944 resultados para Intracellular Ca2 store
Resumo:
A photograph at Baie Comeau with the caption "Cement hoist at work on paper store house construction".
Resumo:
A photograph of two men standing behind the counter of a liquor store. The reverse of the photo has a handwritten description that reads "Buffalo Liquor Store 1900-1920".
Resumo:
Map of the Welland Canal including the store house and waste weir no.1, n.d.
Resumo:
Map of the Welland Canal including the store house and waste weir no.1 drawn by Shamus A. Begly of Public Works, n.d.
Resumo:
Receipt from W.H. Eckhardt, Star Music Store, St. Catharines for rent of machine, Feb. 1, 1888.
Resumo:
Le diabte est une maladie mtabolique qui se caractrise par une rsistance linsuline des tissus priphriques et par une incapacit des cellules pancratiques scrter les niveaux dinsuline appropris afin de compenser pour cette rsistance. Pour mieux comprendre les mcanismes dficients dans les cellules des patients diabtiques, il est ncessaire de comprendre et de dfinir les mcanismes impliqus dans le contrle de la scrtion dinsuline en rponse au glucose. Dans les cellules pancratiques, le mtabolisme du glucose conduit la production de facteurs de couplage mtabolique, comme lATP, ncessaires la rgulation de lexocytose des vsicules dinsuline. Le mcanisme par lequel la production de lATP par le mtabolisme oxydatif du glucose dclenche lexocytose des vsicules dinsuline est bien dcrit dans la littrature. Cependant, il ne peut lui seul rguler adquatement la scrtion dinsuline. Le malonyl-CoA et le NADPH sont deux autres facteurs de couplage mtaboliques qui ont t suggrs afin de relier le mtabolisme du glucose la rgulation de la scrtion dinsuline. Les mcanismes impliqus demeurent cependant tre caractriss. Le but de la prsente thse tait de dterminer limplication des navettes du pyruvate, dcoulant du mtabolisme mitochondrial du glucose, dans la rgulation de la scrtion dinsuline. Dans les cellules , les navettes du pyruvate dcoulent de la combinaison des processus danaplrose et de cataplrose et permettent la transduction des signaux mtaboliques provenant du mtabolisme du glucose. Dans une premire tude, nous nous sommes intresss au rle de la navette pyruvate/citrate dans la rgulation de la scrtion dinsuline en rponse au glucose, puisque cette navette conduit la production dans le cytoplasme de deux facteurs de couplage mtabolique, soit le malonyl-CoA et le NADPH. De plus, la navette pyruvate/citrate favorise le flux mtabolique travers la glycolyse en roxydation le NADH. Une tude effectue prcdemment dans notre laboratoire avait suggr la prsence de cette navette dans les cellules pancratique. Afin de tester notre hypothse, nous avons cibl trois tapes de cette navette dans la ligne cellulaire pancratique INS 832/13, soit la sortie du citrate de la mitochondrie et lactivit de lATP-citrate lyase (ACL) et lenzyme malique (MEc), deux enzymes cls de la navette pyruvate/citrate. Linhibition de chacune de ces tapes par lutilisation dun inhibiteur pharmacologique ou de la technologie des ARN interfrant a corrl avec une rduction significative de la scrtion dinsuline en rponse au glucose. Les rsultats obtenus suggrent que la navette pyruvate/citrate joue un rle critique dans la rgulation de la scrtion dinsuline en rponse au glucose. Paralllement notre tude, deux autres groupes de recherche ont suggr que les navettes pyruvate/malate et pyruvate/isocitrate/-ctoglutarate taient aussi importantes pour la scrtion dinsuline en rponse au glucose. Ainsi, trois navettes dcoulant du mtabolisme mitochondrial du glucose pourraient tre impliques dans le contrle de la scrtion dinsuline. Le point commun de ces trois navettes est la production dans le cytoplasme du NADPH, un facteur de couplage mtabolique possiblement trs important pour la scrtion dinsuline. Dans les navettes pyruvate/malate et pyruvate/citrate, le NADPH est form par MEc, alors que lisocitrate dshydrognase (IDHc) est responsable de la production du NADPH dans la navette pyruvate/isocitrate/-ctoglutarate. Dans notre premire tude, nous avions dmontr limportance de lexpression de ME pour la scrtion adquate dinsuline en rponse au glucose. Dans notre deuxime tude, nous avons test limplication de IDHc dans les mcanismes de rgulation de la scrtion dinsuline en rponse au glucose. La diminution de lexpression de IDHc dans les INS 832/13 a stimul la scrtion dinsuline en rponse au glucose par un mcanisme indpendant de la production de lATP par le mtabolisme oxydatif du glucose. Ce rsultat a ensuite t confirm dans les cellules disperses des lots pancratiques de rat. Nous avons aussi observ dans notre modle que lincorporation du glucose en acides gras tait augmente, suggrant que la diminution de lactivit de IDHc favorise la redirection du mtabolisme de lisocitrate travers la navette pyruvate/citrate. Un mcanisme de compensation travers la navette pyruvate/citrate pourrait ainsi expliquer la stimulation de la scrtion dinsuline observe en rponse la diminution de lexpression de IDHc. Les travaux effectus dans cette deuxime tude remettent en question limplication de lactivit de IDHc, et de la navette pyruvate/isocitrate/-ctoglutarate, dans la transduction des signaux mtaboliques reliant le mtabolisme du glucose la scrtion dinsuline. La navette pyruvate/citrate est la seule des navettes du pyruvate conduire la production du malonyl-CoA dans le cytoplasme des cellules . Le malonyl-CoA rgule le mtabolisme des acides gras en inhibant la carnitine palmitoyl transfrase 1, lenzyme limitante dans loxydation des acides gras. Ainsi, llvation des niveaux de malonyl-CoA en rponse au glucose entrane une redirection du mtabolisme des acides gras vers les processus destrification puis de lipolyse. Plus prcisment, les acides gras sont mtaboliss travers le cycle des triglycrides/acides gras libres (qui combinent les voies mtaboliques destrification et de lipolyse), afin de produire des molcules lipidiques signaltiques ncessaires la modulation de la scrtion dinsuline. Des tudes effectues prcdemment dans notre laboratoire ont dmontr que lactivit lipolytique de HSL (de langlais hormone-sensitive lipase) tait importante, mais non suffisante, pour la rgulation de la scrtion dinsuline. Dans une tude complmentaire, nous nous sommes intresss au rle dune autre lipase, soit ATGL (de langlais adipose triglyceride lipase), dans la rgulation de la scrtion dinsuline en rponse au glucose et aux acides gras. Nous avons dmontr que ATGL est exprim dans les cellules pancratiques et que son activit contribue significativement la lipolyse. Une rduction de son expression dans les cellules INS 832/13 par RNA interfrant ou son absence dans les lots pancratiques de souris dficientes en ATGL a conduit une rduction de la scrtion dinsuline en rponse au glucose en prsence ou en absence dacides gras. Ces rsultats appuient lhypothse que la lipolyse est une composante importante de la rgulation de la scrtion dinsuline dans les cellules pancratiques. En conclusion, les rsultats obtenus dans cette thse suggrent que la navette pyruvate/citrate est importante pour la rgulation de la scrtion dinsuline en rponse au glucose. Ce mcanisme impliquerait la production du NADPH et du malonyl-CoA dans le cytoplasme en fonction du mtabolisme du glucose. Cependant, nos travaux remettent en question limplication de la navette pyruvate/isocitrate/-ctoglutarate dans la rgulation de la scrtion dinsuline. Le rle exact de IDHc dans ce processus demeure cependant tre dtermin. Finalement, nos travaux ont aussi dmontr un rle pour ATGL et la lipolyse dans les mcanismes de couplage mtabolique rgulant la scrtion dinsuline.
Resumo:
Le dogme voulant que les rcepteurs coupls aux protines G (GPCRs) activent des voies de signalisation seulement lorsquils sont localiss la membrane plasmatique, a rcemment t remis en question. Des donnes rcentes indiquent que certains GPCRs peuvent galement induire une rponse intracellulaire partir des compartiments intracellulaires dont le noyau. Les rcepteurs activs par la protase (PAR) sont des membres de la famille GPCR. Les PARs sont activs par le clivage de la partie Nterminale du rcepteur ce qui permet au ligand attach sur le rcepteur de se lier sa poche rceptrice. Quatre PARs ont t dcrits : PAR1, PAR2, PAR3 et PAR4. PAR2 peut susciter des effets mitogniques et participer aux processus comme langiogense et l'inflammation. Alors que beaucoup d'effets intracellulaires de PAR2 peuvent tre expliqus lorsquil est localis la membrane plasmatique, une fonction intracrine de PAR2 a aussi t propose. Pourtant les mcanismes par lesquels PAR2 peut provoquer lexpression de gnes cibls sont toujours inconnus. Le but de notre tude tait de vrifier lexistence dune population nuclaire de PAR2. Nous avons galement mis lhypothse que les voies actives par lactivation de PAR2 dpendent de sa localization cellulaire. En utilisant des techniques de microscopie confocale et de "Western Blot" nous avons dmontr la prsence dune population nuclaire de PAR2. la suite de la stimulation de PAR2, nous avons observ une augmentation de la translocation du rcepteur de la membrane plasmatique au noyau. En utilisant la technique de "RT PCR", nous avons observ des rles diffrents de PAR2 la surface de la cellule et du noyau dans linitiation de lexpression des gnes. Afin didentifier les mcanismes responsables de la translocation nuclaire de PAR2, nous avons valu limplication des membres de la famille de "Sorting Nexins (SNX)" dans la translocation nuclaire de PAR2. "Sorting Nexins" est un groupe de protines avec des fonctions de transport bien tablies. SNX1 et SNX2 ont t identifis comme responsables du transfert de PAR1 vers les lysosomes. SNX11 n'a pas encore t tudi et nous avons mis lhypothse qu'il pourrait tre un autre membre de la famille des SNX impliqu dans la signalisation de PAR2. Pour ce faire, nous avons dvelopp des "knockdowns" stables pour SNX1, SNX2 et SNX11 dans les cellules HEK293. En utilisant les essais dimmunofluorescence, "Western Blot" et de cytomtrie en flux, nous avons dtermin que tous les trois membres du groupe SNX sont des partenaires d'interaction de PAR2. Toutefois, seul SNX11 se co-localise avec son partenaire au noyau et est responsable de sa translocation nuclaire. Les expriences de "RT - PCR" sur les lignes de cellule de SNXs "knockdowns" ont dmontr que la fonction de PAR2 nuclaire dpend surtout de SNX11; nanmoins SNX1 et SNX2 peuvent aussi linfluencer, suggrant qu'ils font aussi partie du rseau signaltique de PAR2. En conclusion, PAR2 est dplac de la membrane plasmatique la membrane nuclaire aprs sa stimulation avec un agoniste. La translocation nuclaire de PAR2 par un mcanisme impliquant SNX11, initie des effets intracellulaires diffrents de sa signalisation membranaire. Mots cls : rcepteurs coupls la protine G, Sorting Nexins, rcepteurs activs par la protase, translocation nuclaire, membrane nuclaire, signal nuclaire.
Resumo:
Linflammation: Une rponse adaptative du systme immunitaire face une insulte est aujourdhui reconnue comme une composante essentielle presque toutes les maladies infectieuses ou autres stimuli nfastes, tels les dommages tissulaires incluant linfarctus du myocarde et linsuffisance cardiaque. Dans le contexte des maladies cardiovasculaires, linflammation se caractrise principalement par une activation long terme du systme immunitaire, menant une faible, mais chronique scrtion de peptides modulateurs, appels cytokines pro-inflammatoires. En effet, la littrature a montr plusieurs reprises que les patients souffrant darythmies et de dfaillance cardiaque prsentent des taux levs de cytokines pro-inflammatoires tels le facteur de ncrose tissulaire alpha (TNF), linterleukine 1 (IL-1) et linterleukine 6. De plus, ces patients souffrent souvent dune baisse de la capacit contractile du myocarde. Le but de notre tude tait donc de dterminer si un lien de cause effet existe entre ces phnomnes et plus spcifiquement si le TNF, lIL-1 et lIL-6 peuvent affecter les proprits lectriques et contractiles du cur en modulant le courant Ca2+ de type L (ICaL) un courant ionique qui joue un rle primordial au niveau de la phase plateau du potentiel daction ainsi quau niveau du couplage excitation-contraction. Les possibles mchansimes par lesquels ces cytokines exercent leurs effets seront aussi explors. Pour ce faire, des cardiomyocytes ventriculaires de souris nouveau-nes ont t mis en culture et traits 24 heures avec des concentrations pathophysiologiques (30 pg/mL) de TNF, IL-1 ou IL-6. Des enregistrements de ICaL raliss par la technique du patch-clamp en configuration cellule entire ont t obtenus par la suite et les rsultats montrent que le TNF naffecte pas ICaL, mme des concentrations plus leves (1 ng/mL). En revanche, lIL-1 rduisait de prs de 40% la densit dICaL. Afin dexaminer si le TNF et lIL-1 pouvaient avoir un effet synergique, les cardiomyocytes ont t trait avec un combinaison des deux cytokines. Toutefois aucun effet synergique sur ICaL na t constat. En outre, lIL-6 rduisait ICaL significativement, cependant la rduction de 20% tait moindre que celle induite par IL-1. Afin dlucider les mcanismes sous-jacents la rduction de ICaL aprs un traitement avec IL-1, lexpression dARNm de CaV1.2, sous-unit codante pour ICaL, a t mesure par qPCR et les rsultats obtenus montrent aucun changement du niveau dexpression. Plusieurs tudes ont montr que linflammation et le stress oxydatif vont de pair. En effet, limagerie confocale nous a permis de constater une augmentation accrue du stress oxydatif induit par IL-1 et malgr un traitement aux antioxydants, la diminution de ICaL na pas t prvenue. Cette tude montre quIL-1 et IL-6 rduisent ICaL de faon importante et ce indpendamment dune rgulation transcriptionelle ou du stress oxydatif. De nouvelles donnes prliminaires suggrent que ICaL serait rduit suite lactivation des protines kinase C mais des tudes additionelles seront ncessaires afin dtudier cette avenue. Nos rsultats pourraient contribuer expliquer les troubles du rythme et de contractilit observs chez les patients souffrant de dfaillance cardiaque.
Resumo:
Hyperammonemia is a key factor in the pathogenesis of hepatic encephalopathy (HE) as well as other metabolic encephalopathies, such as those associated with inherited disorders of urea cycle enzymes and in Reye's syndrome. Acute HE results in increased brain ammonia (up to 5 mM), astrocytic swelling, and altered glutamatergic function. In the present study, using fluorescence imaging techniques, acute exposure (10 min) of ammonia (NH4+/NH3) to cultured astrocytes resulted in a concentration-dependent, transient increase in [Ca2+]i. This calcium transient was due to release from intracellular calcium stores, since the response was thapsigargin-sensitive and was still observed in calcium-free buffer. Using an enzyme-linked fluorescence assay, glutamate release was measured indirectly via the production of NADH (a naturally fluorescent product when excited with UV light). NH4+/NH3 (5 mM) stimulated a calcium-dependent glutamate release from cultured astrocytes, which was inhibited after preincubation with 1,2-bis(2-aminophenoxy)ethane-N,N,N',N'-tetraacetic acid acetoxymethyl ester but unaffected after preincubation with glutamate transport inhibitors dihydrokainate and DL-threo-beta-benzyloxyaspartate. NH4+/NH3 (5 mM) also induced a transient intracellular alkaline shift. To investigate whether the effects of NH4+/NH3 were mediated by an increase in pH(i), we applied trimethylamine (TMA+/TMA) as another weak base. TMA+/TMA (5 mM) induced a similar transient increase in both pH(i) and [Ca2+]i (mobilization from intracellular calcium stores) and resulted in calcium-dependent release of glutamate. These results indicate that an acute exposure to ammonia, resulting in cytosolic alkalinization, leads to calcium-dependent glutamate release from astrocytes. A deregulation of glutamate release from astrocytes by ammonia could contribute to glutamate dysfunction consistently observed in acute HE.
Resumo:
Le tamoxifne, un modulateur slectif des rcepteurs oestrogniques, est un mdicament largement utilis depuis plus de vingt ans pour le traitement et la prvention du cancer du sein. Plusieurs tudes ont rapport que ladministration aigu du tamoxifne pouvait rduire certains courants K+ cardiaques. Cette observation suggre que les femmes traites de faon chronique avec le tamoxifne risquent davoir une prolongation de leur intervalle QT, favorisant ainsi le dveloppement de torsades de pointes. Puisque in vivo, le tamoxifne est largement mtabolis et son effet est attribu celui du 4hydroxy-tamoxifne (4OH-tamoxifne), nous avons d'abord vrifi si les effets du tamoxifne sur la repolarisation pouvaient tre dus au 4OH-tamoxifne. l'aide de la mthode de patch-clamp, nous avons tudi leffet aigu du 4OH-tamoxifne sur les courants K+ prsents au niveau ventriculaire chez la souris femelle. En premier lieu, nous avons dmontr que les souris traites avec le 4OH-tamoxifne prsentaient une diminution des courants K+ comparativement aux souris intactes. Fait intressant, le prtraitement des myocytes avec lantagoniste des rcepteurs oestrogniques, le ICI 182,780, ou linhibiteur de la synthse protique, l'actinomycine D, na pas modifi les effets du 4OH-tamoxifne. Ces rsultats suggraient que les effets du 4OH-tamoxifne sur les courants potassiques ne soient pas lis la transcription gnomique et nimplique pas les rcepteurs aux strognes. Bien que ladministration aigu du 4OH-tamoxifne diminue les courants K+ cardiaques, labsence de troubles au niveau du rythme cardiaque chez les femmes traites long terme exclu la possibilit de conclure que le traitement chronique avec le tamoxifne augmente la dure de lintervalle QT. L'accs des souris femelles et des cobayes nous a permis de dmontrer que contrairement au traitement en aigu, les courants et les canaux K+ cardiaques sont augments en chronique. Les oestrognes associs une diminution des courants K+ dune part et nos rsultats obtenus avec le tamoxifne dautre part suggrent quen bloquant les rcepteurs oestrogniques, le tamoxifne puisse prvenir les effets inhibiteurs des oestrognes sur les courants K+. Cette association strognes- tamoxifne- rcepteurs oestrogniques et courants K+ nous a encourages approfondir encore nos tudes et vrifier linfluence des hormones sexuelles fminines sur la repolarisation ventriculaire. Une troisime tude a t ainsi ralise chez des souris femelles ovariectomises et des souris dficientes en rcepteurs oestrogniques ou afin de vrifier le rle des oestrognes et des rcepteurs oestrogniques sur la repolarisation ventriculaire. Nos rsultats ont rvl clairement que labsence des oestrognes entrane une augmentation de la densit du courant K+ transitoire indpendant du Ca2+ (Ito) et de lexpression du canal Kv4.3 et ces effets sont mdis par les RE. Ces donnes soutiennent davantage notre conclusion que linhibition des rcepteurs oestrogniques est responsable de laugmentation des courants/canaux K+ et suggrent fortement quils jouent un rle dans la rgulation de la repolarisation ventriculaire. Elles soulignent aussi l'importance de vrifier le statut hormonal des animaux utiliss pour des tudes touchant l'lectrophysiologie cardiaque. Dans la dernire partie de cette thse nous avons vrifi les effets de la grossesse et du systme nerveux autonome sur les diffrents paramtres lectrocardiographiques et plus particulirement sur le rythme cardiaque chez la souris. Nos donnes ont montr que, comme chez la femme enceinte, la grossesse est associe une augmentation du rythme cardiaque. De plus, l'augmentation des niveaux des hormones fminines pourrait affecter lautomatisme et lactivit lectrique cardiaque. Ces diffrentes tudes ont augment les connaissances sur la rgulation hormonale de l'lectrophysiologie cardiaque et aideront aux avancements des recherches chez les femmes.
Resumo:
Connue pour son rle dans la cascade de coagulation, la thrombine, une protase srine, peut galement agir par lintermdiaire de PAR1, un rcepteur activ par protase et coupl aux protines G liant le GTP (GPCR). La thrombine se lie et clive lextrmit N-terminale du PAR1 entre lArg41 et la Ser42, exposant une nouvelle extrmit terminale qui agit elle-mme comme un ligand. La thrombine et une squence peptidique de cinq acides amins, compose des rsidus Ser42 Arg46, nomme PAR1-AP, dclenchent dans diverses cellules de mammifres une rponse intracellulaire comportant une composante calcique. Dans cette tude, le systme dexpression par baculovirus dans les cellules Sf9 d'insecte nous a permis d'exprimer le rcepteur PAR1 du rat la surface de ces cellules et de raliser son couplage fonctionnel leur signalisation intracellulaire (modle rPAR1-Sf9). La composante calcique de celle-ci, en rponse au PAR1-AP, a ensuite t tudie en dtail laide de la sonde fluorescente Fura-2 et de plusieurs inhibiteurs agissant sur les canaux calciques ou d'autres lments de la cascade de signalisation du calcium intracellulaire. Lorsque le milieu extracellulaire contient du calcium (Ca2+), la thrombine ou PAR1-AP dclenchent un signal calcique qui consiste en une augmentation rapide de [Ca2+]i suivi dun plateau relativement soutenu, puis d'un retour lent vers le niveau de base initial. En l'absence de Ca2+ dans le milieu extracellulaire, l'augmentation initiale rapide de [Ca2+]i est suivie d'un retour rapide vers le [Ca2+]i de base. laide dinhibiteurs de canaux calciques, tels que le lanthane, la nifdipine et le D-600, l'entre du calcium du milieu extracellulaire dans les cellules est inhibe, abolissant le plateau soutenu de [Ca2+]i. Linhibition de la pompe Ca2+-ATPase par la thapsigargine supprime la rponse au PAR1-AP aprs puisement des sites de stockage de Ca2+intracellulaire. Le TMB-8 agit de faon discordante quant linhibition de la libration de Ca2+ des sites de stockage intracellulaires. La rponse PAR1-AP nest pas affecte par le D-609, un inhibiteur de la phospholipase . Linhibition de la protine kinase C (PKC) par le bisindolylmalimide induit des oscillations en prsence de Ca2+ extracellulaire et attnue fortement le signal calcique en absence de Ca2+ extracellulaire. En prsence de Ca2+ extracellulaire, lactivation de la PKC par le PBDu tronque le flux de [Ca2+]i tandis que la rponse calcique est abolie en absence de Ca2+ dans le milieu extracellulaire. Le H-89, un inhibiteur de la protine kinase A (PKA), cause une prolongation de la dure du plateau de [Ca2+]i dans un milieu riche en calcium et la suppression de la rponse PAR1-AP lorsque le milieu extracellulaire est dpourvu de Ca2+. Les rsultats obtenus nous permettent de conclure que la PKC et possiblement la PKA jouent un rle critique dans la mobilisation du Ca2+ induite par le PAR1-AP dans le modle rPAR1-Sf9.
Resumo:
Le remodelage cardiaque est le processus par lequel la structure ou la fonction cardiaque change en rponse un dsquilibre pathophysiologique tel qu'une maladie cardiaque, un contexte d'arythmie prolonge ou une modification de l'quilibre hormonal. Le systme rnine-angiotensine (SRA) est un systme hormonal largement tudi et il est impliqu dans de nombreuses activits associes au remodelage cardiovasculaire. Lexistence d'un systme circulatoire coupl un systme de tissus locaux est une reprsentation classique, cependant de nouvelles donnes suggrent un SRA indpendant et fonctionnellement actif l'chelle cellulaire. La comprhension de l'activit intracellulaire du SRA pourrait mener de nouvelles pistes thrapeutiques qui pourraient prvenir un remodelage cardiovasculaire dfavorable. L'objectif de cette thse tait d'lucider le rle du SRA intracellulaire dans les cellules cardiaques. Rcemment, les rcepteurs coupls aux protines G (RCPG), les protines G et leurs effecteurs ont t dtects sur des membranes intracellulaires, y compris sur la membrane nuclaire, et les concepts de RCPG intracellulaires fonctionnels sont en voie d'tre accepts comme une ralit. Nous avons ds lors fait l'hypothse que la signalisation du SRA dlimitant le noyau tait implique dans le contrle de l'expression des gnes cardiaques. Nous avons dmontr la prsence de rcepteurs d'angiotensine de type-1 (AT1R) et de type-2 (AT2R) nuclaires dans les cardiomyocytes ventriculaires adultes et dans une fraction nuclaire purifie de tissu cardiaque. Des quantits d'Ang II ont t dtectes dans du lysat de cardiomyocytes et des microinjections d'Ang-II-FITC ont donn lieu des liaisons prfrentielles aux sites nuclaires. L'analyse transcriptionnelle prouve que la synthse d'ARN de novo dans des noyaux isols stimuls l'Ang-II, et l'expression des ARNm de NF-B taient beaucoup plus importants lorsque les noyaux taient exposs de l'Ang II par rapport aux cardiomyocytes intacts. La stimulation des AT1R nuclaires a engendr une mobilisation de Ca2+ via les rcepteurs de l'inositol trisphosphate (IP3R), et le blocage des IP3R a diminu la rponse transcriptionnelle. Les mthodes disponibles actuellement pour l'tude de la signalisation intracrine sont limites aux mthodes indirectes. L'un des objectifs de cette thse tait de synthtiser et caractriser des analogues d'Ang-II cellule-permants afin dtudier spcifiquement dans les cellules intactes l'activit intracellulaire du SRA. Nous avons synthtis et caractris pharmacologiquement des analogues photosensibles Ang-II encapsule en incorporant un groupement 4,5-dimthoxy-2-nitrobenzyl (DMNB) photoclivable sur les sites actifs identifis du peptide. Chacun des trois analogues d'Ang II encapsule synthtiss et purifis: [Tyr(DMNB)4]Ang-II, Ang-II-ODMNB et [Tyr(DMNB)4]Ang-II-ODMNB a montr une rduction par un facteur deux ou trois de l'affinit de liaison envers AT1R et AT2R dans les dosages par liaison comptitive et une activit rduite dans la contraction de l'aorte thoracique. La photostimulation de [Tyr(DMNB)4]Ang-II dans des cellules HEK a augment la phosphorylation d'ERK1/2 (via AT1R) et la production de cGMP (via AT2R) alors que dans les cardiomyocytes isols elle gnrait une augmentation de Ca2+ nucloplasmique et initiait la synthse d'ARNr 18S et d'ARNm du NF-B. Les fibroblastes sont les principaux gnrateurs de remodelage cardiaque structurel, et les fibroblastes auriculaires sont plus ractifs aux stimuli profibrotiques que les fibroblastes ventriculaires. Nous avons mis l'hypothse que lAng-II intracellulaire et l'activation des AT1R et AT2R nuclaires associs contrlaient les profils d'expression des gnes des fibroblastes via des systmes de signalisation distincts et de ce fait jouaient un rle majeur dans le dveloppement de la fibrose cardiaque. Nous avons remarqu que les fibroblastes auriculaires expriment lAT1R et lAT2R nuclaire et l'Ang-II au niveau intracellulaire. Lexpression d'AT1R nuclaire a t rguls positivement dans les cas dinsuffisance cardiaque (IC), tandis que l'AT2R nuclaire a t glycosyl post-traductionnellement. La machinerie protique des protines G, y compris Gq/11, Gi/3, et G, a t observe dans des noyaux isols de fibroblastes. AT1R et AT2R rgulent l'initiation de la transcription du fibroblaste via les voies de transduction de signal d'IP3R et du NO. La photostimulation de [Tyr(DMNB)4]Ang-II dans une culture de fibroblastes auriculaire dclenche la libration de Ca2+ nucloplasmique, la prolifration, et la synthse et scrtion de collagne qui ne sont pas inhibes par les bloqueurs d'AT1R et/ou AT2R extracellulaires.
Resumo:
Les canaux calciques de type L CaV1.2 sont principalement responsables de lentree des ions calcium pendant la phase plateau du potentiel daction des cardiomyocytes ventriculaires. Cet influx calcique est requis pour initier la contraction du muscle cardiaque. Le canal CaV1.2 est un complexe oligomerique qui est compose de la sous-unite principale CaV1 et des sous-unites auxiliaires CaV et CaV21. CaV joue un role determinant dans ladressage membranaire de la sous-unite CaV1. CaV21 stabilise letat ouvert du canal mais le mecanisme moleculaire responsable de cette modulation na pas ete encore identifie. Nous avons recemment montre que cette modulation requiert une expression membranaire significative de CaV21 (Bourdin et al. 2015). CaV21 est une glycoproteine qui possede 16 sites potentiels de glycosylation de type N. Nous avons donc evalue le role de la glycosylation de type-N dans ladressage membranaire et la stabilite de CaV21. Nous avons dabord confirme que la proteine CaV21 recombinante, telle la proteine endogene, est significativement glycosylee puisque le traitement a la PNGase F se traduit par une diminution de 50 kDa de sa masse moleculaire, ce qui est compatible avec la presence de 16 sites Asn. Il sest avere par ailleurs que la mutation simultanee de 6/16 sites (6xNQ) est suffisante pour 1) reduire significativement la densite de surface de! CaV21 telle que mesuree par cytometrie en flux et par imagerie confocale 2) accelerer les cinetiques de degradation telle questimee apres arret de la synthese proteique et 3) diminuer la modulation fonctionnelle des courants generes par CaV1.2 telle quevaluee par la methode du patch-clamp . Les effets les plus importants ont toutefois ete obtenus avec les mutants N663Q, et les doubles mutants N348Q/N468Q, N348Q/N812Q, N468Q/N812Q. Ensemble, ces resultats montrent que Asn663 et a un moindre degre Asn348, Asn468 et Asn812 contribuent a la biogenese et la stabilite de CaV21 et confirment que la glycosylation de type N de CaV21 est necessaire a la fonction du canal calcique cardiaque de type L.
Resumo:
The present investigation is dedicated to understanding various mechanisms of salinity tolerance in the estuarine clam V. cyprinoides var. cochinensis. Even though V. cyprinoids var. cochinensis and V. cyprinoides are found to coexist in the same area, V. cyprinoids is reported to tolerate higher salinities than variety cochinenesis. Variations in the salinity of sea water may affect the aquatic organisms through specific gravity control and variations in osmotic pressure. The specific gravity of most soft tissues is close to that of normal seawater. Many bottom living forms, both attached and motile, have very high specific gravities eg.villorita cyprinoids. Villorita spp. Occurs abundantly in the reaches of the estuary and backwaters of Kerala. In both marine and estuarine forms, it is observed that mantle employs a lesser quantity of amino acids compared to adductor and foot. The regulation of cell volume is not carried out equally in all types of tissues. The capability of salinity tolerance is an aggregate of both the capabilities of extra cellular anisosmotic and intracellular isosmotic regulations in osmoconforming animals. The ultimate aim of water regulation is to regulate the cell volume.T here are slight changes occur in cell volume even in osmoregulators. These studies can also help in revealing the changes brought about in the cellular organelles like lysosomes, which were found to have a role in the osmoregulatory process. The osmoregulatory machinery of estuarine animals is more streamlined for a successful life in the estuarine regime.
Resumo:
Department of Biotechnology, Cochin University of Science and Technology
