Études d'ingénierie du ribozyme VS de Neurospora

Les ribozymes sont des ARN catalytiques fréquemment exploités pour le développement d’outils biochimiques et d’agents thérapeutiques. Ils sont particulièrement intéressants pour effectuer l’inactivation de gènes, en permettant la dégradation d’ARNm ou d’ARN viraux associés à des maladies. Les ribozymes les plus utilisés en ce moment pour le développement d’agents thérapeutiques sont les ribozymes hammerhead et hairpin, qui permettent la reconnaissance spécifique d’ARN simple brin par la formation de structures secondaires stables. In vivo, la majorité des ARN adoptent des structures secondaires et tertiaires complexes et les régions simples brins sont parfois difficiles d’accès. Il serait intéressant de pouvoir cibler des ARN repliés et un motif d’ARN intéressant à cibler est la tige-boucle d’ARN qui peut être importante dans le repliement global des ARN et pour accomplir des fonctions biologiques. Le ribozyme VS de Neurospora fait la reconnaissance de son substrat replié en tigeboucle de façon spécifique par une interaction kissing-loop, mais il n’a jamais été exploité pour faire la reconnaissance d’un ARN cible très différent de son substrat naturel. Le but des travaux présentés dans cette thèse est de déterminer si le ribozyme VS possède l’adaptabilité nécessaire pour l’ingénierie de ribozymes qui clivent des ARN cibles différents du substrat naturel. Dans le cadre de cette thèse, le ribozyme VS a été modifié pour l’adapter à différents substrats et des études de cinétiques ont été réalisées pour évaluer l’impact de ces modifications sur l’activité de clivage du ribozyme. Dans un premier temps, le ribozyme a été modifié pour faire la reconnaissance et le clivage de substrats possédant différentes longueurs de tiges Ib. Le ribozyme a été adapté avec succès à ces substrats de différentes longueurs de tige Ib, avec une activité qui est similaire à celle du ribozyme avec un substrat sans modification. Dans un deuxième temps, c’est l’interaction kissing-loop I/V du ribozyme qui a été substituée de façon rationnelle, dans le but de savoir si un ribozyme VS mutant peut reconnaitre et cliver un substrat ayant une boucle différente de celle de son substrat naturel. L’interaction kissing-loop I/V a été substituée pour les interactions kissing-loop TAR/TAR* de l’ARN du VIH-1 et L22/L88 de l’ARN 23S de Deinococcus radiodurans. La réaction de iii clivage des ribozymes comportant ces nouvelles interactions kissing-loop est toujours observée, mais avec une activité diminuée. Finalement, la sélection in vitro (SELEX) de ribozymes a été effectuée pour permettre un clivage plus efficace d’un substrat mutant avec une nouvelle boucle. Le SELEX a permis la sélection d’un ribozyme qui clive un substrat avec une boucle terminale mutée pour celle de l’ARN TAR du VIH-1 et cela avec une activité de clivage très efficace. L’ensemble de ces études démontre que le ribozyme VS peut être modifié de diverses façons pour la reconnaissance spécifique de différents substrats, tout en conservant une bonne activité de clivage. Ces résultats montrent le grand potentiel d’ingénierie du ribozyme VS et sont prometteurs pour la poursuite d’études d’ingénierie du ribozyme VS, en vue du clivage d’ARN cibles repliés en tige-boucle complètement différents du substrat naturel du ribozyme VS.

New statin use and left ventricular structure: estimating long-term associations in the Multi-Ethnic Study of Atherosclerosis (MESA)

Thesis (Master's)--University of Washington, 2016-08

Growth and yield of red raspberries cultivated under open field condition vs. high tunnel or rain shelter in the northern canadian climate

La culture sous abris avec des infrastructures de type grands tunnels est une nouvelle technologie permettant d’améliorer la production de framboises rouges sous des climats nordiques. L’objectif principal de ce projet de doctorat était d’étudier les performances de ces technologies (grands tunnels vs. abris parapluie de type Voen, en comparaison à la culture en plein champ) et leur effets sur le microclimat, la photosynthèse, la croissance des plantes et le rendement en fruits pour les deux types de framboisiers non-remontants et remontants (Rubus idaeus, L.). Puisque les pratiques culturales doivent être adaptées aux différents environnements de culture, la taille d’été (pour le cultivar non-remontant), l’optimisation de la densité des tiges (pour le cultivar remontant) et l’utilisation de bâches réfléchissantes (pour les deux types des framboisiers) ont été étudiées sous grands tunnels, abris Voen vs. en plein champ. Les plants cultivés sous grands tunnels produisent en moyenne 1,2 et 1,5 fois le rendement en fruits commercialisables que ceux cultivés sous abri Voen pour le cv. non-remontant ‘Jeanne d’Orléans’ et le cv. remontant ‘Polka’, respectivement. Comparativement aux framboisiers cultivés aux champs, le rendement en fruits des plants sous grands tunnels était plus du double pour le cv. ‘Jeanne d’Orléans’ et près du triple pour le cv. ‘Polka’. L’utilisation de bâches réfléchissantes a entrainé un gain significatif sur le rendement en fruits de 12% pour le cv. ‘Jeanne d’Orléans’ et de 17% pour le cv. ‘Polka’. La taille des premières ou deuxièmes pousses a significativement amélioré le rendement en fruits du cv. ‘Jeanne d’Orléans’ de 26% en moyenne par rapport aux framboisiers non taillés. Des augmentations significatives du rendement en fruits de 43% et 71% du cv. ‘Polka’ ont été mesurées avec l’accroissement de la densité à 4 et 6 tiges par pot respectivement, comparativement à deux tiges par pot. Au cours de la période de fructification du cv. ‘Jeanne d’Orléans’, les bâches réfléchissantes ont augmenté significativement la densité de flux photonique photosynthétique (DFPP) réfléchie à la canopée inférieure de 80% en plein champ et de 60% sous grands tunnels, comparativement à seulement 14% sous abri Voen. Durant la saison de fructification du cv. ‘Polka’, un effet positif de bâches sur la lumière réfléchie (jusqu’à 42%) a été mesuré seulement en plein champ. Dans tous les cas, les bâches réfléchissantes n’ont présenté aucun effet significatif sur la DFPP incidente foliaire totale et la photosynthèse. Pour le cv. ‘Jeanne d’Orléans’, la DFPP incidente sur la feuille a été atténuée d’environ 46% sous le deux types de revêtement par rapport au plein champ. Par conséquent, la photosynthèse a été réduite en moyenne de 43% sous grands tunnels et de 17% sous abris Voen. Des effets similaires ont été mesurés pour la DFPP incidente et la photosynthèse avec le cv. Polka. En dépit du taux de photosynthèse des feuilles individuelles systématiquement inférieur à ceux mesurés pour les plants cultivés aux champs, la photosynthèse de la plante entière sous grands tunnels était de 51% supérieure à celle observée au champ pour le cv. ‘Jeanne d’Orléans’, et 46% plus élevée pour le cv. ‘Polka’. Ces résultats s’expliquent par une plus grande (près du double) surface foliaire pour les plants cultivés sous tunnels, qui a compensé pour le plus faible taux de photosynthèse par unité de surface foliaire. Les températures supra-optimales des feuilles mesurées sous grands tunnels (6.6°C plus élevé en moyenne que dans le champ), ainsi que l’atténuation de la DFPP incidente (env. 43%) par les revêtements de tunnels ont contribué à réduire le taux de photosynthèse par unité de surface foliaire. La photosynthèse de la canopée entière était étroitement corrélée avec le rendement en fruits pour les deux types de framboisiers rouges cultivés sous grands tunnels ou en plein champ.

Validity of shape memory NiTi colon ring BioDynamix ColonRing™ (or NiTi CAR 27™) to prevent anastomotic colorectal strictures. Preliminary results

Purpose. Anastomotic strictures occur in 3-30% of colorectal anastomosis and one of the main causes may be a reaction to the presence of the metal staples used for suturing. The aim of this study was to evaluate the efficacy of a compression anastomosis ring using the memoryshaped device in initial, i.e. nickel-titanium alloy (NiTi) for the prevention of colorectal anastomotic strictures. Patients and methods. A compression anastomosis ring device (NiTi CAR 27™) was used to perform compression anastomosis in 20 patients underwent left hemicolectomy and anterior resection of the rectum for carcinoma. An endoscopic check of the anastomosis was carried out at one month and at six months after surgery. Results. In 2 patients (10%) a dehiscence of the anastomosis occurred on the fifth and the eighth postoperative day. No anastomotic strictures were observed in any of the other 18 patients at six months follow-up after surgery. Conclusion. Our preliminary results suggest that the use of a compression anastomosis ring might well be a valid method of preventing anastomotic strictures in colorectal surgery. Further studies involving a larger number of patients are needed in order to confirm these preliminary results.

A Comparison of two Proof Critics: Power vs. Robustness

Proof critics are a technology from the proof planning paradigm. They examine failed proof attempts in order to extract information which can be used to generate a patch which will allow the proof to go through. We consider the proof of the $quot;whisky problem$quot;, a challenge problem from the domain of temporal logic. The proof requires a generalisation of the original conjecture and we examine two proof critics which can be used to create this generalisation. Using these critics we believe we have produced the first automatic proofs of this challenge problem. We use this example to motivate a comparison of the two critics and propose that there is a place for specialist critics as well as powerful general critics. In particular we advocate the development of critics that do not use meta-variables.

Macro-geographical differences influenced by family-based expression on cultured pearl grade, shape and colour in the black-lip "pearl oyster" Pinctada margaritifera: a preliminary bi-local case study in French Polynesia

In French Polynesia, the aquaculture of P. margaritifera is carried out in numerous grow-out sites, located over three archipelagos (Gambier, Society and Tuamotu). To evaluate the impact of macro-geographical effects of these growing sites on pearl quality traits, five hatcheries produced families were used as homogeneous donor oysters in an experimental graft. The molluscs were then reared in two commercial locations: Tahaa island (Society) and Rangiroa atoll (Tuamotu). At harvest, eight pearl quality traits were recorded and compared: surface defects, lustre, grade, circles, shape categories, darkness level, body and secondary colour and visual colour categories. Overall inter-site comparison revealed that: 1) all traits were affected by grow-out location except for lustre and round shape, and 2) a higher mean rate of valuable pearls was produced in Rangiroa. Indeed, for pearl grade, Rangiroa showed twice as many A-B and less reject samples than Tahaa. This was related to the number of surface defects (grade component): in Rangiroa, twice as many pearls had no defects and less pearls had up to 10 defects. Concerning pearl shape, more circled and baroque pearls were found in Tahaa (+10%). For colour variation, 10% more pearls have an attractive green overtone in Rangiroa than in Tahaa, where more grey bodycolor were harvested. Lustre does not seem to be affected by these two culture site (except at a family scale). This is the first time P. margaritifera donor family have been shown to vary in the quality of pearls they produce depending on their grow-out location.

Social capital and educational achievements: Coleman vs. Bourdieu

The influence of social capital on an individual’s educational achievements is the subject of numerous scientific papers. Research on social capital is most frequently based on Coleman’s (1988) or Bourdieu’s (1986) theories of capital, which are related to different paradigms of social theory: whereas Coleman’s approach has its roots in structural functionalism, Bourdieu’s approach contains elements of conflict theory. A number of authors, starting with Bourdieu, attempt to explain and prove that, when connected with the education of individuals, the activity of social capital facilitates social reproduction. Other authors support the notion that social capital is, in fact, a powerful weapon that encourages social mobility. A third group of researchers emphasise that neither of these approaches in isolation can entirety explain the influences of social capital on an individual’s education (Ho, 2003). The present paper offers a review of research focusing on the influences of social capital on educational achievements, while outlining the fundamental differences between the two theoretical approaches that are most frequently used for research of this topic. The aim of the paper is to explain the influence of social capital on an individual’s educational achievements under Bourdieu’s and Coleman’s theoretical concepts, and to establish whether combining the approaches is possible. The conclusion and arguments show that it is legitimate to use all three theoretical approaches. (DIPF/Orig.)

A comparison of in situ vs. ex situ filtration methods on the assessment of dissolved and particulate metals at hydrothermal vents

The objective of this study was to assess the impact of the filtration method (in situ vs. ex situ) on the dissolved/particulate partitioning of 12 elements in hydrothermal samples collected from the Lucky Strike vent field (Mid-Atlantic Ridge; MAR). To do so, dissolved ( <0.45 mu m) and particulate Mg, Li, Mn, U, V, As, Ba, Fe, Zn, Cd, Pb and Cu were measured using different techniques (HR-ICP-MS, ICP-AES and CCSA). Using in situ filtration as a baseline, we showed that ex situ filtration (on-board and on shore after freezing) resulted in an underestimation of the dissolved pool, which was counterbalanced by an overestimation of the particulate pool for almost all the elements studied. We also showed that on-board filtration was acceptable for the assessment of dissolved and particulate Mn, Mg, Li and U for which the measurement bias for the dissolved fraction did not exceed 3%. However, in situ filtration appeared necessary for the accurate assessment of the dissolved and particulate concentrations of V, As, Fe, Zn, Ba, Cd, Pb and Cu. In the case of Fe, on-board filtration underestimated the dissolved pool by up to 96%. Laboratory filtration (after freezing) resulted in a large bias in the dissolved and particulate concentrations, unambiguously discounting this filtration method for deep-sea chemical speciation studies. We discuss our results in light of the precipitation processes that can potentially affect the accuracy of ex situ filtration methods.

Transcript of proceedings of the Arbitration Board (Arb. Bd. 192, N. M. B. case A-4400) : Chicago, Illinois, 1954. Wage increase case. Brotherhood of Locomotive Engineers vs. designated railroads.

On cover: Wage increase case.

Transcript of proceedings of Emergency Board No. 106, appointed by the President of the United States. Chicago, Illinois, 1954. Vacations, holidays, health and welfare benefits, rules. Fifteen cooperating railway labor organizations, vs. designated railroads.

Mode of access: Internet.

Formal function and phrase structure in contemporary music : Pierre Boulez’s late solo works and Sean Clarke’s "Lucretia Overture" and "4 Impromptus"

Cette thèse présente une théorie de la fonction formelle et de la structure des phrases dans la musique contemporaine, théorie qui peut être utilisée aussi bien comme outil analytique que pour créer de nouvelles œuvres. Deux concepts théoriques actuels aident à clarifier la structure des phrases : les projections temporelles de Christopher Hasty et la théorie des fonctions formelles de William Caplin, qui inclut le concept de l’organisation formelle soudée versus lâche (tight-knit vs. loose). Les projections temporelles sont perceptibles grâce à l’accent mis sur les paramètres secondaires, comme le style du jeu, l’articulation et le timbre. Des sections avec une organisation formelle soudée ont des projections temporelles claires, qui sont créées par la juxtaposition des motifs distincts, généralement sous la forme d'une idée de base en deux parties. Ces projections organisent la musique en phrases de présentation, en phrases de continuité et finalement, à des moments formels charnières, en phrases cadentielles. Les sections pourvues d’une organisation plus lâche tendent à présenter des projections et mouvements harmoniques moins clairs et moins d’uniformité motivique. La structure des phrases de trois pièces tardives pour instrument soliste de Pierre Boulez est analysée : Anthèmes I pour violon (1991-1992) et deux pièces pour piano, Incises (2001) et une page d’éphéméride (2005). Les idées proposées dans le présent document font suite à une analyse de ces œuvres et ont eu une forte influence sur mes propres compositions, en particulier Lucretia Overture pour orchestre et 4 Impromptus pour flûte, saxophone soprano et piano, qui sont également analysés en détail. Plusieurs techniques de composition supplémentaires peuvent être discernés dans ces deux œuvres, y compris l'utilisation de séquence mélodiques pour contrôler le rythme harmonique; des passages composés de plusieurs couches musicales chacun avec un structure de phrase distinct; et le relâchement de l'organisation formelle de matériels récurrents. Enfin, la composition de plusieurs autres travaux antérieurs a donné lieu à des techniques utilisées dans ces deux œuvres et ils sont brièvement abordés dans la section finale.

Études d'ingénierie du ribozyme VS de Neurospora

Les ribozymes sont des ARN catalytiques fréquemment exploités pour le développement d’outils biochimiques et d’agents thérapeutiques. Ils sont particulièrement intéressants pour effectuer l’inactivation de gènes, en permettant la dégradation d’ARNm ou d’ARN viraux associés à des maladies. Les ribozymes les plus utilisés en ce moment pour le développement d’agents thérapeutiques sont les ribozymes hammerhead et hairpin, qui permettent la reconnaissance spécifique d’ARN simple brin par la formation de structures secondaires stables. In vivo, la majorité des ARN adoptent des structures secondaires et tertiaires complexes et les régions simples brins sont parfois difficiles d’accès. Il serait intéressant de pouvoir cibler des ARN repliés et un motif d’ARN intéressant à cibler est la tige-boucle d’ARN qui peut être importante dans le repliement global des ARN et pour accomplir des fonctions biologiques. Le ribozyme VS de Neurospora fait la reconnaissance de son substrat replié en tigeboucle de façon spécifique par une interaction kissing-loop, mais il n’a jamais été exploité pour faire la reconnaissance d’un ARN cible très différent de son substrat naturel. Le but des travaux présentés dans cette thèse est de déterminer si le ribozyme VS possède l’adaptabilité nécessaire pour l’ingénierie de ribozymes qui clivent des ARN cibles différents du substrat naturel. Dans le cadre de cette thèse, le ribozyme VS a été modifié pour l’adapter à différents substrats et des études de cinétiques ont été réalisées pour évaluer l’impact de ces modifications sur l’activité de clivage du ribozyme. Dans un premier temps, le ribozyme a été modifié pour faire la reconnaissance et le clivage de substrats possédant différentes longueurs de tiges Ib. Le ribozyme a été adapté avec succès à ces substrats de différentes longueurs de tige Ib, avec une activité qui est similaire à celle du ribozyme avec un substrat sans modification. Dans un deuxième temps, c’est l’interaction kissing-loop I/V du ribozyme qui a été substituée de façon rationnelle, dans le but de savoir si un ribozyme VS mutant peut reconnaitre et cliver un substrat ayant une boucle différente de celle de son substrat naturel. L’interaction kissing-loop I/V a été substituée pour les interactions kissing-loop TAR/TAR* de l’ARN du VIH-1 et L22/L88 de l’ARN 23S de Deinococcus radiodurans. La réaction de iii clivage des ribozymes comportant ces nouvelles interactions kissing-loop est toujours observée, mais avec une activité diminuée. Finalement, la sélection in vitro (SELEX) de ribozymes a été effectuée pour permettre un clivage plus efficace d’un substrat mutant avec une nouvelle boucle. Le SELEX a permis la sélection d’un ribozyme qui clive un substrat avec une boucle terminale mutée pour celle de l’ARN TAR du VIH-1 et cela avec une activité de clivage très efficace. L’ensemble de ces études démontre que le ribozyme VS peut être modifié de diverses façons pour la reconnaissance spécifique de différents substrats, tout en conservant une bonne activité de clivage. Ces résultats montrent le grand potentiel d’ingénierie du ribozyme VS et sont prometteurs pour la poursuite d’études d’ingénierie du ribozyme VS, en vue du clivage d’ARN cibles repliés en tige-boucle complètement différents du substrat naturel du ribozyme VS.

Minerals and vitamin B9 in dried plants vs. infusions: assessing absorption dynamics of minerals by membrane dialysis tandem in vitro digestion

Vitamins and mineral elements are among the most important phytochemicals due to their important role in the maintenance of human health. Despite these components had already been studied in different plant species, their full characterization in several wild species is still scarce. In addition, the knowledge regarding the in vivo effects of phytochemicals, particularly their bioaccessibility, is still scarce. Accordingly, a membrane dialysis process was used to simulate gastrointestinal conditions in order to assess the potential bioaccessibility of mineral elements in different preparations of Achillea millefolium (yarrow), Laurus nobilis (laurel) and Taraxacum sect. Ruderalia (dandelion). The retention/passage dynamics was evaluated using a cellulose membrane with 34 mm pore. Dandelion showed the highest levels of all studied mineral elements (except zinc) independently of the used formulations (dried plant or infusion), but yarrow was the only species yielding minerals after the dialysis step, either in dried form, or as infusion. In fact, the ability of each evaluated element to cross the dialysis membrane showed significant differences, being also highly dependent on the plant species. Regarding the potential use of these plants as complementary vitamin B9 sources, the detected values were much lower in the infusions, most likely due to the thermolability effect.

Otolith shape variation provides a marker of stock origin for north Atlantic bluefin tuna (Thunnus thynnus)

Two stocks of bluefin tuna (Thunnus thynnus) inhabit the north Atlantic; the western and eastern stocks spawn in the Gulf of Mexico and the Mediterranean Sea respectively. Trans-Atlantic movements occur outside spawning time whereas natal homing maintains stock structure. Commercial fisheries may exploit a mixed assemblage of both stocks. The incorporation of mixing rates into stock assessment is precluded by uncertainties surrounding stock discrimination. Otolith shape descriptors were used to characterise western and eastern stocks of Atlantic bluefin tuna in the present study and to estimate stock composition in catches of unknown origin. Otolith shape varied with length and between locations and years. Within a restricted size range (200-297-cm fork length (FL)) the two stocks were distinguished with an accuracy of 83%. Bayesian stock mixture analysis indicated that samples from the east Atlantic and Mediterranean were predominantly of eastern origin. The proportion assigned to the eastern stock showed slight spatial variation; however, overlapping 95% credible intervals indicated no significant difference (200-297 cm FL: central Atlantic, 73-100%; Straits of Gibraltar, 73-100%; Morocco, 50-99%; Portugal 64-100%). Otolith shape could be used in combination with other population markers to improve the accuracy of mixing rate estimates for Atlantic bluefin tuna.

Landscape metrics as indicators of coastal morphology and its use in ecological niche modelling of seagrass species

Dependence of some species on landscape structure has been proved in numerous studies. So far, however, little progress has been made in the integration of landscape metrics in the prediction of species associated with coastal features. Specific landscape metrics were tested as predictors of coastal shape using three coastal features of the Iberian Peninsula (beaches, capes and gulfs) at different scales. We used the landscape metrics in combination with environmental variables to model the niche and find suitable habitats for a seagrass species (Cymodocea nodosa) throughout its entire range of distribution. Landscape metrics able to capture variation in the coastline enhanced significantly the accuracy of the models, despite the limitations caused by the scale of the study. We provided the first global model of the factors that can be shaping the environmental niche and distribution of C. nodosa throughout its range. Sea surface temperature and salinity were the most relevant variables. We identified areas that seem unsuitable for C. nodosa as well as those suitable habitats not occupied by the species. We also present some preliminary results of testing historical biogeographical hypotheses derived from distribution predictions under Last Glacial Maximum conditions and genetic diversity data.