Immunomodulatory effects of low dose chemotherapy and perspectives of combanation with immunotherapy

Nowadays cancer is one of the main causes of death and many efforts worldwide have been driven to find out new treatments and approaches in order to extinguish or reduce this group of disorder. Chemotherapy is the main treatment for cancer, however, conventional schedule based on maximum tolerated dose (MTD) show several side effects and frequently allow the development of drug resistance. In this review we present the evidence that metronomic chemotherapy, based on the frequent administration of low or intermediate doses of chemotherapeutics is as efficient as MTD and works better in some situations. Finally, we present some data indicating that noncytotoxic concentrations of antineoplastic agents are able to both up-regulate the immune system and increase the susceptibility of tumor cells to cytotoxic T lymphocytes. Taken together, data from the literature provide us the evidence that low concentrations of selected chemotherapeutics agents, rather than conventional high doses, should be chosen for combination with immunotherapy

Avaliação da expressão gênica de MMPs e TIMPs modulados por RECK e SPARC durante o desenvolvimento ovariano e a foliculogênese em ratas

O remodelamento da matriz extracelular (MEC), um importante componente dos organismos multicelulares, relaciona-se diretamente com o desenvolvimento embrionário, a angiogênese, a morfogênese de órgãos e a formação de cartilagens. Especificamente nos ovários, este remodelamento permite a ocorrência dos diversos eventos observados no ciclo ovariano, a citar: o crescimento folicular, a ovulação e a formação e regressão do corpo lúteo. A reorganização tecidual advinda destes eventos é regulada, em parte, pela ação de enzimas proteolíticas conhecidas como metaloproteinases de matriz (MMPs) e de seus inibidores (TIMPs e RECK) (revisado por Curry et al., 2003). Atualmente, o remodelamento da MEC pelo sistema MMPs/TIMPs é fortemente correlacionado com a expressão de alguns genes, tais como o gene Basigin (BSG), que induz a expressão de MMPs durante o ciclo ovariano em ratos (Smedts et al., 2005), ou o gene SPARC, que modula a expressão do TGF-β, fator de crescimento este associado ao aumento da agressividade tumoral (Podhajcer et al., 2008). A expressão do gene RECK foi descrita em diversos processos de remodelamento tecidual fisiológicos. Porém, uma diminuição em sua expressão, juntamente com o aumento na expressão das MMPs, tem sido associada com tumores mais agressivos e metastáticos (Meng et al., 2008). No entanto, apesar de RECK e SPARC estarem amplamente associados com remodelamento tecidual em diversas patologias, ainda não foi descrita a associação destes com remodelamento tecidual promovido pelo sistema MMPs/TIMPs que ocorre naturalmente durante a dinâmica ovariana. Considerando este quadro, o trabalho aqui proposto tem por objetivo analisar a expressão gênica de algumas MMPs- (-2, -9, -13, -14 e -19), e alguns de seus inibidores (TIMPs -1, -2, e -3 e RECK) e correlacioná-la com a expressão de SPARC e BSG durante a foliculogênese ovariana de ratas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Avaliação da proliferação celular na próstata de gerbilos vasectomizados, após indução química pela injeção intraperitoneal do carcinógeno N-metil-N-nitrosuréia (MNU)

Prostate cancer is the second leading cause of cancer death in the country. Due to this factor, the interest of showing what relationship exists between vasectomy surgery and the incidence of prostate carcinoma has started. Some epidemiological studies showed an increased risk of prostate cancer in vasectomized men (Emard et al., 2001). On the other hand other authors have argued that there is no correlation (Patel et al., 2005) and there are those who said that vasectomy is linked to reduced risk of prostate cancer (Ross, 1983). Faced with an analysis of published works, such discussion remains today. The vasectomy, or deferentectomia, is a contraceptive male method, which is the section of the vas deferens of man by preventing the sperm from being expelled along with the seminal fluid during ejaculation, and is one of the most simple, economical, uncomplicated post- operative. This study aims to evaluate the process of cell proliferation and to evaluate immuno-histochemically the expression of specific markers of PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen) and Ki-67, in the prostate of the gerbil after chemical induction by intraperitoneal injection of the carcinogen N-methyl -N-nitrosourea (MNU), because the regulation of the functional balance between cell proliferation and apoptosis is associated with hyperplasia and prostatic carcinoma. The experimental procedure was performed at the Laboratory of the Department of Anatomy, along with collecting the data for later analysis

Análise de metilação do gene FOXE1 em carcinoma de células escamosas em cães: padronização metodológica

It is believed that epigenetic mechanisms such as DNA methylation are important for the tumorigenesis and maintenance of the altered state of tumor cells. DNA methylation occurs by the addition of a methyl group to carbon 5 of cytosine, catalyzed by the enzyme DNA methyl-transferase, which can change the expression of a gene, including the tumor suppressor genes. In human squamous cell carcinoma, several features have shown the etiological role of genes in tumor development. Among them, FOXE1 gene (forkhead box E1 - thyroid transcription factor) is presented with an important role in susceptibility to disease. Similarly the FOXE1 methylation pattern could alter the expression of this gene in dogs and predisposed to tumor on. Therefore, this study aims to investigate in dogs, the validity of the strategy employed in humans to analyze the FOXE1 methylation status. DNA extraction from fresh frozen tumoral samples was performed by Wizard Genomic® DNA Purification Kit. The methylation status was determined by MSP-PCR (methylation-specific polymerase chain reaction), using 2.0 ng of DNA treated with sodium bisulphate. One hundred micrograms of bisulphite-modified DNA was amplified using primers specific for either methylated or unmethylated DNA (primers sequences are available at http://pathology2.jhu.edu/pancreas/primer.pdf). The analysis of fragments was loaded on to 7% polyacrylamide gels and silver nitrate staining. In this stage of technical approach, 60% were FOXE1 hypermethylated. In conclusion, it was observed that the standard technique for assessing the methylation pattern of gene FOXE1 in humans can be used for the same evaluation in dogs. The correlation of these molecular data with clinical and histopathological parameters may have diagnostic and prognostic value and still be used as a tumor marker for therapeutic decision and surgical approach

Correlação entre presença de Mycoplasma hominis e Ureaplasma urealyticum e níveis IL-6 e IL-10 no líquido amniótico de gestantes com trabalho de parto prematuro

O trabalho de parto prematuro (TPP) é uma intercorrência obstétrica com etiologia multifatorial, que tem como principal complicação a prematuridade. A infecção da cavidade amniótica (CA) é um fator associado ao TPP e, nos últimos anos, inúmeros trabalhos têm demonstrado a presença de diferentes espécies bacterianas no líquido amniótico (LA) de pacientes em TPP. Dentre essas, destacam-se duas espécies de micoplasmas genitais, Mycoplasma hominis e Ureaplasma urealyticum, que embora sejam freqüentemente detectadas no LA ainda são pouco estudadas quanto à sua relação com essa complicação obstétrica. Avaliar a infecção na cavidade amniótica por M. hominis e U. urealyticum bem como determinar os níveis de IL-6 e IL-10 no líquido amniótico de gestantes com trabalho de parto prematuro. Foi realizado estudo prospectivo com 20 gestantes em TPP, atendidas no Serviço de Obstetrícia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP. O grupo controle foi constituído de 20 gestantes com indicação para amniocentese transabdominal para avaliação da maturidade fetal. Foram obtidas amostras do líquido amniótico e das membranas corioamnióticas de todas as pacientes incluídas no estudo. A pesquisa de M.hominis e U.urealyticum no LA foi realizada empregando-se a técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) e os níveis de IL-6 e IL-10 quantificados por ensaio imunoenzimático (ELISA). Os dados obtidos referentes às características maternas, infecção da cavidade amniótica e concentração de citocinas no LA foram submetidos ao teste z de proporção e ao teste de Mann-Whitney e o nível de significância adotado foi de 5%. A incidência de TPP no período do estudo foi de 5,8%. No grupo TPP, a pesquisa de invasão microbiana da CA foi positiva para... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Principais marcadores utilizados na avaliação da qualidade do sêmen de animais domésticos

Methods of semen cryopreservation allow changes in spermatic cells, such as damage in plasma and acrossomal membrane and modifications in mitochondrial function due to a disorder in the lipidic bilayer. For effective oocyte fertilization, spermatozoa require functional competent membranes, and intact organelles, acrosome and DNA. However, most laboratory methods used to evaluate semen quality are not highly correlated with fertilizing capacity. The discovery of a variety of fluorochromes and compounds conjugated to fluorescent probes has enabled an accurate assessment of the viability, integrity and function of spermatozoa. Among the most used probes that label the various compartments of the sperm cell there are the membrane impermeable fluorescent dyes to test the membrane integrity, as well as acylated dyes that pass the intact membrane. For the acrossomal integrity the most commonly used method is lectins labeled by a fluorescent probe. The acrosome reaction and spermatic capacitation is detected by the evaluation of membrane architecture and disorder of lipids in plasma membrane. Mitochondrial function can be determined using markers for their aerobic activity. The DNA status of spermatozoa has been determined using the metachromatic properties of Acridine Orange, and the DNA fragmentation can also be assessed by TUNEL assay. Finally, DNA condensation is analyzed using a single cell DNA gel electrophoresis assay that indicates DNA compactation. This monograph aims to compile the various tests used to detect damaged spermatozoa under cryopreservation methods, searching for improve the predictive value of semen analysis with the intention of a successful conception

Proliferação e Morte Celular (Apoptose) avaliadas em ratos Lewis após tratamento com mistura de praguicidas em baixas doses

The use of pesticides in Brazil has intensified over the years. And since 2009 it was ranked as the largest market for pesticides worldwide. The consequential diffuse contamination of the environment is therefore due to the increasing number of chemicals of different classes, origins and modes of action. Little is known about the action of pesticides on human health in situations of co-exposure. Possible toxic effects are not restricted to agricultural and industrial workers, but also the general population that may be exposed continuously to its residues in food and water. Although these pesticides are mostly present in the environment at low doses, it must be considered that possible cumulative or synergistic effects may occur when there are concurrent or sustained exposure for two or more of these agents, which can lead to late manifestation of subclinical damages, sometimes irreversible. Thus, the specific objective of this study was to assess the effect of carcinogenesis promotion of a mixture of pesticides at low doses and analyze the phenomena of cell proliferation and apoptosis in rat liver. A total of 50 male Lewis rats was separated into 5 groups for 8 weeks in a medium term hepatocarcinogenesis model. The three different classes of pesticides (dieldrin, dicofol, endosulfan, dichlorvos and permethrin), whose residues were detected by ANVISA during the period from 2001 to 2005 in tomatoes cultures, were added to the feed of rats initiated to hepatocarcinogenesis with diethylnitrosamine (DEN- 200mg/kg ip). We used two different mixtures, one with no toxic effects at doses (MEX1) referring to the NOEL (no-observed-effect level) and another at doses LOEL / LEL / LOAEL (Lowest-observed-effect level / Lowest-effect level / Lowest -observed-adverse-effect level), to the installation of adverse effects (MEX2), derived from chronic studies. All animals ...(Complete abstract click electronic access below)

Atividade in vivo de parasporina extraída de B. thuringiensis sobre o câncer colorretal murino (CT‐26)

Bacillus thuringiensis (Bt), is an environmental Gram-positive spore-forming bacterium that produces crystalline parasporal protein (Cry) during sporulation. The inclusions often exhibit strong and specific insecticidal activity, making Bt an agent for agricultural controlling insects pest, mites, protozoa and nematodes. Recent studies reported that some of these Crys do not show cytotoxicity against insects but they are capable to kill some human and animal cancer cells. These proteins were denominated parasporins (PS). However, antitumor activity of Bt parasporin on the development of murine colorectal cancer (CT-26), are not well studies and these are no reports on the in vivo effect of these proteins. Thus, the present study evaluated the in vitro and in vivo anti-tumoral activity of Bt parasporin against the murine colorectal cancer line CT-26. Therefore, Balb/c mice were s.c. inoculated with CT-26 cells and weekly treated with parasporin (i.p.) pre-activated by enzymatic digestion with trypsin or proteinase K. Our results have shown, for the first time, that despite the anti-tumor activity in vitro, parasporin crystals couldn’t combat tumor growth in vivo. Instead, this protein was highly toxic, affecting the liver and spleen, with possible effect on other organs, decreasing the survival of treated animals. The results indicate the need for studies to better detoxification or manipulation of parasporin for therapeutic use and new studies for analysis of toxicological effects of repetitive exposure of farmers to this toxin

Análise de matérias primas e solução comercial empregada na perfusão e no transporte de órgãos destinados ao transplante

A solução HTK (histidina, triptofano e cetoglutarato) foi especialmente desenvolvida para preservar a heterogeneidade morfológica e bioquímica dos órgãos destinados ao transplante. Contém exclusivamente substâncias existentes no organismo tais como cloretos de sódio, potássio e magnésio, histidina, triptofano, manitol e cetoglutarato de potássio. Sua composição promove a inibição de todos os processos de ativação muscular, nervosa ou endócrina nas estruturas estimuláveis das membranas. Nos compêndios oficiais encontram-se métodos de análise qualitativa e quantitativa para matérias primas. Análises das matérias primas foram realizadas nos Laboratórios de Controle de Qualidade da faculdade de Farmácia e Laboratório de Eletroanalitica (NDcom) do Instituto de Química aplicando os métodos preconizados nos códigos oficiais. Os resultados obtidos com as matérias primas foram satisfatórios e confiáveis. Os mesmos métodos não possibilitaram a análise da Solução HTK acabada como proposto inicialmente. Esses métodos não apresentaram sensibilidade suficiente para a determinação das matérias primas empregadas no preparo desta solução, pois estas se encontram em concentrações bastante reduzidas, necessitando métodos mais sensíveis que realizem análise de traços de eletrólitos.

Avaliação morfológica e morfométrica dos túbulos seminíferos de ratos tratados com o antineoplásico busulfan e suplementados com vitamina b12

O busulfan, um antineoplásico utilizado no tratamento de leucemia mieloide, apresenta como mecanismo de ação a alquilação do DNA, impedindo, portanto, a replicação desse ácido nucleico. Dessa maneira, um dos efeitos adversos desse fármaco consiste em danos aos tecidos de intensa atividade proliferativa, incluindo o epitélio seminífero. A vitamina B12 desempenha um papel importante na síntese de DNA, contribuindo no processo de divisão celular. Portanto, neste estudo, foi proposto avaliar a ação do busulfan sobre o epitélio seminífero de ratos e verificar se as alterações provocadas por esse fármaco são amenizadas pela suplementação com vitamina B12 durante o tratamento. Foi também proposto avaliar o hemograma dos animais a fim de verificar se o suplemento vitamínico minimiza a leucopenia e a trombocitopenia, causadas pelo busulfan. Foram utilizados 25 ratos distribuídos em 5 grupos: grupo controle (GC), grupo busulfan (GB), grupo veículo (GV), grupo busulfan+vitamina (GB/B12) e grupo vitamina (GB12). Os tratamentos foram realizados no período de 10 dias da seguinte maneira: os animais do grupo GB receberam duas doses de busulfan (10 mg/kg) no 1º e 4º dias de tratamento. Os animais do grupo veículo (GV) receberam uma solução contendo polietilenoglicol em duas doses de 0,1 ml/100 g de peso corpóreo, semelhantemente ao grupo GB. Os animais de ambos os grupos receberam doses de salina nos demais dias de tratamento. Os animais dos grupos GB/B12 e GB12 receberam busulfan+vitamina B12 e vitamina B12, respectivamente, no 1º e 4º dias de tratamento. Esses animais receberam vitamina B12 durante os demais dias de tratamento. Os animais do grupo GC receberam solução salina em todos os dias do tratamento. Após o tratamento, os animais foram eutanasiados e, por meio de punção cardíaca, o sangue foi coletado para análise do hemograma... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Avaliação das alterações celulares nos ovócitos de fêmeas semi-ingurgitadas de carrapatos Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae) decorrentes da exposição ao óleo de andiroba

Os carrapatos são considerados um dos mais importantes grupos dentre os artrópodes, por serem vetores de agentes patogênicos, que podem atacar animais, bem como o próprio homem. Dentre as diversas espécies de carrapato destaca-se a do Rhipicephalus sanguineus, pertencente à família Ixodidae e com ampla distribuição em todos os continentes. Atualmente esta espécie é considerada uma praga urbana, de grande importância médico-veterinária, que parasita principalmente o cão doméstico. Os ovários de carrapatos são considerados órgãos vitais para o sucesso biológico deste grupo de animais. Neste sentido, desenvolver pesquisas para se conhecer a ação de produtos naturais com reconhecida ação repelente ou acaricida, sobre o sistema reprodutor feminino de carrapatos, traria importantes informações para um melhor entendimento dos efeitos da ação destes produtos nos ovócitos desses ectoparasitas, contribuindo principalmente para o desenvolvimento de métodos de controle alternativos menos tóxicos para os organismos não-alvo e menos poluentes para o meio ambiente. Dessa forma, o presente estudo analisou as alterações morfofisiológicas causadas por diferentes concentrações do óleo de andiroba no ovário de fêmeas semiingurgitadas de carrapatos R. sanguineus

Células-Tronco e Terapia Celular: Suporte didático para o ensino fundamental e médio

Nos últimos anos, as pesquisas com células-tronco têm despertado um grande interesse nos meios de comunicação, levando a população a encarar esse novo conhecimento científico como sendo um método promissor para a cura de inúmeras doenças até agora, tidas como incuráveis. Deste modo, mostra-se fundamental que o ensino de Biologia se volte para o desenvolvimento de competências que permitam ao aluno entender, discutir, questionar, analisar, adquirir um posicionamento crítico diante das informações postas e fazendo uso dos conhecimentos adquiridos, servir como multiplicadores do conhecimento científico. Este trabalho tem como objetivo central a produção de um material didático contendo informações a respeito das células-tronco, quanto aos tipos, características, classificações, métodos de coleta e as terapias desenvolvidas no Brasil. Informações estas que servem como auxílio para professores de Ciências e Biologia, na compreensão e atualização perante as inovações científicas relacionadas às células-tronco. O capítulo 6 vem como uma sugestão de atividades possíveis a serem desenvolvidas a partir desse tema. Apresenta ainda um CD-ROM contendo uma síntese do assunto proposto a servir como suporte no preparo de aulas didáticas relacionadas ao tema

Efeito das baixas concentrações de agentes antineoplásicos sobre linfócitos humanos de sangue periférico

Our previous studies have shown that low concentrations (noncytotoxics) of antineoplastic agents modulate positively the dendritic cells, favoring their in vitro maturation and improving their antigen presenting function. The effects on colorectal cancer cells (HCT-116) were also investigated and we have observed an increased immunogenicity and susceptibility to cytotoxic T cells. Thereby, this study aimed to investigate the effect of 5-fluorouracil (5-FU) an azacitidine (AZA), in minimum effective and noncytotoxic concentrations on lymphocytes of healthy donors. In this study we have analyzed the cytotoxic effect of drugs at these concentrations as well as the proliferative ability of lymphocytes. In vitro production of IL-10 and IFN-γ has been also evaluated. We have observed that low concentrations of those chemotherapeutic agents are not cytotoxic for lymphocytes. However, the minimum effective concentrations (5-FU: 0,410±0,088 e AZA: 0,757±0,233; p<0, 05) have reduced the cell number. Proliferative activity of allogeneic lymphocytes in a mixed reaction (MLR) was not affected by the treatment. The cytokine production was not affected by the treatments, either. In conclusion, low concentrations of 5-FU and AZA has no deleterious effects on human peripheral blood lymphocytes and seems to be safe for combinatory administration with DC vaccines

Efeitos do citrato de sildenafila sobre a neuroproteção na neuropatia óptica, em ratos (Lewis/SsNHsd) com glaucoma agudo

Pós-graduação em Cirurgia Veterinária - FCAV

Células T reguladoras em sangue periférico de cães portadores de mastocitoma cutâneo

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV