Comportamento das cepas Y e Peruana do Trypanosoma cruzi no camundongo, após passagem em diferentes meios

Com o objetivo de verificar se o comportamento morfobiológico e histopalógico de cerpa do Trypanosoma cruzi é mantido após modificações no seu meio de manutenção e multiplicação, foram estudados oito grupos de infecção experimental em camundongos com as cepas Y e Peruana, após manutenção nas seguintes condições cultura acelular em meio de Warren, criopreservação em Nitrogênio líquido durante trinta dias, passagem em triatomíneos e passagem em camundongos. Os parâmetros avaliados foram: parasitemia, mortalidade, sobrevida, morfologiaq dos parasitos no sangue periférico, tropismo tíssular e lesões histopatológicoas. Tanto com a cepa Y como Peruana, cada grupo experimental foi dividido em dois subgrupos de acordo com a dose de inóculo, sendo um inoculado com 10.000 e outro com 50.000 formas tripomastigotas, menos o inoculado com formas de triatomíneos em que o inóculo foi apenas com 10.000 tripomastigotas. Observou-se na infecção pela cepa Y, retardo na evolução da parasitemia nos inoculados com formas de cultura e atenuação de virulência com o inóculo de 10.000 formas. Os caracteres básicos da cepa foram mantidos com predominância de macrofagotropismo na fase inicial da infecção e miotropismo nas fases tardias,predominância de forma delgadas e elevada patogenicidade, com 100% de mortalidade embora com variação nos periodos de sobrevida. Na infecção pela cepa Peruana observou-se também retardo da evolução da parasitemia com o inóculo de 10.000 formas provenientes de triatomíneos, de cultura e de criopreservação. Entretanto, as características morfológicas, o tropismo tissular e a patogenicidade foram mantidos.

Aspectos imunológicos da infecção de seis linhagens isogênicas de camundongos por três diferentes cepas do Trypanosoma cruzi

Foram avaliados aspectos da imunidade humoral e celular em seis linhagens de camundongos isogênicos (BALB/c, B-10, C3H, A/J, AKR e DBA) infectados por três cepas do Trypanosoma cuzi, representantes dos três tipos de cepas da classificação de Andrade (cepas Peruana, 21SF e Colombiana). A imunidade celular, avaliada pelo teste de hipersensibilidade cutânea tardia contra antigenos do parasita, estava suprimida. A avaliação dos níveis de imunoglobulinas (imunodifusão radial), mostrou queda precose de IgG1 e elevação de IgM em praticamente todas as linhagens infectadas por qualquer das cepas estudadas. A elevação de IgG2a e/ou IgG2b foi mais intensa nas linhagens mais resistentes. Os níveis de anticorpos anti-T, cruzi (Imunofluorescência indireta e ELISA) não se correlacionam com a sobrevida dos animais. Apesar de diferenças entre as linhagens observou-se uma regularidade na resposta do hospedeiro e a manutenção dos padrões biológicos que caracterizam os tipos de cepa.

Chronic murine myocarditis due to Trypanosoma cruzi: an ultrastructural study and immunochemical characterization of cardiac interstitial matrix

In an attempt to define the mouse-model for chronic Chagas' disease, a serological, histopathological and ultrastructural study as well as immunotyping of myocardium collagenic matrix were performed on Swiss mice, chronically infected with Trypanosoma cruzi strains: 21 SF and mambaí (Type II); PMN and Bolivia (Type III), spontaneously surviving after 154 to 468 days of infection. Haemagglutination and indirect immunofluorescence tests showed high titres of specific antibodies. The ultrastructural study disclosed the cellular constitution of the inflammatory infiltrate showing the predominance of monocytes, macrophages with intense phagocytic activity, fibroblasts, myofibroblasts and abundant collagen matrix suggesting the association of the inflammatory process with fibrogenesis in chronic chagasic cardiomyopathy. Artertolar and blood capillary alterations together with dissociation of cardiac cells from the capillary wall by edema and inflammation were related to ultrastructural lesions of myocardial cells. Rupture of parasitized cardiac myocells contribute to intensify the inflammatory process in focal areas. Collagen immunotyping showed the predominance of Types III and IV collagen. Collagen degradation and phagocytosis were present suggesting a reversibility of the fibrous process. The mouse model seems to be valuable in the study of the pathogenetic mechanisms in Chagas cardiomyopathy, providing that T. cruzi strains of low virulence and high pathogenecity are used.

CL 64, 855, a potent do anti-Trypanosoma cruzi drug, is also mutagenic in the salmonella/microsome assay

The nitroimidazole-tiadiazole derivative CL 64,855 (2-amino-5-(1-methyl-5-nitro-2-imidazolyl)-1,3,4-thiadiazole, a potent anti-trypanosomal drug, was assayed in a short-term bacterial mutagenicity test with Salmonella typhimurium strains TA 98, TA 100 and TA 102. Results indicate that CL 64,855 is a potent frameshift mutagen detected by strains TA 98 and TA 102. CL 64,855 was able to revert the indicators strains at concentrations as low as 0.1 µg/plate. Metabolic activation experiments with rat liver microsomal fractions did not increase the mutagenic action of Cl 64,855.

Tripomastigota muito largo como padrão morfológico de cepas do Trypanosoma cruzi do extremo Sul do Brasil?

Foi estudado, em camundongos, o padrão morfológico-evolutivo de tripomastigotas sanguíneos de cinco cepas silvestres de Trypanosoma cruzi de Santa Catarina. Os resultados mostraram predomínio da forma muito larga ( > 70%) ao longo de toda a fase aguda de infecção em quatro cepas de média virulência. Com uma cepa de elevada virulência, a forma delgada foi prevalente no período inicial de infecção seguido de maior ocorrência da muito larga. Tendo em vista que a maioria das cepas de T. cruzi que possuem predomínio da forma muito larga foram isoladas no sul do Brasil (Rio Grande do Sul e Santa Catarina) e que existem evidências de diferentes comportamentos biológicos entre estes parasitas sangüíneos, os autores sugerem a investigação de possíveis correlações dos padrões morfológicos com os aspectos epidemiológicos e clínicos da doença de Chagas.

Caracterização biológica comparativa das cepas Berenice e Berenice-78 de Trypanosoma cruzi isoladas da mesma paciente em diferentes períodos

A amostra Berenice-78 de T. cruzi recém-isolada apresentou características bem distintas da cepa Berenice isolada há 16 anos da mesma paciente. Foram verificadas sua alta infectividade e baixa virulência para camundongos C3H isogênicos que sobreviveram à fase aguda da infecção. Os parasitas desta cepa apresentaram tropismo para os músculos esquelético e cardíaco, ascensão gradual da parasitemia ao longo de 25 passagens sangüíneas sucessivas e estabilidade da curva de parasitemia. A cepa Berenice apresentou as mesmas características descritas por Brener, Chiari & Alvarenga (1974) em relação ao tropismo e padrão da curva de parasitemia, sendo no entanto demonstrado que sua virulência para camundongos albinos continua aumentando com o decorrer do tempo. Foram discutidas a possibilidade de reinfecção da paciente Berenice e a importância do conhecimento de amostras de T. cruzi de baixa virulência para animais de laboratório.

The conduction system of the heart in mice chronically infected with Trypanosoma cruzi: histopathological lesions and electrocardiographic correlations

Chronic focal and diffuse myiocarditis with interstitial fibrosis developed in Swiss outbred mice and in the inbred AKR and A/J strains of mice which were chronically infected with several Trypanosoma cruzi strains belonging to three biological types (Type I, II and III). High incidence of electrocardiographic changes with predominance of intraventricular conduction disturbances, 1st. and 2nd. degree AV block, arrhythmias, comparable with those found in human Chagas' disease, were also present. Morphological study of the conduction tissue of the heart revealed inflammatory and fibrotic changes. The presence of inflammation in the inter-atrial septum almost always coincided with the inflammatory involvement of the ventricular conduction system. Focal inflammation was associated with vacuolization and focal necrosis of the specific fibers. Most of the lesions were seen affecting the His bundel (76.3% of the cases), the right bundle branch (73.3%), AV node (43.9%) and left bundle branch (37.5%). Correlation between morphological changes in the conduction tissue and electrocardiographic alteration occured in 53.0 to 62.5% of the cases, according to the experimental groups.

Evaluation of a monoclonal antibody affinity purified antigen for zymodeme specific serological diagnosis of Trypanosoma cruzi infection

Theoretically, serological assays with affinity purified marker antigens can allow strain-specific diagnosis even when parasites cannot be retrieved from and infected host. A Trypanosoma cruzi antigen was purified by affinity chromatography using a zymodeme (Z) 2 specific monoclonal antibody (2E2C11). An indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) based on the purified antigen could discriminate between sera from rabbits immunized with T. cruzi zymodeme clones but could not discriminate between sera from mice infected with different zymodemes.

Effect of drugs on Trypanosoma cruzi and on its interaction with heart muscle cell in vitro

Megazol, nifurtimox, benznidazol and allopurinol were investigated, by light and electron µscopy, for their action on T. cruzi. Both the direct effect upon amastigote and trypomastigote forms and the effect upon the interaction of heart muscle cells (HMC) with bloodstream trypomastigotes were studied. The proliferation of amastigotes in Warren medium was inhibited in a dose-dependent manner by megazol, nifurtimox and benznidazol. Treatment of amastigotes (25-50 µM/24 h) and trypomastigotes (25 µM/24h) led to several ultrastructural alterations in the parasites. These three drugs also had a potent effect on the treatment of infected heart muscle cells when added at the beginning of the interaction or after one or three days of infection. The interiorized parasites showed a similar pattern of ultrastructural alterations as observed by the direct effect on the amastigotes. The primary heart muscle cell culture proved to be a suitable model for the study of drugs on intracellular parasites. Likewise, the amastigote proliferation in axenic medium was shown to be an adequate assay for an initial trial of drugs. These parameters seem very reliable to us for a systematic investigation of the mechanism of action of new drugs.