... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Precificação do biogás produzido por autoprodutores, considerando seu transporte por meio de gasodutos existentes

The expansion of the energy matrix is a matter of great importance since the recent problems facing the country in this sector, such as rationing mobilized in 2001. Moreover, there is also concern with global sustainable development. Brazil is producing about 64 million cubic meters of biogas per day, but only a small percentage of this total is harnessed as an energy resource. Compounders are considered potential, for example, landfill energy (LE) and sewage treatment plants (STP), which can be adapted to produce biogas and market them. The work focuses its studies on biogas produced by these small and medium compounders. Are proposed and studied the following alternatives for the utilization of biogas energy: generation and sale of electricity through the installation of a small power station within the landfill, and purification and marketing of gas, whose price will be a consideration on the price of natural gas, taking into account the percentage of methane present in the biogas. Trade ensures that gas plus a destination ecologically appropriate to it, taking advantage of its energy

Atividade antiinflamatória intestinal da escopoletina e fraxetina nas fases aguda e crônica do processo inflamatório induzido por TNBS em ratos

A Doença Inflamatória Intestinal (DII) engloba, fundamentalmente, duas doenças distintas: a Doença de Crohn (DC) e a Colite Ulcerativa (CU), ambas caracterizadas por uma inflamação crônica do intestino, com períodos de exacerbação seguidos de intervalos prolongados de remissão dos sintomas. Apesar da DII ser objeto de pesquisa há várias décadas, a sua etiologia ainda é desconhecida e seu tratamento envolve uma série de fármacos com sérios efeitos colaterais, especialmente quando usado cronicamente. As cumarinas representam uma importante classe de compostos fenólicos naturais que apresentam inúmeras propriedades farmacológicas importantes para que um produto seja potencialmente ativo no tratamento da DII. Dentre as inúmeras cumarinas conhecidas e estudadas, dados obtidos em nosso laboratório demonstram que algumas cumarinas apresentam efeitos protetores na fase aguda e preventiva do processo inflamatório intestinal induzido por TNBS (ácido trinitrobenzenosulfônico) em ratos, reduzindo a incidência de diarréia, aderência e obstrução intestinal, além de manterem os níveis de glutationa e reduzirem a atividade da fosfatase alcalina e da mieloperoxidase colônica. Os objetivos do presente projeto são determinar a atividade antiinflamatória intestinal da escopoletina e fraxetina na fase aguda e crônica com recidiva de colite ulcerativa induzida por TNBS tendo-se em vista a determinação de sua atividade curativa. Para tanto, serão avaliados os parâmetros clínicos gerais (consumo de alimento e peso corporal), parâmetros macroscópicos da lesão (determinação de índice de lesão, relação peso-comprimento colônico) e bioquímicos (avaliação das atividades da mieloperoxidase, fosfatase alcalina, níveis de proteínas e glutationa total)

Uso de sistemas construídos de áreas alagadas (Constructed Wetland System - CWS) tipo ascendente/descendente, para tratamento de efluentes avícolas

Human development and population growth during the twentieth century increased the water demand, tripling its consumption between 1950 and 1990. As the water streams were polluted; and as water is the source of minerals and also regulates vital functions, it becomes the vehicle of transmission and consequently spreads many diseases. Probably, the industries are the major responsible for this pollution when they dump untreated effluents to water streams, saturating the already insufficient net of sanitation facilities polluting water and soil. An effective treatment has been established with low cost in Europe and the United States, through constructed systems on wetlands Constructed Wetland Systems - CWSs, gradually used in other countries in the last three decades. Lately, we observe a continuous growth in Brazilian poultry business, and poultry industry showed greatest dynamism in the country, following the global market. Pondering this information and the efficiency of such treatment, this work aimed to study prototypes, in a laboratory scale, simulating ascending and descending types of CWSs, vegetated with aquatic macrophytes Eichhornia crassipes and the uses of aggregates and soil, to treat industrial wastewater from slaughterhouses and aviary. We conducted the initial characterization of the effluent to have an idea of its constituents and to scale the system and the continuous flow. Furthermore, we characterized the soil to be used in this system. The collects are periodically made in the refrigeration industry FRICOCK FRIGORIFICAÇÃO AVICULTURA INDÚSTRIA E COMÉRCIO LTDA. for local treatment simulation. The effluent that was treated with 12 prototypes of CWSs are analyzed with some frequency. The results of these reviews were compared to the effluent coming from the industry... (Complete abstract click electronic access below)

Utilização de biossurfactante e surfactante químico para dessorção de óleo presente em vermiculita hidrofobizada: estudo comparativo

A number of methods and products have been developed in order to eliminate or reduce the negative effects that hydrocarbons cause to the environment, including hydrophobic expanded vermiculite, used in oil residue filtering systems at gas stations. However, upon adsorbing organic compounds, the vermiculite is no longer used and is sent to landfills. The aim of the present study was to wash granular and powdered vermiculite containing oil lubricant in its pores with distilled water and solutions of 0.1% SDS surfactant and rhamnolipids, with the aim of removing the lubricant and the possibility of reusing the mineral. The greatest amount of lubricant removal was obtained through washing with 0.1% SDS and both granulometric forms. This may be associated to the industrial purification received by the surfactant. However, the biosurfactant is ecologically more viable due to its low toxicity and ease of degradability. In the readsorption tests, greatest adsorption was obtained with the granular vermiculite washed in SDS solution. In order to enable the reuse of the mineral, further tests are needed to enhance desorption/adsorption efficiency.

Biorremoção do corante acid blue 29, usando serragem (Pinus sp.) como biossorvente

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Exames laboratoriais importantes no diagnóstico da Piometra canina

Canine Pyometra is a uterine disease that occurs in sexually mature bitches, with higher incidence in nulliparous and animals over 4 years and is characterized by presenting an accumulation of pus in the uterine lumen, usually occurring in diestrus. Laboratory tests are important tools for the detection of metabolic abnormalities associated with sepsis and renal function, which are serious consequences of pyometra. In blood the main findings are normochromic non-regenerative anemia, presence of dehydration, and sometimes thrombocytopenia. The WBC count may be normal but most often occurs a neutrophilic leukocytosis with a left shift, monocytosis and the presence of toxic neutrophils. In less than 1 / 3 of the animals the presence of azotemia is present and a density lower than 1035 is detected in the urine of almost 90% of bitches which may be in normal range at the onset of the desease. Urinary protein loss is rare but the protein may be elevated in the reagent strip due to urinary contamination by uterine secretion. The increase of gamma-glutamyltransferase (GGT), alkaline phosphatase (ALP), aspartate aminotransferase (AST) and creatine kinase (CK) may be present, indicating disorders in the liver. Currently, additional laboratory tests are being studied for the diagnosis of pyometra and its prognosis, such as the measurement of C-reactive protein and fibrinogen for monitoring the recovery of the inflammatory process and the urine electrophoresis to characterize the origin of proteinuria in these animals . The aim of this work is to review the literature on the main laboratory tests that aid the diagnosis of Pyometra

Análise eletroforética de proteínas recombinantes obtidas de Pichia pastoris

A glicerol quinase é uma proteína tetramérica que cataliza a fosforilação do glicerol a glicerol-3-fosfato, composta por quatro subunidades - sua análise eletroforética fornecerá apenas uma banda se for constatada a sua pureza num gel não desnaturante - e sua reação com o glicerol é dependente de magnésio e de ATP. A eletroforese de proteínas utiliza como suporte um gel de poliacrilamida, que é formado pela polimerização de monômeros de acrilamida ao longo da sua cadeia e ligações cruzadas de cadeias pela inclusão de um co-monômero bifuncional apropriado, usualmente a N,N’ – metileno-bis-acrilamida ou apenas Bis . A eletroforese de proteínas mais comum é a que utiliza SDS para um gel de poliacrilamida desnaturante. O SDS é um sal chamado Dodecil Sulfato de Sódio que tem por característica se ligar a cadeia proteína nos resíduos de aminoácidos apolares, deixando com a carga negativa, sendo assim, toda proteína fica com carga total negativa, migrando para o anodo na eletroforese. As técnicas de purificação utilizadas foram ultrafiltração e precipitação com ácido tricloro acético, etanol gelado e sulfato de amônio. A dupla precipitação com etanol resultou na recuperação de maior quantidade de proteínas. A coloração do gel com prata foi mais sensível do que Comassie blue. O gel de eletroforese mostrou quatro bandas, correspondentes às quatro subunidades da glicerol quinase quando revelados com prata em gel de SDS-PAGE.

Remoção de matéria orgânica e nitrogênio de efluentes provenientes de abatedouros de bovinos por meio de reator aeróbio operando em bateladas sequenciais com adição de coagulante químico

The volume of liquid effluent generated in cattle slaughterhouses is quite high and cannot be released untreated in water bodies due to its high pollution load of predominantly organic origin. To minimize the environmental impacts of its industrial wastewater and meet the local environmental legislation, abattoirs shall make the treatment of these effluents. The present work aims to develop the study of a reactor by sequential batch pilot scale, in order to optimize their performance in treating wastewater from a cattle slaughterhouse. The treatment system used was developed and installed in the Laboratory of Wastewater Treatment, in Faculty of Science and Technology UNESP, Presidente Prudente campus. The procedure used followed the operation of sequential batch reactors, in which all processes and treatment operations occurring sequentially in a single unit, by establishing specific operating cycles, which comprise the following separated phases: aerobic reaction, anoxic reaction, sedimentation and emptying. Aiming to improve the quality of treatment was planned the addition of coagulant Poly Aluminum Chloride (PAC) in the reactor, by determining their optimal dosage by Jar-test trials. Were prepared four steps with specific operating cycles: step one or acclimatization (10 hour of aeration, one hour and 30 minutes of sedimentation and 30 minutes for exchanging the effluent); step 2 (6 hours of aeration or aerobic phase, 4 hours and 45 minutes of stirring or anoxic phase and 1 hour and 15 minutes for sedimentation and exchange effluent); step 3 (2 hours and 30 minutes of aeration, 8 hours and 15 minutes of stirring and 1 hour and 15 minutes for sedimentation and exchange) and step 4 (2 hours of aeration, 8 hours and 45 minutes of stirring and 1 hour and 15 minutes for sedimentation and exchange)... (Complete abstract click electronic access below)

Desenvolvimento de kit para quantificação enzimática de etanol

A dosagem do etanol durante a produção de medicamentos, bebidas e combustíveis tem se mostrado bastante importante para o aumento de rendimento dos processos e qualidade dos produtos. Embora existam vários métodos para determinar a concentração do etanol, os enzimáticos são os mais interessantes por serem rápidos, precisos, de fácil manuseio e baixo custo. O objetivo geral desse trabalho foi a elaboração de um Kit de quantificação enzimática de etanol, utilizando a enzima álcool desidrogenase I recombinante de S. cerevisiae (Adh1). Para isso, o gene codificador da enzima álcool desidrogenase I (ADH1) de levedura foi clonado no vetor pET28a para expressão em E. coli (BL21). Em seguida, a produção e solubilidade da enzima álcool desidrogenase I foi determinada, sendo definida uma condição ideal de produção e purificação da proteína recombinante por cromatografia de afinidade. A atividade enzimática da álcool desidrogenase I purificada foi determinada através de ensaios já padronizados na literatura (UV), bem como sua estabilidade em diversas condições de tempo e temperatura. Os resultados obtidos aqui demonstraram que a enzima obtida apresentou boa atividade biológica in vitro, com sensibilidade na detecção de no mínimo 2,3 x 10–4 g/L de etanol em 2 minutos. Além disso, a proteína purificada teve sua atividade preservada quando estocada a - 20°C durante 120 dias, características que possibilitarão que a enzima álcool desidrogenase I recombinante, purificada pela metodologia apresentada nesse trabalho, seja utilizada em um kit de quantificação enzimática de etanol rápido, preciso e de baixo custo

Estudo da tratabilidade de água pluvial utilizando coagulante natural a base de tanino visando fins não potáveis

This paper aimed to study the treatability of rainwater collected in Rio Claro, SP, using natural coagulant tannin based. The tannin was compared with other too primary coagulants, namely ferric chloride and corn starch. Assays were performed in laboratory scale using equipment known as Jarteste and aimed to study the conditions most suitable dosage and coagulation pH. First tests were conducted to compare the coagulating and determination of the conditions to be used in the following tests, taking as a criterion the greatest efficiency for water treatment. Also performed were performed tests to construct the tannin coagulation diagram, using the optimal concentration found in the previous phase, by varying the dosage of coagulant and the pH of clotting in order to determine the isoefficiency regions for apparent color and turbidity. Finally, tests were performed cyclically filtration with filter paper. Preliminary tests indicated that the vegetable tannin concentration 3% (m/m) from the commercial solution was presented the best set of results (84.3% removal of apparent color and 82.51% removal of turbidity) compared to ferric chloride (66.25% removal efficiency and apparent color of turbidity 67.82%) and starch (73.68% removal efficiency apparent color and turbidity to 67.19%). The coagulation diagrams indicate that the best region to work with vegetable tannin 3% is where the coagulant dosage ranges from 15 mg/L to about 37.5 mg/L and coagulation pH ranging from about 6.5 to 7.5. The cyclic filtration showed to be not efficient for the best dosage of coagulant, due to the process of clogging of the filter paper, but proved to be efficient for other dosages. Thus, for the waters studied, the results indicate that the natural coagulant based tannin is an alternative to conventional coagulants, possessing benefits of technical and environmental

Resolução de problema de valor no contorno associado ao projeto de reatores de fluxo disperso empregados no tratamento de efluentes

The objective of this work was to develop a numerical method to solve boundary value problems concerning to the use of dispersion model for describing the hydraulic behavior of chemical or biological reactors employed in the wastewater treatment. The numerical method was implemented in FORTRAN language generating a computational program which was applied to solve cases involving reaction kinetics of both integer and fractional orders. The developed method was able to solve the proposed problems evidencing to be a useful tool that provides more accurate design of wastewater treatment reactors