964 resultados para Mécanisme enzymatique
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Introduction: Le gne O6-mthylguanine-ADN mthyltransferase (MGMT) code pour une enzyme spcifique rparatrice de lADN qui protge les cellules de la toxicit des agents alkylants. Ainsi, lactivit du MGMT est un mécanisme majeur de rsistance aux agents alkylants. Il a t dmontr quune diminution de lexpression du gne MGMT par une hypermthylation du promoteur rsulte en une amlioration de la survie chez les patients avec certains types de tumeurs qui sont traites avec des agents chimiothrapeuthique alkylants. Objectifs: Dterminer la prvalence de la mthylation du gne MGMT chez des patients avec des cancers pidermodes localement avancs de la sphre ORL traits avec chimioradiothrapie et valuer limpact de cette mthylation sur la survie. Mthodes: Sur 428 patients conscutifs, traits avec chimioradiothrapie notre institution et suivis pour un priode mdiane de 37 mois, 199 spcimens chirurgicaux paraffins ont t rcuprs. LADN tait extrait et modifi par le traitement au bisulfite. Une raction en chane de la polymrase, spcifique la mthylation tait entreprise pour valuer ltat de mthylation du promoteur du gne du MGMT. Les rsultats de laboratoire taient corrls avec la rponse clinique. Lanalyse statistique tait excute laide du test de Fisher pour les donnes catgoriques et laide des courbes de Kaplan-Meier pour les checs au traitement. Rsultats : Des 199 extraits dADN initiaux, 173 (87%) taient modifis au bisulfite avec succs. Des ces spcimens modifis, 71 (41%) ont dmontr une hypermthylation du MGMT. Pour les cas de mthylation et nonmthylation du MGMT, les caractristiques des patients ntaient pas significativement diffrentes. Les taux de rponse taient 71 et 73% (p=NS) respectivement. Le contrle locorgional tait respectivement 87 et 77% (p=0.26), la survie sans maladie tait 80 et 60% (p=0.38), la survie sans mtastase distance tait 92 et 78% (p=0.08) et la survie globale tait 64 et 62% (p=0.99) 3 ans. Conclusions : Ltat de mthylation du MGMT est fortement prvalent (41%) et semble avoir un possible impact bnfique sur la survie quand la chimioradiothrapie est administre aux patients avec des stades avancs de cancers tte et cou.
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Cette thse est compose de trois essais en conomie forestire. Les deux premiers s'intressent la fixation de la redevance optimale laquelle fait face le propritaire d'une ressource forestire dans un contexte d'information asymtrique. Le troisime analyse l'impact long terme du recyclage sur la surface de terre affecte la fort. La gestion des ressources forestires implique souvent la dlgation des droits de coupe par le propritaire forestier une entreprise exploitante. Cette dlgation prend la forme d'un contrat de concession par lequel le propritaire forestier octroie les droits d'exploitation aux compagnies forestires, en contrepartie d'une redevance (transfert montaire). L'octroie des droits d'exploitation s'effectue gnralement sous plusieurs modes, dont les plus rpandus sont les appels d'offres publics et les contrats de gr gr, o le propritaire forestier et la firme exploitante spcifient entre autres la redevance dans les clauses d'exploitation de la fort. Pour dterminer le mécanisme optimal (choix de la firme, ge de coupe et redevance), le propritaire forestier a idalement besoin de connatre les cots de coupe et de reboisement. Or en ralit, les firmes sont mieux informes sur leurs cots que le propritaire forestier. Dans ce contexte d'information asymtrique, le mécanisme optimal doit donc prendre en considration des contraintes informationnelles. Les deux premiers essais caractrisent, sous ces conditions, l'ge de coupe optimal (la rotation optimale) et la redevance optimale. Le premier essai examine le contrat optimal quand le propritaire forestier cde les droits de coupes une firme par un accord de gr gr ou par une procdure d'appel d'offre public au second prix. L'analyse du problme est mene premirement dans un contexte statique, dans le sens que les cots de coupe sont parfaitement corrls dans le temps, puis dans un contexte dynamique, o les cots sont indpendants dans le temps. L'examen en statique et en dynamique montre que la rotation optimale va satisfaire une version modifie de la rgle de Faustmann qui prvaudrait en information symtrique. Cette modification est ncessaire afin d'inciter la firme rvler ses vrais cots. Dans le cas statique, il en rsulte que la rotation optimale est plus leve en information asymtrique qu'en situation de pleine information. Nous montrons galement comment le seuil maximal de cot de coupe peut tre endognis, afin de permettre au propritaire d'accrotre son profit espr en s'assurant que les forts non profitables ne seront pas exploites. Nous comparons ensuite la redevance optimale en information asymtrique et symtrique. Les redevances forestires dans un arrangement de gr gr tant gnralement, en pratique, une fonction linaire du volume de bois, nous drivons le contrat optimal en imposant une telle forme de redevance et nous caractrisons la perte en terme de profit espr qui rsulte de l'utilisation de ce type de contrat plutt que du contrat non linaire plus gnral. Finalement, toujours dans le contexte statique, nous montrons travers un mécanisme optimal d'enchre au second prix qu'en introduisant ainsi la comptition entre les firmes le propritaire forestier augmente son profit espr. Les rsultats obtenus dans le contexte dynamique diffrent pour la plupart de ceux obtenus dans le cas statique. Nous montrons que le contrat optimal prvoit alors que chaque type de firme, incluant celle ayant le cot le plus lev, obtient une rente strictement positive, laquelle augmente dans le temps. Ceci est ncessaire pour obtenir la rvlation moindre cot la priode courante du vritable type de la firme. Comme implication, la rotation optimale s'accrot aussi dans le temps. Finalement, nous montrons qu'il y a distorsion en asymtrique d'information par rapport l'optimum de pleine information mme pour le cot le plus bas (la ralisation la plus favorable). La concurrence introduite dans le premier essai sous forme d'enchre au second prix suppose que chaque firme connat exactement son propre cot de coupe. Dans le deuxime essai nous relchons cette hypothse. En ralit, ni le propritaire forestier ni les firmes ne connaissent avec prcision les cots de coupe. Chaque firme observe de manire prive un signal sur son cot. Par exemple chaque firme est autorise visiter un lot pour avoir une estimation (signal) de son cot de coupe. Cependant cette valuation est approximative. Ainsi, le cot de chaque firme va dpendre des estimations (signaux) d'autres firmes participantes. Nous sommes en prsence d'un mécanisme valeurs interdpendantes. Dans ce contexte, la valeur d'une allocation dpend des signaux de toutes les firmes. Le mécanisme optimal (attribution des droits d'exploitation, redevance et ge de coupe) est explor. Nous dterminons les conditions sous lesquelles le mécanisme optimal peut tre implment par une enchre au second prix et drivons la rotation optimale et le prix de rserve dans le contexte de ce type d'enchre. Le troisime essai de la thse analyse l'impact long terme du recyclage sur la surface de terre affecte la fort. L'un des principaux arguments qui milite en faveur du recours au recyclage est que cela entranerait une rduction de la coupe de bois, pargnant ainsi des arbres. L'objectif est donc d'aboutir un nombre d'arbres plus important qu'en l'absence de recyclage. L'ide d'accrotre le stock d'arbre tient au fait que les forts gnrent des externalits: elles crent un flux de services rcratifs, freinent l'rosion des sols et des rives des cours d'eau et absorbent du dioxyde de carbone prsent dans l'atmosphre. tant donn la prsence d'externalits, l'quilibre des marchs rsulterait en un nombre d'arbre insuffisant, justifiant donc la mise en oeuvre de politiques visant l'accrotre. Le but de ce troisime essai est de voir dans quelle mesure la promotion du recyclage est un instrument appropri pour atteindre un tel objectif. En d'autres mots, comment le recyclage affecte-t-il long terme la surface de terre en fort et l'ge de coupe? Nous tudions cette question en spcifiant un modle dynamique d'allocation d'un terrain donn, par un propritaire forestier priv, entre la fort et une utilisation alternative du terrain, comme l'agriculture. Une fois les arbres coups, il dcide d'une nouvelle allocation du terrain. Il le fait indfiniment comme dans le cadre du modle de Faustmann. Le bois coup est transform en produit final qui est en partie recycl comme substitut du bois original. Ainsi, les outputs passs affectent le prix courant. Nous montrons que, paradoxalement, un accroissement du taux de recyclage rduira long terme la surface forestire et donc diminuera le nombre d'arbres plants. Par contre l'ge de coupe optimal va s'accrotre. L'effet net sur le volume de bois offert sur le march est ambigu. Le principal message cependant est qu' long terme le recyclage va rsulter en une surface en fort plus petite et non plus grande. Donc, si le but est d'accrotre la surface en fort, il pourrait tre prfrable de faire appel d'autres types d'instruments de politique que celui d'encourager le recyclage.
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Thse en cotutelle avec Universit de Nantes - Pays de La Loire - France (2005-2010)
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Lapplication des mtaux de transition la fonctionnalisation directe a ouvert la voie une nouvelle classe de ractions pour la formation de liens carbone-carbone. De par l'omniprsence des liaisons CH, lintroduction de nouvelles fonctionnalits chimiques par voie directe et pr-activation minimale simpose comme une stratgie de synthse trs attrayante. Ainsi, il est envisageable de prparer de manire rapide et efficace des supports complexes menant des molcules complexes, qui pourraient tre utiles dans divers domaines de la chimie. L'objectif principal de la prsente thse vise la fonctionnalisation directe des arnes htrocycliques et non htrocycliques et, plus prcisment, les techniques darylation. Dans un premier temps, nous allons aborder le thme de larylation directe tout en mettant laccent sur les pyridines (Chapitre 1). Ces molcules sont la base d'une multitude de composs biologiquement actifs et jouent un rle important dans le domaine des sciences des matriaux, de lagrochimie et de la synthse des produits naturels. Dans un deuxime temps, nous discuterons de nos travaux sur larylation directe catalys par un complex de palladium sur des ylures de N-iminopyridinium en soulignant la drivatisation du sel de pyridinium aprs une phnylation sp2 (Chapitre 2). Ltude de ce procd nous a permis de mettre en lumire plusieurs dcouvertes importantes, que nous expliquerons en dtails une une : larylation benzylique directe lorsque des ylures N-iminopyridinium substitues avec un groupement alkyl la position 2 sont utiliss comme partenaires dans la raction; les allylations Tsuji-Trost catalyse par un complex de palladium; et lalkylation directe et sans mtal via une catalyse par transfert de phase. Plusieurs dfis restent relever pour le dveloppement de procds directs utilisant des mtaux de transition peu coteux, dautant plus que la synthse par transformation directe des pyridines 2-alcnyles, lesquelles sont pertinentes sur le plan pharmacologique, na pas encore t rapporte ce jour. Avec cette problmatique en tte, nous avons russi mettre au point une alcnylation directe catalys par un complex de cuivre sur des ylures de N-iminopyridinium. Nous discuterons galement dune nouvelle mthode pour la prparation des iodures de vinyle utiliss dans les couplages. Ces ractions sont non seulement remarquablement chimioslectives, mais sont aussi applicables plusieurs substrats (Chapitre 3). En optimisant ce procd direct, nous avons dcouvert une faon unique de synthtiser les pyrazolo[1,5-a]pyridines 2-substitues (Chapitre 4). Le mécanisme global met en jeu une squence tandem de fonctionnalisation-cyclisation directe et un procd direct en cascade, qui navais jamais t rapport. Cela simplifie ansi la synthse autrement complique de ces substrats en y apportant une solution un problme de longue date. Dans les deux derniers chapitres, nous examinerons en dtail les techniques darylation directe qui n'impliquent pas les partenaires de couplage htrocycliques. Entre autres, au Chapitre 5, nous soulignerons notre dcouverte dun umpolung dirig et catalys par un complexe de palladium du benzne et de quelques autres drivs arnes. Il sagit l du premier cas de fonctionnalisation directe dans laquelle le groupe directeur se trouve sur le partenaire halogne et il sajoute la courte liste dexemples connus dans la littrature rapportant une arylation directe du benzne. Finalement, au Chapitre 6, nous passerons en revue une nouvelle arylation directe catalyse au fer, qui se veut un procd peu coteux, durable et prsentant une conomie datomes. Nous discutons des substrats possibles ainsi des tudes mcanistiques raliss.
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Les virus sont utiliss depuis longtemps dans la recherche sur le cancer et ont grandement contribu lavancement des connaissances de mme qu ltablissement de prceptes importants encore valables aujourdhui dans le domaine. Lun des dfis actuels est de mieux dfinir les tapes menant la transition dune cellule normale une cellule transforme et cest sur cette problmatique que nous nous sommes penchs. Pour ce faire, nous avons tir profit de lutilisation de lantigne grand-T du virus de polyome (PyLT), un virus capable dinduire des tumeurs chez les rongeurs. Cet oncogne viral lui seul possde des proprits intressantes qui suggrent que, en plus de limmortalisation, il peut galement contribuer aux vnements prcoces de la carcinognse. Ceci repose principalement sur la capacit de PyLT induire des tumeurs en souris transgniques et ce, avec une certaine latence ce qui suggre que des vnements supplmentaires sont ncessaires. Ainsi, lutilisation de PyLT dans un modle de culture cellulaire permet de dissquer les changements qui lui sont attribuables. Dans un premier temps, ltablissement du profil d'expression gnique associ l'expression de PyLT dans un modle murin nous a permis de slectionner un bon nombre de gnes, parmi lesquels figurait Necdin. Nous avons choisi dtudier Necdin plus en dtail puisque peu dattention tait accorde cette protine dans le domaine du cancer, malgr que diffrentes donnes de la littrature lui suggrent la fois des fonctions suppresseurs de tumeur et oncogniques. Nous avons dmontr que, malgr sa fonction propose de suppresseur de croissance, lexpression de Necdin nest pas incompatible avec la prolifration dans la ligne cellulaire de souris NIH 3T3 et les cellules primaires humaines (IMR90), bien que linhibition de son expression par shARN confre un avantage prolifratif. Nous avons confirm que Necdin est un gne cible de p53 induit par diffrents agents gnotoxiques, toutefois son expression peut galement tre rgule de faon p53-indpendante. De plus, Necdin agit ngativement sur larrt du cycle cellulaire en rponse lactivation de p53. Ceci suggre que Necdin est impliqu dans une boucle de rgulation ngative de la voie de p53 et que laugmentation anormale de lexpression de Necdin pourrait contribuer la perturbation la voie du suppresseur de tumeur p53. Lactivation de p53 permet larrt transitoire du cycle cellulaire en condition de stress, mais est aussi implique dans ltablissement dun arrt permanent nomm snescence. La snescence est un mécanisme de protection contre laccumulation de mutations qui peut contribuer linitiation du cancer. Vu lintressante implication de Necdin dans la rgulation de lactivit de p53, nous avons transpos les connaissances acquises du modle murin un modle humain, plus adapt pour ltude de la snescence. La caractrisation de lexpression de Necdin dans des fibroblastes primaires humains diffrents passages montre que les jeunes cellules en prolifration active expriment Necdin et que son niveau diminue avec ltablissement de la snescence rplicative. Le mme phnomne est observ lors de la snescence prmature provoque par lexpression dun oncogne et par lexposition aux radiations ionisantes. De plus, dans des conditions normales de prolifration, la modulation de Necdin par des essais de gain et de perte de fonction naffecte pas la dure de vie des cellules primaires. Toutefois, en condition de stress gnotoxique d lexposition aux irradiations, les cellules surexprimant Necdin prsentent une radiorsistance accrue de la mme faon que lorsque p53 est inactiv directement. Ce rsultat en cellules humaines vient appuyer leffet observ dans les cellules de souris sur limpact quaura le niveau de Necdin sur la rponse de p53 en condition de stress. Un bref survol a t fait pour aborder de quelle faon nos rsultats en culture cellulaire pouvaient se traduire dans des modles de cancer chez lhumain. Nous avons caractris lexpression de Necdin dans deux types diffrents de cancer. Dabord, dans le cancer de lovaire, le niveau lev de Necdin dans les tumeurs faible potentiel de malignit (LMP) en comparaison aux cancers agressifs de lovaire de type sreux suggre que lexpression de Necdin se limite aux cellules de cancer LMP, qui prsente gnralement un p53 de type sauvage. Son expression est aussi retrouve dans deux lignes cellulaires du cancer de lovaire non-tumorigniques en xnogreffe de souris, dont lune possde un p53 fonctionnel. De plus, la caractrisation de Necdin dans les lignes cellulaires du cancer de la prostate suggre une relation entre son expression et la prsence de p53 fonctionnel. Dans le cancer de la prostate, tout comme pour le cancer de lovaire, Necdin semble tre prsent dans les lignes reprsentant un stade moins avanc de la maladie. Lutilisation de loncoprotine virale PyLT nous a permis de rvler des proprits intressantes de Necdin. Nous proposons que dans certains contextes, lexpression constitutive de Necdin pourrait contribuer au cancer en retardant une rponse par p53 approprie et possiblement en participant laugmentation de linstabilit gnomique. La fonction potentiellement oncognique de Necdin quant sa relation avec p53 que nous avons rvle requiert davantage dinvestigation et les cancers caractriss ici pourraient constituer de bons modles cette fin.
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La cardiomyopathie ischmique et linsuffisance cardiaque (IC) sont deux des principales causes de morbidit et de mortalit dans les pays industrialiss. LIC reprsente la condition finale rsultant de plusieurs pathologies affectant le myocarde. Au Canada, plus de 400 000 personnes souffrent dIC. Malgr la grande varit de traitements disponibles pour prendre en charge ces patients haut risque de mortalit, lvolution et le pronostic clinique de cette population demeurent sombres. Les thrapies de rgnration par transplantation cellulaire reprsentent de nouvelles approches pour traiter les patients souffrant dIC. Limpact de cette approche cellulaire et les mécanismes qui sous-tendent lapplication de ce nouveau mode de traitement demeurent obscurs. Les hypothses proposes dans cette thse sont les suivantes : 1) lvolution long terme des patients qui se prsentent en IC grave est nettement dfavorable malgr les techniques actuelles de revascularisation chirurgicale cur battant; 2) la thrapie cellulaire et, plus spcifiquement, linjection intracoronaire prcoce de milieu de culture cellulaire, permet damliorer la rcupration fonctionnelle du ventricule gauche suite un infarctus aigu du myocarde; et 3) la mobilisation de laxe cur-moelle osseuse constitue un mécanisme de rponse important lors de la survenue dun vnement ischmique chronique affectant le myocarde.
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Les oligonuclotides (ONs) antisens prsentent un fort potentiel en tant quagents thrapeutiques. Toutefois, leurs proprits physicochimiques limitent leur utilisation en thrapie gnique. Pour pallier aux divers obstacles, des systmes de vectorisation, tels que les micelles polyioniques (PICMs), ont t dvelopps. Grce leur structure unique, les micelles protgent lON contre une dgradation prmature et le couplage dun ligand leur surface augmente leur spcificit et leur internalisation. Dans dautres systmes, un polymre adjuvant aux proprits pH-sensibles peut tre ajout pour faciliter la sortie de lendosome et augmenter lefficacit de lON. Lobjectif gnral de ce mmoire tait de mettre au point des PICMs ternaires cibles pour ladministration dONs. Ces micelles assureraient la fois linternalisation cellulaire de leur cargaison en interagissant avec des rcepteurs cellulaires et sa fuite de lendosome grce un mécanisme de dstabilisation de la membrane endosomale. Pour cela, des PICMs composes dun copolymre cationique de type poly(thylne glycol)-bloc-poly(mthacrylate d(alkylamino)thyle) et dun copolymre dacide mthacrylique ont t prpares. Les proprits physicochimiques de ces vecteurs ont dmontr quils permettaient une condensation efficace de lacide nuclique et ce, indpendamment de la nature du polymre cationique et de lacide nuclique. Finalement, une approche de couplage par pont disulfure a t dveloppe afin de greffer au copolymre un fragment danticorps dirig contre les rcepteurs de la transferrine. En conclusion, ces travaux dmontrent la versatilit et le potentiel des PICMs ternaires en tant que vecteurs dacide nuclique, et proposent une mthodologie de couplage dun ligand afin de formuler des PICMs cibles.
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Le trouble du dficit de lattention/hyperactivit (TDA/H) est le dsordre du comportement le plus commun chez les enfants. Les tudes suggrent qu'un pourcentage lev d'enfants atteints de TDA/H souffre de problmes de sommeil et de somnolence diurne. Le mécanisme sous-jacent ces difficults demeure inconnu. Plusieurs tudes ont suggr que les fuseaux de sommeil jouent un rle dans les mécanismes de protection du sommeil. L'objectif de cette tude est de comparer les fuseaux lents (11-13 Hz) et rapides (14-15 Hz) chez des enfants atteints du TDA/H et des sujets contrles. Nous prvoyons que comparativement aux enfants contrles, les enfants atteints du TDA/H montreront une plus faible densit des fuseaux lents et rapides, et auront des fuseaux plus courts (sec), moins amples (uV) et plus rapides (cycle/sec). Enfin, nous prvoyons que ces effets seront plus prononcs dans les drivations crbrales antrieures que dans les drivations plus postrieures du cerveau. Les enregistrements polysomnographiques (PSG) du sommeil de nuit ont t mens chez 18 enfants diagnostiqus avec le TDA/H et chez 26 sujets tmoins gs entre 7 et 11 ans. Un algorithme automatique a permis de dtecter les fuseaux lents et rapides sur les drivations frontales, centrales, paritales et occipitales. Les rsultats ont montr que, les caractristiques PSG du sommeil ne diffraient pas significativement entre les deux groupes. On ne note aucune diffrence significative entre les groupes sur nombre/densit des fuseaux lents et rapides ainsi que sur leurs caractristiques respectives. Cette tude suggre que les mécanismes de synchronisation du l'EEG en sommeil lent, tel que mesur par la densit et les caractristiques des fuseaux lents et rapides en sommeil lent ne diffrent pas chez les enfants atteints du TDA/H.
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La transformation de modles consiste transformer un modle source en un modle cible conformment des mta-modles source et cible. Nous distinguons deux types de transformations. La premire est exogne o les mta-modles source et cible reprsentent des formalismes diffrents et o tous les lments du modle source sont transforms. Quand elle concerne un mme formalisme, la transformation est endogne. Ce type de transformation ncessite gnralement deux tapes : lidentification des lments du modle source transformer, puis la transformation de ces lments. Dans le cadre de cette thse, nous proposons trois principales contributions lies ces problmes de transformation. La premire contribution est lautomatisation des transformations des modles. Nous proposons de considrer le problme de transformation comme un problme d'optimisation combinatoire o un modle cible peut tre automatiquement gnr partir d'un nombre rduit d'exemples de transformations. Cette premire contribution peut tre applique aux transformations exognes ou endognes (aprs la dtection des lments transformer). La deuxime contribution est lie la transformation endogne o les lments transformer du modle source doivent tre dtects. Nous proposons une approche pour la dtection des dfauts de conception comme tape pralable au refactoring. Cette approche est inspire du principe de la dtection des virus par le systme immunitaire humain, appele slection ngative. Lide consiste utiliser de bonnes pratiques dimplmentation pour dtecter les parties du code risque. La troisime contribution vise tester un mécanisme de transformation en utilisant une fonction oracle pour dtecter les erreurs. Nous avons adapt le mécanisme de slection ngative qui consiste considrer comme une erreur toute dviation entre les traces de transformation valuer et une base dexemples contenant des traces de transformation de bonne qualit. La fonction oracle calcule cette dissimilarit et les erreurs sont ordonnes selon ce score. Les diffrentes contributions ont t values sur dimportants projets et les rsultats obtenus montrent leurs efficacits.
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Ralis en codirection avec Karen C. Waldron et Dominic Rochefort.
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Une comprhension approfondie et un meilleur contrle de l'auto-assemblage des copolymres diblocs (squencs) et de leurs complexes l'interface air/eau permettent la formation contrle de nanostructures dont les proprits sont connues comme alternative la nanolithographie. Dans cette thse, des monocouches obtenues par les techniques de Langmuir et de Langmuir-Blodgett (LB) avec le copolymre dibloc polystyrne-poly(4-vinyl pyridine) (PS-PVP), seul ou complex avec de petites molcules par liaison hydrogne [en particulier, le 3-n-pentadcylphnol (PDP)], ont t tudies. Une partie importante de notre recherche a t consacre l'tude d'une monocouche assemble atypique baptise rseau de nanostries. Des monocouches LB composes de nanostries ont dj t rapportes dans la littrature mais elles coexistent souvent avec d'autres morphologies, ce qui les rend inutilisables pour des applications potentielles. Nous avons dtermin les paramtres molculaires et les conditions exprimentales qui contrlent cette morphologie, la rendant trs reproductible. Nous avons aussi propos un mécanisme original pour la formation de cette morphologie. De plus, nous avons montr que l'utilisation de solvants haut point dbullition, non couramment utiliss pour la prparation des films Langmuir, peut amliorer l'ordre des nanostries. En tudiant une large gamme de PS-PVP avec des rapports PS/PVP et des masses molaires diffrents, avec ou sans la prsence de PDP, nous avons tabli la dpendance des types principaux de morphologie (planaire, stries, nodules) en fonction de la composition et de la concentration des solutions. Ces observations ont men une discussion sur les mécanismes de formation des morphologies, incluant la cintique, lassemblage molculaire et leffet du dmouillage. Nous avons aussi dmontr pour la premire fois que le plateau dans l'isotherme des PS-PVP/PDP avec morphologie de type nodules est reli une transition ordre-ordre des nodules (hxagonal-ttragonal) qui se produit simultanment avec la rorientation du PDP, les deux aspects tant clairement observs par AFM. Ces tudes ouvrent aussi la voie l'utilisation de films PS-PVP/PDP ultraminces comme masque. La capacit de produire des films nanostructurs bien contrls sur diffrents substrats a t dmontre et la stabilit des films a t vrifie. Le retrait de la petite molcule des nanostructures a fait apparatre une structure interne explorer lors dtudes futures.
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Les canaux potassiques dpendants du voltage sont forms de quatre sous-units, chacune possdant six segments transmembranaires (S1-S6) et une boucle (p-loop) qui se trouve entre le cinquime et le sixime segment au niveau du pore. Il est connu que le segment senseur du voltage (S1-S4) subit un mouvement lorsque le potentiel membranaire change. Pour ouvrir le canal, il est ncessaire de transfrer l'nergie du senseur du voltage (gnr par le mouvement des charges positives de S4) au pore. Le mécanisme exact de ce couplage lectromcanique est encore sous tude. Un des points de liaison entre le senseur de voltage et le pore est le lien physique fait par le segment S4-S5 (S45L). Le but de cette tude est de dterminer l'influence de la flexibilit du segment S45L sur le processus de couplage. Dans le S45L, trois glycines sont distribues dans des positions diffrentes. Elles sont responsables de la flexibilit des hlices-alpha. Ces glycines (mais pas leurs positions exactes) sont conserves pour tous les canaux potassiques dpendants de potentiel. En utilisant la technique de mutagnes dirig, la glycine a t remplace dans chacune de ces diffrentes positions par une alanine et dans une deuxime tape, par une proline (pour introduire un angle dans l'hlice). Pour tudier le comportement des canaux dans cette nouvelle conformation, on a appliqu la technique de patch clamp pour dterminer les effets lors de l'ouverture du pore (courant ionique). Avec le cut-open oocyte voltage-clamp , nous avons tudi les effets sur le mouvement du senseur de voltage (courant gating) et la coordination temporelle avec l'ouverture du pore (courant ionique). Les donnes ont montr quen rduisant la flexibilit dans le S45L, il faut avoir plus d'nergie pour faire ouvrir le canal. Le changement pour une proline suggre que le mouvement du senseur est indpendant du pore pendant l'ouverture du canal.
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Lacide rtinoque (AR) est le ligand des rcepteurs nuclaires RAR et RXR qui agissent comme facteurs de transcription ligand-inductibles et mdient ses effets biologiques. Il est connu que lAR a des proprits prodiffrenciatrices et antiprolifratives, notamment sur les cellules de lpithlium mammaire. Une perte de sensibilit de lAR a toutefois t mise en vidence dans plusieurs lignes cellulaires mammaires cancreuses, ce qui pourrait faciliter la croissance des tumeurs. Or jusquici cette perte de sensibilit avait t attribue des dfauts de la voie de signalisation de lAR, cause par la perte de lexpression des rcepteurs lAR dans la tumeur, bien que plusieurs lignes de cellules cancreuses y soient tout de mme trs sensibles. Peu dtudes se sont intresses au rle de la voie de synthse de lAR dans la transformation des cellules mammaires. En effet, lAR est synthtis partir de la vitamine A, ou rtinol, son prcurseur sanguin provenant de la dite. Les cellules de lpithlium mammaire normales ont la capacit de synthtiser lAR partir du rtinol. Nos rapportons pour la premire fois que lpithlium mammaire est probablement le sige de la synthse et de la signalisation de lAR. Cela est d, au moins en partie, lexpression dune enzyme de synthse de lAR, RALDH3, dans lpithlium mammaire normal. Dans cette tude, nous dmontrons que les cellules cancreuses de type luminal, qui ont sensibles lAR (et qui expriment le rcepteur des estrognes ER, catgorie qui regroupe 75 % des tumeurs diagnostiques) nont au contraire pas la capacit de sythtiser lAR, probablement en raison dune faible expression de RALDH3 dans les tumeurs, sous leffet des estrognes. Cela pourrait reprsenter un nouveau mécanisme favorisant la croissance des tumeurs luminales dont les cellules prolifrent en prsence du rtinol sanguin. RALDH1, une autre enzyme de la voie de synthse de lAR, et qui partage 70 % didentit de squence avec RALDH3, est un marqueur de tumeurs plus agressives et de la formation de mtastase. Nous montrons au contraire, que RALDH3 est un marqueur dune moindre probabilit de dvelopper des mtastases chez les patientes atteintes dune tumeur luminale. Cela suggre des rles different pour ces deux enzymes dans la glande mammaire. Nos rsultats indiquent que RALDH1 et 3 ont des proprits enzymatiques trs diffrentes, ce qui est en accord avec cette dernire hypothse. Nos donnes suggrent aussi que RALDH1 et 3 pourraient tre des marqueurs de populations distinctes de cellules dans la glande mammaire normale. Nous proposons dexploiter les diffrences entre RALDH1 et 3 afin de mettre au point des mthodes de sparation des diffrentes population de cellules de lpithlium mammaire ce qui pourrait aider comprendre le rle de la synthse dAR dans ce tissu.
Resumo:
La technique de clonage par transfert nuclaire de cellules somatiques (SCNT) prsente une page importante dans les annales scientifiques, mais son application pratique demeure incertaine d son faible taux de succs. Les anomalies placentaires et de dveloppement ftal se traduisent par des pertes importantes de gestation et des mortalits nonatales. Dans un premier temps, la prsente tude a caractris les changements morphologiques des membranes ftales durant la gestation clone en les comparant des gestations contrles obtenues partir de linsmination artificielle. Les diffrentes anomalies morphologiques des placentomes telles que ldme chorioallantoique, la prsence de zones hyperchoiques et irrgulires dans la membrane amniotique et la prsence de cellules inflammatoires dgnres compromettent le dveloppement ftal normal de la gestation clone. Lexamen ultrasonographique reprsente une technique diagnostique importante pour faire le suivi dune gestation et de caractriser les changements placentaires dans le cadre dvaluation globale du bien-tre ftal. Le profil hormonal de trois strodes (progestrone (P4), estrone sulfate (E1S), et stradiol (E2)) et de la protine B spcifique de gestation (PSPB) dans le srum des vaches porteuses de clones SCNT a t dtermin et associ aux anomalies de gestations clones. Une diminution de la P4 srique au jour 80, une lvation du niveau de la concentration de la PSPB au jour 150, et une augmentation de la concentration dE2 srique durant le deuxime et troisime tiers de la gestation clone concident avec les anomalies de gestation dj reportes. Ces changements du profil hormonal associs aux anomalies phnotypiques du placenta compromettent le droulement normal de la gestation clone et gnent le dveloppement et le bien-tre ftal. Sur la base des observations faites sur le placenta de gestation clone, le mécanisme molculaire pouvant expliquer la disparition de lpithlium du placenta (linterface entre le tissue maternel et le placenta) a t tudi. Ltude a identifi des changements dans lexpression de deux protines dadhrence (E-cadhrin et -catenin) de cellules pithliales pouvant tre associes aux anomalies du placenta chez les gestations clones. Le tissu de cotyldons provenant de gestations clones et contrles a t analys par Western blot, RT-PCR quantitatif, et par immunohistochimie. Les rsultats prsentaient une diminution significative (p<0.05) de lexpression des dites protines dans les cellules trophoblastiques chez les gestations clones. Le RT-PCR quantitatif dmontrait que les gnes CCND1, CLDN1 et MSX1 cibls par la voie de signalisation de la Wnt/-catenin taient significativement sous exprims. La diminution de lexpression des protines E-cadherin et -catenin avec une rduction de lactivation de la protine -catenin durant le priode dattachement de lembryon peut potentiellement expliquer labsence totale ou partielle de lattachement des membranes ftales au tissu maternel et ventuellement, linsuffisance placentaire caractristique des gestations clones chez la vache. La caractrisation morphologique et fonctionnelle du placenta durant les gestations clones haut risque est essentielle pour valuer le statut de la gestation. Les rsultats de la prsente tude permettront de prdire le dveloppement et le bien-tre ftal de faon critique travers un protocole standardis et permettre des interventions mdicales pour amliorer le taux de succs des gestations clones chez les bovins.
Resumo:
Les antibiotiques aminoglycosidiques sont des agents bactricides de grande valeur et defficacit large spectre contre les pathognes Gram-positifs et Gram-ngatifs, dont plusieurs membres naturels et semisynthtiques sont importants dans lhistoire clinique depuis 1950. Des travaux crystallographiques sur le ribosome, rcompenss par le prix Nobel, ont dmontr comment leurs diverses structures polyamines sont adaptes pour cibler une hlice dARN dans le centre de codage de la sous-unit 30S du ribosome bactrien. Leur interfrence avec laffinit et la cintique des tapes de slection et vrification des tARN induit la synthse de protines basse fidlit, et linhibition de la translocation, tablissant un cercle vicieux daccumulation dantibiotique et de stress sur la membrane. En rponse ces pressions, les pathognes bactriens ont volu et dissmin une panoplie de mécanismes de rsistance enzymatiques et dexpulsion : tels que les N actyltransfrases, les O phosphotransfrases et les O nucleotidyltransfrases qui ciblent les groupements hydroxyle et amino sur le coeur des aminoglycosides; des mthyl-transfrases, qui ciblent le site de liaison ribosomale; et des pompes dexpulsion actives pour llimination slective des aminoglycosides, qui sont utiliss par les souches Gram-ngatives. Les pathognes les plus problmatiques, qui prsentent aujourdhui une forte rsilience envers la majorit des classes dantibiotiques sur le bord de la pan-rsistance ont t nomms des bactries ESKAPE, une mnmonique pour Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa et Enterobacteriaceae. La distribution globale des souches avec des mécanismes de rsistance envers les standards cliniques aminoglycosides, tels que la tobramycine, lamikacine et la gentamicine, est comprise entre 20 et 60% des isoles cliniques. Ainsi, les aminoglycosides du type 4,6-disubstitus-2-deoxystreptamine sont inadquats comme thrapies anti-infectieuses large spectre. Cependant, la famille des aminoglycosides 4,5-disubstitus, incluant la butirosine, la neomycine et la paromomycine, dont la structure plus complexe, pourrait constituter une alternative. Des collgues dans le groupe Hanessian et collaborateurs dAchaogen Inc. ont dmontr que certains analogues de la paraomomycine et neomycine, modifis par dsoxygnation sur les positions 3 et 4, et par substitution avec la chane N1--hydroxy--aminobutyramide (HABA) provenant de la butirosine, pourrait produire des antibiotiques trs prometteurs. Le Chapitre 4 de cette dissertation prsente la conception et le dveloppement dune stratgie semi-synthtique pour produire des nouveaux aminoglycosides amliors du type 4,5 disubstitus, inspir par des modifications biosynthtiques de la sisomicine, qui frustrent les mécanismes de rsistance bactrienne distribues globalement. Cette voie de synthse dpend dune raction dhydrognolyse de type Tsuji catalyse par palladium, dabord dveloppe sur des modles monosaccharides puis subsquemment applique pour gnrer un ensemble daminoglycosides hybrides entre la neomycine et la sisomicine. Les tudes structure-activit des divers analogues de cette nouvelle classe ont t values sur une gamme de 26 souches bactriennes exprimant des mécanismes de rsistance enzymatique et dexpulsion qui englobe lensemble des pathognes ESKAPE. Deux des antibiotiques hybrides ont une couverture antibacterienne excellente, et cette tude a mis en vidence des candidats prometteurs pour le dveloppement prclinique. La thrapie avec les antibiotiques aminoglycosidiques est toujours associe une probabilit de complications nphrotoxiques. Le potentiel de toxicit de chaque aminoglycoside peut tre largement corrl avec le nombre de groupements amino et de dsoxygnations. Une hypothse de longue date dans le domaine indique que les interactions principales sont effectues par des sels des groupements ammonium, donc lajustement des paramtres de pKa pourrait provoquer une dissociation plus rapide avec leurs cibles, une clairance plus efficace et globalement des analogues moins nphrotoxiques. Le Chapitre 5 de cette dissertation prsente la conception et la synthse asymtrique de chanes N1 HABA substitutes par mono- et bis-fluoration. Des chanes qui possdent des -N pKa dans lintervalle entre 10 et 7.5 ont t appliques sur une neomycine ttra-dsoxygne pour produire des antibiotiques avancs. Malgr la rduction considrable du N pKa, le large spectre bactricide na pas t significativement affect pour les analogues fluors isosteriques. De plus, des tudes structure-toxicit values avec une analyse dapoptose propritaire dAchaogen ont dmontr que la nouvelle chane , difluoro-N1-HABA est moins nocive sur un modle de cellules de rein humain HK2 et elle est prometteuse pour le dveloppement dantibiotiques du type neomycine avec des proprits thrapeutiques amliores. Le chapitre final de cette dissertation prsente la proposition et validation dune synthse biomimtique par assemblage spontan du aminoglycoside 66-40C, un dimre C2 symtrique bis-imine macrocyclique 16 membres. La structure propose du macrocycle a t affine par spectroscopie nuclaire un systme trans,trans-bis-azadine anti-parallle. Des calculs indiquent que leffet anomrique de la liaison glycosidique entre les anneaux A et B fournit la pr-organisation pour le monomre 6 aldhydo sisomicine et favorise le produit macrocyclique observ. Lassemblage spontan dans leau a t tudi par la dimrisation de trois divers analogues et par des expriences dentre croisement qui ont dmontr la gnralit et la stabilit du motif macrocyclique de l'aminoglycoside 66-40C.
