Leukotriene A4 hydrolase: protection from mechanism-based inactivation by mutation of tyrosine-378.

Leukotriene A4 (LTA4) hydrolase [(7E,9E,11Z,14Z)-(5S,6S)-5,6-epoxyicosa-7, 9,11,14-tetraenoate hydrolase; EC 3.3.2.6] is a bifunctional zinc metalloenzyme that catalyzes the final step in the biosynthesis of the potent chemotactic agent leukotriene B4 (LTB4). LTA4 hydrolase/aminopeptidase is suicide inactivated during catalysis via an apparently mechanism-based irreversible binding of LTA4 to the protein in a 1:1 stoichiometry. Previously, we have identified a henicosapeptide, encompassing residues Leu-365 to Lys-385 in human LTA4 hydrolase, which contains a site involved in the covalent binding of LTA4 to the native enzyme. To investigate the role of Tyr-378, a potential candidate for this binding site, we exchanged Tyr for Phe or Gln in two separate mutants. In addition, each of two adjacent and potentially reactive residues, Ser-379 and Ser-380, were exchanged for Ala. The mutated enzymes were expressed as (His)6-tagged fusion proteins in Escherichia coli, purified to apparent homogeneity, and characterized. Enzyme activity determinations and differential peptide mapping, before and after repeated exposure to LTA4, revealed that wild-type enzyme and the mutants [S379A] and [S380A]LTA4hydrolase were equally susceptible to suicide inactivation whereas the mutants in position 378 were no longer inactivated or covalently modified by LTA4. Furthermore, in [Y378F]LTA4 hydrolase, the value of kcat for epoxide hydrolysis was increased 2.5-fold over that of the wild-type enzyme. Thus, by a single-point mutation in LTA4 hydrolase, catalysis and covalent modification/inactivation have been dissociated, yielding an enzyme with increased turnover and resistance to mechanism-based inactivation.

Qualidade de vida: o papel do estado nutricional e da percepção do relacionamento familiar de crianças do município de Indaiatuba/SP

Introdução: A importância da investigação da qualidade de vida de crianças está diretamente relacionada ao fato de que muitos problemas na vida adulta têm sua origem na infância. Objetivo: analisar a contribuição da percepção do relacionamento familiar e do estado nutricional sobre a qualidade de vida de crianças do município de Indaiatuba. Metodologia: Na etapa 1 foi realizado o estudo de validade do instrumento APGAR Familiar adaptado à crianças de 7 a 11 anos, utilizando como medida de confiabilidade a técnica do Teste-Reteste e para a avaliação da validade convergente foi utilizada a Escala de Avaliação de Qualidade de Vida Infantil. Na etapa 2 foram avaliados os determinantes da Qualidade de Vida de crianças sob aspectos familiares, estado nutricional e socioeconômicos e demográficos. Os dados foram analisados por meio de Regressão Linear Múltipla com método dos Mínimos Quadrados Ordinários. Resultados: Na etapa 1 a análise de confiabilidade obteve a correlação de 0,764 do coeficiente de Spearman-Brown. Na análise de Validade Convergente o coeficiente de correlação de Rô de Spearman entre os escores dos dois instrumentos foi de 0,570 (p<0,01). Na etapa 2 foi estimado um modelo dos determinantes da qualidade de vida a partir de uma amostra de 1028 crianças de 7 a 11 anos de ambos os sexos. As variáveis independentes foram capazes de explicar a Qualidade de Vida de crianças a uma significância de 1% (Z = 8,417), sendo o R² ajustado de 0,104. A idade da criança e a percepção do relacionamento familiar foram as variáveis estatisticamente significativas, ao passo que o estado nutricional, o tamanho da família, o sexo da criança, a classe social e a escolaridade do responsável, não foram estatisticamente significantes. Conclusão: O instrumento APGAR Familiar apresentou índices preliminares de validade e precisão; a idade e o relacionamento familiar foram as variáveis que explicaram a qualidade de vida percebida sob a perspectiva subjetiva de bem-estar.