Influência da clorhexidina como inibidor das metaloproteinases na alteração da cor das resinas compostas

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz

Efeito da Minociclina em Mus Musculus Infectados com Trypanosoma brucei brucei

As patologias provocadas tanto em humanos como em outros mamíferos, pelo parasita hemoflagelado Trypanosoma brucei são um verdadeiro flagelo em África, ma-tando milhares de pessoas e cabeças de gado todos os anos. No caso da terapêutica hu-mana, todas as drogas foram implementadas em meados do século XX, sem novas pa-tentes desde 1981. Urge portanto a descoberta de novas moléculas, que em esquema monoterapêutico ou em associação, possam de alguma forma intervir no controlo do parasita ou contra a inflamação provocada pelas sucessivas ondas de parasitémia. Em estudos anteriores a minociclina, tetraciclina de 2ª geração, provou ser eficaz na protecção do sistema nervoso central (SNC) de ratos infectados com Trypanosoma brucei brucei (T.b.brucei), diminuindo a passagem pela barreira hemato-encefálica (BHE) de leucócitos e parasitas. No presente estudo, o efeito dessa droga parece estar relacionado com uma maior resistência à perda de vários componentes hematológicos como eritrócitos, leucócitos ou granulócitos em amostras de animais com vinte dias (20 DPI) de progressão de infecção com o parasita. Também as parasitémias são substanci-almente mais baixas (cerca de dez vezes menores) nos animais tratados em 20 DPI. Em termos das citocinas interleucina 4 (IL-4), interferão gama (IFN-γ) e óxido nítrico (NO), parece existir um padrão de secreção diferente nos animais tratados e não tratados. A IL-4 parece neste caso estar associada a um perfil anti-inflamatório; o NO, importante no controlo do parasita, existe em maiores quantidades nos animais tratados, ao contrá-rio do IFN-γ com quantidades mais elevadas nos animais controlos. Esta última citocina está escrita na literatura como factor de crescimento parasitário. A expressão de metaloproteinases é aparentemente superior no baço quando comparada com tecido hepático, contudo sem aparentes diferenças entre os dois grupos persisitindo um sistema de dupla banda compreendidas entre r de 30 e 40 kDa, valores de massa molecular, na maioria dos animais dos dois grupos. As metaloproteinases po-dem se endógenas do hospedeiro, mas com elevada possibilidade de serem secretadas pelo parasita no seu processo de invasão tecidular.

The role of monocarboxylate transporters in 3-bromopyruvate effect in cancer cells

Tese de Doutoramento em Biologia Molecular e Ambiental (área de especialização em Biologia Molecular e Saúde).

Angiogênese coronariana como resposta endógena da isquemia miocárdica no adulto

O processo de angiogênese envolve uma sequência complexa de estímulos e respostas integradas, como estimulação das células endoteliais (CE) para sua proliferação e migração, estimulação da matriz extracelular, para atração de pericitos e macrófagos, estimulação das células musculares lisas, para sua proliferação e migração, e formação de novas estruturas vasculares. Angiogênese é principalmente uma resposta adaptativa à hipóxia tecidual e depende do acúmulo do fator de crescimento induzido pela hipóxia (FIH-1 α) na zona do miocárdio isquêmico, que serve para aumentar a transcrição do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e seus receptores VEGF-R, pelas CE em sofrimento isquêmico. Esses passos envolvem mecanismos enzimáticos e proteases ativadoras do plasminogênio, metaloproteinases (MMP) da matriz extracelular (MEC) e cinases que provocam a degradação molecular proteolítica da MEC, bem como pela ativação e a liberação de fatores de crescimento, tais como: fator básico de crescimento dos fibroblastos (FCFb), VEGF e fator de crescimento insulínico-1 (FCI-1). Posteriormente, vem a fase intermediária de estabilização do novo broto neovascular imaturo e a fase final de maturação vascular da angiogênese fisiológica. Como conclusões generalizáveis, é possível afirmar que a angiogênese coronária em adultos é, fundamentalmente, uma resposta parácrina da rede capilar preexistente em condições fisiopatológicas de isquemia e inflamação.

Reparo intraperitoneal de defeitos da parede ventral do abdome com telas de poliéster com colágeno e polipropileno com ácido poliglicólico

OBJETIVO: Avaliar a incorporação de telas de poliéster revestido em uma de suas faces por colágeno (Parietex, Covidien) e polipropileno recoberto por ácido poliglicólico (Optilene Mesh Elastic e Safil, BBD Aesculap) no reparo de defeitos da parede ventral de coelhos avaliando a cicatrização no aspecto macroscópico, o depósito de colágeno e a imunomarcação tecidual pelos anticorpos MMP-1, MMP-8 e MMP-13. MÉTODOS: Utilizaram-se 16 coelhos, divididos em dois grupos de oito animais, avaliados após eutanásia após 30 e 60 dias de pós-operatório. Os animais foram submetidos à realização de dois defeitos simétricos na parede ventral do abdome, à direita e esquerda da linha alba, que compreendendo todos os folhetos musculares e o peritônio. O reparo dos defeitos foi realizado mediante implante intraperitoneal de dois modelos diferentes de telas. Utilizou-se a tela de poliéster revestido com camada protetora de colágeno (grupo controle) e a tela de polipropilene revestido com malha de ácido poliglicólico (manufaturacao própria, grupo de experimentacao). A avaliacao constou de aspectos clínicos, achados macroscópicos, análise dos colágenos tipos I/III e avaliação imunoistoquímica de metaloproteinases. RESULTADOS: Os resultados da avaliacao clínica e os parâmetros macroscópicos foram semelhantes entre os grupos. 50% dos animais do grupo Parietex tiveram ausência de aderencias intraperitoneais a no 30° dia de pós-operatrório. Em ambos os grupos observou-se reducao das aderências entre o 30° e o 60° dias de pós-operatório, contudo sem diferenca estatística. As aderências observadas foram classificadas principalmente de frouxas. Nao se observou a ocorrencia de complicacoes envolvendo vísceras intraabdominais. No Grupo Parietex houve a ocorrência de formacao de ulceracao da pele que recobria a tela em quatro animais, em comparacao com um no grupo de experimentacao. No Grupo Parietex foi observada uma insuficiencia de reparo após 60 dias. Quanto ao depósito do colágeno tipos I e III, nao houve diferenca significativa entre os grupos. Os resultados da imunoistoquímica referentes aos anticorpos MMP-1 e MMP-8 também não demonstraram diferença significativa entre as telas. CONCLUSÃO: As duas telas pesquisadas obtiveram resultados semelhantes tanto nos aspectos macro como nos microscópicos, podendo ser consideradas semelhantes quanto ao reparo de defeitos cirúrgicos da parede ventral do abdome em coelhos.

Alterações morfológicas de tecido laminar do casco e parâmetros clínicos e laboratoriais de equinos com síndrome cólica letal

As afecções gastrintestinais dos cavalos são agravadas por complicações como a laminite, cuja etiopatogenia está relacionada à degradação da membrana basal do tecido laminar por metaloproteinases (MMPs). A ativação das MMPs pode ocorrer devido à liberação local de citocinas inflamatórias ou enzimas provenientes de leucócitos infiltrados no tecido laminar. O objetivo deste trabalho foi avaliar as alterações morfológicas do tecido laminar de equinos com síndrome cólica letal e sua provável associação com parâmetros clínicos e laboratoriais. Observou-se intensa destruição da arquitetura laminar, principalmente nos animais com alterações físicas e laboratoriais mais acentuadas, como tempo de preenchimento capilar prolongado (TPC), membranas mucosas congestas, taquicardia, hemoconcentração e redução nas contagens de plaquetas e leucócitos. Os resultados sinalizam o provável momento do desenvolvimento de lesões do tecido laminar em equinos com síndrome cólica, no qual é possível adotar medidas preventivas contra a laminite.

Alterações radiográficas e ecográficas de osteoartrite da articulação metacarpofalângica em cavalos de desporto

Nos equinos a articulação metacarpofalângica é submetida a vários graus de stress físico. Com o exercício intenso, o aumento da carga imposta aos seus tecidos pode provocar sinovite mecanicamente induzida, com produção e libertação de citoquinas, e consequentemente estimulação de metaloproteinases e outros componentes inflamatórios. Esta situação pode causar um desequilíbrio entre os processos de síntese e degradação de proteoglicanos e glicosaminoglicanos da matriz cartilaginosa, levando a osteoartrite. A osteoartrite é considerada uma das causas mais comuns da diminuição da performance e abandono precoce das actividades desportivas dos equinos. A utilização do Rx e da ecografia articular em conjunto tem vindo a aumentar cada vez mais na prática clínica equina, pois são dois meios relativamente baratos e de fácil acesso em comparação com outros métodos de diagnóstico imagiológicos. A utilização conjunta permite uma avaliação tanto estática como dinâmica da articulação, permitindo uma avaliação mais precisa da articulação, beneficiando o diagnóstico e avaliação de patologias ósseas. Neste trabalho, para além de falar da anatomia e fisiologia da articulação normal, faço uma breve descrição da fisiopatologia da osteoartrite, do seu diagnóstico e tratamento. No entanto dá-se ênfase as alterações radiológicas e ecográficas da osteoartite a nível da articulação metacarpofalângica e benefício destes dois métodos combinados.

Alterações morfológicas de tecido laminar do casco e parâmetros clínicos e laboratoriais de equinos com síndrome cólica letal

As afecções gastrintestinais dos cavalos são agravadas por complicações como a laminite, cuja etiopatogenia está relacionada à degradação da membrana basal do tecido laminar por metaloproteinases (MMPs). A ativação das MMPs pode ocorrer devido à liberação local de citocinas inflamatórias ou enzimas provenientes de leucócitos infiltrados no tecido laminar. O objetivo deste trabalho foi avaliar as alterações morfológicas do tecido laminar de equinos com síndrome cólica letal e sua provável associação com parâmetros clínicos e laboratoriais. Observou-se intensa destruição da arquitetura laminar, principalmente nos animais com alterações físicas e laboratoriais mais acentuadas, como tempo de preenchimento capilar prolongado (TPC), membranas mucosas congestas, taquicardia, hemoconcentração e redução nas contagens de plaquetas e leucócitos. Os resultados sinalizam o provável momento do desenvolvimento de lesões do tecido laminar em equinos com síndrome cólica, no qual é possível adotar medidas preventivas contra a laminite.

Expressão imuno-histoquímica metaloproteinase -1, -2 e -9 em ameloblastoma sólido e tumor odontogênico adematóide

Ameloblastoma and adenomatoid odontogenic tumor are odontogenic tumors arising from the odontogenic epithelium with distinct clinical behavior. In attempt to comprehend the interaction between the odontogenic tumor cells and the extracellular matrix, the present work evaluated and compared the immunohistochemical expression of the matrix metalloproteinases-1 (MMP-1), -2 (MMP-2) and -9 (MMP-9) in 20 cases of ameloblastoma and 10 adenomatoid odontogenic tumor. MMP-1 exhibited exuberant expression in the parenchyma and in the stroma of both studied tumors, while the MMP-2 showed varied expression with about of 80% and 60% of the neoplastic cells exhibiting positivity in the ameloblastoma and adenomatoid odontogenic tumor, respectively. With relation to the MMP-2 expression by the mesenchymal cells, it was observed that 65% of the ameloblastoma and 80% of the adenomatoid odontogenic tumor were positive. The immunoreactivity of MMP-9 was detected in all studied cases, although its expression had occurred predominantely in less than 50% of the parenchyma cells of the ameloblastoma, while in about of 60% of the adenomatoid odontogenic tumor more than 50% of cells were positive. The mesenchymal cells were positive to MMP-9 in 65% of the ameloblastoma and in 80% of the adenomatoid odontogenic tumor, respectively. Statistically significant difference was observed to the MMP-1 expression with relation to MMP-2 and MMP-9 in the ameloblastoma (p < 0.001). It was not possible to perform statistical analysis to the cases of adenomatoid odontogenic tumor, however there was a tendency toward a differential expression of the MMP-1 with relation to other studied MMPs. These results suggest that MMP-1, - 2 and -9 are implicated in the growth and progression of both tumors analyzed as well as the more pronounced participation of the stroma in the ameloblastoma could together to be related to the higher clinical aggressiveness

Expressão imuno-histoquimica de colagenase-1 e gelatinases A e B em mixomas odontogênicos e papilas de germes dentários

The odontogenic myxoma shares cellular and structural aspects with dental papilla, which has been implicated as probable origin of this neoplasm. The aim of the present study was to perform a comparative immunohistochemical analysis for the expression of collagenase-1 (MMP-1) and gelatinases A (MMP-2) and B (MMP-9) in odontogenic myxomas and dental papilla of teeth germs. Twelve cases of odontogenic myxomas and eight specimens of teeth germs were selected. It was taken into consideration the presence or absence of immunoreactivity, the pattern of immunohistochemical distribution of proteases within extracellular matrix, as well as, the number of cells revealing immunostaining for matrix metalloproteinases (MMPs). It was verified a significant difference (p<0,05) in relation to MMP-2 immunoexpression, which was observed only within extracellular matrix of myxomas. Nevertheless, MMP-1 labeling was revealed by most of the cases of odontogenic myxoma, at levels close to those observed in dental papilla. In relation to the pattern of distribution, a significant difference was obtained between specimens (p<0,05), with neoplasms predominantly exhibiting a focal pattern for MMP-1. The quantitative analysis of neoplastic cells labeled for MMPs denoted a significant difference (p<0,05), demonstrating a higher proportion of MMP-1 in comparison to MMPs-2 and -9. It can be concluded that immunohistochemical expression of MMP-1 at levels comparable to those observed in dental papilla and quantitatively superior in relation to MMPs-2 and -9, suggest an implication of this protease on extracellular matrix degradation of odontogenic myxomas. Moreover, the possibility of interactions with receptors involved in cellular adhesion, particularly with integrins, suggests a plausible function on local invasiveness of such neoplasms. Additionally, the presence of a descent immunoexpression gradient for these MMPs on odontogenic myxomas, associated to substrate specificity inherent in each enzyme, suggest the existence of a coordinated mechanism between interstitial collagenase and gelatinases A and B in order to allow an efficient degradation of extracellular matrix and local invasion by neoplastic cells

Estudo da expressão imuno-histoquímica das proteínas MMP-9, MMP-13 e TIMP-1 em ameloblastomas e tumores odontogênicos ceratocistos

Ameloblastomas and keratocystic odontogenic tumors (KOT) represent odontogenic lesions that, despite their benign nature, are distinguished by a distinct biological behavior, characterized by locally aggressive growth and recurrent episodes. The gnathic bone resorption caused by the growth of these lesions is a key to the expansion of the same, both being mediated by osteoclastic cells like enzymatic activity of various matrix metalloproteinases (MMPs) factor. The expression of stimulatory factors and inhibitors of bone resorption has been correlated with the development of these lesions, with emphasis to some MMPs such as collagenases and gelatinases and tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs), among others. Based on the premise that stimulatory and inhibitory factors of osteolytic processes can be decisive for the growth rate of intraosseous odontogenic lesions, this experiment evaluated the immunoreactivity of MMP-9, -13 and TIMP-1 protein in the epithelium and mesenchyme of ameloblastoma and the KOT specimens, by a quantitative analysis of the immunoreactivity cells. Statistical analysis was performed using the Mann-Whitney and Wilcoxon tests with a significance level set at 5 %. Immunohistochemical expression of MMP-9, -13 and TIMP-1 was observed in 100% of cases both in the epithelium and in mesenchyme. The immunoreactivity in the epithelium of KOT and ameloblastomas revealed a predominance of score 3 for MMP-9 (p=0.382) and MMP-13 (p=0.069) and no statistically significance for TIMP-1, the latter being significantly higher immunoreactivity in ameloblastomas. In the mesenchyme, there was a higher score immunoreactivity of MMP-13 (p=0.031) in ameloblastomas in relation to KOT, whereas for MMP-9 and TIMP-1 no statistically significant difference (p=0.403 was observed, p=1.000). The calculation of the ratio of scores revealed expression of proteins in general, similarity of the lesions, a significant predominance of equal expression of TIMP-1 and MMP-9 was observed only in the epithelium of ameloblastoma. The marked immunostaining of MMP-9 , MMP-13 and TIMP-1 in epithelium and mesenchyme of the lesion indicate that these proteins involved in ECM remodeling required for tumor progression, however, specific differences in the expression of some of these proteins, are not sufficient to suggest differences in the biological behavior of ameloblastomas and KOTs

Associação entre polimorfismos funcionais nos genes da MMP-7 e MMP-9 e o perfil clinicopatológico do carcinoma epidermóide de língua

Matrix metalloproteinase-7 (MMP-7) and -9 (MMP-9) modulate important functions strictly related to the development, invasion and metastasis of several human cancers among them the squamous cell carcinoma of the tongue (SCCT). However, individual genetic factors such as the functional single nucleotide polymorphisms (SNPs) influence the pattern of protein expression of these MMPs and thus may be related to the variability observed in the clinical behavior of patients with SCCT. In this context, the present cross-sectional study aimed to evaluate the association between the frequency of the functional SNPs MMP-7 -181 A/G and MMP-9 -1562 C/T and the clinical (age, gender and metastasis) and pathological (malignancy histological grading and immunohistochemistry expression) features of SCCT cases. Genotyping of these SNPs were performed by PCR-RFLP on DNA samples from 71 cases of SCCT and 60 individuals without cancer who constitute the control group. Among the results of this research, it was observed that the frequency of the polymorphic alleles MMP-7 -181 G and MMP-9 -1562 T in SCCT patients was 28% and 12%, respectively, and the frequency of the heterozygotes A/G (PR = 2.00; p < 0.001) and C/T (PR = 1.54; p = 0.014) were significantly higher in the patient group than in the controls. The prevalence of patients carrying the combination of SNPs studied was significantly associated with SCCT cases (PR = 2.00; p = 0.011) and metastasis (PR = 2.00; p < 0.001). Furthermore, with the frequency of SNPs analyzed, the age, gender, histological grading and immunoreactivity of MMP-7 and MMP-9 formed clinical and pathological parameters relevant to the identification of population subgroups more related to the development of SCCT and metastasis. Based on these results, it is suggested that the protein expression levels of MMP-7 and -9 substantially influence the balance between their pro- and anticancer biological functions and hence the clinicopathological profile of the squamous cell carcinoma of the tongue

Estudo da expressão imuno-histoquímica das MMPs -2, -7, -9 e -26 e TIMPs -1 e -2 em adenomas pleomórficos e carcinomas adenóides císticos de glândulas salivares menores

The balance between the expression of matrix metalloproteinases (MMPs) and their tissue inhibitors (TIMPs) has been related to various physiological and pathological processes, including salivary gland morphogenesis and tumor invasion and metastasis processes. Pleomorphic adenoma (PA) and adenoid cystic carcinoma (ACC) respectively represent benign and malignant neoplasias of salivary glands. Although they share the same cell origin, they present distinct biological behavior. The aim of this study was to compare the immunohistochemical expression of MMPs -2, -7, -9 and -26, and of TIMPs -1 and -2, in cases of PA and ACC of minor salivary glands. Twenty cases of PA and twenty cases of ACC were assessed according to the presence, intensity and location of MMPs and TIMPs in the tumor parenchyma. Most of the PAs and ACCs presented a high expression of MMP -2, -7, -9 and -26 and of TIMP -1 and -2, predominantly located in tumor cells. There was no significant difference in the expression of MMPs -2 (p=0.359), -7 (p=0.081) and -26 (p=0.553), as well as of TIMPs -1 (p=0.657) and -2 (p=0.248), between the parenchyma of PAs and ACCs. However, MMP-9 showed a significant difference of expression between the two tumors, with the ACC showing more intense marking for this gelatinase (p=0.041). The strong expression of MMP-9 observed in the parenchyma suggests that this gelatinase may play an important role in the biological behavior of these tumors. On the other hand, although there was no significant difference between the marking of MMP -2, 7 and 26 in the studied tumors, the data, when analyzed as a whole, suggest that these proteases may take part in the process of tissue remodeling in both tumors, but do not present a direct relation with the pattern of aggressiveness of ACC. Nonetheless, matrilisins may indirectly influence the behavior of this tumor due to their capacity of activating MMP-9, strongly expressed in the parenchyma of ACC

Expressão imuno-histoquímica das integrinas a2ß1, a3ß1, e a5ß1 em folículos pericoronários espessados e cistos dentígeros incipientes

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior