Autologous keratinocyte suspension in platelet concentrate accelerates and enhances wound healing : a prospective randomized clinical trial on skin graft donor sites

La cicatrisation cutanée requiert de nombreux mécanismes et un nombre toujours croissant de molécules participant à ces réactions sont identifiées. La compréhension de cette cinétique et des différents facteurs impliqués dans ce processus permet d'accélérer la guérison des plaies. Certains facteurs de croissance (PDGF, FGF, EGF) ont déjà été utilisés localement sur des plaies mais leurs effets relatés sont inconsistants et contradictoires, probablement en raison de l'absence de cinétique ou de concentration physiologique. Les plaquettes jouent un rôle fondamental dans la cicatrisation cutanée, principalement par la formation du clou plaquettaire et le relargage de divers facteurs de croissance et de cytokines. De même, les kératinocytes ont un rôle similaire dans l'épithélialisation des plaies. Ainsi, l'apport de plaquettes et de kératinocytes sur une plaie pourrait accélérer sa cicatrisation. L'étude rapportée ici tente de vérifier si une solution de kératinocytes autologues en suspension dans un concentré plaquettaire ou un concentré plaquettaire seul pourrait stimuler la cicatrisation cutanée. Pour ce faire, nous avons comparé trois groupes de 15 patients bénéficiant, sur une prise de greffe de profondeur similaire, d'un traitement standard fait de pansement simple, d'un concentré plaquettaire seul ou de kératinocytes autologues suspendus dans un concentré plaquettaire. Sur ces plaies, la durée de cicatrisation ainsi que la douleur au cours de la guérison ont été étudiés. Nos résultats montrent une réduction significative de la durée de cicatrisation dans le groupe traité avec un concentré plaquettaire, passant de 13.9 +/- 0.5 à 7.2 +/- 0.2 jours. Cet effet est encore plus marqué dans le groupe traité avec des kératinocytes en suspension dans un concentré plaquettaire passant de 13.9 +/- 0.5 à 5.7 +/- 0.2 jours. De même, la douleur évaluée au cinquième jour montre une nette diminution dans les deux groupes traités avec des cellules. En conclusion, notre travail montre que l'application de plaquettes autologues ou de kératinocytes en suspension dans un concentré plaquettaire permet d'accélérer la cicatrisation cutanée et de diminuer les douleurs, sans aucun effet indésirable constaté. Notre étude montre également qu'un concentré plaquettaire peut être utilisé comme vecteur pour une suspension de kératinocytes. L'identification de la cinétique d'apparition et de la concentration de chacun des facteurs de croissance lors de la cicatrisation cutanée permettrait dans le futur d'analyser plus finement et de traiter physiologiquement des plaies chroniques.

Exendin-(9-39) is an inverse agonist of the murine glucagon-like peptide-1 receptor: implications for basal intracellular cyclic adenosine 3',5'-monophosphate levels and beta-cell glucose competence.

The effect of exendin-(9-39), a described antagonist of the glucagon-like peptide-1 (GLP-1) receptor, was evaluated on the formation of cAMP- and glucose-stimulated insulin secretion (GSIS) by the conditionally immortalized murine betaTC-Tet cells. These cells have a basal intracellular cAMP level that can be increased by GLP-1 with an EC50 of approximately 1 nM and can be decreased dose dependently by exendin-(9-39). This latter effect was receptor dependent, as a beta-cell line not expressing the GLP-1 receptor was not affected by exendin-(9-39). It was also not due to the endogenous production of GLP-1, because this effect was observed in the absence of detectable preproglucagon messenger RNA levels and radioimmunoassayable GLP-1. Importantly, GSIS was shown to be sensitive to this basal level of cAMP, as perifusion of betaTC-Tet cells in the presence of exendin-(9-39) strongly reduced insulin secretion. This reduction of GSIS, however, was observed only with growth-arrested, not proliferating, betaTC-Tet cells; it was also seen with nontransformed mouse beta-cells perifused in similar conditions. These data therefore demonstrated that 1) exendin-(9-39) is an inverse agonist of the murine GLP-1 receptor; 2) the decreased basal cAMP levels induced by this peptide inhibit the secretory response of betaTC-Tet cells and mouse pancreatic islets to glucose; 3) as this effect was observed only with growth-arrested cells, this indicates that the mechanism by which cAMP leads to potentiation of insulin secretion is different in proliferating and growth-arrested cells; and 4) the presence of the GLP-1 receptor, even in the absence of bound peptide, is important for maintaining elevated intracellular cAMP levels and, therefore, the glucose competence of the beta-cells.

Genotyping of Mycobacterium leprae present on Ziehl-Neelsen-stained microscopic slides and in skin biopsy samples from leprosy patients in different geographic regions of Brazil

We analysed 16 variable number tandem repeats (VNTR) and three single-nucleotide polymorphisms (SNP) in Mycobacterium leprae present on 115 Ziehl-Neelsen (Z-N)-stained slides and in 51 skin biopsy samples derived from leprosy patients from Ceará (n = 23), Pernambuco (n = 41), Rio de Janeiro (n = 22) and Rondônia (RO) (n = 78). All skin biopsies yielded SNP-based genotypes, while 48 of the samples (94.1%) yielded complete VNTR genotypes. We evaluated two procedures for extracting M. leprae DNA from Z-N-stained slides: the first including Chelex and the other combining proteinase and sodium dodecyl sulfate. Of the 76 samples processed using the first procedure, 30.2% were positive for 16 or 15 VNTRs, whereas of the 39 samples processed using the second procedure, 28.2% yielded genotypes defined by at least 10 VNTRs. Combined VNTR and SNP analysis revealed large variability in genotypes, but a high prevalence of SNP genotype 4 in the Northeast Region of Brazil. Our observation of two samples from RO with an identical genotype and seven groups with similar genotypes, including four derived from residents of the same state or region, suggest a tendency to form groups according to the origin of the isolates. This study demonstrates the existence of geographically related M. leprae genotypes and that Z-N-stained slides are an alternative source for M. leprae genotyping.

Role of the epithelial sodium channel (ENaC) and its positive regulator, the channel-activating protease 1 (CAP1) in skin

Summary: The mammalian epidermis is a pluristratified epithelium composed of 90% keratinocytes, and its main function is to serve as barrier for the body. The epithelial sodium channel (ENaC), formed by three homologous subunits α, β and γ is found in a variety of epithelia including epidermis. Previous studies showed that ENaC modulates different aspects of epidermal differentiation, such as synthesis of differentiation-specific proteins and lipid secretion. ENaC plays also a critical role in sodium homeostasis of renal and pulmonary epithelia, and its activity is thereby well controlled by hormones and non-hormonal factors, such as the serine protease CAP1 (channel-activating protease 1), also termed prostasin encoded by Prss8 gene. Serine proteases are proteolytic enzymes involved in numerous physiological and pathological processes in the epidermis. In order to evaluate the role of β and γENaC in epidermis, we analyzed the skin phenotype of β and γENaC null mutant (βENaC-/- and γENaC-/-) mice in comparison with the phenotype of αENaC-deficient mice. Furthermore, keratin14-specific CAP1-deficient mice (Prss8lox/Δ /K14-Cre) were generated in order to unveil the role of the serine protease CAP1 in epidermal development and function. This study reveals that the skin phenotype of βENaC and γENaC null mutant mice is less severe than the one of αENaC-deficient mice. However, all these mice present a common premature lipid secretion in the mid-granular layer of the epidermis. Further, the composition of the lipids of the stratum corneum in αENaC-deficient mice is strongly altered, suggesting that epidermal barrier function is compromised. K14-specific CAP1-deficient newborn mice are born at the expected Mendelian ratio, but die soon after birth, showing that CAP1 is required for postnatal survival. The epidermis of these mice exhibits striking malformations of the stratum corneum showing hyperkeratosis. These defects seriously affect both inward and outward epidermal barrier function, leading to rapid and fatal dehydration. As in αENaC-deficient mice, the lipid composition of the stratum corneum of K14-specific CAP1-deficient mice is disturbed. Furthermore, lack of CAP1 leads to the selective loss of filaggrin monomers, important for keratins aggregation and skin moisturization, and to an increased of aberrant profilaggrin precursors. In conclusion, both ENaC and CAP1 expression in the epidermis are crucial for keratinocyte differentiation processes and/or barrier function. Since the abnormalities in K14-specific CAP1-deficient mice resemble key features of human skin ichthyosis, in particular Harlequin ichthyosis, the study of ENaC and CAP1 mutant mice might allow new insights into mechanisms underlying skin diseases. Résumé: L'épiderme des mammifères est un épithélium pluristratifié, protégeant le corps contre les perturbations extérieures et la déshydratation. Le canal épithélial à sodium (ENaC), formé de trois sous-unités α, β et γ, est exprimé dans de nombreux épithélia, comme l'épiderme. Des études ont montré que l'absence de la sous-unité αENaC modulait différents aspects de la différenciation des kératinocytes de l'épiderme, comme la synthèse de protéines spécifiques ou la sécrétion de lipides dans la couche granulaire de l'épiderme. ENaC joue également un rôle crucial dans l'homéostasie du sodium dans les épithélia électriquement étanches, comme l'épithélium rénal ou pulmonaire. L'activité de ENaC est par conséquent finement régulée, en partie par des hormones, mais aussi par des facteurs non-hormonaux, telle que la sérine protéase CAP1 (« channel-activating protease 1 >>) (nommée également prostasine et codée par le gène Prss8). Le but de ce travail a donc été d'étudier le rôle des sous-unités β et γENaC dans l'épiderme en comparaison avec celui de la sous-unité α en utilisant des souris mutantes βENaC-/- et γENaC-/-. Dans un deuxième temps, le phénotype d'une souris chez qui CAP1 a été spécifiquement invalidé dans l'épiderme (Prsslox/Δ/K14-Cre) a été analysé, dans le but de mettre en évidence le rôle de cette protéase dans l'épiderme. Comme déjà montré pour les souris αENaC-/-, la sécrétion des lipides dans la couche granulaire de l'épiderme des souris βENaC-/- et γENaC-/- est prématurée. Cependant, l'hyperplasie et l'expression anormale des protéines marqueurs de la différenciation présents chez les souris αENaC-/- n'ont pas été observés dans l'épiderme des souris βENaC-/- et γENaC-/-. La composition lipidique de la couche cornée des souris αENaC-/- est fortement altérée suggérant que la fonction de barrière de l'épiderme de ces souris est compromise. Les souris mutantes CAP1 ont quant à elles révélé des malformations sévères de leur couche cornée, affectant la fonction de barrière de leur épiderme et conduisant à la mort de ces souris par déshydratation quelques jours après leur naissance. De plus, la composition en lipides de la couche cornée ainsi que la taille des cellules cornées, les cornéocytes, de ces souris sont modifiées par rapport aux souris contrôles. L'invalidation de la protéine CAP1 dans l'épiderme conduit aussi à la perte de la filaggrine, une protéine cruciale pour l'agrégation des kératines dans la couche cornée et le maintien du niveau d'hydratation de la peau, et à l'accumulation de ses précurseurs. En conclusion, l'expression de ENaC et de CAP1 est cruciale pour la différenciation de l'épiderme et/ou sa fonction de barrière. De plus, le phénotype des souris mutantes CAP1 présente des caractéristiques qui ressemblent à celles observées dans certaines pathologies humaines cutanées, comme l'ichthyose d'Harlequin. L'étude des souris mutantes ENaC et CAP1 pourrait donc apporter de nouvelles connaissances dans les mécanismes impliqués dans l'ichthyose d'Harlequin ou d'autres maladies de la peau chez l'homme. Résumé tout public: La peau est le plus grand organe vital du corps humain. Sa fonction principale est de protéger le corps comme une barrière, contre les agressions extérieures et la déshydratation. De nombreuses maladies de la peau résultent d'une perte de fonction de cette barrière. Bien que les pathologies cutanées soient très bien décrites, leur cause génétique n'est en général pas encore connue. La souris est alors un modèle de choix pour la recherche fondamentale. En effet, grâce aux progrès récents de la science, le génome de la souris peut aujourd'hui être modifié dans le but d'étudier le rôle de nombreuses protéines. Dans différents organes, comme le rein et le poumon, le canal épithélial à sodium (ENaC), composé de trois sous-unités protéiques homologues (α, β, et γ), joue un rôle essentiel dans la réabsorption du sodium. L'activité de ENaC est régulée par de nombreux facteurs hormonaux et non-hormonaux, telle que la protéase CAP1 (« channel-activating protease 1 »). L'invalidation de la sous-unité αENaC chez la souris a permis de montrer que dans la peau, le canal ENaC est impliqué dans la différenciation des cellules de l'épiderme et la croissance des poils. Durant ce travail, le phénotype des souris chez qui la protéine βENaC, γENaC ou CAP1 a été invalidée (souris mutantes), a été étudié dans le but de mieux comprendre le rôle des sous-unités du canal ENaC et de son régulateur CAP1 dans la peau. Les résultats de ce projet ont montré que les souris mutantes βENaC et γENaC présentent un épiderme anormal avec une synthèse prématurée de lipides dans la couche granulaire, suggérant l'implication de ENaC dans la fonction de barrière de la peau. De plus, quand CAP1 est invalidé de manière totale chez les souris, le développement embryonnaire est perturbé et ces souris meurent avant la naissance. CAP1 a donc été invalidé spécifiquement dans l'épiderme des souris. Ces souris mutantes « épiderme-spécifique » naissent normalement, mais meurent peu après la naissance de déshydratation. La couche superficielle de l'épiderme, appelée couche cornée, de ces souris est malformée et ne confère plus à la peau sa fonction de barrière. De plus, les composants de la couche cornée, les cellules cornées entourées de lipides, sont sévèrement altérés. Le phénotype de ces souris ressemble aux caractéristiques présentes chez les patients atteints d'ichthyoses, en particulier l'ichthyose d'Harlequin. En conclusion, le canal ENaC ainsi que son régulateur CAP1 jouent un rôle clé dans les processus de différenciation de l'épiderme et/ou de sa fonction de barrière. De plus, les souris mutantes pour CAP1 et ENaC se révéleront peut-être comme des modèles appropriés dans l'étude de l'ichthyose d'Harlequin ou d'autres maladies cutanées.

Risk factors for positive tuberculin skin tests among migrant and resident children in Lausanne, Switzerland

Résumé en français Cadre : Policlinique pédiatrique à Lausanne en Suisse, pays rencontrant une proportion importante de tuberculose au sein de la population de migrants. But : Déterminer les facteurs de risque associés à un test tuberculinique positif (ou test de Mantoux), notamment l'influence du BCG (Bacille Calmette Guérin) et d'un contact avec un personne ayant une tuberculose active. Les patients concernés étaient des enfants examinés dans le cadre d'un contrôle de santé ou dans le cadre d'une étude d'entourage d'un cas déclaré de tuberculose. Méthode : Etude descriptive comprenant des enfants ayant eu un test tuberculinique (2 unités RT23) entre novembre 2002 et avril 2004. L'âge, le sexe, l'anamnèse de contact avec une personne ayant une tuberculose active, la vaccination par le BCG, le pays d'origine et le lieu de naissance (en Suisse ou hors de la Suisse) étaient répertoriés. Résultats : Parmi les 234 enfants de l'étude, 176 (75%) avaient une réaction tuberculinique égal à zéro et 31 (13%) avaient une réaction positive (> 10mm). Dans le modèle de régression linéaire, la taille de la réaction tuberculinique variait significativement selon l'anamnèse de contact avec une personne ayant une tuberculose active, l'âge, l'incidence de la tuberculose dans le pays d'origine et la vaccination par le BCG. Le sexe ou le lieu de naissance n'influençait pas la taille de la réaction. Dans le modèle de régression logistique incluant toutes les valeurs répertoriées, les paramètres significativement associés avec un Mantoux positif étaient l'âge (Odds Ratio = 1.21, 95% CI 1.08 ; 1.35), l'anamnèse de contact avec une personne ayant une tuberculose active (OR = 7.31, 95% CI 2.23 ; 24) et l'incidence de la tuberculose dans le pays d'origine (OR = 1.01, 95% CI 1.00 ; 1.02). Le sexe (OR = 1.18, 95% CI 0.50 ; 2.78) et la vaçcination par le BCG (OR = 2.97, 95% CI 0.91 ; 9.72) n'étaient pas associés avec une réaction tuberculinique positive. Conclusions : L'incidence de la tuberculose dans le pays d'origine, la vaccination par le BCG et l'âge influencent le test de Mantoux (taille ou proportion de réaction > 10mm). Toutefois, le facteur de risque le plus important d'avoir une réaction tuberculinique positive est l'anamnèse de contact avec. une personne ayant une tuberculose active.

Influence of Bacille Calmette-Guérin vaccination on size of tuberculin skin test reaction : to what size ?

RESUME Le diagnostic d'infection tuberculeuse repose essentiellement sur le test tuberculinique (test de Mantoux). Cependant, le résultat de ce dernier est également influencé par d'autres facteurs, le plus important étant la vaccination par le Bacille Calmette-Guérin (BCG), interaction connue depuis de nombreuses années. Il est généralement admis que l'effet de la vaccination peut entraîner des réactions positives jusqu'à un diamètre d'induration de 15 mm. Au-delà, la positivité du test est en général attribuée à une primo-infection tuberculeuse. Peu d'études se sont réellement penchées sur le sujet. Chez le personnel de soins soumis à des Mantoux répétés, cette notion revêt une importance particulière pour interpréter correctement une réaction fortement positive en l'absence de facteurs de risque tuberculeux, dans un pays à faible endémie tuberculeuse. Notre étude a cherché à déterminer si le diamètre transversal de l'induration du Mantoux était un critère fiable pour distinguer une positivité associée à une infection tuberculeuse de celle associée à une ancienne vaccination. Elle s'est attachée à rechercher un seuil au-delà duquel l'infection tuberculeuse pourrait être considérée comme probable. Entre janvier 1991 et mars 1998, tous les nouveaux employés du CHUV ont été invités à recevoir un test tuberculinique à l'occasion de leur visite d'entrée à la Médecine du personnel. En cas de réponse négative, un deuxième test a été pratiqué une semaine plus tard, pour détecter un éventuel effet booster. Lors de la première visite, l'infirmière a rempli un questionnaire comprenant les données démographiques usuelles, des informations concernant les facteurs pouvant influencer la positivité du test, notamment les antécédents de vaccination par le BCG, les expositions à la tuberculose et l'existence d'antécédents d'infection tuberculeuse. Parmi les 5117 sujets inclus dans l'étude, nous avons trouvé que l'influence de la vaccination variait en fonction de l'âge. Chez les sujets de moins de 40 ans, la vaccination par le BCG était le prédicteur le plus important d'un Mantoux positif inférieur à 18 mm, de loin supérieur aux facteurs de risque habituels pour une infection tuberculeuse, eux aussi significatifs. L'effet du BCG était présent pour des réactions allant jusqu'à 20 mm. Pour les Mantoux supérieurs à 20 mm, l'odds ratio (OR) relatif au BCG demeure clairement élevé (supérieur à 3,4) bien que non significatif. Par contre, pour les employés âgés de plus de 40 ans, le BCG est un facteur prédictif pour les tests supérieurs à 10 mm (OR 2.4) mais n'est plus un facteur significatif pour une taille supérieure à 15 mm. Ces résultats montrent que l'interprétation d'un test tuberculinique même fortement positif, doit être faite avec prudence et discernement. En effet, notre étude démontre que chez les sujets vaccinés de moins de 40 ans, dans les zones de faible endémie tuberculeuse particulièrement en l'absence de facteurs de risque pour une infection tuberculeuse, un Mantoux positif jusqu'à 18 mm est dû, le plus probablement, à une ancienne vaccination par le BCG, plutôt qu'à une infection par M tuberczilosis. L'interprétation des Mantoux de taille inférieure à 18 mm et les Mantoux effectués chez des sujets de moins de 40 ans, doit prendre en compte l'existence d'un BCG antérieur. En conséquence, la mise en évidence d'une réaction de Mantoux fortement positive ne devrait pas conduire systématiquement à un traitement préventif. L'absence de spécificité du test Mantoux, utilisé pour le dépistage de la tuberculose depuis bientôt une centaine d'année, est un problème connu. Nous démontrons que la taille de l'induration ne peut pas être utilisée de façon fiable comme critère pour identifier une infection tuberculeuse chez une personne vaccinée avec le BCG, avec le risque de sui-traiter un nombre important de sujets. Dans notre étude, 21% des sujets avaient un Mantoux supérieur ou égal à 15 mm et auraient dû être traités selon les recommandations en vigueur en Suisse si l'on ne tenait pas compte du BCG antérieur. Des tests plus spécifiques sont actuellement à l'étude et permettront vraisemblablement, à l'avenir, de palier au problème de l'absence de spécificité du test de Mantoux. Abstract : Background. Previous bacillus Calmette-Guerin (BCG) vaccination can confound the results of a tuberculin skin test (TST). We sought to determine a cutoff diameter of TST induration beyond which the influence of BCG vaccination was negligible in evaluating potential Mycobacterium tuberculosis infection in a population of health care workers with a high vaccination rate and low incidence of tuberculosis. Methods. From 1991 through 1998, all new employees at the University Hospital of Lausanne, Switzerland, underwent a 2-step TST at entry visit. We also gathered information on demographic characteristics, along with factors commonly associated with tuberculin positivity, including previous BCG vaccination, history of latent M. tuberculosis infection, and predictors for M. tuberculosis infection. Results. Among the 5117 investigated subjects, we found that influence of BCG vaccination on TST results varied across categories of age (likelihood ratio test, 0.0001). Prior BCG vaccination had a strong influence on skin test results of mm in diameter among persons <40 years old, compared with the influence of factors predictive of M. tuberculosis infection. Prior latent M. tuberculosis infection and travel or employment in a country in which tuberculosis is endemic also had significant influences. Conclusions. Interpretation of TST reactions of mm among BCG-vaccinated persons <40 years of age must be done with caution in areas with a low incidence of tuberculosis. In such a population, except for persons who have never been vaccinated, TST reactions of ---518 mm are more likely to be the result of prior vaccination than infection and should not systematically lead to preventive treatment.

Skin infection caused by Scedosporium apiospermum in immunocompromised patients. Report of two cases.

Scedosporium apiospermum is a filamentous fungus that can cause cutaneous or extracutaneous disease. A large number of cases have been published over the last decades, mainly in patients immunocompromised as a result of their disease or treatment. These kinds of infections can progress rapidly and become disseminated, leading to very serious or even fatal complications. We report two new cases of skin infection by Scedosporium apiospermum from our hospital.

How Can Nanotechnology Help to Repair the Body? Advances in Cardiac, Skin, Bone, Cartilage and Nerve Tissue Regeneration

Nanotechnologists have become involved in regenerative medicine via creation of biomaterials and nanostructures with potential clinical implications. Their aim is to develop systems that can mimic, reinforce or even create in vivo tissue repair strategies. In fact, in the last decade, important advances in the field of tissue engineering, cell therapy and cell delivery have already been achieved. In this review, we will delve into the latest research advances and discuss whether cell and/or tissue repair devices are a possibility. Focusing on the application of nanotechnology in tissue engineering research, this review highlights recent advances in the application of nano-engineered scaffolds designed to replace or restore the followed tissues: (i) skin; (ii) cartilage; (iii) bone; (iv) nerve; and (v) cardiac.

Effect of treatment with cyclophosphamide in low doses upon the onset of delayed type hypersensitivity in mice chronically infected with Trypanosoma cruzi: involvement of heart interstitial dendritic cells

Acute infection with Trypanosoma cruzi results in intense myocarditis, which progresses to a chronic, asymptomatic indeterminate form. The evolution toward this chronic cardiac form occurs in approximately 30% of all cases of T. cruzi infection. Suppression of delayed type hypersensitivity (DTH) has been proposed as a potential explanation of the indeterminate form. We investigated the effect of cyclophosphamide (CYCL) treatment on the regulatory mechanism of DTH and the participation of heart interstitial dendritic cells (IDCs) in this process using BALB/c mice chronically infected with T. cruzi. One group was treated with CYCL (20 mg/kg body weight) for one month. A DTH skin test was performed by intradermal injection of T. cruzi antigen (3 mg/mL) in the hind-footpad and measured the skin thickness after 24 h, 48 h and 72 h. The skin test revealed increased thickness in antigen-injected footpads, which was more evident in the mice treated with CYCL than in those mice that did not receive treatment. The thickened regions were characterised by perivascular infiltrates and areas of necrosis. Intense lesions of the myocardium were present in three/16 cases and included large areas of necrosis. Morphometric evaluation of lymphocytes showed a predominance of TCD8 cells. Heart IDCs were immunolabelled with specific antibodies (CD11b and CD11c) and T. cruzi antigens were detected using a specific anti-T. cruzi antibody. Identification of T. cruzi antigens, sequestered in these cells using specific anti-T. cruzi antibodies was done, showing a significant increase in the number of these cells in treated mice. These results indicate that IDCs participate in the regulatory mechanisms of DTH response to T. cruzi infection.

Metallothionein-1 and nitric oxide expression are inversely correlated in a murine model of Chagas disease

Chagas disease, caused by Trypanosoma cruzi, represents an endemic among Latin America countries. The participation of free radicals, especially nitric oxide (NO), has been demonstrated in the pathophysiology of seropositive individuals with T. cruzi. In Chagas disease, increased NO contributes to the development of cardiomyopathy and megacolon. Metallothioneins (MTs) are efficient free radicals scavengers of NO in vitro and in vivo. Here, we developed a murine model of the chronic phase of Chagas disease using endemic T. cruzi RyCH1 in BALB/c mice, which were divided into four groups: infected non-treated (Inf), infected N-monomethyl-L-arginine treated (Inf L-NAME), non-infected L-NAME treated and non-infected vehicle-treated. We determined blood parasitaemia and NO levels, the extent of parasite nests in tissues and liver MT-I expression levels. It was observed that NO levels were increasing in Inf mice in a time-dependent manner. Inf L-NAME mice had fewer T. cruzi nests in cardiac and skeletal muscle with decreased blood NO levels at day 135 post infection. This affect was negatively correlated with an increase of MT-I expression (r = -0.8462, p < 0.0001). In conclusion, we determined that in Chagas disease, an unknown inhibitory mechanism reduces MT-I expression, allowing augmented NO levels.

Duality of the murine CD8 compartment.

CD8αβ plays crucial roles in the thymic selection, differentiation, and activation of some, but not all, CD8(+) T cells, whereas CD8αα does not. To investigate these roles, we produced mice that expressed transgene P14 T-cell receptor β (TCRβ) chain and CD8β or did not (WT and KO mice, respectively). The primary CD8(+) T-cell response to acute lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV) infection was predominantly D(b)/GP33 specific and CD8 independent in KO mice and was mostly CD8 dependent in WT mice. Cytotoxic T lymphocytes (CTL) from KO mice failed to mobilize intracellular Ca(2+) and to kill via perforin/granzyme. Their strong Fas/FasL-mediated cytotoxicity and IFN-γ response were signaled via a Ca(2+)-independent, PI3K-dependent pathway. This was also true for 15-20% of CD8-independent CTL found in WT mice. Conversely, the perforin/granzyme-mediated killing and IFN-γ response of CD8-dependent CTL were signaled via a Ca(2+), p56(lck), and nuclear factor of activated T cells-dependent pathway. Deep sequencing of millions of TCRα chain transcripts revealed that the TCR repertoires of preimmune CD8(+) T cells were highly diverse, but those of LCMV D(b)/GP33-specific CTL, especially from KO mice, were narrow. The immune repertoires exhibited biased use of Vα segments that encoded different complementary-determining region 1α (CDR1α) and CDR2α sequences. We suggest that TCR from WT CD8-independent T cells may engage MHC-peptide complexes in a manner unfavorable for efficient CD8 engagement and Ca(2+) signaling but permissive for Ca(2+)-independent, PI3K-dependent signaling. This duality of the CD8 compartment may provide organisms with broader protective immunity.

Tuberculin skin test and interferon-gamma release assay values are associated with antimicrobial peptides expression in polymorphonuclear cells during latent tuberculous infection

It has been reported that patients with progressive tuberculosis (TB) express abundant amounts of the antimicrobial peptides (AMPs) cathelicidin (LL-37) and human neutrophil peptide-1 (HNP-1) in circulating cells, whereas latent TB infected donors showed no differences when compared with purified protein derivative (PPD) and QuantiFERON®-TB Gold (QFT)-healthy individuals. The aim of this study was to determine whether LL-37 and HNP-1 production correlates with higher tuberculin skin test (TST) and QFT values in TB household contacts. Twenty-six TB household contact individuals between 26-58 years old TST and QFT positive with at last two years of latent TB infection were recruited. AMPs production by polymorphonuclear cells was determined by flow cytometry and correlation between TST and QFT values was analysed. Our results showed that there is a positive correlation between levels of HNP-1 and LL-37 production with reactivity to TST and/or QFT levels. This preliminary study suggests the potential use of the expression levels of these peptides as biomarkers for progression in latent infected individuals.

Inoculum effect on the efficacies of amoxicillin-clavulanate, piperacillin-tazobactam, and imipenem against extended-spectrum β-lactamase (ESBL)-producing and non-ESBL-producing Escherichia coli in an experimental murine sepsis model.

Escherichia coli is commonly involved in infections with a heavy bacterial burden. Piperacillin-tazobactam and carbapenems are among the recommended empirical treatments for health care-associated complicated intra-abdominal infections. In contrast to amoxicillin-clavulanate, both have reduced in vitro activity in the presence of high concentrations of extended-spectrum β-lactamase (ESBL)-producing and non-ESBL-producing E. coli bacteria. Our goal was to compare the efficacy of these antimicrobials against different concentrations of two clinical E. coli strains, one an ESBL-producer and the other a non-ESBL-producer, in a murine sepsis model. An experimental sepsis model {~5.5 log10 CFU/g [low inoculum concentration (LI)] or ~7.5 log(10) CFU/g [high inoculum concentration (HI)]} using E. coli strains ATCC 25922 (non-ESBL producer) and Ec1062 (CTX-M-14 producer), which are susceptible to the three antimicrobials, was used. Amoxicillin-clavulanate (50/12.5 mg/kg given intramuscularly [i.m.]), piperacillin-tazobactam (25/3.125 mg/kg given intraperitoneally [i.p.]), and imipenem (30 mg/kg i.m.) were used. Piperacillin-tazobactam and imipenem reduced spleen ATCC 25922 strain concentrations (-2.53 and -2.14 log10 CFU/g [P < 0.05, respectively]) in the HI versus LI groups, while amoxicillin-clavulanate maintained its efficacy (-1.01 log10 CFU/g [no statistically significant difference]). Regarding the Ec1062 strain, the antimicrobials showed lower efficacy in the HI than in the LI groups: -0.73, -1.89, and -1.62 log10 CFU/g (P < 0.05, for piperacillin-tazobactam, imipenem, and amoxicillin-clavulanate, respectively, although imipenem and amoxicillin-clavulanate were more efficacious than piperacillin-tazobactam). An adapted imipenem treatment (based on the time for which the serum drug concentration remained above the MIC obtained with a HI of the ATCC 25922 strain) improved its efficacy to -1.67 log10 CFU/g (P < 0.05). These results suggest that amoxicillin-clavulanate could be an alternative to imipenem treatment of infections caused by ESBL- and non-ESBL-producing E. coli strains in patients with therapeutic failure with piperacillin-tazobactam.

Peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) in skin health, repair and disease.

Peroxisome proliferator-activated receptors, PPARalpha, PPARbeta/delta and PPARgamma, are fatty acid activated transcription factors that belong to the nuclear hormone receptor family. While they are best known as transcriptional regulators of lipid and glucose metabolism, evidence has also accumulated for their importance in skin homeostasis. The three PPAR isotypes are expressed in rodent and human skin. Various cell culture and in vivo approaches suggest that PPARalpha contributes to fetal skin development, to epidermal barrier maturation and to sebocyte activity. PPARbeta/delta regulates sebocyte differentiation, promotes hair follicle growth and has pro-differentiating effects in keratinocytes in normal and inflammatory conditions. In contrast, the role of PPARgamma appears to be rather minor in keratinocytes, whereas its activity is required for sebaceous gland differentiation. Importantly, PPARalpha and beta/delta are instrumental in skin repair after an injury, each of them playing specific roles. Due to their collective diverse functions in skin biology, PPARs represent a major research target for the understanding and treatment of many skin diseases, such as benign epidermal tumors, papillomas, acne vulgaris and psoriasis.