Conditional and targeted overexpression of vascular chymase causes hypertension in transgenic mice

We cloned a rat vascular chymase (RVCH) from smooth muscle cells (SMCs) that converts angiotensin I to II and is up-regulated in SMC from spontaneously hypertensive vs. normotensive rats. To determine whether increased activity of RVCH is sufficient to cause hypertension, transgenic mice were generated with targeted conditional expression of RVCH to SMC, with the use of the tetracycline-controlled transactivator (tTA). We confirmed conditional expression of RVCH by mRNA, protein, and chymase activity in the absence, but not in the presence, of dietary doxycycline. The systolic blood pressure (mmHg), measured by carotid artery cannulation at 10–12 weeks of age, was higher in tTA+/RVCH+ mice than in nonbinary transgenic littermates (136 ± 4 vs. 109 ± 3) (P < 0.05), as were the diastolic and mean pressures. Hypertension was completely reversed by doxycycline, suggesting a causal link with chymase expression. Medial thickening of mesenteric arteries from tTA+/RVCH+ mice vs. littermates (0.82 ± 0.1 vs. 0.42 ± 0.02) (P < 0.05) was associated with increased SMC proliferation, as judged by positive immunoreactivity, with the use of an antibody to the proliferating cell nuclear antigen. These structural changes were prevented by doxycycline. Perfusion myography of mesenteric arteries from tTA+/RVCH+ mice also revealed increased vasoconstriction in response to phenylephrine and impaired metacholine-induced vasodilatation when compared with littermate controls or with the doxycyline-treated group. Our studies suggest that up-regulation of this vascular chymase is sufficient to cause a hypertensive arteriopathy, and that RVCH may be a candidate gene and a therapeutic target in patients with high blood pressure.

Doxycycline-mediated quantitative and tissue-specific control of gene expression in transgenic mice.

The tet regulatory system in which doxycycline (dox) acts as an inducer of specifically engineered RNA polymerase II promoters was transferred into transgenic mice. Tight control and a broad range of regulation spanning up to five orders of magnitude were monitored dependent on the dox concentration in the water supply of the animals. Administration of dox rapidly induces the synthesis of the indicator enzyme luciferase whose activity rises over several orders of magnitude within the first 4 h in some organs. Induction is complete after 24 h in most organs analyzed. A comparable regulatory potential was revealed with the tet regulatory system where dox prevents transcription activation. Directing the synthesis of the tetracycline-controlled transactivator (tTA) to the liver led to highly specific regulation in hepatocytes where, in presence of dox, less than one molecule of luciferase was detected per cell. By contrast, a more than 10(5)-fold activation of the luciferase gene was observed in the absence of the antibiotic. This regulation was homogeneous throughout but stringently restricted to hepatocytes. These results demonstrate that both tetracycline-controlled transcriptional activation systems provide genetic switches that permit the quantitative control of gene activities in transgenic mice in a tissue-specific manner and, thus, suggest possibilities for the generation of a novel type of conditional mutants.

Creation of a reversible on/off system for site-specific in vivo control of exogenous gene activity in the renal glomerulus.

Using genetically engineered glomerular mesangial cells, an in vivo gene transfer approach was developed that specifically targets the renal glomerulus. By combining this system with a tetracycline (Tc)-responsive promoter, the present study aimed to create a reversible on/off system for site-specific in vivo control of exogenous gene activity within the glomerulus. In the Tc regulatory system, a Tc-controlled transactivator (tTA) encoded by a regulator plasmid induces target gene transcription by binding to a tTA-responsive promoter located in a response plasmid. Tc inhibits this tTA-dependent transactivation via its affinity for tTA. In double-transfected cells, therefore, the activity of a transgene can be controlled by Tc. Cultured rat mesangial cells were cotransfected with a regulator plasmid and a response plasmid that introduces a beta-galactosidase gene. In vitro, stable double-transfectant MtTAG cells exhibited no beta-galactosidase activity in the presence of Tc. However, following withdrawal of Tc from culture media, expression of beta-galactosidase was induced within 24 h. When Tc was again added, the expression was rapidly resuppressed. Low concentrations of Tc were sufficient to maintain the silent state of tTA-dependent promoter. MtTAG cells were then transferred into the rat glomeruli via renal artery injection. In the isolated chimeric glomeruli, expression of beta-galactosidase was induced ex vivo in the absence of Tc, whereas it was repressed in its presence. When Tc-pretreated MtTAG cells were transferred into the glomeruli of untreated rats, beta-galactosidase expression was induced in vivo within 3 days. Oral administration of Tc dramatically suppressed this induction. These data demonstrate the feasibility of using mesangial cell vectors combined with the Tc regulatory system for site-specific in vivo control of exogenous gene expression in the glomerulus.

A modified tetracycline-regulated system provides autoregulatory, inducible gene expression in cultured cells and transgenic mice.

A system for tetracycline-regulated inducible gene expression was described recently which relies on constitutive expression of a tetracycline-controlled transactivator (tTA) fusion protein combining the tetracycline repressor and the transcriptional activation domain of VP16 [Gossen, M. & Bujard, H. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 5547-5551]. This system yielded only low levels of transactivator protein, probably because tTA is toxic. To avoid this difficulty, we placed the tTA gene under the control of the inducible promoter to which tTA binds, making expression of tTA itself inducible and autoregulatory. When used to drive expression of the recombination activating genes 1 and 2 (RAG-1 and RAG-2), the autoregulatory system yielded both substantially higher levels of variable (diversity) joining [V(D)J] recombination activity (70-fold on average) and inducible expression in a much larger fraction of transfected cells (autoregulatory, 90%, vs. constitutive, 18%). In addition, this system allowed the creation of transgenic mice in which expression of a luciferase transgene was inducible tens to hundreds of times the basal levels in most tissues examined. Induced levels of expression were highest in thymus and lung and appear to be substantially higher than in previously reported inducible luciferase transgenic mice created with the constitutive system. With the modified system, inducible transactivator mRNA and protein were easily detected in cell lines by RNA and Western blotting, and transactivator mRNA was detected by RNA blotting in some tissues of transgenic mice. This autoregulatory system represents an improved strategy for tetracycline-regulated gene expression both in cultured cells and in transgenic animals.

Prevention of cement leakage into the hip joint by a standard cement plug during PFN-A cement augmentation: a technical note.

Medial penetration of the helical blade into the hip joint after fixation of trochanteric fractures using the proximal femur nail antirotation (PFN-A) is a potential failure mode. In low demand patients a blade exchange with cement augmentation may be an option if conversion to total hip arthroplasty is unfeasible to salvage the cut-through. This article describes a technique to avoid intraarticular cement leakage using a cement plug to close the defect in the femoral head caused by the cut-through.

Noticias históricas y descriptivas sobre el gran país del Chaco y río Bermejo; con observaciones relativas á un plan de navegación y colonización que se propone.

"Memoria sobre los ríos navegables que fluyen al Marañon, procedentes de las cordilleras del Perú y Bolivia. Por el Señor D. Tadeo Haënke": p. 393-415.

Modern Latin America: continent in ferment.

Includes bibliography.

Catalogus codicum manu scriptorum Bibliothecae regiae monacensis ...

Vol. 2 (not yet published) was reserved for Greek manuscripts. A catalog of the Greek manuscripts by I. Hardt was published in 5 vol. in 1806-12.

Sämmtliche Schriften. Ausgabe letzter Hand. Bd.46-47.

46.Das Maal.--47.Das Schachspiel. Der Pelzmantel.

Claudie; ein Roman.

Mode of access: Internet.

Martini Hankii De byzantinarum rerum scriptoribus graecis liber. Auctorum qvinqvaginta, qvi de constantinopolitanis aliisq[ue] tam civilibus, qvam ecclesiasticis antiqvitatibus monumenta nobis reliqverunt, vitas, scripta, de scriptis judicia distinctiorem in modum recenset.

Mode of access: Internet.

YouTube - en främjare av demokrati eller demokratism? : En fallstudie i svenska riksdagspartiers politiska kommunikation på YouTube

Bakgrunden till studien är att Sverigedemokraterna kom in i riksdagen vid valet 2014. De sägs även vara mest aktiva på sociala medier av partierna, samtidigt som användningen av dessa medier som kanalen YouTube är vanligt för alla partier att sprida sin politiska kommunikation. Vårt syfte består av flera delar: dels att undersöka riksdagspartiernas YouTube-användning; dels att analysera text, diskursiv- och social praktik i politiska kommunikation hos partier med öppna kommentarfält. För att studera detta använder vi begreppen  “det goda samhället” och demokratism med avsikten att förstå och problematisera politisk kommunikationen på YouTube utifrån ett demokratiskt perspektiv. Teoretisk ram är Arthos (etisk propagandaanvändning), Calderaro (web 2.0s demokratifrämjande), Dahlgren (“det goda samhället” och demokratism), Ekman (extremhögergruppers YouTube-användning), Falkheimer & Heide (historisk överblick av strategisk kommunikaiton), Giansante (demokrati i social medier), Halpern & Gibbs (politiska diskussioner i kommentarfält) och Neumayer (politiskt oliktänkandes diskussion i kommentarfält). Materialet är alla åtta riksdagspartiers (Vänsterpartiet, Socialdemokraterna, Miljöpartiet, Centerpartiet, Kristdemokraterna, Liberalerna, Nya Moderaterna och Sverigedemokraterna) YouTube-kanaler med  kommentarfält och tre filmer och deras kommentarfält. Filmerna är en valfilm från 2014 från både Centern respektive Vänstern samt en reklamfilm från 2015 från SD. Metoden för analysen av YouTube-kanalerna och kommentarerna är en liten översiktlig kvantitativ deskriptiv innehållsanalys, medan den djupgående analysen av filmer och kommentarfält är Faircloughs kvalitativa kritiska diskursanalys kompletterad med semiotisk analys. Resultatet visar att äldre och stora har sedan 2014 många stängda fält och lägre videouppladdningsfrekvens, medan yngre och mindre partier generellt sedan 2014 har många öppna fält och hög videouppladdningsfrekvens. Av de tre undersökta partiernas filmer och fält tillåter minst två av dem kritisk dialog mellan politiskt oliktänkande i dessa vilket främjar demokratin. Slutsatsen är då att YouTube bidrar till utvecklingen av politisk kommunikation mot det demokratiskt goda samhället.

Syns det inte, finns det inte : En studie om produktplaceringar i tv-serier och film

Tidigare har den vanligaste typen av reklam varit den i form av avbrott i tv­sändningar men i takt med våra ändrade tv­vanor söker reklamföretagen nya sätt att marknadsföra sig själva på. Så kallade produktplaceringar, är ett sådant marknadsföringssätt. Ett av de tydligaste exempel på detta är år 1982 då filmen E.T: The Extra Terrestrial hade premiär och huvudkaraktären åt godiset Reeses Pieces, en produktplacering som medförde en försäljningsökning på hela 65%. Produktplaceringar är sedan dess en blomstrande bransch och drar årligen in mångmiljardbelopp men attityderna gentemot denna typ av reklam har sviktat. Vi ställde oss därför frågan hur attityderna gentemot reklamfenomenet ser ut idag samt ifall ålder är en avgörande faktor för hur individer resonerar om produktplaceringar. Detta har lett till denna studiens syfte som är att undersöka två generationers attityder gentemot produktplaceringar i film och tv­serier samt hur de uppmärksammar det. Eftersom syftet med studien är att erhålla information om individers personliga uppfattningar, ansåg vi att den kvalitativa intervjun var bäst lämpad. Fyra intervjuer med personer mellan 20­30 år samt fyra intervjuer med personer mellan 50­60 år genomfördes. Materialet bestod i slutändan av åtta transkriberade intervjuer som analyserades med hjälp av studiens teoretiska ramverk. Teorierna berör generella antaganden om produktplaceringar, olika typer av produktplaceringar, dess påverkan på publiken, övertalningsförsök samt attityd och perception. Studien resulterade i att vi fann skillnader i hur generationerna uppmärksammar produktplaceringar. Den yngre generationen är i högre grad mottaglig för subtila placeringar medan den äldre generationen ansåg att placeringarna behövde vara tydliga och inzoomade för att uppmärksammas. Gällande attitydsaspekten fann vi att den yngre generationen har en något mer negativ inställning mot produktplaceringar, vilket kan bero på att denna typ av reklam påverkar det undermedvetna, något som framförallt den yngre generationen anser vara läskigt. Den äldre generationen har en något mer positiv syn på produktplaceringar, men en viss skepcism består. Detta beror troligen på att reklamtypen faktiskt påverkar och bringar ett köpintresse, något som denna generation hade skilda åsikter kring.

Men det är väl bara mensvärk? : En studie om hur det är att leva med endometrios

Endometrios är en kronisk sjukdom som drabbar en av tio kvinnor världen över. Vanliga symptom är menstruationssmärta, samlagssmärta och en nedsatt fertilitet. Diagnosen endometrios ställs oftast i samband med en titthålsoperation och kan i många fall dröja upp till flera år. Tidigare forskning på området har funnit att individer som lever med endometrios kan uppleva en minskad livskvalité, komplikationer med sociala relationer samt emotionella besvär. Syftet med föreliggande studie var att studera kvinnors upplevelse av endometrios. Åtta kvinnor intervjuades, samtliga bosatta i Stockholmsområdet. Resultatet visar på flera olika psykologiska aspekter som sjukdomen för med sig. En minskad livskvalité, komplikationer med sociala relationer och en nedsatt arbetsförmåga är aspekter som påverkas av de upplevda symptomen. En nedsatt fertilitet kan vidare skapa en reducering av individens självkänsla. Slutsatsen är att en tidigare diagnos och ökad forskning skulle kunna bidra till underlättande av endometriosdrabbades vardag och därmed förbättra deras livskvalité.

Sequence and chemistry requirements for a novel aptameric oligonucleotide inhibitor of EGF receptor tyrosine kinase activity

We have previously identified a phosphorothioate oligonucleotide (PS-ODN) that inhibited epidermal growth factor receptor tyrosine kinase (TK) activity both in cell fractions and in intact A431 cells. Since ODN-based TK inhibitors may have anti-cancer applications and may also help understand the non-antisense mediated effects of PS-ODNs, we have further studied the sequence and chemistry requirements of the parent PS-ODN (sequence: 5′-GGA GGG TCG CAT CGC-3′) as a sequence-dependent TK inhibitor. Sequence deletion and substitution studies revealed that the 5′-terminal GGA GGG hexamer sequence in the parent compound was essential for anti-TK activity in A431 cells. Site-specific substitution of any G with a T in this 5′-terminal motif within the parent compound caused a significant loss in anti-TK activity. The fully PS-modified hexameric motif alone exhibited equipotent activity as the parent 15-mer whereas phosphodiester (PO) or 2′-O-methyl-modified versions of this motif had significantly reduced anti-TK activity. Further, T substitutions within the two 5′-terminal G residues of the hexameric PS-ODN to produce a sequence, TTA GGG, representing the telomeric repeats in human chromosomes, also did not exhibit a significant anti-TK activity. Multiple repeats of the active hexameric motif in PS-ODNs resulted in more potent inhibitors of TK activity than the parent ODN. These results suggested that PS-ODNs, but not PO or 2′-O-methyl modified ODNs, containing the GGA GGG motif can exert potent anti-TK activity which may be desirable in some anti-tumor applications. Additionally, the presence of this previously unidentified motif in antisense PS-ODN constructs may contribute to their biological effects in vitro and in vivo and should be accounted for in the design of the PS-modified antisense ODNs. © 2002 Published by Elsevier Science Inc.