Estudo comparativo dos métodos diagnósticos para Leishmaniose Visceral em cães oriundos de Ilha Solteira, SP

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Exames parasitológicos, imunoistoquímicos e histopatológicos para detecção de Leishmania chagasi em tecidos esplênicos de cães com leishmaniose visceral

O propósito do presente trabalho foi o estudo da Leishmaniose Visceral Canina - LVC por meio de métodos parasitológicos e imunoistoquímicos para a detecção de formas amastigotas de Leishmania (L.) chagasi em baço, além de descrever a histopatologia das lesões esplênicas em 34 cães, com diferentes manifestações clínicas da LVC, eutanasiados pelo Centro de Controle de Zoonoses de Ilha Solteira, SP. Esses animais foram examinados clinicamente antes da eutánásia e de acordo com os sinais clínicos da LVC, foram classificados em três grupos: assintomáticos (8 cães), oligossintomáticos (17 cães) e sintomáticos (9 cães). Após a realização desses exames, dos 34 cães, 22 (64,7%) estavam positivos e 12 (35,3%) negativos. Desses cães positivos, 1/22 (4,5%) era assintomático, 12/22 (54,5%) eram oligossintomáticos e 9/22 (40,1%) sintomáticos. Pela histopatologia, os cães, especialmente os sintomáticos apresentavam o baço com inflamação crônica e espessamento na região capsular e trabecular, além de extensa alteração morfológica na polpa vermelha e branca pela presença de grande quantidade de macrófagos repletos de amastigotas, pela reação granulomatosa inflamatória e pelas áreas hemorrágicas. Os exames histopatológicos e a detecção microscópica direta da L. (L.) chagasi revelaram que o baço é um órgão útil para auxiliar no diagnóstico da LVC. A coloração imunoistoquímica foi a que detectou o maior número de tecidos esplênicos positivos com amastigotas, além de elucidar os casos suspeitos pelos exames parasitológicos, principalmente, nos animais assintomáticos ou oligossintomáticos.

Diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina pelas técnicas de imunoistoquímica e PCR em tecidos cutâneos em associação com a RIFI e ELISA-teste

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Differential alterations in the activity of matrix metalloproteinases within the nervous tissue of dogs in distinct manifestations of visceral leishmaniasis

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Avaliação da leishmaniose visceral canina em Poxoréo, Estado do Mato Grosso, Brazil

O cão doméstico desempenha importante papel como reservatório na transmissão da leishmaniose visceral ao homem, zoonose de grande importância em saúde pública. Realizou-se avaliação epidemiológica da leishmaniose visceral em 1.112 cães domiciliados no município de Poxoréo, estado do Mato Grosso e observou-se prevalência de 7,8%. Observou-se ainda associação estatisticamente significativa entre a prevalência de leishmaniose visceral canina e as variáveis faixa etária, presença de sinais clínicos e presença de outra espécie animal co-habitando com os cães avaliados, tendo sido as galinhas mais freqüentemente observadas entre os animais soropositivos. O sexo, a coleta de lixo domiciliar bem como a renda familiar não apresentaram associação estatisticamente significativa com a prevalência da leishmaniose visceral canina. A análise dos resultados sugere que cães com idade superior a sete anos e a , presença de outra espécie animal co-habitando com os cães podem ser fatores de risco para a leishmaniose visceral canina.

Avaliação da reação em cadeia pela polimerase para diagnóstico da leishmaniose visceral em sangue de cães

Canine and human visceral leishmaniasis is endemic in several States of Brazil, and it is associated with infected dogs and the presence of the vector. Aiming at using polymerase chain reaction as a diagnostic tool in dogs, we amplified a 120bp fragment from kDNA of Leishmania spp. by PCR in blood samples. The lower detection limit observed was 0.1 parasites per 500 mu L of blood, which is a highly satisfactory result. on the other hand, PCR evaluation in 166 blood samples of dogs from Poxoreo, MS, Brazil, resulted in 55% sensitivity and 66.3% specificity, considering indirect imunnofluorescent test as gold standard.

Diminished CD4+/CD25+T cell and increased IFN-gamma levels occur in dogs vaccinated with Leishmune (R) in an endemic area for visceral leishmaniasis

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

High levels of serum matrix metalloproteinases in dogs with natural visceral leishmaniosis: A preliminary report

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Aplicação da técnica de imunofluorescência direta para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina em aspirado de linfonodo

Recentemente, foco de leishmaniose visceral canina (CVL) foi descrito na região noroeste do Estado de São Paulo - Brasil. O Hospital Veterinário - UNESP - Araçatuba, no ano de 2.000, desenvolveu 60 testes citopatológicos de casos suspeitos de leishmaniose usando aspirado por agulha fina (FNA). Os esfregaços de linfonodo foram corados pelo método de Romanowsky (Diff-Quik®) e observados em microscopia de luz. Os casos positivos mostraram formas amastigotas típicas de Leishmania livres ou em vacúolos de macrófagos. Sinais citopatológicos de reatividade do sistema linfo-histiocitário com ausência de parasitos foram também observados. Com o objetivo de implementar o diagnóstico da CVL, detectando parasitos e material antigênico nos esfregaços, aplicou-se a reação de imunofluorescência direta (IFD) usando anticorpo policlonal anti-Leishmania produzido em camundongo. Comparamos o método de IFD com a pesquisa direta do parasito em esfregaços corados pelo método de Romanowsky. Dos 60 cães com sinais clínicos da doença, o exame direto foi positivo em 50% (n=30), duvidoso em 36,7% (n=22) e negativo com reatividade do linfonodo em 13,3% (n=8). Quando os linfonodos foram submetidos a reação de IFD observamos reação positiva em 93,3% (n=56) e reação negativa em 6,7% (n=4). Nossos resultados mostraram que a reação de IFD apresentou alta sensibilidade quando comparada a pesquisa direta do parasito pela coloração de Romanowsky. A reação de IFD pode ser um método útil para confirmar os casos duvidosos da doença, onde as formas amastigotas não são identificadas com facilidade.

Dog culling and replacement in an area endemic for visceral leishmaniasis in Brazil

Measures employed to control visceral leishmaniasis in Brazil have focused on vector control by residual insecticide spraying and diagnosis of infection with elimination of positive dogs. We describe dog culling and replacement in a Brazilian endemic area (the Alvorada District, Aracatuba, SP) in order to better understand dog population dynamics when elimination of the dog reservoir is adopted as the main control measure. From August 2002 to July 2004, 60.9% of the estimated dog population for the area was culled with a mean age of 34 months old. The presence of anti-Leishmania sp. antibodies was recorded for only 26.7% of the euthanized canines. Replacement was observed in 38.8% of the cases, some of them by 2 or more dogs and in a mean time of 4 months. Dogs were replaced mostly by puppies of both sexes with a mean age of 6.8 months. From August 2002 to April 2005 we were able to follow-up 116 of these dogs, during a mean time of 8.7 months. Canine visceral leishmaniasis seropositivity by ELISA was observed in 42.2% of the followed dogs, 30.6% of which were already positive at the first evaluation. By the end of the follow-up period 37% of the dogs were submitted to euthanasia, with a mean age of 18.3 months. In the studied CVL endemic area of Brazil, euthanasia and the subsequent replacement ratio were high, increasing the dog population turnover and leading to a younger population that might be more susceptible to a variety of other infectious diseases in addition to CVL. Dog culling as a control strategy for VL should be reassessed. (C) 2008 Elsevier B.V. All rights reserved.

Influence of apoptosis on the cutaneous and peripheral lymph node inflammatory response in dogs with visceral leishmaniasis

In canine visceral leishmaniasis (CVL), the abnormalities most commonly observed in clinical examination on the animals are lymphadenomegaly and skin lesions. Dogs are the main domestic reservoir for the protozoon Leishmania (L.) chagasi and the skin is the main site of contamination by the vector insect. Some protozoa use apoptosis as an immunological escape mechanism. The aim of this study was to correlate the presence of apoptosis with the parasite load and with the inflammatory response in the skin and lymph nodes of dogs naturally infected with Leishmania (L.) chagasi. Thirty-three dogs from the municipality of Araçatuba (São Paulo, Brazil) were used, an endemic area for CVL. Muzzle, ear and abdominal skin and the popliteal, subscapular, iliac and mesenteric lymph nodes of symptomatic (S), oligosymptomatic (O) and asymptomatic (A) dogs were analyzed histologically. The parasite load and percentage apoptosis were evaluated using an immunohistochemical technique. Microscopically, the lymph nodes presented chronic lymphadenitis and the skin presented plasmacytic infiltrate and granulomatous foci in the superficial dermis, especially in the ear and muzzle regions. The inflammation was most severe in group S. The parasite load and apoptotic cell density were also greatest in this group. The cause of the lymphoid atrophy in these dogs was correlated with T lymphocyte apoptosis, thus leaving the dogs more susceptible to CVL. The peripheral lymph nodes presented the greatest inflammatory response. Independent of the clinical picture, the predominant inflammatory response was granulomatous and plasmacytic, both in the skin and in the peripheral lymph nodes. The ear skin presented the greatest intensity of inflammation and parasite load, followed by the muzzle skin, in group S. The ear skin area presented a non-significant difference in cell profile, with predominance of macrophages, and a significant difference from group A to groups O and S. It was seen that in these areas, there were high densities of parasites and cells undergoing apoptosis, in group S. The association between apoptosis and parasite load was not significant in the lymph nodes, but in the muzzle regions and at the ear tips, a positive correlation was seen between the parasite load and the density of cells undergoing apoptosis. The dogs in group S had the highest parasite load and the greatest number of apoptotic cells, thus suggesting that the parasite had an immune evasion mechanism, which could be proven statistically in the skin. © 2012 Elsevier B.V.

Improvement in clinical signs and cellular immunity of dogs with visceral leishmaniasis using the immunomodulator P-MAPA

This study investigated the immunotherapeutic potential of the protein aggregate magnesium-ammonium phospholinoleate-palmitoleate anhydride immuno-modulator (P-MAPA) on canine visceral leishmaniasis. Twenty mongrel dogs presenting clinical symptoms compatible with leishmaniasis and diagnosis confirmed by the detection of anti-leishmania antibodies were studied. Ten dogs received 15 doses of the immunomodulator (2.0mg/kg) intramuscularly, and 10 received saline as a placebo. Skin and peripheral blood samples were collected following administration of the immunomodulator. The groups were followed to observe for clinical signals of remission; parasite load in the skin biopsies using real-time PCR, the cytokines IL-2, IL-10 and IFN-γ in the supernatant of peripheral blood mononuclear cells stimulated in vitro with either total promastigote antigen or phytohemagglutinin measured by capture ELISA, and changes in CD4+ and CD8+ T cell subpopulations evaluated by flow cytometry. Comparison between the groups showed that treatment with the immunomodulator promoted improvement in clinical signs and a significant reduction in parasite load in the skin. In peripheral blood mononuclear cell cultures, supernatants showed a decrease in IL-10 levels and an increase in IL-2 and IFN-γ. An increase in CD8+ T cells was observed in peripheral blood. In addition, the in vitro leishmanicidal action of P-MAPA was investigated using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and no leishmanicidal activity was detected. These findings suggest that P-MAPA has potential as an immunotherapeutic drug in canine visceral leishmaniasis, since it assists in reestablishing partial immunocompetence of infected dogs. © 2013 Elsevier B.V.

Expressão da glicoproteína-p e da mrp1 em tecidos de cães portadores de leishmaniose visceral

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Leishmaniose visceral canina-LVC, em Campina Grande-PB/Brasil: avalição epidemiológica e diagnóstica

Pós-graduação em Doenças Tropicais - FMB

Comparação entre os métodos de ELISA, imunofluorescência indireta e imunocromatografia para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)