Lufaxin, a novel factor Xa inhibitor from the salivary gland of the sand fly Lutzomyia longipalpis blocks protease-activated receptor 2 activation and inhibits inflammation and thrombosis in vivo.

OBJECTIVE: Blood-sucking arthropods' salivary glands contain a remarkable diversity of antihemostatics. The aim of the present study was to identify the unique salivary anticoagulant of the sand fly Lutzomyia longipalpis, which remained elusive for decades. METHODS AND RESULTS: Several L. longipalpis salivary proteins were expressed in human embryonic kidney 293 cells and screened for inhibition of blood coagulation. A novel 32.4-kDa molecule, named Lufaxin, was identified as a slow, tight, noncompetitive, and reversible inhibitor of factor Xa (FXa). Notably, Lufaxin's primary sequence does not share similarity to any physiological or salivary inhibitors of coagulation reported to date. Lufaxin is specific for FXa and does not interact with FX, Dansyl-Glu-Gly-Arg-FXa, or 15 other enzymes. In addition, Lufaxin blocks prothrombinase and increases both prothrombin time and activated partial thromboplastin time. Surface plasmon resonance experiments revealed that FXa binds Lufaxin with an equilibrium constant ≈3 nM, and isothermal titration calorimetry determined a stoichiometry of 1:1. Lufaxin also prevents protease-activated receptor 2 activation by FXa in the MDA-MB-231 cell line and abrogates edema formation triggered by injection of FXa in the paw of mice. Moreover, Lufaxin prevents FeCl(3)-induced carotid artery thrombus formation and prolongs activated partial thromboplastin time ex vivo, implying that it works as an anticoagulant in vivo. Finally, salivary gland of sand flies was found to inhibit FXa and to interact with the enzyme. CONCLUSIONS: Lufaxin belongs to a novel family of slow-tight FXa inhibitors, which display antithrombotic and anti-inflammatory activities. It is a useful tool to understand FXa structural features and its role in prohemostatic and proinflammatory events.

Morphologic aspects of Tetratrichomonas didelphidis isolated from opossums Didelphis marsupialis and Lutreolina crassicaudata

Tetratrichomonas didelphidis (Hegner & Ratcliffe, 1927) Andersen & Reilly, 1965 is a flagellate protozoan found in the intestine, cecum, and colon of Didelphis marsupialis. The parasitic protozoa used in this study was found and isolated in the intestine of opossums in Pavlova starch-containing medium in Florianópolis, State of Santa Catarina, Brazil, from D. marsupialis and Lutreolina crassicaudata. The strains were cultivated in Diamond medium without maltose and with starch solution, pH 7.5 at 28°C. The specimens were stained by the Giemsa method and Heidenhain's iron hematoxylin. The light microscopy study of the trophozoites revealed the same morphologic characteristics as specimens previously described.

An mRNA region of the canine distemper virus fusion protein gene lacking AUG codons can promote protein expression.

Canine distemper virus (CDV) produces a glycosylated type I fusion protein (F) with an internal hydrophobic signal sequence beginning around 115 residues downstream of the first AUG used for translation initiation. Cleavage of the signal sequence yields the F0 molecule, which is cleaved into the F1 and F2 subunits. Surprisingly, when all in-frame AUGs located in the first third of the F gene were mutated a protein of the same molecular size as the F0 molecule was still expressed from both the Onderstepoort (OP) and A75/17-CDV F genes. We designated this protein, which is initiated from a non-AUG codon protein Fx. Site-directed mutagenesis allowed to identify codon 85, a GCC codon coding for alanine, as the most likely position from which translation initiation of Fx occurs in OP-CDV. Deletion analysis demonstrated that at least 60 nucleotides upstream of the GCC codon are required for efficient Fx translation. This sequence is GC-rich, suggesting extensive folding. Secondary structure may therefore be important for translation initiation at codon 85.

Bone mineral density (BMD), micro-architecture estimation (TBS) and vertebral fracture assessment (VFA) extracted from a single DXA device in combination with clinical risk factors improve significantly the identification of women at high risk of fracture

Introduction: Osteoporosis (OP) is a systemic skeletal disease characterized by a low bone mineral density (BMD) and a micro-architectural (MA) deterioration. Clinical risk factors (CRF) are often used as a MA approximation. MA is yet evaluable in daily practice by the Trabecular Bone Score (TBS) measure. TBS is a novel grey-level texture measurement reflecting bone micro-architecture based on the use of experimental variograms of 2D projection images. TBS is very simple to obtain, by reanalyzing a lumbar DXA-scan. TBS has proven to have diagnosis and prognosis value, partially independent of CRF and BMD. The aim of the OsteoLaus cohort is to combine in daily practice the CRF and the information given by DXA (BMD, TBS and vertebral fracture assessment (VFA)) to better identify women at high fracture risk. Method: The OsteoLaus cohort (1400 women 50 to 80 years living in Lausanne, Switzerland) started in 2010. This study is derived from the cohort COLAUS who started in Lausanne in 2003. The main goals of COLAUS is to obtain information on the epidemiology and genetic determinants of cardiovascular risk in 6700 men and women. CRF for OP, bone ultrasound of the heel, lumbar spine and hip BMD, VFA by DXA and MA evaluation by TBS are recorded in OsteoLaus. Preliminary results are reported. Results: We included 631 women: mean age 67.4±6.7 y, BMI 26.1±4.6, mean lumbar spine BMD 0.943±0.168 (T-score -1.4 SD), TBS 1.271±0.103. As expected, correlation between BMD and site matched TBS is low (r2=0.16). Prevalence of VFx grade 2/3, major OP Fx and all OP Fx is 8.4%, 17.0% and 26.0% respectively. Age- and BMI-adjusted ORs (per SD decrease) are 1.8 (1.2- 2.5), 1.6 (1.2-2.1), 1.3 (1.1-1.6) for BMD for the different categories of fractures and 2.0 (1.4-3.0), 1.9 (1.4-2.5), 1.4 (1.1-1.7) for TBS respectively. Only 32 to 37% of women with OP Fx have a BMD < -2.5 SD or a TBS < 1.200. If we combine a BMD < -2.5 SD or a TBS < 1.200, 54 to 60% of women with an osteoporotic Fx are identified. Conclusion: As in the already published studies, these preliminary results confirm the partial independence between BMD and TBS. More importantly, a combination of TBS subsequent to BMD increases significantly the identification of women with prevalent OP Fx which would have been miss-classified by BMD alone. For the first time we are able to have complementary information about fracture (VFA), density (BMD), micro- and macro architecture (TBS & HAS) from a simple, low ionizing radiation and cheap device: DXA. Such complementary information is very useful for the patient in the daily practice and moreover will likely have an impact on cost effectiveness analysis.

Evaluation des facteurs de risque cliniques et des données de la DXA (DMO, VFA, TBS) pour la prédiction du risque fracturaire. L'étude de la cohorte OséoLaus.

Introduction. - L'ostéoporose est caractérisée par une diminution dela densité minérale osseuse (DMO) et une détérioration de lamicroarchitecture osseuse (MO). En routine clinique, l'appréciationde la MO se fait de façon approximative en utilisant les facteurs derisque clinique (FRC). Il est maintenant possible d'estimer de façonsimple la MO en mesurant le Trabecular Bone Score (TBS) par réanalysed'une image DXA lombaire. TBS a une valeur diagnostiqueet pronostique indépendante des FRC et de la DMO. Le but de lacohorte lausannoise OstéoLaus est de combiner des éléments facilesà obtenir en routine clinique, à savoir les FRC et les éléments issusde la DXA (DMO, TBS, VFA) pour évaluer le risque fracturaire defaçon transversale puis prospective.Patients et Méthodes. - Nous avons constitué une cohorte d'environ1400 femmes entre 50 et 80 ans de la région lausannoise enrôléedepuis 7 ans dans une vaste cohorte (CoLaus, 6 700 participants)évaluant les facteurs génétiques et phénotypiques de maladies fréquentescardiovasculaires et psychiatriques. Le taux de participationà Ostéolaus est > 85%. Ces femmes sont vues entre mars 2010et décembre 2012. Elles passent un questionnaire, un ultrasonosseux du talon, une DXA de la colonne et de la hanche et une évaluationpar VFA (selon la méthode semi-quantitative de Genant) etle TBS. Nous rapportons les résultats préliminaires sur 631 participantes.Les données concernant les fractures (fx) vertébrales ne distinguentpas les origines traumatiques ou non.Résultats. - L'âge est de 67,4 ± 6,7 ans, l'IMC de 26.1 ± 4,6. Les donnéesbrutes de la colonne lombaire montrent une DMO à 0,943 ±0,168 (T-score -1,4 DS) et un TBS à 1,271 ± 0,103. La corrélationentre DMO et TBS est faible avec r2 = 0,16. La prévalence des fx vertébralesgrade 2/3, des fx ostéoporotiques majeures, et de toutes lesfx ostéoporotiques est de 8,4 %, 17,0 % et 26.0 % respectivement. LesORs (par diminution d'une déviation standard) ajustés pour l'âge etl'IMC sont pour la DMO de 1,8 (1,2-2,5), 1,6 (1,2-2,1), 1,3 (1,1-1,6),et pour TBS de 2,0 (1,4-3,0), 1,9 (1,4-2,5), 1.4 (1,1-1,7), respectivement.Le taux de fx avec DMO <þ- 2,5 DS se situe entre 35 et 37 %et le taux de fx avec un TBS < 1.200 entre 37 et 44 %. Par contre cetaux augmente entre 54 et 60 % si l'on combine une DMO < - 2,5 DSou un TBS < 1,200.Conclusion. - Ces données préliminaires confirment la faible corrélationentre la DMO et le TBS. Ajouter le TBS à la DMO permetd'augmenter significativement le nombre de participantes avec unefx ostéoporotique prévalente. Une mesure simple et peu irradiantepar DXA offre ainsi 3 informations complémentaires et pertinentespour la routine clinique : la DMO, la recherche des fractures vertébraleset le TBS.

Better 6 months outcome for steroid refractory ulcerative colitis with infliximab rescue therapy compared to tacrolimus or cyclosporine: a Swiss IBD cohort retrospective analysis

BACKGROUND: C iclosporine ( CsA), Tacrolimus (Tcl) and Infliximab (IFX) are effective rescue therapies in steroidrefractory ulcerative colitis (UC). Comparative studies are however m issing. M ETHOD: T his i s the retrospective analysis of treatment outcome for oral Tcl (n=27, initially 0.05mg/Kg twice daily, aiming for serum trough levels of 5-10 n g/mL), i ntravenous C sA ( n=23, 2 mg/kg/daily a nd then o ral CsA 5mg/kg/daily) and IFX ( n=43, 5 mg/kg intravenously at week 0, 2, 6 and then every 8 weeks) in patients with s teroid r efractory moderate to s evere UC enrolled i n the SWISS IBD cohort s tudy. After successful rescue therapy with Tcl o r C sA, t hiopurine m aintenance therapy or maintenance therapy with Tcl (in Tcl pretreated patients) was introduced. The endpoints analyzed steroid free r emission r ate (on the basis of m odified Truelove- Witts severity index (MTWSI)) and number of colectomies after 6 m onths. R ESULTS: A t 6 months, 26% ( 7/27) o f patients treated with T cl r emained i n steroid free remission (MTWSI score ≤4) compared to 30 % (7/23) on 18 droplets to the same extend under the linoleic acid treat, whereas lipid hydrolysis or loss was significantly increased in Huh-7 WT cells after 24h. Conclusions: Chronic alcohol feeding in obese, insulin-resistant rats exerts significant and synergistic effects on PNPLA3 mRNA expression, which correlated with triglyceride content. In v itro experiments suggest that PNPLA3 expression depends on the t ypes of d ietary f atty acids with polyunsaturated fatty a cids i nducing a nd monounsaturated fatty a cids inhibiting PNPLA3 mRNA. I148M polymorphism of PNPLA3 l eads to attenuation o f lipolytic processes resulting in fat accumulation in the cell. 20 CsA and 58% ( 27/41) o f patients t reated w ith IFX ( Tcl & CsA vs I FX p = 0 .018). S ignificant m ore patients had primary non response, loss of response or severe adverse events i n the CsA cohort ( 61%, 1 4/23) c ompared to Tcl cohort (33.3 % , 9/27), and IFX cohort (30%, 1 3/43) (p= 0.037). Colectomy rate was significantly higher after CsA (17.4 %, 4/23) compared to Tcl (3.7 %, 1/27) or IFX (2.3 %, 1/43) (p= 0.047).CONCLUSION: After s ix m onth, rescue therapy with I FX h ad t he l owest c olectomy r ate, significantly h igher steroid free r emission rate, a nd t he lowest rate of non-response, loss of response and severe adverse events compared to CsA or Tcl rescue treatment.

Fluoxetine addition to methadone in addicts: pharmacokinetic aspects.

We report nine cases where fluoxetine (FX) (20 mg/day) was added to maintenance treatment with methadone (MTD) (dose range: 30-100 mg) in addicts with affective disorders. MTD plasma levels were measured before and after treatment with FX under steady-state conditions. Among the nine patients, two also received fluvoxamine (FLVX) at different times. Although it is possible that in some patients a moderate FX-MTD interaction occurs, resulting in increased plasma levels of MTD, this interaction is certainly less marked than that between FLVX and MTD and unlikely to have clinical consequences.

Perfil da prescrição médica dos pacientes atendidos nas farmácias comunitária na cidade da Praia: Estudo de medicamentos prescritos e sua farmacoepidemiologia

Sumário O presente estudo envolveu utentes que usufruíram dos serviços prestados pelas farmácias comunitárias (FX e FY) na cidade da Praia, baseado num levantamento de dados feitos a partir de observações e questionários. Na população estudada foi analisado características relevantes e constatou-se o seguinte nas respectivas farmácias (FX / FY): prescrição de anti-bacterianos (63% FY FX / 60% FY ), analgésicos e antipiréticos (24% ) e anti-histamínicos (19% FX / 18% FY FX / 26% FY ), anti-hipertensores (19% ); com denominação genérica (100% ); prescreve-se uma (1) embalagem (83% FY ), suspensões (43% FX / 36% FY FX / 72% ), cápsulas (29% FY ); em forma de comprimidos (76% FX / 36% FY ), e pomadas (27% ); administradas via oral (91% FX /96% FY ), dérmica (26% FX / 3% ); a dosagem em miligramas (86% FX FX / 54% / 94% FY FY ) e em mililitros (54% ), pelo médico ORL (11% FX FX / 44% / 6% FY FY FY FX FX / 16% / 88% FX FX FY / 82% / 38% ); atendimento pelo médico clínico geral (53% ), e restantes pelos médicos ginecologista (7% / 6% FY ), cirurgião (7% FX / 16% FY ) e pediatra (3% FX / 2% ); atendidas em clínicas área adulta (29% FX / 48% FY ), e em hospital área pediatria (18% FX FY / 8% ). Da avaliação feita ao receituário quanto a presença de elementos essenciais, destaca-se a ausência de posologia (10% FY ) e data (1% FX / 6% FY FY ). Quanto a legibilidade, em parte ausente, o medicamento prescrito (4% FX / 14% FY ) e o carimbo médico (28% FX / 28% ). Os utentes automedicaram de forma significativa nas farmácias comunitárias (FX e FY), e os medicamentos mais usados foram: Paracetamol (23%), Ibuprofeno (18%), Hidroclorotiazida (16%), Ácido ascórbico (10%), e Diclofenac de sódio (9%), justificando a prática segundo sintomas como, febre e dores (42%), inflamações cutâneas e dores (34%), HTA (30%), e dores nas articulações e músculos (17%). Os resultados demostram que o uso racional de medicamentos depende de uma prescrição médica racional, automedicação responsável, e intervenções específicas para melhorias de qualidade de serviços de saúde.

Perdas de solo e água por erosão hídrica em sistemas florestais na região de Aracruz (ES)

Avaliaram-se as perdas de solo e água por erosão hídrica em sistemas florestais, relacionando-as com os limites admissíveis de perdas para as principais classes de solo nos Tabuleiros Costeiros da região de Aracruz (ES), com vistas em obter indicativos da adequação do manejo deste sistema de produção. O experimento foi instalado em parcelas em Argissolo Amarelo textura média/argilosa (PA1), Plintossolo Háplico (FX) e Argissolo Amarelo moderadamente rochoso (PA8), com declividade variando de 1,8 a 8,2 %; 1,3 a 12,4 % e 28,8 a 35,5 %, respectivamente, contemplando três situações: eucalipto, mata nativa e solo descoberto. As perdas de solo por erosão hídrica para o sistema com eucalipto apresentaram a seguinte ordem: PA8 > PA1 > FX. As perdas de água por enxurrada para o sistema com eucalipto apresentaram a seguinte ordem: PA8 > FX > PA1, com uma variação de 9,09 a 70,48 mm, correspondendo a 0,79 e 6,1 % da precipitação total anual, respectivamente. As perdas de solo para o povoamento de eucalipto foram bem abaixo dos limites de tolerância para os solos referentes a cada classe, indicando a adequação do manejo deste sistema de produção em relação à erosão hídrica. O fato de as perdas de solo para o eucalipto ficarem relativamente próximas daquelas da mata nativa indica a sustentabilidade daquele ambiente no contexto de erosão.

Método alternativo de avaliação da pressão de preconsolidação por meio de um penetrômetro

A curva de compressão do solo tem sido freqüentemente utilizada em estudos de compactação do solo. Essa curva representa graficamente a relação entre o logaritmo da pressão aplicada e a densidade do solo ou o índice de vazios. A pressão de preconsolidação divide essa curva em uma região de deformações recuperáveis e em uma de deformações não-recuperáveis. Por esse motivo, a pressão de preconsolidação tem sido usada como uma estimativa da capacidade de suporte de carga dos solos parcialmente saturados. A pressão de preconsolidação é obtida em laboratório por meio do ensaio de compressão uniaxial, o qual requer aparelhos sofisticados para a sua realização. Além do tempo gasto na realização do ensaio, há necessidade de usar um método gráfico ou de planilhas para a sua determinação. Uma maneira alternativa que visa minimizar este problema seria a calibração da pressão de preconsolidação com outras medidas de fácil e rápida obtenção. O objetivo deste trabalho foi propor um método alternativo de avaliação da pressão de preconsolidação por meio de um penetrômetro. Para isso, foram determinadas as pressões de preconsolidação e as resistências à penetração, no laboratório, na camada superficial de um Argissolo Amarelo (PA) e de um Plintossolo (FX) localizados na região de Aracruz, ES. Testes de campo foram efetuados em um Latossolo Vermelho-Amarelo (LV) localizado em Belo Oriente, MG. Os valores dos coeficientes de determinação foram significativos e variaram de 0,88 a 0,99. As equações que relacionam a pressão de preconsolidação (sigmap) com a resistência à penetração (RP) foram da forma: sigmap = a + b (RP). Pela equação, as pressões de preconsolidação serão estimadas em função da resistência à penetração e poderão ser utilizadas na identificação da compactação do solo e como uma ferramenta auxiliar de decisão sobre a realização ou não de determinada operação mecanizada.

Distribuição de potássio e de raízes no solo e crescimento de milho em sistemas de manejo do solo e da adubação em longo prazo

O manejo do solo e da adubação potássica pode influenciar a distribuição de K e de raízes no solo, a absorção desse nutriente e o crescimento do milho. Com o objetivo de entender melhor essas inter-relações, foi realizado um experimento em um Argissolo Vermelho distrófico, há 18 anos, sob diferentes sistemas de manejo. Amostragens detalhadas do perfil do solo foram efetuadas no início da fase de enchimento de grãos de milho na safra 2006/07, nos seguintes tratamentos: preparo convencional (Con), com adubação potássica em linha (Lin), a lanço (Lan) e em faixa (Fx); sem preparo (Dir), com adubação em linha (Lin) e a lanço (Lan); e preparo em faixa (Fx), com adubação em faixa (Fx). Independente do manejo do solo e da adubação, o K formou gradientes a partir da superfície do solo e em torno do colmo do milho. Os gradientes, no entanto, foram diferenciados em relação ao manejo do solo, concentrando-se mais na superfície em plantio direto, independente do modo de adubação. As raízes de milho se concentraram na camada superficial do solo, com maior crescimento em plantio direto. A absorção de K e o crescimento do milho não foram associados à distribuição desse nutriente e de raízes no solo. A eficiência de utilização de K pelas plantas foi favorecida pela aplicação do adubo potássico a lanço, independente do preparo do solo.

Prediction of Infant Drug Exposure Through Breastfeeding: Population PK Modeling and Simulation of Fluoxetine Exposure.

The likelihood of significant exposure to drugs in infants through breast milk is poorly defined, given the difficulties of conducting pharmacokinetics (PK) studies. Using fluoxetine (FX) as an example, we conducted a proof-of-principle study applying population PK (popPK) modeling and simulation to estimate drug exposure in infants through breast milk. We simulated data for 1,000 mother-infant pairs, assuming conservatively that the FX clearance in an infant is 20% of the allometrically adjusted value in adults. The model-generated estimate of the milk-to-plasma ratio for FX (mean: 0.59) was consistent with those reported in other studies. The median infant-to-mother ratio of FX steady-state plasma concentrations predicted by the simulation was 8.5%. Although the disposition of the active metabolite, norfluoxetine, could not be modeled, popPK-informed simulation may be valid for other drugs, particularly those without active metabolites, thereby providing a practical alternative to conventional PK studies for exposure risk assessment in this population.