Estudo da hemoglobina como adjuvante na infecção experimental de eqüinos, via intraperitoneal, com Escherichia coli e/ou Bacteroides fragilis

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Bacteroides fragilis endocarditis: a case report and review of literature

Endocarditis due to Bacteroides fragilis is a rare disorder. This article describes a case of Bacteroides fragilis endocarditis associated with portal and superior mesenteric venous thrombosis in a patient without preexisting valvular heart disease and review the cases of endocarditis due to this anaerobic bacterium in medical literature since 1980.

Bacteroides fragilis enterotoxin cleaves the zonula adherens protein, E-cadherin

Strains of Bacteroides fragilis associated with diarrheal disease (enterotoxigenic B. fragilis) produce a 20-kDa zinc-dependent metalloprotease toxin (B. fragilis enterotoxin; BFT) that reversibly stimulates chloride secretion and alters tight junctional function in polarized intestinal epithelial cells. BFT alters cellular morphology and physiology most potently and rapidly when placed on the basolateral membrane of epithelial cells, suggesting that the cellular substrate for BFT may be present on this membrane. Herein, we demonstrate that BFT specifically cleaves within 1 min the extracellular domain of the zonula adherens protein, E-cadherin. Cleavage of E-cadherin by BFT is ATP-independent and essential to the morphologic and physiologic activity of BFT. However, the morphologic changes occurring in response to BFT are dependent on target-cell ATP. E-cadherin is shown here to be a cellular substrate for a bacterial toxin and represents the identification of a mechanism of action, cell-surface proteolytic activity, for a bacterial toxin.

Reclassification of Bacteroides putredinis (Weinberg et al., 1937) in a New Genus Alistipes gen. nov., as Alistipes putredinis comb. nov., and description of Alistipes finegoldii sp nov., from human sources

During studies on the bacteriology of appendicitis in children, we often isolated from inflamed and non-inflamed tissue samples, an unusual bile-resistant pigment-producing strictly anaerobic gram-negative rod. Phenotypically this organism resembles members of Bacteroides fragilis group of species, as it is resistant to bile and exhibits a special-potency-disk pattern (resistance to vancomycin, kanamycin and colistin) typical for the B. fragilis group. However, the production of brown pigment on media containing haemolysed blood and a cellular fatty acid composition dominated by iso-C15:0, suggests that the organism most closely resembles species of the genus Porphyromonas. However, the unidentified organism differs from porphyromonads by being bile-resistant and by not producing butyrate as a metabolic end-product. Comparative 16S ribosomal RNA gene sequencing studies show the unidentified organism represents a distinct sub-line, associated with but distinct from, the miss-classified species Bacteroides putredinis. The clustering of the unidentified bacterium with Bacteroides putredinis was statistically significant, but they displayed >4% sequence divergence with each other. Chromosomal DNA-DNA pairing studies further confirmed the separateness of the unidentified bacterium and Bacteroides putredinis. Based on phenotypic and phylogenetic considerations, it is proposed that Bacteroides putredinis and the unidentified bacterium from human sources be classified in a new genus Alistipes, as Alistipes putredinis comb. nov. and Alistipes finegoldii sp. nov., respectively. The type strain of Alistipes finegoldii is CCUG 46020(T) (= AHN2437(T)).

Development of novel oral formulations prepared via hot melt extrusion for targeted delivery of photosensitizer to the colon

Colon-residing bacteria, such as vancomycin-resistant Enterococcus faecalis and Bacteroides fragilis, can cause a range of serious clinical infections. Photodynamic antimicrobial chemotherapy (PACT) may be a novel treatment option for these multidrug resistant organisms. The aim of this study was to formulate a Eudragit®-based drug delivery system, via hot melt extrusion (HME), for targeting colonic release of photosensitizer. The susceptibility of E. faecalis and B. fragilis to PACT mediated by methylene blue (MB), meso-tetra(N-methyl-4-pyridyl)porphine tetra-tosylate (TMP), or 5-aminolevulinic acid hexyl-ester (h-ALA) was determined, with tetrachlorodecaoxide (TCDO), an oxygen-releasing compound, added in some studies. Results show that, for MB, an average of 30% of the total drug load was released over a 6-h period. For TMP and h-ALA, these values were 50% and 16% respectively. No drug was released in the acidic media. Levels of E. faecalis and B. fragilis were reduced by up to 4.67 and 7.73 logs, respectively, on PACT exposure under anaerobic conditions, with increased kill associated with TCDO. With these formulations, photosensitizer release could potentially be targeted to the colon, and colon-residing pathogens killed by PACT. TCDO could be used in vivo to generate oxygen, which could significantly impact on the success of PACT in the clinic.

Antibioresistência em piómetra canina

Este estudo teve como objectivos, determinar quais são as entidades microbiológicas envolvidas no Complexo Hiperplasia Quística Endometrial - Piómetra, e eventualmente responsáveis por este tipo de patologia em Portugal, estabelecendo uma comparação com estudos prévios publicados que reflectem a realidade de outros países; determinar e documentar a ocorrência de fenómenos de resistência bacteriana para antibióticos utilizados por rotina, para terapia de situações clínicas de piómetra, no norte de Portugal; e ainda com base nos aspectos anteriores, concluir acerca do uso empírico e racional de antibióticos em situações de piómetra, identificando assim os agentes que não são eficazes no combate à infecção. As entidades envolvidas nesta patologia, são na sua maioria Escherichia coli, sendo isolada de 58% da população em estudo. No entanto, foram isoladas outras bactérias em menor número de amostras, que não tinham sido previamente identificadas como infectantes neste tipo de patologia. Pode destacar-se Peptostreptococcus anaerobius, Enterobacter aerogenes e Bacteroides fragilis. Embora com base numa amostra populacional estatisticamente não significativa, demonstrou-se no presente estudo, a ocorrência de resistência a antibióticos por parte dos microorganismos envolvidos nos quadros clínico de piómetra. Duas culturas revelaram-se multiresistentes, o que representa uma séria condicionante para sucesso terapêutico, e que pode apresentar repercussões a nível de Saúde Pública. Dos antibióticos que estavam descritos como eficazes, e que no presente estudo se demonstraram ineficazes no combate à infecção, destacam-se; a amoxicilina, a associação de amoxicilina e ácido clavulânico, a ampicilina, a cefalexina, a cefalotina, a cefazolina, a cefoxitina, a penicilina G e as sulfonamidas potenciadas.

Aspectos microbiológicos da bile de pacientes com suspeita de coledocolilitíase e suas repercussões no tratamento das infecções biliares

A infecção das vias biliares é uma doença freqüente com alta morbidade e mortalidade, que pode variar de 10 a 60% dependendo de sua gravidade. A causa mais comum desta infecção é a presença de cálculos na via biliar principal que propicia o surgimento de bacteriobilia. O profundo conhecimento das características microbiológicas da bile nos casos de coledocolitíase e infecção das vias biliares são fundamentais para o melhor diagnóstico desta infecção e escolha da antibioticoterapia a ser instituída. Assim, o objetivo deste estudo foi de caracterizar os principais aspectos microbiológicos da bile dos pacientes com e sem coledocolitíase e avaliar sua importância na escolha dos antimicrobianos para o tratamento da infecção das vias biliares. Foram analisados 33 pacientes que foram divididos em um grupo de 10 pacientes sem coledocolitíase (grupo controle) no momento da Colangiografia Endoscópica (CPER) e em outro grupo de 23 pacientes com coledocolitíase. A bile de todos os pacientes foi coletada no início do procedimento endoscópico, através de catater introduzido na via biliar. O exame de microscopia direta com coloração de Gram e as culturas da bile foram negativas nos 10 pacientes que não apresentaram coledocolitíase durante a CPER. Dos 23 pacientes com cálculos na via biliar principal, 19 (83%) apresentaram culturas positivas. Desses 19 pacientes com culturas de bile positivas, 18 (94,7%) apresentaram microorganismos detectáveis à microscopia direta com coloração de Gram. Apenas um paciente apresentou crescimento de germe anaeróbio (Bacteroides fragilis). O cultivo de 28 bactérias teve predominância de microorganismos Gram negativos (18 bactérias- 64,3%). Os germes isolados foram E. coli (9, 32,1%), Klebsiella pneumoniae (5, 17,9%), Enterococcus faecalis (5, 17,9%), Streptococcus alfa-haemoliticus (3, 10,7%), Streptococcus viridans (2, 7,1%), Enterobacter cloacae (2, 7,1%), Panteona aglomerans (1, 3,6%) e Pseudomonas aeruginosa (1, 3,6%). Todos os pacientes com microorganismos detectados pela microscopia direta com coloração de Gram tiveram crescimento bacteriano em suas culturas, por outro lado nenhum paciente com cultura negativa apresentou microoorganismos à microsopia direta ( p= 0,0005). Nesses casos, a microsopia direta apresentou uma especificidade de 100% e sensibilidade de 80%. A análise quantitativa das culturas da bile mostrou que das 19 culturas positivas, 12 (63,2%) tiveram pelo menos um germe com contagem superior a 105 ufc/ml. Todas as bactérias Gram positivas isoladas foram sensíveis à ampicilina, da mesma forma que todas as Gram negativas foram sensíveis aos aminoglicosídeos. Os achados deste estudo demonstram uma boa correlação entre a microscopia direta da bile com coloração de Gram e os achados bacteriológicos das culturas da bile coletada por colangiografia endoscópica retrógrada. O esquema terapêutico antimicrobiano tradicionalmente empregado em nosso hospital, que inclui a combinação de ampicilina e gentamicina, parece ser adequado, pois apresenta eficácia terapêutica contra os principais microorganismos responsáveis pela infecção das vias biliares.

Experimental peritonitis in horses. Hematological and biochemistry aspects

Dezesseis eqüinos adultos foram distribuídos aleatoriamente em 4 grupos (GI, GII, GIII e GIV) constituídos por quatro animais, recebendo cada grupo o seguinte inóculo por via intraperitoneal: GI (100 X 10(7) unidades formadoras de colônia (UFC) de Escherichia coli diluídos em 500 ml de solução salina 0,9% estéril); GII (100 X 10(7) UFC de Bacteroides fragilis diluídos em 500 ml de solução salina 0,9% estéril); GIII (100 X 10(7) UFC de Escherichia coli associados a 100 X 10(7) UFC de Bacteroides fragilis diluídos em 500 ml de solução salina 0,9% estéril); GIV (testemunho - 500 ml de solução salina 0,9% estéril). Leucopenia ocorreu em todos os animais inoculados com bactérias, nas primeiras seis horas após as inoculações. Posteriormente a este período, verificou-se em alguns eqüinos inoculados leucocitose. Os eqüinos inoculados com culturas puras de E. coli ou B. fragilis apresentaram peritonites brandas e autolimitantes, enquanto os inoculados com a associação destas bactérias, apresentaram alterações laboratoriais de maior intensidade e duração.

Amniotic Fluid Interleukin-1 Beta and Interleukin-6, but not Interleukin-8 Correlate with Microbial Invasion of the Amniotic Cavity in Preterm Labor

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Clinical aspects of experimental peritonitis in horses

Dezesseis eqüinos adultos foram distribuídos aleatoriamente em 4 grupos (GI, GII, GIII e GIV), constituídos por quatro animais, recebendo cada grupo o seguinte inóculo por via intraperitoneal: GI (100 X 10(7) unidades formadoras de colônia (UFC) de Escherichia coli diluídos em 500ml de salina 0,9%); GII (100 X 10(7) UFC de Bacteroides fragilis diluídos em 500ml de salina 0,9%); GIII (100 X 10(7) UFC de E. coli associados a 100 X 10(7) UFC de B. fragilis diluídos em 500ml de salina 0,9%); GIV (testemunho - 500ml de salina 0,9%). Aumento da sensibilidade e tensão da parede abdominal, diarréia, diminuição dos sons intestinais e aumento da freqüência cardíaca foram os sinais mais freqüentemente observados nos eqüinos inoculados com cepas bacterianas. Eqüinos inoculados com culturas puras de E. coli ou B. fragilis apresentaram peritonites brandas e autolimitantes, enquanto que os inoculados com a associação dessas bactérias apresentaram sinais de maior intensidade e duração.

Experimental peritonitis in horses: peritoneal fluid composition

Dezesseis eqüinos adultos foram aleatoriamente divididos em quatro grupos de quatro animais que receberam inoculação intraperitoneal das seguintes suspenções: grupo I, 100×10(7) unidades formadoras de colônias (CFU) de E. coli diluídas em 500ml de solução salina a 0,9%; grupo II, 100×10(7) CFU de Bacteroides fragilis em 500ml de solução salina a 0,9%; grupo III, 100×10(7) CFU de E. coli combinados com 100×10(7) CFU de B. fragilis em 500ml de solução salina a 0,9%; grupo IV, 500ml de solução salina a 0,9%. Observou-se aumento significativo do número de leucócitos no líquido peritoneal quatro horas após as inoculações dos animais dos grupos I e II, e oito horas após as inoculações dos animais do grupo III. A contagem mais elevada foi de 516×10³ leucócitos/mm³. Aumentos significativos nas concentrações de fibrinogênio (1g/dl) e proteína total (9,1%) foram também observados. Eqüinos inoculados com culturas puras, tanto de E. coli quanto de B. fragilis, apresentaram peritonites mais brandas e autolimitantes, enquanto que eqüinos inoculados com associação das duas bactérias apresentaram alterações laboratoriais com maior intensidade e duração.

Bacterial Pathogens Related to Chronic Suppurative Otitis Media in Individuals With Cleft Palate: Bacteriological Culture and Polymerase Chain Reaction

Objective: To characterize the microbial etiology of chronic suppurative otitis media comparing the methods of classical bacteriological culture and polymerase chain reaction.Design/Setting/Patients: Bacteriological analysis by classical culture and by molecular polymerase chain reaction of 35 effusion otitis samples from patients with cleft lip and palate attending the Hospital for Rehabilitation of Craniofacial Anomalies of the University of Sao Paulo, Bauru, Brazil.Interventions: Collection of clinical samples of otitis by effusion through the external auditory tube.Main Outcome Measure: Otolaryngologic diagnosis of chronic suppurative otitis media.Results: Positive cultures were obtained from 83% of patients. Among the 31 bacterial lineages the following were isolated. In order of decreasing frequency: Pseudomonas aeruginosa (54.9%), Staphylococcus aureus (25.9%), and Enterococcus faecalis (19.2%). No anaerobes were isolated by culture. The polymerase chain reaction was positive for one or more bacteria investigated in 97.1% of samples. Anaerobe lineages were detected by the polymerase chain reaction method, such as Fusobacterium nucleatum, Bacteroides fragilis, and Peptostreptococcus anaerobius.Conclusions: Patients with cleft lip and palate with chronic suppurative otitis media presented high frequency of bacterial infection in the middle ear. The classical bacteriological culture did not detect strict anaerobes, whose presence was identified by the polymerase chain reaction method.

Occurrence and antimicrobial susceptibility of Porphyromonas spp. and Fusobacterium spp. in dogs with and without periodontitis

The occurrence of Porphyromonas gulae, Porphyromonas macacae, Fusobacterium nucleatum and Fusobacterium canifelinum in subgingival plaque from dogs with and without periodontitis as well as their antimicrobial susceptibility were evaluated. From 50 dogs with periodontitis were identified 38 P. gulae, 8 P. macacae, 26 F. nucleatum and 15 F. canifelinum, and from 50 dogs without periodontitis were identified 15 P. gulae, 12 F. nucleatum and 11 F. canifelinum. All strains were susceptible to most of the antibiotics tested, however, different resistance rates to clarithromycin, erythromycin and metronidazole among strains were observed. The role of P. gulae, P. macacae, F. nucleatum and F. canifelinum in periodontal disease of household pets needs to be defined to a better prevention and treatment of the canine periodontitis. (c) 2012 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Non-enterobacterial endotoxins stimulate human coronary artery but not venous endothelial cell activation via toll-like receptor 2

To determine whether non-enterobacterial endotoxins, which are likely to constitute the majority of the circulating endotoxin pool, may stimulate coronary artery endothelial cell activation. Interleukin-8 secretion, monocyte adhesion, and E-selectin expression were measured in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) and coronary artery endothelial cells (HCAECs) challenged in vitro with highly purified endotoxins of common host colonisers Escherichia coli, Porphyromonas gingivalis, Pseudomonas aeruginosa, and Bacteroides fragilis. HCAECs but not HUVECs expressed Toll-like receptor (TLR)-2 and were responsive to non-enterobacterial endotoxins. Transfection of TLR-deficient HEK-293 cells with TLR2 or TLR4/MD2 revealed that while E. coli endotoxin utilised solely TLR4 to signal, the endotoxins, deglycosylated endotoxins (lipid-A), and whole heat-killed bacteria of the other species stimulated TLR2-but not TLR4-dependent cell-signalling. Blockade of TLR2 with neutralizing antibody prevented HCAEC activation by non-enterobacterial endotoxins. Comparison of each endotoxin with E. coli endotoxin in limulus amoebocyte lysate assay revealed that the non-enterobacterial endotoxins are greatly underestimated by this assay, which has been used in all previous studies to estimate plasma endotoxin concentrations. Circulating non-enterobacterial endotoxins may be an underestimated contributor to endothelial activation and atherosclerosis in individuals at risk of increased plasma endotoxin burden.