Serological investigation and PCR in detection of pathogenic leptospires in snakes

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Títulos de anticorpos aglutinantes induzidos por vacinas comerciais contra leptospirose bovina

No presente estudo, 100 fêmeas bovinas foram divididas em cinco grupos de 20 animais cada. Os grupos experimentais receberam quatro diferentes vacinas comerciais (B, C, D e E), e um grupo permaneceu como controle. Amostras foram colhidas no dia da aplicação da primeira dose e nos dias 3, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63, 70, 77, 84, 91, 120, 150 e 180 pós-vacinação (PV). A triagem dos animais foi feita pela análise sorológica com 6 antígenos de leptospiras, escolhendo-se os animais não reagentes. Os títulos de anticorpos foram monitorados pela soroaglutinação microscópica (SAM) com os sorovares Canicola, Grippotyphosa, Hardjo, Icterohaemorrhagiae, Pomona e Wolffi. Todas as vacinas induziram, aos 3 dias PV, títulos de anticorpos aglutinantes para os sorovares Hardjo e Wolffi, que persistiram até o 150º dia PV. Os sorovares Hardjo e Wolffi induziram os maiores títulos de anticorpos aglutinantes. A vacina D, apesar de não possuir o sorovar Wolffi em sua composição foi capaz de induzir anticorpos aglutinantes contra este sorovar. Somente foram detectados anticorpos contra o sorovar Canicola nos animais vacinados com a bacterina D. A vacina que induziu os maiores títulos médios de anticorpos, considerando todos os sorovares testados foi a D.

Prevalência e fatores de risco de leptospirose bovina no Estado do Maranhão

Foram investigados a prevalência e os fatores de risco da leptospirose bovina no Estado do Maranhão. O Estado foi dividido em quatro circuitos amostrais com base em parâmetros de produção distintos que variam conforme os diferentes sistemas de produção, as práticas de manejo, a finalidade de exploração, o tamanho médio dos rebanhos e os sistemas de comercialização. Objetivou-se estudar as características epidemiológicas da leptospirose bovina no Estado do Maranhão, de modo a determinar a prevalência em bovinos e em rebanhos, detectar as sorovariedades de Leptospira spp. presentes, identificar os fatores de risco eventualmente associados à leptospirose em bovinos e diferenciar os circuitos pecuários entre si no que se refere à prevalência de leptospirose. A pesquisa foi realizada em 136 propriedades rurais pertencentes ao circuito I, no qual 841 fêmeas bovinas com idade igual ou superior a 24 meses foram analisadas; 238 do circuito II, com 2.582 fêmeas analisadas; 122 do circuito III, com 869 fêmeas analisadas; e 77 do circuito IV, com 540 fêmeas analisadas; no total, 573 propriedades e 4.832 fêmeas foram estudadas. A presença de anticorpos contra Leptospira spp. foi verificada pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM). Das 4.832 fêmeas bovinas analisadas, 1.904 (35,94%; IC 95% = 33,01% - 38,98%) foram reagentes. Das 573 propriedades analisadas, 380 (64,81%; IC 95% = 61,10% - 68,35%) foram consideradas positivas. As sorovariedades Hardjo e Wolffi foram as mais frequentes em todo o Estado. O circuito III foi o que apresentou menor prevalência de leptospirose em todas as comparações. As variáveis identificadas como fatores de risco de leptospirose foram: presença de equinos (p = 0,000), presença de capivaras (p = 0,034) e rebanhos bovinos com 32 ou mais fêmeas adultas (p = 0,002).

Serosurvey for antibodies against Brucella abortus and Leptospira interrogans in pampas deer from Brazil

A survey for antibodies against Brucella abortus, and Leptospira interrogans was conducted on 17 pampas deer (Ozotocerus bezoarticus) from Pantanal Matogrossense (State of Mato Grosso do Sul, Brazil) and on 24 pampas deer from Parque Nacional de Emas (State of Goias, Brazil). Antibodies against B. abortus were detected by plate ag glutination, rose Bengal, and complement fixation tests, antibodies against Leptospira interrogans were detected by the microscopic agglutination test. All sera were negative for B. abortus antibodies and all deer sera from Parque Nacional de Emas were negative for L. interrogans antibodies. Four (24%) of 17 sera from Pantanal Matogrossense were positive for L. interrogans serovar (n = 2) hardjo, wolffi (n = 1) and mini (n = 1). While these diseases do not appear to be of major importance to the health status of Pampas deer, it appears that deer are reservoir for leptospirosis in one of the study areas.

Use of saprophytic leptospira strains in the serodiagnosis of experimental leptospirosis in guinea-pigs (Cavia sp)

No presente estudo foi avaliada, através da reação de soroaglutinação microscópica, a eficiência de quatro estirpes apatogênicas de Leptospira biflexa (Buenos Aires, Patoc 1, Rufino e São Paulo) como antígeno único para o diagnóstico sorológico em cobaias experimentalmente infectadas com sete diferentes sorotipos de Leptospira interrogans (canicola, grippotyphosa, hardjo, icterohaemorrhagiae, pomona, tarassovi e wolffi). As estirpes Buenos Aires, Patoc 1, Rufino e São Paulo não foram eficientes em revelar títulos de anticorpos nos soros das cobaias infectadas com Leptospira interrogans. Durante o experimento, foi observada a ocorrên cia de reações sorológicas cruzadas entre as estirpes Patoc 1 e São Paulo e também entre os sorotipos wolffi e hardjo.

Anticorpos contra Leptospira spp em bovinos leiteiros vacinados com bacterina polivalente comercial: perfil sorológico frente a dois esquemas de vacinação

Mediante a utilização da prova de soroaglutinação microscópica (SAM), foi pesquisada a indução de anticorpos contra leptospira em bovinos vacinados com uma bacterina polivalente comercial. Procurou-se avaliar a resposta sorológica homóloga frente a dois esquemas de vacinação. Os animais utilizados foram fêmeas adultas em produção leiteira oriundas de seis propriedades da região noroeste do Estado de São Paulo. Vinte animais de cada propriedade foram escolhidos após três exames sorológicos com 24 sorovares de leptospiras com intervalo de 20 dias, através de triagem sorológica com 24 antígenos de leptospiras. Os grupos foram constituídos de animais não reagentes (I, II e III) e animais reagentes (IV, V e VI). Posteriormente os animais foram subdivididos em grupos controle (I e IV), os que receberam somente uma dose de vacina (II e V) e que receberam duas uma doses de vacina com e dose de reforço após 30 dias (III e VI). Os animais foram monitorados por meio da SAM nos dias 0, 15, 30, 45 e 60 após a primeira aplicação da vacina. Os resultados obtidos revelaram que não houve diferença significativa (p>0,05) entre os animais vacinados e não vacinados. Não houve diferença significativa (p>0,05) nas respostas de títulos vacinais com relação ao perfil sorológico apresentados pelos animais. A vacinação com reforço apresentou melhor desempenho e a indução produção de aglutininas somente ocorreu contra os sorovares hardjo, wolffi, icterohaemorrhagiae e pomona. Há a necessidade de maiores estudos sobre o poder imunogênico da vacina utilizada no experimento.

Geographic analysis on the occurrence of human and canine leptospirosis in the city of Maringá, state of Paraná, Brazil

INTRODUÇÃO: Leptospirose é uma zoonose que tem como hospedeiros primários os animais silvestres, sinantrópicos e domésticos. Os humanos comportam-se como hospedeiros terminais e acidentais. Sua prevalência depende dos animais portadores que disseminam o agente, de sua sobrevivência ambiental e do contato de pessoas susceptíveis. Cada sorovar tem um ou mais hospedeiros com diferentes níveis de adaptação. Os focos de leptospirose devem-se aos animais infectados, doentes e assintomáticos, considerados como fontes de infecção ambiental. O objetivo deste estudo foi determinar áreas de risco da infecção leptospírica em cães errantes e pacientes com diagnóstico de leptospirose nos anos de 2006 a 2008, em Maringá, Estado do Paraná, Brasil. MÉTODOS: Foram estudados 335 cães errantes e 25 pacientes. Os soros, tanto dos animais como dos pacientes, foram examinados pela prova de soroaglutinação microscópica (SAM), para pesquisa de anticorpos antileptospíricos. Para determinar áreas de risco e a distribuição espacial da doença foram elaborados mapas temáticos. RESULTADOS: Foram observados 41(12,2%) cães positivos para um ou mais sorovares de leptospiras, e os mais frequentes foram: Pyrogenes (43,9%), Canícola (21,9%) e Copennhageni (19,5%). Nos humanos, a positividade foi de 2 (8%) para os sorovares, Pyrogenes e Hardjo Prajitno e, Pyrogenes e Cynopteri. CONCLUSÕES: A análise espacial revelou que o risco de cães e humanos, no município de Maringá, se infectar com leptospiras está presente tanto em áreas centrais como periféricas, fato que reforça a relevância deste estudo e de ações contínuas de vigilância epidemiológica e ambiental para o controle da doença tanto nos animais como no homem.

Leptospira spp. antibodies in captive coatis (Nasua nasua Storr, 1780) (Carnivora: Procyonidae)

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Leptospiral antibodies in wild boars (Sus scrofa) bred in Brazil

In the recent years, the wild boar (Sus scrofa) trade has increased in Brazil. The present study aimed to detect Leptospira spp. infection in 308 blood samples from wild boars bred in São Paulo state, Brazil. The microscopic agglutination test (MAT) was performed using 29 serovars. Sixty three (63; 20.45%) animals tested positive against the serovars Hardjo (29/63; 46.0%), Copenhageni (11/63; 17.4%), Pomona (8/63; 12.7%), Pyrogenes (4/63; 6.3%), Wolfii (4/63; 6.3%), Autumnalis (3/63; 4.7%), Icterohaemorraghiae (2/63; 3.1%), and Hardjo-miniswajezak (1/63; 15.8%). These results indicate that captive wild boars were infected with Leptospira spp. and may represent a source of infection to humans and other animals.

Prevalência e aspectos epidemiológicos da leptospirose bovina em rebanho leiteiro na microrregião de Goiânia - GO

Foram colhidas 426 amostras de hemossoro bovino, provenientes de vacas em lactação na microrregião de Goiânia-GO, e testadas pelo método de soroaglutinação microscópica (SAM) para detecção de aglutininas antileptospiras, para efetuar um estudo de prevalência. Paralelamente, foi realizado um questionário epidemiológico, contendo informações que pudessem fornecer dados sobre a epidemiologia da leptospirose nessa região. Os resultados obtidos revelaram uma prevalência de 81,90% de animais reagentes. Os principais sorovares envolvidos foram: wolffi (36,10%), icterohaemorrhagiae (20,50%), hardjo (5,20%) e tarassovi (4,90%). A presença de ratos e suínos, a utilização de inseminação artificial e o tipo de fonte de água não interferiram no número de animais reagentes no teste de SAM. A leptospirose tem um comportamento enzoótico nessa região.

Perfil de aglutininas anti-Leptospira em bezerras búfalas vacinadas com bacterina pentavalente comercial contra leptospirose

Avaliou-se o perfil sorológico de 17 bezerras búfalas vacinadas nos dias zero, 30 e 210 com bacterina pentavalente comercial contra leptospirose, empregando-se a prova de soroaglutinação microscópica com antígenos vivos, durante o período de 360 dias. Utilizaram-se quatro bezerras-controle, e todos os animais foram negativos no dia zero. Nos animais vacinados, foram observadas reações aos 60 dias para todos os sorovares, associadas a títulos máximos para Canicola, Grippothyphosa e Pomona. No 90° dia, houve declínio acentuado dos títulos para todos os sorovares e ausência de títulos para Hardjo. Nos dias 120º, 150º, 180º e 210º, ocorreram oscilações de títulos para todos os sorovares. No 240º dia, foram encontrados títulos máximos para Hardjo, elevação para os outros sorovares e ausência de título para Canicola. Nos dias 270º, 300º e 330º, foi observado declínio gradativo dos títulos. No 360º dia, foram encontrados títulos residuais para Icterohaemorrhagiae, Grippothyphosa e Pomona e ausência de reação para os outros sorovares. Inferiram-se a reduzida persistência dos títulos vacinais mesmo após o reforço e revacinação e a baixa interferência da vacinação no diagnóstico sorológico.

Occurrence and risk factors associated with canine leptospirosis

Leptospirosis is a globally distributed emerging zoonosis. Dogs are commonly affected and although other serovars can cause canine leptospirosis, Leptospira interrogans serovar Canicola is primary found in these animals. A retrospective study was conducted using a database of 1195 dogs tested for Leptospira infection from 2003 to 2010 at the Laboratory of Zoonosis Diagnosis at the Veterinary Hospital of São Paulo State University (UNESP) in Botucatu, São Paulo state, Brazil. The seroprevalence of infected dogs was 20.08% (240/1195), and the most prevalent serovars were Canicola (6.7%), Copenhageni (5.0%), Icterohaemorrhagiae (2.9%), Autumnalis (2.9%), Pyrogenes (2.8%), Pomona (2.0%), Hardjo (2.0%), Australis (1.8%), Bratislava (1.6%), Cynopteri (1.4%), Grippotyphosa (1.3%) and Djasiman (1.0%). By univariate analysis, the variables age and breed were not statistically related to the infection, while gender and season were. The effects of gender were also noticeable related to serovars Australis, Canicola and Hardjo. In multivariate analysis, the level of significance (p-value) of season was suppressed by gender, indicating possible collinearity between those two variables.

An in vitro growth inhibition test for measuring the potency of Leptospira spp. Sejroe group vaccine in buffaloes

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Epidemiological aspects in leptospirosis. Research of anti-Leptospira spp antibodies, isolation and biomolecular research in bovines, rodents and workers in rural properties from Botucatu, SP, Brazil.

Leptospirosis is a worldwide infection, transmitted between man and animals that causes a decrease in the production of bovine flocks, and offer risks for public health, as an important zoonosis. The rodents are the main reservoirs of leptospires. It was studied 27 dairy farm properties located in or near from Botucatu-SP, Brazil. In these farms were collected blood and kidney samples from rodents, blood and urine samples from bovines and blood samples from the workers. The serology was performed with microscopic agglutination test (MAT). Samples of bovine urine and rodent kidneys were cultivated searching for leptospires isolation. The polymerase chain reaction (PCR) of the kidneys of the rodents was performed. In MAT, 46/ 140 (32.85%) bovine and 8/34 (23.53%) human sera samples were positive, respectively. In human samples, the serovar Brastilava (37.51%) presented the highest occurrence, while in bovines, the serovars Hardjo and Castellonis were most frequent, with 26.08% each one. All of the rodents were negatives in serology. No leptospire was isolated, and kidney samples were negative in PCR. In bovines, the dam water and the bad hygiene quality of milking process were considered important risks of infection in the affected properties (p<0.05), where other reproductive problems, except abortion, can be related. In other side, to human beings the drainage system was the most important risk factor in the studied properties. Thus, it was verified the necessity of an improvement in zoosanitary handling of the properties, mainly of water supply.

Detection of Leptospira spp. from pure cultures and from experimentally contaminated bovine semen by polymerase chain reaction

Considerando a importância do sêmen na transmissão da leptospira bovina, foi realizado o presente estudo que teve como objetivo aplicar a reação em cadeia pela polimerase (PCR) para a detecção de leptospiras em sêmen bovino experimentalmente contaminado. A reação de PCR foi capaz de amplificar um fragmento de DNA específico de 330 pares de bases a partir de cultivos puros de 26 sorovares de Leptospira spp. A contaminação experimental de sêmen com Leptospira interrogans serovar hardjo revelou que a técnica de PCR conseguiu detectar 10 bactérias/ml, concentração sensivelmente mais baixa que as 1.000 bactérias/ml detectadas através do cultivo microbiológico. Os resultados observados revelam o grande potencial da reação de PCR para a detecção de Leptospira spp. em sêmen bovino, notadamente em centrais de inseminação artificial.