Exogenous insulin stimulates glycogen accumulation in Rhipicephalus (Boophilus) microplus embryo cell line BME26 via PI3K/AKT pathway

Ticks are obligatory blood-feeding arthropods and important vectors of both human and animal disease agents. Besides its metabolic role, insulin signaling pathway (ISP) is widely described as crucial for vertebrate and invertebrate embryogenesis, development and cell survival. In such cascade, Phosphatidylinositol 3-OH Kinase (PI3K) is hierarchically located upstream Protein Kinase B (PKB). To study the insulin-triggered pathway and its possible roles during embryogenesis we used a culture of embryonic Rhipicephalus microplus cells (BME26). Exogenous insulin elevated cell glycogen content in the absence of fetal calf serum (FCS) when compared to cells without treatment. Moreover, in the presence of PI3K inhibitors (Wortmannin or LY294002) these effects were blocked. We observed an increase in the relative expression level of PI3K`s regulatory subunit (p85), as determined by qRT-PCR. In the presence of PI3K inhibitors these effects on transcription were also reversed. Additionally, treatment with Wortmannin increased the expression level of the insulin-regulated downstream target glycogen synthase kinase 3 beta (GSK3 beta). The p85 subunit showed elevated transcription levels in ovaries from fully engorged females, but was differentially expressed during tick embryogenesis. These results strongly suggest the presence of an insulin responsive machinery in BME26 cells, and its correlation with carbohydrate/glycogen metabolism also during embryogenesis. (C) 2009 Published by Elsevier Inc.

BYC, an atypical aspartic endopeptidase from Rhipicephalus (Boophilus) microplus eggs

An aspartic endopeptidase was purified in our laboratory from Rhipicephalus (Boophilus) microplus eggs [Logullo, C., Vaz, I.S., Sorgine, M.H., Paiva-Silva, G.O., Faria, F.S., Zingali, R.B., De Lima, M.F., Abreu, L., Oliveira, E.F., Alves, E.W, Masuda, H., Gonzales, J.C., Masuda, A., and Oliveira, P.L., 1998. Isolation of an aspartic proteinase precursor from the egg of a hard tick, Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Parasitology 116, 525-532]. Boophilus yolk cathepsin (BYC) was tested as component of a protective vaccine against the tick, inducing a significant immune response in cattle [da Silva, VI., Jr., Logullo, C., Sorgine, M., Velloso, F.F., Rosa de Lima, M.F., Gonzales, J.C., Masuda, H., Oliveira, P.L., and Masuda, A., 1998. Immunization of bovines with an aspartic proteinase precursor isolated from Rhipicephalus (Boophilus) microplus eggs. Vet. Immunol. Immunopathol. 66,331-341]. In this work, BYC was cloned and its primary sequence showed high similarity with other aspartic endopeptidases. In spite of this similarity, BYC sequence shows many important differences in relation to other aspartic peptidases, the most important being the lack of the second catalytic Asp residue, considered to be essential for the catalysis of this class of endopeptidases. When we determined BYC cleavage specificity by LC-MS, we found out that it presents a preference for hydrophobic residues in P1 and P1` in accordance to most aspartic endopeptidases. Also, when analyzed by circular dicroism, BYC presented high beta sheet content, also a characteristic of aspartic endopeptidases. On the other hand, although both native and recombinant BYC are catalytically active, they present a very low specific activity, what seems to indicate that this peptidase will digest its natural substrate, vitellin, very slowly. We speculate that such a slow Vn degradative process might constitute an important strategy to preserve egg protein content to the hatching larvae. (c) 2007 Elsevier Inc. All rights reserved.

Clonagem, caracterização e expressão de cDNAs similares a calreticulina e paramiosina isolados de glândula salivar do carrapato Boophilus microplus (Canestrini, 1887)

O carrapato Boophilus microplus é um dos mais importantes ectoparasitas dos rebanhos bovinos, estando em todas as áreas tropicais e subtropicais entre o paralelo 32 °N e 32 °S, abrangendo regiões que se dedicam à pecuária na América, África, Ásia e Oceania. O controle do carrapato B. microplus é realizado principalmente com o uso de acaricidas, entretanto devido a crescente preocupação com os problemas criados pela poluição química do ambiente, ao alto custo e toxicidade das drogas e ao aparecimento de carrapatos resistentes aos acaricidas, alternativas para o controle do B. microplus devem ser encontradas. A sobrevivência dos carrapatos depende grandemente da sua capacidade de evadir o sistema imunológico dos hospedeiros, portanto antígenos da glândula salivar poderiam ser alvos para intervenção imunoprofilática. Neste trabalho foram isolados cDNAs não previamente descritos correspondentes a antígenos presentes na glândula salivar. cDNAs que codificam para proteínas similares a paramiosina e calreticulina foram seqüenciados, expressos em Escherichia coli e as proteínas recombinantes purificadas, tendo sido produzidos soros policlonais contra as proteínas recombinantes em coelhos. As seqüências foram caracterizadas e alinhamentos múltiplos com outras seqüências foram determinados. O gene da calreticulina mostrou ser expresso em todos os estágios e tecidos testados, tanto em experimentos de RT-PCR quanto de Western blot, tendo sido demonstrado também a sua secreção pela saliva. Análise filogenética indica o agrupamento do gene de B. microplus com seqüências de outros artrópodos. Soros de bovinos infestados não reconhecem a calreticulina recombinante, apesar dela ser reconhecida pelo soro de cães infestados pelo carrapato Rhippicephalus sanguineus. A paramiosina mostrou-se, em ensaios de Western blot, também estar presente em todos os estágios testados, porém não na saliva. A paramiosina recombinante foi capaz de ligar colágeno e IgGs. Ambas as proteínas correspondem a proteínas multi-funcionais possivelmente envolvidas na imunomodulação do hospedeiro, tendo sido sugeridas como imunógenos protetores contra outros parasitas.

Clonagem e caracterização parcial de cDNA de glândula salivar de Boophilus microplus (Acari:Ixodidae) similar a glutationa s-transferase

O carrapato Boophilus microplus é um ectoparasita hematófago de bovino que causa sérias perdas econômicas. Estudos para o desenvolvimento de formas alternativas de controle do carrapato tem sido realizados para diminuir ou substituir a aplicação de agentes químicos, que contaminam o ambiente, os derivados da carne, além dos problemas de resistência das gerações de carrapatos aos acaricidas. As vacinas são uma forma alternativa de controle do carrapato. As enzimas glutationa S-transferase (GSTs) são alvo potencial para intervenção imunológica contra alguns parasitas. Este trabalho teve como objetivo isolar e caracterizar parcialmente um cDNA de B. microplus similar a GST da classe Mu. O clone SG2 foi isolado dentre aproximadamente 8 x 103 pfu de fagos recombinantes de uma biblioteca de cDNA de glândula salivar de partenógina, sondada com anti-soro de coelho contra glândula salivar. O clone SG2 contendo um inserto de 864 pb teve sua seqüência determinada e a fase de leitura aberta corresponde a 220 amino ácidos. A análise desta seqüência indicou que o gene clonado codifica uma GST de B. microplus (BmGST) com um motivo altamente conservado entre os resíduos 60 e 68 que compreende o sítio de ligação a glutationa (GSH) e outro motivo SLAILRYL, centrado no resíduo 78 da seqüência. No alinhamento múltiplo da AgSG2 com outras GSTs foi observada uma similaridade de até 41% com GSTs da classe Mu de outros organismos e inclusive com outra GST da classe Mu isolada de larva de B. microplus (HE et al., 1999). A proteína recombinante AgSG2 purificada apresentou atividade enzimática contra o substrato cromogênico CDNB. Ensaios de atividade enzimática com extratos de tecidos, secreções e excreções foram realizados para verificar a presença de GST. Ensaios de RT-PCR com tecidos de B. microplus indicaram que os sítios de síntese de BmGST são glândulas salivares e intestino de partenógina e teleógina.

Purificação e caracterização da microfilina, o segundo inibidor de trombina da saliva do carrapato Boophilus microplus

A saliva do carrapato bovino Boophilus microplus contém dois inibidores de trombina: o BmAP e a microfilina. Este trabalho apresenta a purificação e a caracterização deste último anticoagulante. A microfilina foi purificada da saliva por cromatografia de gel filtração, ultrafiltração em membrana de exclusão de 3 kDa e cromatografia de afinidade em trombina-Sepharose. A análise por espectrometria de massas mostrou uma massa molecular de 1770 Da. Com uma composição de 16 aminoácidos, a microfilina é o segundo menor inibidor peptídico de trombina já descrito. A microfilina inibe a fibrinocoagulação e a agregação plaquetária induzida por trombina com IC50 de 5 M. Como ela não inibe a atividade amidolítica da enzima sobre S2238, mas inibe a hidrólise de um substrato sintético longo que interage com o exosítio I da trombina, o mecanismo de ação proposto para a microfilina é o bloqueio do exosítio I da enzima. A microfilina é resistente à temperatura e não inibe a atividade amidolítica de fXa, plasmina, proteína C ativada, uroquinase, quimiotripsina e tripsina. O estudo mais detalhado da microfilina permitirá sua avaliação como antígeno contra o carrapato e/ou como droga antitrombótica.

Obtenção e avaliação da proteína BYC (Boophilus Yolk pro-Cathepsin) recombinante em uma vacina contra o carrapato Boophilus microplus

O carrapato Boophilus microplus é um ectoparasita hematófago que infesta os rebanhos bovinos de regiões tropicais e subtropicais, causando grande prejuízo à pecuária. O principal método de controle deste parasita baseia-se no uso de acaricidas, entretanto, o uso de vacinas tem sido estudado como um método de controle promissor. A Boophilus Yolk pro-Cathepsin (BYC) é uma aspártico proteinase presente no ovo do carrapato e envolvida na embriogênese que foi anteriormente testada como imunógeno vacinal. Neste estudo, o cDNA da BYC foi amplificado por PCR e clonado em dois vetores de expressão para produção de duas formas da proteína recombinante com cauda de histidina, rBYC e rBYC-Trx (fusionada com tioredoxina). As duas formas foram expressas em Escherichia coli na forma de corpúsculos de inclusão (CI) e comparadas quanto ao nível de expressão, solubilidade e rendimento na purificacão. Três agentes desnaturantes (N-lauroil sarcosina, hidrocloreto de guanidina e uréia) foram testados para solubilização dos CIs. Sarcosina foi o agente mais eficiente, solubilizando mais de 90 % de rBYC-Trx e rBYC. As duas proteínas recombinantes foram purificadas em cromatografia de afinidade por metal (Ni2+), sob condições desnaturantes. O rendimento na purificação da proteína solúvel foi de 84 % para r-BYC-Trx e 6 % para rBYC. As duas formas foram reconhecidas por soro de coelhos, camundongos e bovinos previamente imunizados com BYC nativa, demonstrando a existência de epítopos comuns entre a BYC nativa e as formas recombinantes expressas em E. coli. Para verificar o potencial vacinal da proteína recombinante, um grupo de bovinos Hereford foi imunizado com rBYC e desafiado com 20.000 larvas de B. microplus por animal. Os soros dos bovinos imunizados reconheceram a BYC nativa em ELISA e “Western blot”, com títulos entre 500 e 4.000. Os resultados do desafio mostraram uma proteção parcial contra a infestação, com 25 % de proteção global. O perfil de expressão de citocinas (IL-2, IL-4, IL-10, IFN-γ) foi verificado por RT-PCR, porém os resultados não permitiram identificar a polarização da resposta imune em Th1 ou Th2. Os resultados de imunoproteção obtidos com a BYC recombinante foram similares aos obtidos na imunização de bovinos com BYC nativa, indicando a possibilidade de uso da forma recombinante como imunógeno vacinal.

Padrões clínicos de acne em mulheres de diferentes faixas etárias

FUNDAMENTOS: Acne é dermatose comum que acomete ambos os gêneros e todas as faixas etárias. Mulheres apresentam diferentes padrões clínicos da doença, além de frequente persistência da acne após a adolescência. OBJETIVO: Analisar características clínicas e epidemiológicas associadas às diferentes faixas etárias acometidas por acne feminina. MÉTODOS: Estudo transversal envolvendo mulheres com diagnóstico de acne, atendidas em ambulatório de dermatologia geral. Variáveis relacionadas à doença e às pacientes foram avaliadas com o emprego de questionário padronizado. RESULTADOS: Avaliaram-se 103 pacientes, cuja idade média na época da consulta foi 21,7 ± 7,3 anos. Definiram-se dois subgrupos com idade de corte de 21 anos e idades médias de 15,8 ± 2,3 e 28,0 ± 5,1 anos. Houve correlação entre a duração do quadro e a idade das pacientes na consulta (R = 0,7). Observaram-se diferenças entre os grupos nas frequências de uso de contraceptivo oral combinado (OR = 48,1), lesões no colo (OR = 11,6), lesões no dorso (OR = 0,2), predominância na topografia superior da face (OR = 0,1) e idade de início das lesões (OR = 1,8). No grupo de mulheres adultas, 80% relataram início do quadro antes dos 20 anos. CONCLUSÕES: Identificaram-se padrões clínicos cronológicos e topográficos que caracterizaram a acne feminina em diferentes faixas etárias, alertando para a importância da abordagem diagnóstica e terapêutica individualizada.

Detection of the 43,000-molecular-weight glycoprotein in sera of patients with paracoccidioidomycosis

The 43,000-molecular-weight (43K) soluble glycoprotein was detected in sera of patients with paracoccidioidomycosis by the immunoblot technique by using as the probe rabbit monospecific antisera to this fraction. The 43K antigen was present before treatment in sera of patients with the acute (juvenile) form; it started to disappear from circulation after 10 months of chemotherapy, and it was undetectable afer 2 years of treatment. In the chronic cases, the 43K antigen was detected in patients without treatment, and it was absent in the healed cases. The detection of the 43K protein specific to Paracoccidioides brasiliensis may be important for its diagnostic value as well as for modulation of the host immune response.

Antibody response to the 43 kDa glycoprotein of Paracoccidioides brasiliensis as a marker for the evaluation of patients under treatment

Sera of patients with paracoccidioidomycosis contained IgG-, IgA-, and IgM-specific antibodies to a 43 kDa antigen contained in the filtrate of a culture of Paracoccidioides brasiliensis. IgG- and IgA-specific antibodies were present in all observed patients. The IgM response was more frequent in acute cases, and the mean titers of IgG- and IgM-specific antibodies were higher in the acute forms. By the fourth month of chemotherapy, there was a decay of IgG, IgA, and IgM antibody titers to this antigen in acute cases, correlating with clinical improvement. The detection of IgG and IgA antibodies and the sequential determination of antibodies to the 43 kDa glycoprotein may be useful tools for serodiagnosis and evaluation of therapeutic efficacy.

Spinning reserve opportunity cost in hydroelectric plants

Starting from the deregulated process of the Electric Sector, there was the need to attribute responsibilities to several agents and to elaborate appropriate forms of remuneration of the services rendered by the same. One of the services of great importance within this new electric sector is the Ancillary Services. Among the various types of Ancillary Services, Spinning Reserve is a service necessary for maintaining the integrity of the transmission system from either generation interruptions or load variations. This paper uses the application of the Economic Dispatch theory with the objective of quantifies the availability of Spinning Reserve supply in hydroelectric plants. The proposed methodology utilizes the generating units as well as their efficiencies so as to attend the total demand with the minimum water discharge. The proposed methodology was tested through the data provided by the Água Vermelha Hydroelectric Power Plant. These tests permitted the opportunity cost valuation to the Spinning Reserve supply in hydroelectric plants. © 2005 IEEE.

Brachioradial pruritus - Descriptive analysis of Brazilian case series

Background The epidemiology and clinical features of brachioradial pruritus are variably described in the literature. We sought to analyze these features in a large group of Brazilian patients. Patients and Methods In a descriptive, observational study, we identified all patients with a final diagnosis of brachioradial pruritus seen over a one-year period and re-trospectively reviewed their records. The diagnosis was made after clinical-laboratory investigation had ruled out other causes of chronic pruritus. Demographic and clinical variables were collected along with pruritus characteristics, and analyzed using des-criptive statistics. Results Forty-three patients were identified; their mean age was 55.9 years, with predominance of women (81.4%) and Caucasians (86%). In 52%, the pruritus worsened with heat and sun exposure; 58.1% had intermittent complaints; the ice-pack sign was present only in 20.9%. The arms involving dermatomes C5-C6-C7-C8 (62.8%) were the most affected sites, while psychoactive drugs were the most frequently prescribed therapy. Conclusions Although uncommon, brachioradial pruritus should not be neglected in dermatological diagnosis. This case series analysis indicated that Brazilian patients from a tropical climate show characteristics similar to those described in other series from more temperate regions. © Blackwell Verlag GmbH, Berlin.

Quality of life profile and correlated factors in chronic leg ulcer patients in the mid-west of São Paulo State, Brazil

BACKGROUND: Chronic leg ulcer may have an impact on patients' quality of life.OBJECTIVES:This study aimed to identify the impact of leg ulcers on patient's quality of life using the Dermatology Life Quality Index and to define the main factors correlated with this perception.METHOD:Cross-sectional, non-probabilistic sampling study. We included patients with chronic leg ulcers being treated for at least 3 months. A sociodemographic and clinical survey was conducted to assess the profile of the ulcers. We administered a screening for depressive symptoms and the Dermatology Life Quality Index. We performed a descriptive statistical analysis, chi-square test and Mann-Whitney test for categorical data, Pearson for numeric variables, and multiple regression for categorical data.RESULTS:Forty-one patients were assessed. Their mean age was 61.78 years. Venous ulcers (48.8%) were the most prevalent. Seventy-three percent of the sample perceived no impact/low impact on quality of life in the past week, and 26.8% perceived moderate/high impact. A multiple regression analysis identified the causes of lesion, pain related to the ulcers, time of onset, and severity of the depressive symptoms as the variables that had an influence on quality of life.CONCLUSIONS:The majority of the sample perceived low or no impact of the condition on the quality of the life. The variables etiology of the lesion (p<0.001), pain related to the ulcers (p=0.001), time of onset (p=0.006), and severity of the depressive symptoms (p<0.001) had an influence on the quality of life, suggesting the need for further studies with more robust designs to confirm the causal relationship between these characteristics and quality of life.

Surgical treatment of type I neuritis in a teenage boy with borderline tuberculoid leprosy

Exacerbation of the immune response against Mycobacterium leprae can lead to neuritis, which is commonly treated via immunosuppression with corticosteroids. Early neurolysis may be performed concurrently, especially in young patients with a risk of functional sequelae. We report the case of a young patient experienced intense pain in the left elbow one year after the treatment of tuberculoid-tuberculoid leprosy. The pain was associated with paresthesias in the ulnar edge and left ulnar claw. After evaluation, the diagnosis was changed to borderline tuberculoid leprosy accompanied with neuritis of the left ulnar nerve. Early neurolysis resulted in rapid reduction of the pain and recovery of motor function.

Mycobacterium marinum infection: a case report

The infection by Mycobacterium marinum in humans is relatively uncommon. When it occurs, it mainly affects the skin, usually with a chronic, indolent and benign evolution. The diagnosis requires a high index of suspicion, and a significant delay may be observed between the first symptoms to the final diagnosis. This present case reports a M. marinum infection in an immunocompetent patient that had a chronic undiagnosed injury on the dominant hand for at least five years. The patient had several medical consultations, without proper suspicion, hampering adequate diagnostic investigation. Histopathology detected tuberculoid granulomas, but showed no acid-fast bacilli. The culture in appropriate medium and the polymerase chain reaction-restriction enzyme analysis (PRA)-hsp65 confirmed the diagnosis. Treatment with clarithromycin (1 g/day) for three months was effective. Although uncommon, this infection is a contact zoonosis. Therefore, it is important for clinicians to be aware of this diagnosis and properly guide preventable measures to professionals that are in risk group.

Upgrading of Transmission Lines in Areas of Severe Environmental Constraints

The need for increasing the loading capacity of transmission lines in a traditional way, by replacing or reinforcement of the structures and foundations on routes crossing areas considered of permanent environmental preservation, may require additional works that alter the environment. The present rigorous environmental legislation turns these changes and substitution unfeasible. One way to increase the capacity of these lines is the use of new conductor technology. The aim of this paper is to discuss the needs for upgrading a transmission line and minimize or eliminate the damage to the environment by using special conductors. Because the aluminum conductor composite reinforced technology is relatively new and considering the lack of information related to its effective performance in practical system, there is a need to verify the behavior of these conductors through monitoring procedures.