L1 sequence of a new human papillomavirus type-58 variant associated with cervical intraepithelial neoplasia

The present study on molecular characterization of a human papillomavirus (HPV) isolated in Central Brazil describes the L1 gene sequence from a new variant of HPV-58, the isolate Bsb-02. The sample was from a smear obtained from a woman with cervical intraepithelial neoplasia grade II. The whole L1 gene from isolate Bsb-02 was sequenced automatically, showing 99.1% nucleotide identity with the gene from the HPV-58 reference. The clustering between Bsb-02 and HPV-58 reference sequence was also supported by phylogenetic analysis. Fourteen nucleotide substitutions were observed: eight were synonymous and six were associated with amino acid substitutions. A10V and V144I have not been previously described. At GenBank, the only complete L1 sequence from HPV-58 in addition to the HPV-58 reference one is that of Bsb-02. These data provide information that may be relevant to HPV diagnosis and to rational vaccine strategies. HPV variants may also be associated with host immune responses and with the risk of cervical neoplasia.

High expression of the circadian gene mPer2 diminishes the radiosensitivity of NIH 3T3 cells

Period2 is a core circadian gene, which not only maintains the circadian rhythm of cells but also regulates some organic functions. We investigated the effects of mPeriod2 (mPer2) expression on radiosensitivity in normal mouse cells exposed to 60Co-γ-rays. NIH 3T3 cells were treated with 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA) to induce endogenous mPer2 expression or transfected with pcDNA3.1(+)-mPer2 and irradiated with 60Co-γ-rays, and then analyzed by several methods such as flow cytometry, colony formation assay, RT-PCR, and immunohistochemistry. Flow cytometry and colony formation assay revealed that irradiated NIH 3T3 cells expressing high levels of mPer2 showed a lower death rate (TPA: 24 h 4.3% vs 12 h 6.8% and control 9.4%; transfection: pcDNA3.1-mPer2 3.7% vs pcDNA3.1 11.3% and control 8.2%), more proliferation and clonogenic survival (TPA: 121.7 ± 6.51 vs 66.0 ± 3.51 and 67.7 ± 7.37; transfection: 121.7 ± 6.50 vs 65.3 ± 3.51 and 69.0 ± 4.58) both when treated with TPA and transfected with mPer2. RT-PCR analysis showed an increased expression of bax, bcl-2, p53, c-myc, mre11, and nbs1, and an increased proportionality of bcl-2/bax in the irradiated cells at peak mPer2 expression compared with cells at trough mPer2 expression and control cells. However, no significant difference in rad50 expression was observed among the three groups of cells. Immunohistochemistry also showed increased protein levels of P53, BAX and proliferating cell nuclear antigen in irradiated cells with peak mPer2 levels. Thus, high expression of the circadian gene mPer2 may reduce the radiosensitivity of NIH 3T3 cells. For this effect, mPer2 may directly or indirectly regulate the expressions of cell proliferation- and apoptosis-related genes and DNA repair-related genes.

Production of L1 protein from different types of HPV in Pichia pastoris using an integrative vector

Human papillomavirus (HPV) infection is the most common sexually transmitted disease in the world and is related to the etiology of cervical cancer. The most common high-risk HPV types are 16 and 18; however, the second most prevalent type in the Midwestern region of Brazil is HPV-33. New vaccine strategies against HPV have shown that virus-like particles (VLP) of the major capsid protein (L1) induce efficient production of antibodies, which confer protection against the same viral type. The methylotrophic yeast Pichia pastoris is an efficient and inexpensive expression system for the production of high levels of heterologous proteins stably using a wild-type gene in combination with an integrative vector. It was recently demonstrated that P. pastoris can produce the HPV-16 L1 protein by using an episomal vector associated with the optimized L1 gene. However, the use of an episomal vector is not appropriate for protein production on an industrial scale. In the present study, the vectors were integrated into the Pichia genome and the results were positive for L1 gene transcription and protein production, both intracellularly and in the extracellular environment. Despite the great potential for expression by the P. pastoris system, our results suggest a low yield of L1 recombinant protein, which, however, does not make this system unworkable. The achievement of stable clones containing the expression cassettes integrated in the genome may permit optimizations that could enable the establishment of a platform for the production of VLP-based vaccines.

Composição química da biomassa de levedura integral (Saccharomyces sp.) e determinação do valor nutritivo da proteína em células íntegras ou rompidas mecanicamente

Levedura de cerveja foi submetida a estudos analíticos para determinação de sua composição química e a ensaios biológicos em ratos para determinação de seu valor protéico, na forma de células íntegras e com as paredes celulares rompidas mecanicamente, através de um moinho com esferas de vidro (Dynomill). Na composição da biomassa predominam as proteínas (48,52%), os carboidratos (32,92%), minerais (8,32%), RNA (7,52%) e lípides totais (3,4%). O perfil de aminoácidos da proteína é adequado para nutrição humana, superando as recomendações da FAO/WHO/UNU de aminoácidos essenciais, sendo particularmente rica em lisina, podendo ser indicada para complementar a proteína de cereais. O valor protéico determinado através de ensaios biológicos (PER e NPUa) representou 70-80% dos valores para caseína, utilizada como referência.

Estudo da produção de biopolímeros via enzimática através de inativação e lise celular e com células viáveis de Beijerinckia sp. 7070

Biopolímeros microbianos são polissacarídeos produzidos por microrganismos. A Beijerinckia sp. 7070 produz o biopolímero denominado clairana®. Biopolímeros microbianos podem ser produzidos utilizando enzimas purificadas (via enzimática). O objetivo desse trabalho foi avaliar a possibilidade de produzir o biopolímero clairana® via enzimática, verificar se a síntese e as enzimas envolvidas na síntese são intra e/ou extracelulares, se as enzimas permanecem ativas no meio e estudar a produção do biopolímero via enzimática, através de inativação e lise celular, e pelo processo convencional com células viáveis. As amostras foram cultivadas com a bactéria em meio líquido e submetidas à morte celular por inativação e lise celular após 30h, através de antibiótico e ultrasom, respectivamente. Amostras foram retiradas após 32, 46 e 54h de incubação, junto com amostras produzidas com células viáveis. O mesmo procedimento foi realizado em 46h e amostras foram coletadas após 48, 52 e 54h de incubação. Os polímeros foram recuperados, secos, pesados e analisados. Os resultados sugerem que é possível produzir o biopolímero clairanaâ via enzimática e que, provavelmente enzimas intra e extracelulares estão envolvidas, permanecendo ativas no meio e começando a atuar antes de 30h de fermentação. O processo via enzimática através de lise foi mais eficiente pois libera os polissacarídeos produzidos intracelularmente para o meio externo.

Estudo da reciclagem de células na produção biológica de etanol

Nas destilarias de álcool o conteúdo de etanol, na suspensão de levedura reciclada, gira em torno de 2% a 3%. A reciclagem de células é realizada tanto em fermentações em batelada, como nas contínuas. A fermentação alcoólica e a recuperação de células de leveduras foram avaliadas em laboratório. A levedura recuperada, por centrifugação, nos experimentos laboratoriais, foi tratada e novamente inoculada em novo meio fermentativo para avaliar o efeito tóxico do etanol e de outros metabólitos nas fermentações subseqüentes. A cepa Saccharomyces cerevisiae IZ-1904 utilizada foi inoculada em meio de melaço diluído contendo 180g L-1 e 310g L-1 de açúcares redutores totais (ART), com três repetições. O tratamento da levedura recuperada constou de dupla centrifugação e ressuspensão em água e vinho. Foram realizadas oito fermentações, a primeira com fermento multiplicado e as demais com a reciclagem de células das fermentações anteriores. O elevado teor de açúcar foi necessário para obtenção da concentração alcoólica desejada no vinho e, assim, conferir inibições e toxicidades detectáveis. Nas fermentações com concentração de etanol menor que 6,4% (v v-1) o efeito tóxico ou inibidor não foi detectado. A inibição pelo etanol e por outros componentes foi detectada sobre as leveduras e os resultados mostraram que a redução dos componentes reciclados com a levedura pode melhorar o processo fermentativo.

Avaliação da atividade antioxidante do extrato hidroalcoólico da romã (Punica granatum, L.) sobre células da linhagem Caco-2

A absorção dos compostos antioxidantes presentes no extrato hidroalcoólico da polpa da romã (Punica granatum, L.) foi avaliada utilizando-se o modelo de cultura de células, cuja linhagem escolhida foi a Caco-2, provenientes de um adenocarcinoma do cólon. O extrato hidroalcoólico da polpa apresentou um conteúdo de 832 µg equivalente de ácido gálico.mL-1 de extrato e sua atividade antioxidante mostrou valores de 5,9% (0,1 ppm) a 93,09% (8 ppm) de capacidade de redução do radical DPPH•. As células tratadas com o extrato apresentaram uma inibição de crescimento celular de 4,16% (200 ppm), e a absorção dos compostos antioxidantes foi de 63,25%. Para o ácido gálico, os resultados mostraram uma inibição de 2,98% (400 ppm) e uma absorção de 72,54% dos compostos antioxidantes. Os resultados mostraram que o método de avaliação de absorção através de cultura de células foi eficaz, e que os compostos antioxidantes foram absorvidos pelas células, que se apresentaram viáveis, após um período de exposição prolongado aos compostos.

Carcinoma de células renais com metástase cutânea: relato de caso

O adenocarcinoma do rim, ou hipernefroma, é a terceira neoplasia mais comum do trato geniturinário, sendo o de células claras o tipo principal, representando 60% dos casos, com pico de incidência entre 50 e 70 anos. A presença de metástase ao diagnóstico acomete em torno de 30% dos pacientes, tendo como principais sítios pulmões, ossos, pele, fígado e cérebro. Relatamos o caso de um paciente portador de carcinoma de células renais com metástase ao diagnóstico que, apesar de inserido na faixa etária predominante, tipo histológico mais frequente e quadro clínico característico, apresentava metástase a distância em local pouco observado na prática clínica. O paciente evoluiu para o óbito sem tempo hábil para o tratamento.

Estudio citogenético en células espermatogénicas de ratón (C57BLx CD1)F1 tratado con etilmetanosulfonato

Tesis (Maestría en Ciencias con Especialidad en Morfología) UANL

Identificación de posibles células del sistema A.P.U.D. en placentas humanas normales a término

Tesis (Maestría en Ciencias con Especialidad en Fisiología Médica) UANL

Determinación por métodos histoquímico enzimáticos del tiempo de aparición de las células de Langerhans en la epidermis del ratón albino (Mus musculus cepa C-D1)

Tesis (Maestría en Ciencias con Especialidad en Morfología) UANL

Expresión del gen de la hormona del crecimiento (hGH-N) bajo el control de un promotor inducible con doxiciclina, en células hipofisiarias

Tesis (Maestría en Ciencias con Especialidad en Biología Molecular e Ingeniería Génetica) UANL

Regulación de la expresión diferencial del gen hGH-V en células en cultivo

Tesis (Maestría en Ciencias con Especialidad en Biología Molecular e Ingeniería Genética) UANL

Regulación del promotor del gen de IL-10 por papilomavirus humano en células epiteliales transformadas derivadas de cervix

Tesis (Maestría en Ciencias con Especialidad en Inmunobiología) UANL