Analyse des alt��rations de l'immunit�� T-d��pendante �� l'��gard de Candida albicans chez la souris transg��nique exprimant le g��nome du VIH-1

La candidose oro-pharyng��e (COP) est l���infection fongique opportuniste la plus commune chez les individus infect��s par le VIH-1. La production des cytokines Il-17 et Il-22 par les lymphocytes Th17 est importante lors de la r��solution de la COP, puisque ces cytokines induisent la production de peptides antifongiques et le recrutement des neutrophiles polymorphonucl��aires. Toutefois, les lymphocytes Th17 sont pr��f��rentiellement d��pl��t��s chez les individus infect��s par le VIH-1. Le mod��le de COP chez la souris transg��nique (Tg) CD4C/HIVMutA, exprimant les g��nes nef, env et rev du VIH-1, permettra de d��terminer si des alt��rations quantitatives et/ou fonctionnelles des sous-populations de lymphocytes T CD4+ causent la sensibilit�� �� la candidose. Les sous-populations Th1, Th2, Th1Th17, Th17 et Treg, ainsi que leurs pr��curseurs, les lymphocytes T CD4+ na��fs, sont s��v��rement d��pl��t��es dans les ganglions cervicaux de la souris Tg. Cependant, les lymphocytes T CD4+ na��fs conservent la capacit�� �� se diff��rencier in vitro en pr��sence de cytokines polarisantes et �� produire les cytokines typiques des diverses sous-populations. De plus, les cytokines requises pour la polarisation des lymphocytes T CD4+ na��fs n�����taient pas r��duites dans les ganglions cervicaux des souris Tg, 7 jours apr��s le d��but de l���infection. Les g��nes S100a8, Ccl20, Il17 et Il22 ��taient surexprim��s en r��ponse �� la COP chez la souris non-Tg, mais pas chez la souris Tg. Le traitement de souris Tg infect��es �� l���aide de la combinaison des cytokines Il-17 et Il-22 r��duit significativement la charge fongique buccale de C. albicans et le nombre d���hyphes dans l�����pith��lium de la langue et restaure la capacit�� �� surexprimer des g��nes S100a8, Ccl20 et Il22. Ces r��sultats d��montrent que la perturbation de l���induction de l���immunit�� inn��e par l���Il-17 et l���Il-22 augmente la susceptibilit�� �� la COP chez la souris Tg.

Lupus nephritis: an overview of recent findings

Lupus nephritis (LN) is one of the most serious complications of systemic lupus erythematosus (SLE) since it is the major predictor of poor prognosis. In susceptible individuals suffering of SLE, in situ formation and deposit of immune complexes (ICs) from apoptotic bodies occur in the kidneys as a result of an amplified epitope immunological response. IC glomerular deposits generate release of proinflammatory cytokines and cell adhesion molecules causing inflammation. This leads to monocytes and polymorphonuclear cells chemotaxis. Subsequent release of proteases generates endothelial injury and mesangial proliferation. Presence of ICs promotes adaptive immune response and causes dendritic cells to release type I interferon. This induces maturation and activation of infiltrating T cells, and amplification of Th2, Th1 and Th17 lymphocytes. Each of them, amplify B cells and activates macrophages to release more proinflammatory molecules, generating effector cells that cannot be modulated promoting kidney epithelial proliferation and fibrosis. Herein immunopathological findings of LN are reviewed.

Avalia����o da express��o das isoformas da mol��cula HLA-G e do perfil da resposta imune em pacientes com l��pus eritematoso sist��mico juvenil (LESJ)

O l��pus eritematoso sist��mico juvenil (LESJ) �� uma doen��a inflamat��ria cr��nica causada pela produ����o de autoanticorpos, que reconhecem como estranhos ant��genos pr��prios do organismo, e possuem alta morbidade e mortalidade em rela����o �� doen��a no adulto. Em sua patog��nese est��o envolvidos fatores ambientais, hormonais, imunol��gicos e gen��ticos. Estudos de associa����o gen��tica demonstraram que a susceptibilidade ao l��pus �� polig��nica, e entre os genes envolvidos est�� o HLA-G que �� respons��vel pela regula����o da resposta imune. No estudo, foi analisada a express��o de isoforma da mol��cula HLA-G e observamos o perfil de resposta imune em pacientes com l��pus eritematoso sist��mico juvenil. Os pacientes que participaram do estudo foram selecionados no servi��o de Reumatologia do Hospital das Cl��nicas e foi coletado sangue perif��rico de 10 pacientes no momento ativo e inativo do LESJ. O estudo comparou a express��o do mRNA do HLA-G5, IL-10 e TNF, os n��veis plasm��ticos de sHLA-G e citocinas Th1, Th2 e Th17 entre os grupos com a doen��a ativa, inativa e o grupo de crian��as saud��veis aplicando os testes de Mann-Whitney U e Kruskal-Wallis. Os resultados mostraram que pacientes com LESJ ativo apresentaram n��veis elevados das citocinas IL-10 (p=0,004) e IL-6 (p=0,011), al��m de apresentarem express��o de mRNA do TNF mais elevada em rela����o ao grupo inativo (p0,05). Mesmo com n��mero reduzido, foi poss��vel caracterizar que houve mudan��a do perfil de citocinas durante a ativa����o do LESJ, e a rela����o dessa ativa����o com a express��o de HLA-G sol��vel, al��m de servir como base para proposta de um modelo de regula����o imunol��gica, que poder�� ser validado em futuros experimentos

MyD88 Signaling Is Required for Efficient Innate and Adaptive Immune Responses to Paracoccidioides brasiliensis Infection

The mechanisms that govern the initial interaction between Paracoccidioides brasiliensis, a primary dimorphic fungal pathogen, and cells of the innate immunity need to be clarified. Our previous studies showed that Toll-like receptor 2 (TLR2) and TLR4 regulate the initial interaction of fungal cells with macrophages and the pattern of adaptive immunity that further develops. The aim of the present investigation was to assess the role of MyD88, an adaptor molecule used by TLRs to activate genes of the inflammatory response in pulmonary paracoccidioidomycosis. Studies were performed with normal and MyD88(-/-) C57BL/6 mice intratracheally infected with P. brasiliensis yeast cells. MyD88(-/-) macrophages displayed impaired interaction with fungal yeast cells and produced low levels of IL-12, MCP-1, and nitric oxide, thus allowing increased fungal growth. Compared with wild-type (WT) mice, MyD88(-/-) mice developed a more severe infection of the lungs and had marked dissemination of fungal cells to the liver and spleen. MyD88(-/-) mice presented low levels of Th1, Th2, and Th17 cytokines, suppressed lymphoproliferation, and impaired influx of inflammatory cells to the lungs, and this group of cells comprised lower numbers of neutrophils, activated macrophages, and T cells. Nonorganized, coalescent granulomas, which contained high numbers of fungal cells, characterized the severe lesions of MyD88(-/-) mice; the lesions replaced extensive areas of several organs. Therefore, MyD88(-/-) mice were unable to control fungal growth and showed a significantly decreased survival time. In conclusion, our findings demonstrate that MyD88 signaling is important in the activation of fungicidal mechanisms and the induction of protective innate and adaptive immune responses against P. brasiliensis.

Efeitos do potencial probi��tico Enterococcus faecium 32 e de sua associa����o com o extrato da alga marinha Caulerpa mexicana no tratamento de colite experimental murina

Ulcerative colitis comprising an inflammatory bowel disease, whose most severe consequence is the development of intestinal neoplasia. The drugs currently used to treat the disease trigger a variety of serious adverse effects and are not effective in many cases. Recent studies demonstrated the effectiveness of natural products for the treatment of inflammatory processes. Seaweed extracts and their purified products have shown protective effects in models of inflammation and the association of traditional therapies with probiotics has significantly improved the clinical symptoms of ulcerative colitis. Therefore, the aims of this study include evaluating the potential effects of the use of probiotic strain Enterococcus faecium 32 (Ef32), the methanolic extract of the green seaweed Caulerpa mexicana (M.E.) and their concomitant administration in a murine model of colitis induced by dextran sodium sulfate (DSS). Accordingly, C57BL /6 mice were pretreated orally with Ef32 (109 CFU/ml) for seven days. In the seven days following, the colitis was induced by administration of 3% DSS (w/v) diluted in the animals drinking water. During this period, animals were treated daily with Ef32 and the M.E. (2.0 mg/kg) every other day by intravenous route. The development of colitis was monitored by the disease activity index (DAI), which takes into account the loss of body weight, consistency and presence of blood in stools. After euthanasia, the colon was removed, its length measured and tissue samples were destined for histological analysis and culture for cytokine quantification. The levels of cytokines in the culture supernatant of the colon were measured by ELISA. The treatments with the probiotic Ef32 or the M.E. alone or the combination of these two substances provoked significant improvement as to weight loss and DAI, and prevented the shortening of the colon in response to DSS. The isolated treatments triggered a slight improvement in intestinal mucosal tissue damage. However, their combination was able to completely repair the injury triggered by DSS. The association was also able to reduce the levels of all the cytokines analyzed (IFN-γ, IL-4, IL-6, IL-12, IL-17A and TNF-α). On the other hand, the treatment with Ef32 did not interfere with the levels of TNF-α, whereas treatment with M.E. did not alter the levels of IL-6. Moreover, the treatment with Ef32 not interferes in TNF-α levels, whereas treatment with M.E. did not alter the levels of IL-6. Therefore, the potential probiotic Ef32 and M.E. and especially when these samples were associated proved promising alternatives in the treatment of ulcerative colitis as demonstrated in an experimental model because of its beneficial effects on morphological and clinical parameters, and by reducing the production of proinflammatory cytokines of Th1, Th2 and Th17

Influ��ncia do receptor Toll-like 2 na defesa do hospedeiro contra o fungo Sporothrix schenckii

Funda����o de Amparo �� Pesquisa do Estado de S��o Paulo (FAPESP)

Analysis of Toll-Like Receptors, iNOS and Cytokine Profiles in Patients with Pulmonary Tuberculosis during Anti-Tuberculosis Treatment

Funda����o de Amparo �� Pesquisa do Estado de S��o Paulo (FAPESP)

Imunologia das intera����es materno-fetais no diabete e na hiperglicemia gestacional leve

Funda����o de Amparo �� Pesquisa do Estado de S��o Paulo (FAPESP)

An��lise microbiol��gica e imunologica do fluido gengival e proteoma salivar de individuos com Sindrome de Down com doen��a periodontal

P��s-gradua����o em Odontologia - FOAR

Studying MHC I-dependent CD8 + T cell responses in the model of murine cutaneous leishmaniasis

Der Ausheilung von Infektionen mit Leishmania major liegt die Sekretion von IFN-��� von sowohl CD4+ als auch CD8+ T Zellen zugrunde.rnAktuell konnte in der Literatur nur ein Epitop aus dem parasit��ren LACK Protein f��r eine effektive CD4+ T Zell-vermittelte Immunantwort beschrieben werden. Das Ziel der vorliegenden Arbeit bestand daher darin, m��gliche MHC I abh��ngige CD8+ T Zell Antworten zu untersuchen. rnF��r diesen Ansatz wurde als erstes der Effekt einer Vakzinierung mit LACK Protein fusioniert an die Protein-Transduktionsdom��ne des HIV-1 (TAT) analysiert. Die Effektivit��t von TAT-LACK gegen��ber CD8+ T Zellen wurde mittels in vivo Protein-Vakzinierung von resistenten C57BL/6 M��usen in Depletions-Experimenten gezeigt.rnDie Prozessierung von Proteinen vor der Pr��sentation immunogener Peptide gegen��ber T Zellen ist unbedingt erforderlich. Daher wurde in dieser Arbeit die Rolle des IFN-���-induzierbaren Immunoproteasoms bei der Prozessierung von parasit��ren Proteinen und Pr��sentation von Peptiden gebunden an MHC I Molek��le durch in vivo und in vitro Experimente untersucht. Es konnte in dieser Arbeit eine Immunoproteasom-unabh��ngige Prozessierung aufgezeigt werden.rnWeiterhin wurde Parasitenlysat (SLA) von sowohl Promastigoten als auch Amastigoten fraktioniert. In weiterf��hrenden Experimenten k��nnen diese Fraktionen auf immunodominante Proteine/Peptide hin untersucht werden. rnLetztlich wurden Epitop-Vorhersagen f��r CD8+ T Zellen mittels computergest��tzer Software von beiden parasit��ren Lebensformen durchgef��hrt. 300 dieser Epitope wurden synthetisiert und werden in weiterf��hrenden Experimenten zur Charakterisierung immunogener Eigenschaften weiter verwendet. rnIn ihrer Gesamtheit tr��gt die vorliegende Arbeit wesentlich zum Verst��ndnis ��ber die komplexen Mechanismen der Prozessierung und letztendlich zur Identifikation von m��glichen CD8+ T Zell Epitopen bei. Ein detailiertes Verst��ndnis der Prozessierung von CD8+ T Zell Epitopen von Leishmania major ��ber den MHC Klasse I Weg ist von h��chster Bedeutung. Die Charakterisierung sowie die Identifikation dieser Peptide wird einen ma��geblichen Einfluss auf die weiteren Entwicklungen von Vakzinen gegen diesen bedeutenden human-pathogenen Parasiten mit sich bringen. rn

Identifizierung und ��berexpression immunregulatorischer Molek��le in dendritischen Zellen zur gezielten Modulation ihrer T-Zell-stimulierenden Eigenschaften

Die Modifizierung von dendritischen Zellen (DCs) in vitro erfolgt meist durch eine Behandlung mit Mediatoren, die den Aktivierungszustand sowie die T-Zell-polarisierenden DC-Eigenschaften ver��ndern. In dieser Doktorarbeit sollten zun��chst mediatorinduzierte tolerogene Schl��sselmolek��le identifiziert werden. Als Modell wurden murine Knochenmarkszellen unter DC-differenzierenden Bedingungen mit dem Glucocorticoid Dexamethason (DEX) behandelt. Die generierten DEX-APCs (antigenpr��sentierende Zellen) zeigten einen protolerogenen, weitgehend maturierungsresistenten Ph��notyp und eine gesteigerte Expression toleranzassoziierter Molek��le. DEX-APCs induzierten in vitro aus CD25+ depletierten allogenen T-Zellen de novo CD4+ und CD8+ regulatorische T-Zellen (Tregs). Basierend auf diesen Ergebnissen und Literaturstudien wurden protolerogene Molek��le f��r eine ��berexpression in DCs selektiert. Da DCs non-viral kaum transfizierbar sind, wurde die lentivirale Transduktion von DCs optimiert, wodurch Effizienzen bis zu 95% erreicht werden konnten. Der mit der Transduktion assoziierte physikalische Stress resultierte in einer partiellen DC-Aktivierung. Trotzdessen zeigten DCs, die die Zytokine IL-10 oder IL-21 ��berexprimierten, einen protolerogenen Ph��notyp und induzierten in vitro Tregs. Beide DC-Populationen reduzierten im therapeutischen Ansatz im murinen Krankheitsmodell der Kontaktallergie haptenspezifisch die Ohrschwellungsreaktion. Auch DCs, die andere Zytokine, intrazellul��re Proteine oder Oberfl��chenrezeptoren mit protolerogenen Eigenschaften ��berexprimierten, wiesen eine jeweils spezifische Genexpressionssignatur auf. Diese DC-Populationen waren zumeist durch eine verminderte allogene T-Zell-Aktivierungskapazit��t gekennzeichnet und ver��nderten die Th1-/Th2-Zytokinmuster in kokultivierten T-Zellen.

Funktionelle Charakterisierung der Casein Kinase 2 in der Etablierung und Aufrechterhaltung peripherer Toleranz durch dendritische Zellen

Dendritische Zellen (DCs) nehmen eine Schl��sselrolle in unserem Immunsystem ein, indem DCs sowohl Immunit��t, als auch Toleranz induzieren k��nnen. Im Falle der Immunit��t sind DCs in der Lage die Differenzierung der verschiedenen T-Helferzellen, wie Th1-, Th2- und Th17-Zellen zu steuern und tragen so zu der Qualit��t einer Immunantwort bei. Auf der anderen Seite k��nnen DCs in Gegenwart von TGF-��, IDO und Retins��ure die Differenzierung von regulatorischen T-Zellen induzieren und tragen somit zur Aufrechterhaltung der peripheren Toleranz bei. Insbesondere in den Darm-assoziierten lymphatischen Geweben (GALT) m��ssen DCs unverh��ltnism����ige Immunantworten gegen harmlose Antigene aus der Nahrung und kommensale Bakterien verhindern, w��hrend gegen Pathogene sch��tzende Immunantworten induziert werden m��ssen. Auf Grund dieser entgegengesetzten Funktionen der DCs wollten wir die molekularen Mechanismen der DCs untersuchen, die der Regulation von Immunit��t und Toleranz zu Grunde liegen. Insbesondere der Wnt-Signalweg ist f��r die Aufrechterhaltung der peripheren Toleranz im GALT von Bedeutung. Da die Casein Kinase 2 in diesem Signalweg entscheidend beteiligt ist, haben wir die CK2-Funktion konditionell, unter der Kontrolle des CD11c-Promotors, deletiert. Hierf��r haben wir CD11c-cre M��use mit M��usen verpaart, welche ein von loxP-Signalsequenzen flankiertes Ck2�� Gen (CK2��-fl/fl) tragen. Die konditionelle Deletion der CK2-Funktion in DCs, f��hrte zu einer verst��rkten Expression der kostimulatorischen Molek��le (wie CD40, CD80, CD86) und der Zytokine IL-6 und IL-12 unter ���steady-state��� Bedingungen. Detaillierte Untersuchungen der T-Zellen in CD11c-cre x CK2��-fl/fl M��usen zeigte eine deutlich reduzierte naive T-Zellpopulation, einhergehend mit einer erh��hten Th1- und Th17-Differenzierung. Speziell in den mesenterialen Lymphknoten konnte eine h��here Frequenz von T-bet+ und Ror��t+ CD4+ T-Zellen gefunden werden, welche gro��e Mengen der Zytokine IFN-�� und IL-17 nach ex vivo Stimulation produzierten. Weiterf��hrende in vivo Versuche, hier wurde das Modell der oralen Toleranz gew��hlt, zeigten das eine CK2-Deletion in DCs die Induktion einer oralen Toleranz verhindert. Unsere Daten zeigen eindeutig, dass die CK2 entscheidend in der Regulation der DC Hom��ostase und der Aufrechterhaltung der peripheren Toleranz beteiligt ist.

Antigenspezifische DNA-Immunisierung in Kombination mit IDO-kodierenden Plasmiden zur Therapie der experimentellen Typ I-Allergie

Derzeit stellt die allergenspezifische Immuntherapie die einzige nicht allein antisymptomatische Behandlungsform zur langfristigen Therapie von Typ I-Allergien dar, welche grundlegende ��nderungen im immunologischen Geschehen induziert. Sie ist jedoch verbesserungsw��rdig in Bezug auf Behandlungsdauer, Erfolgschancen und Nebenwirkungen. Daher wurde in dieser Arbeit eine Strategie zur Therapie von Typ I-Allergien entwickelt und evaluiert, welche auf der Inhibition allergenspezifischer T-Zellen durch Dendritische Zellen (DC), die selektiv nach DNA-Immunisierung sowohl das relevante Allergen als auch Indolamin 2,3-dioxygenase (IDO) konstitutiv produzieren, basiert. IDO ist ein Enzym aus dem Tryptophan-Stoffwechsel, dessen Produktion durch DC einen lokalen immunsuppressiven Mechanismus induziert und in verschiedenen Situationen mit der Induktion peripherer Toleranz assoziiert ist. Zun��chst wurden Plasmide hergestellt, die entweder IDO alleine oder IDO zusammen mit dem Antigen unter der Kontrolle des ubiquit��r aktiven CMV- bzw. des DC-spezifischen Fascin-Promotors kodieren. Die ��berpr��fung der IDO-Expression durch die monocistronischen Plasmide anhand von Transfektionsexperimenten in vitro ergab, dass die IDO-Expression unter der Kontrolle des CMV-Promotors sehr viel st��rker ausfiel als unter der Kontrolle des Fascin-Promotors. Nach Transfektion mit den bicistronischen Vektoren, in denen die Transgene f��r das Antigen und IDO durch eine IRES-Sequenz verbunden waren, war die IDO-Expression jedoch insgesamt sehr schwach. Im Rahmen der ��berpr��fung der Funktionalit��t der IDO-Expressionplasmide in vivo unter Verwendung der Genpistole wurden daher lediglich Plasmide getestet, die alleine IDO unter der Kontrolle des CMV-Promotors bzw. des Fascin-Promotors kodieren. Auch in vivo wurde eine st��rkere IDO-Expression nach biolistischer Transfektion mit solchen Vektoren beobachtet, in denen der CMV-Promotor zur Expressionskontrolle verwendet wurde. Die Analyse des Einflusses einer Koexpression von IDO auf die durch biolistische Immunisierung mit einem antigenkodierenden Vektor induzierte systemische Immunantwort offenbarte einen inhibitorischer Effekt f��r den Fall, dass die Antigenproduktion mittels des Fascin-Promotors auf DC fokussiert war und die Expression des koapplizierten IDO-Transgens unter der Kontrolle des CMV-Promotors stand. In diesem Fall wurde eine Reduktion der antigenspezifischen IgG1- und IgG2a-Produktion, eine verringerte Sekretion von IFN-y durch restimulierte Milz- und Lymphknotenzellen sowie eine Reduktion der Zahl antigenspezifischer CD8+ Effektor-T-Zellen nachgewiesen. Im Mausmodell der IgE-vermittelten Typ I-Allergie wurde weiterhin gezeigt, dass nach prophylaktischer biolistischer Vakzinierung unter Verwendung dieser Vektorkombination eine Inhibition der durch die Vakzinierung bedingten antigenspezifischen Th1-Immunantwort ausgel��st wurde. Die Suppression der Th2-Antwort, welche durch Transfektion mit dem Antigenkodierenden Vektor unter Kontrolle des Fascin-Promotors bewirkt wurde, wurde durch Kotransfektion mit den IDO-kodierenden Vektoren aufrecht erhalten.

Induktion tolerogener dendritischer Zellen zur Suppression von experimenteller autoimmuner Enzephalomyelitis und Kontaktallergie

Dendritische Zellen (DC) spielen als professionelle antigenpr��sentierende Zellen (APC) eine zentrale Rolle in der Aktivierung und Regulierung antigenspezifischer Immunantworten. Aus diesem Grund wird der therapeutische Einsatz von DC zur Behandlung von Autoimmunerkrankungen und Allergien sowie zur Tumorbek��mpfung erforscht. Im ersten Teil der vorliegenden Arbeit untersuchten wir das Potenzial einer biolistischen DNA-Vakzinierung zur Induktion tolerogener DC in vivo. Im Tiermodell der Myelin-Oligodendrozyten-Glykoprotein Peptid 35-55 (MOGp35-55) induzierten experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) sollte mittels pr��ventiver biolistischer Kovakzinierung von Plasmid-DNA kodierend f��r MOG und die immunregulatorischen Zytokine TGF�� oder IL-10 eine protektive Immunit��t induziert werden. Die MOG-Expression stand dabei entweder unter der Kontrolle des ubiquit��r aktiven CMV-Promotors oder des murinen Fascin-Promotors, um eine ektopische MOG-Expression spezifisch in dermalen DC und Langerhanszellen zu erreichen. Dass MOGp35-55-pr��sentierende DC nach biolistischer DNA-Vakzinierung von der Haut in die drainierenden Lymphknoten migrieren und dort T-Zellen aktivieren, konnte im Vorfeld anhand einer substanziellen Proliferation von MOGp35-55-reaktiven 2D2 T-Zellen nachgewiesen werden. Im pr��ventiven Ansatz der MOGp35-55-induzierten EAE zeigten M��use, die mit MOG-kodierenden Plasmiden biolistisch transfiziert wurden, eine leicht reduzierte EAE-Symptomatik. Die Kotransfektion von MOG und TGF�� f��hrte zu einer Verst��rkung der EAE-Suppression ��� unabh��ngig davon, ob die MOG-Expression unter der Kontrolle des CMV- oder des Fascin-Promotors stand. Interessanterweise resultierte die Koapplikation von MOG- und IL-10-kodierender Plasmid-DNA nur bei DC-fokussierter MOG-Expression zu reduzierter EAE-Symptomatik. F��r biolistische DNA-Vakzinierungen stellt somit der Fascin-Promotor eine potente Alternative zu viralen Promotoren dar. Entsprechend der milderen EAE-Symptome beobachteten wir bei behandelten EAE-M��usen einen geringeren Grad an Demyelinisierung sowie eine reduzierte Infiltration des ZNS mit IFN��-produzierenden CD4+ Th1- und IL-17-produzierenden CD4+ Th17-Zellen. Desweiteren zeigten Milzzellen ex vivo nach MOGp35-55-Restimulation eine inhibierte Proliferation und eine signifikant reduzierte IFN��- und IL-17-Zytokinproduktion. ��berraschenderweise ging die antigenspezifische Immunsuppression nicht mit der Expansion von Foxp3+ regulatorischen T-Zellen einher. Da die Milzen aber erh��hte Mengen an CD8+IFN��+ T-Zellen aufweisen, k��nnte ein zytotoxisch-suppressiver Mechanismus f��r die Inhibition der Th1- und Th17-Immunantwort verantwortlich sein. Nachfolgende Untersuchungen sind notwendig, um die induzierten immunologischen Mechansimen mittels biolistischer DNA-Vakzinierung aufzukl��ren. Der zweite Teil der Arbeit befasst sich mit der Generierung von tolerogenen DC in vitro. Daf��r wurden murine Knochenmarkszellen unter DC-differenzierenden Bedingungen in Gegenwart des synthetischen Glucocorticoids Dexamethason (DEX) kultiviert. Die DEX-Zugabe f��hrte zur Differenzierung von APC mit geringer CD11c-Expression. DEX-APC waren in vitro weitestgehend gegen LPS stimulierungsresistent und zeigten eine reduzierte Expression von MHC-II und den kostimulatorischen Molek��len CD80, CD86 und CD40. Ihrem tolerogenen Ph��notyp entsprechend besa��en DEX-APC ein geringeres syngenes T-Zellstimulierungspotenzial als unbehandelte BM-DC. Anhand der erh��hten Oberfl��chenexpression von CD11b, GR1 und F4/80 besteht eine ph��notypische ��hnlichkeit zu myeloiden Suppressorzellen. Die F��higkeit von DEX-APC in vivo antigenspezifische Toleranz zu induzieren, wurde durch einen therapeutischen Ansatz im murinen Krankheitsmodell der Kontaktallergie ��berpr��ft. Die therapeutische Applikation von DEX-APC f��hrte hierbei im Vergleich zur Applikation von PBS oder unbehandelten BM-DC zu einer signifikant reduzierten Ohrschwellungsreaktion. Zusammenfassend demonstrieren die Ergebnisse dieser Arbeit, dass potente tolerogene DC sowohl in vivo als auch in vitro induziert werden k��nnen. Dass diese Zellpopulation effektiv antigenspezifische Immunreaktionen supprimieren kann, macht sie zu einem vielversprechenden Werkzeug in der Behandlung von Autoimmunerkrankungen und Allergien.rn

The sphingosine kinase 1 and S1P1 axis specifically counteracts LPS-induced IL-12p70 production in immune cells of the spleen

Sphingosine-1-phosphate (S1P) has been implicated in angiogenesis, inflammation, cancerogenesis, neurological excitability and immune regulation and is synthesized by two different sphingosine kinases (SphK). It was suggested that mice lacking the gene for SphK1 exhibit no obvious phenotype, because SphK2 compensates for its absence. However, recent investigations revealed that under challenge SphK1 contributed to pro-inflammatory processes favoring Th2 and Th17 rather than Th1-type reactions. To investigate the immune modulatory role of SphK1 as opposed to SphK2 specifically for the Th1 propagating IL-12p70 we compared WT and SphK1(-/-) splenocytes and Flt3-ligand differentiated BMCs of WT and SphK1(-/-), representing dendritic cells as major producers of IL-12p70, incubated with LPS. We determined the impact on IL-12p70 in comparison to other inflammatory cytokines, and on DC and macrophage surface marker expression, SphK mRNA, protein expression and enzymatic activity in splenocytes. Our data demonstrated that SphK1 deficiency enhanced LPS-induced IL-12p70 production although SphK2 was present. To further characterize SphK1-dependent IL-12p70 regulation we exogenously applied S1P, SEW2871 and the new potent S1P1 agonist CYM5442. Both S1P and S1P1-specific analogs fully compensated the increase of IL-12p70 production in SphK1-deficient splenocytes. The use of pertussis toxin, to block G(i)-coupled signaling downstream of S1P1, again increased IL-12p70 and neglected the compensation achieved by addition of S1P and S1P1 agonists pointing on the importance of this specific S1P-receptor. Given that, in parallel to a prominent IL-12p35 increase following LPS stimulation, LPS also enhanced SphK expression and total SphK activity, we concluded that SphK1-derived S1P acting via S1P1 is a major mechanism of this negative IL-12p70 feedback loop, which did not affect other cytokines. Moreover, our data showed that SphK2 activity failed to compensate for SphK1 deficiency. These findings clearly point to a divergent and cytokine-specific impact of immune cell SphK1 and SphK2 in chronic inflammation and cancer.