The therapeutic potential of recombinant BCG expressing the antigen S1PT in the intravesical treatment of bladder cancer

Purpose: Bacillus Calmette-Guerin (BCG) continues to be employed as the most effective immunotherapy against superficial bladder cancer. We have developed an rBCG-S1PT strain that induces a stronger cellular immune response than BCG. This preclinical study was designed to test the potential of rBCG-S1PT as an immunotherapeutic agent for intravesical bladder cancer therapy. Materials and methods: A tumor was induced in C57BL/6 mice after chemical cauterization of the bladder and inoculation of the tumor cell line MB49. Next, mice were treated by intravesical instillation with BCG, rBCG-S1PT, or PBS once a week for 4 weeks. After 35 days, the bladders were removed and weighed, Th1 (IL-2, IL-12, INOS, INF-gamma, TNF-alpha), and Th2 (IL-5, IL-6, IL-10, TGF-beta) cytokine mRNA responses in individual mice bladders were measured by quantitative real time PCR, and the viability of MB49 cells in 18-hour coculture with splenocytes from treated mice was assessed. In an equivalent experiment, animals were observed for 60 days to quantify their survival. Results: Both BCG and rBCG-S1PT immunotherapy resulted in bladder weight reduction, and rBCG-S1PT increased survival time compared with the control group. There were increases in TNF-alpha in the BCG treated group, as well as increases in TNF-alpha and IL-10 mRNA in the rBCG-S1PT group. The viability of MB49 cells cocultured with splenocytes from rBCG-S1PT-treated mice was lower than in both the BCG and control groups. Conclusions: rBCG-S1PT therapy improved outcomes and lengthened survival times. These results indicate that rBCG could serve as a useful substitute for wild-type BCG. (C) 2010 Elsevier Inc. All rights reserved.

Using BCG, MPT-51 and Ag85 as antigens in an indirect ELISA for the diagnosis of bovine tuberculosis

This study evaluated the Mycobacterium tuberculosis protein antigen MPT-51, the trimeric antigen 85 (Ag85) complex, and Bacillus Calmette-Guerin (BCG) in an indirect ELISA to diagnose bovine tuberculosis (TB) from serum samples. Serum was collected from 208 intra-dermal tuberculin test (ITT)-positive and 54 ITT-negative animals from a region where bovine TB is endemic. Using the Ag85 and BCG antigens, the indirect ELISA was able to discriminate ITT-positive from ITT-negative animals. This level of discrimination was not achieved when using the MPT-51 antigen. The highest sensitivity (Se) and specificity (Sp) of the test was found when BCG was used (Se, 82%; Sp, 91%). Further work in different epidemiological settings and with larger numbers of animals will be required to validate these findings. (C) 2009 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Neonatal BCG Immunization Followed by DNAhsp65 Boosters: Highly Immunogenic but not Protective Against Tuberculosis - a Paradoxical Effect of the Vector?

A new tuberculosis vaccine is urgently needed. Prime-boost strategies are considered very promising and the inclusion of BCG is highly desirable. In this investigation, we tested the protective efficacy of BCG delivered in the neonatal period followed by boosters in the adult phase with a DNA vaccine containing the hsp65 gene from Mycobacterium leprae (pVAXhsp65). Immune responses were characterized by serum anti-hsp65 antibody levels and IFN-gamma and IL-5 production by the spleen. Amounts of these cytokines were also determined in lung homogenates. Protective efficacy was established by the number of colony-forming units (CFU) and histopathological analysis of the lungs after challenge with Mycobacterium tuberculosis. Immunization with BCG alone triggered a significant reduction of CFU in the lungs and also clearly preserved the pulmonary parenchyma. BCG priming also increased the immunogenicity of pVAXhsp65. However, boosters with pVAXhsp65 or the empty vector abolished the protective efficacy of BCG. Also, higher IL-5 levels were produced by spleen and lungs after DNA boosters. These results demonstrated that neonatal BCG immunization followed by DNAhsp65 boosters is highly immunogenic but is not protective against tuberculosis.

Mycobacterium tuberculosis Culture Filtrate Proteins plus CpG Oligodeoxynucleotides Confer Protection to Mycobacterium bovis BCG-Primed Mice by Inhibiting Interleukin-4 Secretion

Culture filtrate proteins (CFP) are potential targets for tuberculosis vaccine development. We previously showed that despite the high level of gamma interferon (IFN-gamma) production elicited by homologous immunization with CFP plus CpG oligodeoxynucleotides (CFP/CpG), we did not observe protection when these mice were challenged with Mycobacterium tuberculosis. In order to use the IFN-gamma-inducing ability of CFP antigens, in this study we evaluated a prime-boost heterologous immunization based on CFP/CpG to boost Mycobacterium bovis BCG vaccination in order to find an immunization schedule that could induce protection. Heterologous BCG-CFP/CpG immunization provided significant protection against experimental tuberculosis, and this protection was sustained during the late phase of infection and was even better than that conferred by a single BCG immunization. The protection was associated with high levels of antigen-specific IFN-gamma and interleukin-17 (IL-17) and low IL-4 production. The deleterious role of IL-4 was confirmed when IL-4 knockout mice vaccinated with CFP/CpG showed consistent protection similar to that elicited by BCG-CFP/CpG heterologous immunization. These findings show that a single dose of CFP/CpG can represent a new strategy to boost the protection conferred by BCG vaccination. Moreover, different immunological parameters, such as IFN-gamma and IL-17 and tightly regulated IL-4 secretion, seem to contribute to the efficacy of this tuberculosis vaccine.

Effect of BCG stimulus on proinflammatory cytokine production in laryngeal cancer

Background Evaluate the production of TNF and IL-6 in the supernatant of peripheral blood mononuclear cell (PBMC) cultures of patients with supraglottic laryngeal cancer before and after surgical treatment. Materials and methods Adherent cell cultures were stimulated with LPS and BCG. Fourteen patients with advanced supraglottic laryngeal cancer were studied. Cytokine concentration was determined by ELISA in supernatants of mononuclear cell cultures. Results In non-stimulated cultures, lower TNF cytokine levels were detected during the late postoperative (LP) period compared to control (P = 0.02). LP TNF and IL-6 levels were high in cultures stimulated with LPS compared with the preoperative period (PREOP) (P = 0.007; P = 0.008, respectively). Stimulation with BCG led to increased levels of TNF and IL-6 during the LP period compared to control (P = 0.001; P = 0.04, respectively). Conclusions BCG is able to modulate the immune response of patients with advanced supraglottic laryngeal cancer in vitro, increasing the secretion of TNF and IL-6 by macrophages during the postoperative period.

Avaliação de um serviço de rotina (vacinação anti-rábica) no Centro de Saúde de Londrina, Paraná, Brasil

Discute-se a importância de uma análise contínua das informações obtidas rotineiramente em serviços de saúde, a fim de que reajustes necessários para aumentar a eficiência sejam tomados na época oportuna e para que essas informações possam ser usadas em planejamentos científicos. Tomou-se como exemplo específico a avaliação de um serviço de vacinação anti-rábica em um Centro de Saúde sede de um distrito sanitário. A população caracterizada foi aquela que procurou o serviço na época do estudo (junho de 1969 a abril de 1973). Foi analisada a influência da urbanização e da distância em quilômetros da cidade sede sobre a procura do serviço e feitas algumas considerações sobre o esquema de vacinação anti-rábica usado. Sempre que possível foram comparados os dados obtidos com aqueles de outros locais, concluindo que de um modo geral as diferenças encontradas não são significativas.

Tétano e vacinação antitetânica: estudo na população urbana de Londrian (PR), Brasil

Inquérito realizado em três grupos da população urbana de Londrina (PR), representados por 602 donas-de-casa, 464 colegiais e 778 universitários, com o objetivo de: determinar o número de vacinados contra o tétano; avaliar índices de conhecimento sobre o tétano, a vacina e o soro antitetânicos; correlacionar esses índices com algumas características de cada grupo da população estudada. Concluiu-se que conceitos incorretos e carência de informação quanto ao tétano e à vacina antitetânica prevalecem na população da zona urbana de Londrina (PR). Foi discutido o significado e a decorrência desses fatos afirmando-se que a morbidade do tétano, persistentemente elavada no Brasil, deve representar séria advertência para as autoridades de saúde pública em nosso país, com vista à reformulação dos programas de vacinação antitetânica e à revisão dos métodos de educação sanitária adotados na divulgação dessa doença e dos recursos científicos disponíveis para sua profilaxia.

Resposta sorológica de adultos à vacinação contra a rubéola

Foi estudada a resposta sorológica à vacinação contra a rubéola, por via subcutânea, com a cepa vacinal viva atenuada Wistar RA 27/3, num grupo de 30 professoras da rede municipal de ensino de São Paulo. Foram escolhidos, como participantes do grupo, indivíduos destituídos de imunidade contra a rubéola, tendo as dosagens de anticorpos inibidores da hemaglutinação e fixadores do complemento sido feitas em amostras de soro colhidas 10, 30, 90 e 180 dias após a vacinação. Tanto nas provas de inibição da hemaglutinação, como fixação do complemento, observou-se uma soro-conversão de 96,6%. Não se observaram quaisquer relações vacinais no grupo em estudo.

Reações clínicas à vacinação de adultos contra a rubéola

Descreve-se a incidência comparativa e as características das reações associadas à vacinação contra a rubéola de 305 mulheres adultas na faixa etária de 20 a 35 anos ou mais, com a vacina RA 27/3: 238 vacinações (77,8%) sem qualquer reação; 6 casos (1,9%) com febre, artralgias e adeno-patia retro-auricular; 8 casos (2,6%) com os mesmos sintomas anteriores e "rash" rubeliforme; 21 casos (6,9%) com adenopatia retro-auricular; mal estar geral sem sintomas respiratórios, 25 casos (8,2%) e com sintomas respiratórios das vias superiores, 8 casos (2,6).

Possível interferência da antitoxina tetânica pré-existente, na vacinação antitetânica

Estudou-se qual a possível interferência no desenvolvimento da imunidade antitetânica ativa em cobaias e camundongos, filhos de fêmeas vacinadas contra o tétano em diferentes épocas durante o período da prenhês. Verificou-se que a vacinação das fêmeas, em gestação não interferiu, negativamente, no desenvolvimento da imunidade ativa dos animais filhos, quando submetidos à vacinação ao redor de 60 dias após o nascimento. A presença de baixos níveis de anticorpos circulantes, recebidos congenitamente, parece ter, em determinadas condições, estimulado a resposta imunitária quando, posteriormente, os animais filhos foram vacinados contra o tétano. Sugere-se que o complexo antígeno-anticorpo formado seja capaz de melhorar a resposta imunitária induzida pelo toxóide.

Esquema reduzido de vacinação anti-rábica humana pré-exposição e avaliação de doses anuais de reforço

São apresentados os resultados do emprego de esquema de vacinação anti-rábida humana pré-exposição, constituído de 3 doses de vacina tipo Fuenzalida-Palacios administradas a 165 pacientes em dias alternados, mais uma dose de reforço no 30.° dia após a dose inicial. Os títulos de anticorpos foram determinados por prova de soroneutralização em amostras de sangue colhidas antes, 30 e 40 dias após administração da primeira dose. Verificou-se que no 30.° dia, 74,6% dos pacientes apresentaram anticorpos neutralizantes no soro, valor que se elevou a 98,1% no quadragésimo dia, o que mostra a eficácia do esquema em relação à resposta imunitária em tempo relativamente curto e a importância da dose de reforço como estímulo à produção de anticorpos. Nos pacientes submetidos às doses anuais de reforço num período de 10 anos, verificou-se aumento gradual da presença de anticorpos antes da administração da dose de reforço subseqüente, até atingir valores de 100%. Face aos resultados obtidos foi sugerido que as doses de reforço sejam administradas a intervalos de tempo maiores e precedidas da titulagem de anticorpos a fim de se avaliar da necessidade ou não de sua administração.

Imunidade relativa à poliomielite em crianças de zero a dez anos, após o "Quarto Dia Nacional de Vacinação Contra a Poliomielite" com a vacinação oral trivalente, tipo Sabin, em área da Região da Grande São Paulo, SP (Brasil), 1982

Efetuou-se um levantamento soro-epidemiológico, abrangendo 898 crianças, para a verificação da imunidade aos poliovírus 1, 2 e 3 por meio da determinação dos títulos de anticorpos neutralizantes. De 522 crianças, ou seja, de 58,1% da população estudada, foi possível a obtenção de informações referentes à situação vacinal a partir de anotações existentes nas próprias Cadernetas de Vacinação. Neste último sub-grupo foi estudado o estado imunitário em relação ao número de doses de vacina oral tipo Sabin recebidas. Os resultados mostraram alta proporção de imunes para os três tipos de poliovírus entre as crianças estudadas, porém também revelaram a existência de lacuna imunitária nos menores de um ano, especialmente no primeiro semestre de vida. Não foram observadas diferenças importantes na proporção de imunes segundo o sorotipo considerado. Salientou-se a necessidade de um alerta constante e permanente em relação à ocorrência de possíveis surtos epidêmicos em segmentos mais vulneráveis da população, particularmente entre crianças menores de 1 ano.

Avaliação das condições de estocagem de vacinas vivas, atenuadas contra o sarampo, em postos de vacinação credenciados e em centros de saúde do Estado de São Paulo (Brasil)

Para avaliar as condições de estocagem de vacinas vivas, atenuadas contra o sarampo, da rede de vacinação do Estado de São Paulo (Brasil), foram visitados 71 Postos de Vacinação Credenciados particulares (PVC), assim como 117 Centros de Saúde oficiais (CS), sobre os quais interessava saber a respeito da qualidade da estocagem a frio. Os parâmetros adotados foram: a) temperatura das geladeiras de uso (+2 a +8°C) e de estoque (+ 8°C); b) validade do produto; c) título das vacinas conservadas nestas geladeiras, avaliado pela inoculação de diluições das amostras de vacinas em células Vero; d) proteção à luz. Dos CS pesquisados, 85,33% apresentaram geladeiras com temperatura de acordo com a recomendada e 100% das vacinas neles estocadas com título e validade satisfatórios. Nos PVC foram encontrados, com maior freqüência, lotes de vacina fora do prazo de validade (14,49%), com títulos abaixo do mínimo requerido (3,53%) e geladeiras de uso e de estoque com temperaturas inadequadas (33,80%). Necessário se faz que as condições de estocagem das vacinas contra o sarampo (temperatura e proteção à luz), prevalentes no momento, sejam melhoradas e que as bulas passem a acompanhar o produto a eles entregue, para que os responsáveis pela vacinação obedeçam as recomendações do laboratório produtor com relação às condições de estocagem, validade e administração do imunobiológico, uma vez que a pesquisa revelou que estas não são observadas com o rigor necessário.

Estimativa da prevalência de infecção tuberculosa em escolares vacinados com BCG, por meio de método de Bhattacharya

Em populações muito afetadas por reações tuberculínicas inespecíficas, o teste tuberculínico padronizado, via de regra, superestima a infecção tuberculosa. A bem sucedida aplicação do método de Bhattacharya (método gráfico para a decomposição de uma distribuição de freqüências em componentes normais) na análise de resultados do teste em população contaminada por infecçõcs atípicas sugeriu seu uso nos resultados obtidos cm populações vacinadas com BCG. Assim, na análise dos resultados de dois inquéritos tuberculínicos realizados na cidade de São Paulo, SP (Brasil), em 1982 (escolares vacinados entre o segundo e o sexto ano de vida), e em 1988 (escolares vacinados no primeiro ano de vida), foi possível a caracterização e quantificação da componente normal devida à infecção natural em cada uma das misturas. Na população de 1982 o diâmetro médio das reações foi de 17,40 mm com desvio padrão 3,72 mm, e a proporção de infectados foi de 7,71% contra 4,85% nos não vacinados; na população de 1988, o diâmetro médio foi 17,00 mm com desvio padrão 4,67 mm, e a proporção de infectados foi de 4,14% contra 4,48% nos não vacinados. Concluiu-se que o método permite estimar a prevalência da infecção tuberculosa em populações com alta cobertura vacinal, desde que a vacina tenha sido aplicada no primeiro ano de vida.