An unexpected role of semaphorin3a-neuropilin-1 signaling in lymphatic vessel maturation and valve formation.

RATIONALE: Lymphatic vasculature plays important roles in tissue fluid homeostasis maintenance and in the pathology of human diseases. Yet, the molecular mechanisms that control lymphatic vessel maturation remain largely unknown. OBJECTIVE: We analyzed the gene expression profiles of ex vivo isolated lymphatic endothelial cells to identify novel lymphatic vessel expressed genes and we investigated the role of semaphorin 3A (Sema3A) and neuropilin-1 (Nrp-1) in lymphatic vessel maturation and function. METHODS AND RESULTS: Lymphatic and blood vascular endothelial cells from mouse intestine were isolated using fluorescence-activated cell sorting, and transcriptional profiling was performed. We found that the axonal guidance molecules Sema3A and Sema3D were highly expressed by lymphatic vessels. Importantly, we found that the semaphorin receptor Nrp-1 is expressed on the perivascular cells of the collecting lymphatic vessels. Treatment of mice in utero (E12.5-E16.5) with an antibody that blocks Sema3A binding to Nrp-1 but not with an antibody that blocks VEGF-A binding to Nrp-1 resulted in a complex phenotype of impaired lymphatic vessel function, enhanced perivascular cell coverage, and abnormal lymphatic vessel and valve morphology. CONCLUSIONS: Together, these results reveal an unanticipated role of Sema3A-Nrp-1 signaling in the maturation of the lymphatic vascular network likely via regulating the perivascular cell coverage of the vessels thus affecting lymphatic vessel function and lymphatic valve development.

Bioconjugated lanthanide luminescent helicates as multilabels for lab-on-a-chip detection of cancer biomarkers.

The lanthanide binuclear helicate [Eu(2)(L(C2(CO(2)H)))(3)] is coupled to avidin to yield a luminescent bioconjugate EuB1 (Q = 9.3%, tau((5)D(0)) = 2.17 ms). MALDI/TOF mass spectrometry confirms the covalent binding of the Eu chelate and UV-visible spectroscopy allows one to determine a luminophore/protein ratio equal to 3.2. Bio-affinity assays involving the recognition of a mucin-like protein expressed on human breast cancer MCF-7 cells by a biotinylated monoclonal antibody 5D10 to which EuB1 is attached via avidin-biotin coupling demonstrate that (i) avidin activity is little affected by the coupling reaction and (ii) detection limits obtained by time-resolved (TR) luminescence with EuB1 and a commercial Eu-avidin conjugate are one order of magnitude lower than those of an organic conjugate (FITC-streptavidin). In the second part of the paper, conditions for growing MCF-7 cells in 100-200 microm wide microchannels engraved in PDMS are established; we demonstrate that EuB1 can be applied as effectively on this lab-on-a-chip device for the detection of tumour-associated antigens as on MCF-7 cells grown in normal culture vials. In order to exploit the versatility of the ligand used for self-assembling [Ln(2)(L(C2(CO(2)H)))(3)] helicates, which sensitizes the luminescence of both Eu(III) and Tb(III) ions, a dual on-chip assay is proposed in which estrogen receptors (ERs) and human epidermal growth factor receptors (Her2/neu) can be simultaneously detected on human breast cancer tissue sections. The Ln helicates are coupled to two secondary antibodies: ERs are visualized by red-emitting EuB4 using goat anti-mouse IgG and Her2/neu receptors by green-emitting TbB5 using goat anti-rabbit IgG. The fact that the assay is more than 6 times faster and requires 5 times less reactants than conventional immunohistochemical assays provides essential advantages over conventional immunohistochemistry for future clinical biomarker detection.

Prox1 interacts with Atoh1 and Gfi1, and regulates cellular differentiation in the inner ear sensory epithelia.

Inner ear hair cells and supporting cells arise from common precursors and, in mammals, do not show phenotypic conversion. Here, we studied the role of the homeodomain transcription factor Prox1 in the inner ear sensory epithelia. Adenoviral-mediated Prox1 transduction into hair cells in explant cultures led to strong repression of Atoh1 and Gfi1, two transcription factors critical for hair cell differentiation and survival. Luciferase assays showed that Prox1 can repress transcriptional activity of Gfi1 independently of Atoh1. Prox1 transduction into cochlear outer hair cells resulted in degeneration of these cells, consistent with the known phenotype of Gfi1-deficient mice. These results together with the widespread expression of endogenous Prox1 within the population of inner ear supporting cells point to the role for Prox1 in antagonizing the hair cell phenotype in these non-sensory cells. Further, in vivo analyses of hair cells from Gfi1-deficient mice suggest that the cyclin-dependent kinase inhibitor p57(Kip2) mediates the differentiation- and survival-promoting functions of Gfi1. These data reveal novel gene interactions and show that these interactions regulate cellular differentiation within the inner ear sensory epithelia. The data point to the tight regulation of phenotypic characteristics of hair cells and supporting cells.

Embryonic vascular endothelial cells are malleable to reprogramming via Prox1 to a lymphatic gene signature.

BACKGROUND: In vivo studies demonstrate that the Prox1 transcription factor plays a critical role in the development of the early lymphatic system. Upon Prox1 expression, early lymphatic endothelial cells differentiate from the cardinal vein and begin to express lymphatic markers such as VEGFR-3, LYVE-1 and Podoplanin. Subsequent in vitro studies have found that differentiated vascular endothelial cells can be reprogrammed by Prox1 to express a lymphatic gene profile, suggesting that Prox1 can initiate the expression of a unique gene signature during lymphangiogenesis. While the in vitro data suggest that gene reprogramming occurs upon Prox1 expression, it is not clear if this is a direct result of Prox1 in vascular endothelial cells in vivo. RESULTS: Overexpression of Prox1 in vascular endothelial cells during embryonic development results in the reprogramming of genes to that of a more lymphatic signature. Consequent to this overexpression, embryos suffer from gross edema that results in embryonic lethality at E13.5. Furthermore, hemorrhaging and anemia is apparent along with clear defects in lymph sac development. Alterations in junctional proteins resulting in an increase in vascular permeability upon Prox1 overexpression may contribute to the complications found during embryonic development. CONCLUSION: We present a novel mouse model that addresses the importance of Prox1 in early embryonic lymphangiogenesis. It is clear that there needs to be a measured pattern of expression of Prox1 during embryonic development. Furthermore, Prox1 reprograms vascular endothelial cells in vivo by creating a molecular signature to that of a lymphatic endothelial cell.

Viikon albumi -haastattelu osana YleX-kanavan ohjelmatarjontaa

Nuorille suunnatut lähetysvirtaradioasemat käyvät Suomessa koko ajan tiukempaa taistelua kuuntelijoidensa huomiosta. Kuuntelijalukuja tarkastellaan miltei viikoittain ja kuuntelijoille tarjottavaa tuotetta pyritään kilpailun koventuessa koko ajan kehittämään. Yleisradiossa tapahtui viimeksi kanavauudistus vuonna 2003, jonka seurauksena Radiomafia -kanava sai uuden nimen YleX. Uudistuksessa radiokanavan kohdeyleisö tarkennettiin uudelleen ja kanavalla siirryttiin soittolistapohjaiseen radion tekemiseen, jossa kanavan musiikkia soitetaan etukäteen laaditulta soittolistalta. Kanavauudistusta kritisoitiin mediassa ja arkipuheessa, vaikka YleX -kanavan viikkokuulijamäärät lähtivät nousuun. Vieläkin YleX:n musiikkitarjontaa arvostellaan yksipuoliseksi ja samalla myös kanavan ohjelmat ovat joutuneet kritiikin kohteeksi. Opinnäytetyöni käsittelee viihdeartistihaastattelun tekemistä YleX-radiokanavalla. Työssäni YleX-kanavalla olen tehnyt viikoittaista viihdeartistihaastattelua, joka tunnetaan nimellä Viikon Albumi -haastattelu. Tämä haastattelu on osa arkipäiväistä YleX Tänään-ohjelmaa, missä sitä lähetetään maanantaisin kello 11.10. Omia haastatteluja reflektoimalla selvitin haastattelijan näkökulmasta, minkälaisin menetelmin nykyaikaisessa nopeatempoisessa lähetysvirtaradiossa syntyy mielenkiintoinen ja syvällinen viihdeartisti-haastattelu. Kuinka lähelle laadukkaan viihdehaastattelun tavoitteita on mahdollista päästä 15 minuutin Viikon Albumi -haastattelun aikana? Työssäni keskityn etenkin YleX:n haastatteluiden viihteelliseen luonteeseen ja nimenomaan viihdeartistin haastattelemiseen, jota on alan kirjallisuudessa käsitelty melko vähän. Viihdyttävän ja hauskan viihdeartistihaastattelun tekeminen on vaikea haastattelumuoto, jonka tekemistä pyrin valottamaan omien töideni avulla. Toivon, että työstäni on jatkossa hyötyä myös muille samankaltaisissa haastattelutilanteissa.

Putkistosuunnittelun tunnusluvut

Tässä insinöörityössä tutkittiin Neste Jacobsin toimeksiantamia laitossuunnitteluprojekteja ja tarkemmin niiden yleis- ja putkistosuunnittelua ja siinä yleisimmin käytettäviä tunnuslu-kuja. Tunnuslukujen selvittämistä varten valittiin neljä projektia, jotka olivat tyypillisiä teollisia investointiprojekteja, ja joista saadut tekniset tiedot olivat tuoreita. Valittujen projektien suunnittelutyö oli joko valmis tai valmistumassa tietojenkeruuhetkellä. Työssä tutkittiin projektien tunnuslukujen eroja ja niiden syitä. Projektien tekniset tiedot kerättiin niiden suunnittelutyössä mukana olleilta yrityksiltä. Alkutietojen hyväksymisen jälkeen niiden pohjalta laskettiin projektikohtaiset tunnusluvut Tunnuslukutietojen keräämisen tuli olla huolellista ja pitkäjänteistä, koska niistä saatuja tietoja käytetään tulevien projektien laajuuksien ja kustannuksien arviointiin. Työn tärkeimpiä tuloksia olivat yleisimmin käytettyjen tunnuslukujen saanti jokaisesta pro-jektista ja tietojen kokoaminen helposti luettavaan taulukkoon. Saatuja tuloksia voidaan pitää luotettavina ja niitä voidaan käyttää jatkossa arvioitaessa projektien laajuuksia.

Maston ympärille asennetun antenniryhmän säteilykuvion laskeminen

Tämän insinöörityön tavoitteena oli tehdä MATLAB-sovellus, jolla voidaan laskea ja tulostaa yleisradiotoiminnassa käytettävien dipolipaneeliantennien säteilykuvioita. Toinen tavoite oli saattaa tämän työn valvojan Antti Koivumäen vuoden 1980 diplomityön laskenta ja grafiikka modernimmalle tasolle. Aluksi työssä tarkasteltiin yleisiä asioita VHF- ja UHF-taajuuksien lähetystavoista ja lähetinantennityypeistä. Alussa käytiin läpi myös antennijoukon ja -ryhmän käsite. Seuraavaksi tutustuttiin tarkemmin lähetinantennien rakenteeseen ja ominaisuuksiin. Antennien ominaisuuksista tarkasteltiin säteilykuviota, suuntaavuutta, vahvistusta, hyötysuhdetta ja polarisaatiota. Näistä säteilykuvio oli tarkimman tutkinnan kohteena. Säteilykuvion laskeminen esitettiin kaavojen ja havainnoillistavien kuvien avulla. Lopuksi perehdyttiin antennin säteilykuvion laskemiseen tietokoneella, etenkin MATLABilla. Osuudessa tarkasteltiin graafisen käyttöliittymän tekemistä, laskennan suorittamista ja horisontaalisen säteilykuvion esittämistä graafisesti. Työn tuloksena saatiin tehdyksi MATLAB-sovellus, joka laskee elementtiantennin horisontaalisen säteilykuvion annettujen parametrien avulla ja tulostaa sen.

Haasteena J. S. Bachin 2. luuttusarja BWV 997 : oppimisprosessi

Tämä opinnäytetyö käsittelee Johann Sebastian Bachin toista luuttusarjaa Bwv 997 kokonaisvaltaisena oppimisprosessina. Tässä opinnäytetyössä reflektoin omaa tulkintaani kyseisestä teoksesta ja kerron kuinka tulkinta on saatettu muotoonsa ja miten olen onnistunut siinä. Pohdinnan kohteena ovat mm. se, miten rakennetta voidaan lähestyä, sekä mitkä seikat ovat esimerkiksi vaikuttaneet tempojen valintoihin, koristeluun sekä fraseeraukseen. Olen koonnut tähän työhön tarpeelliseksi kokemiani lainauksia barokkimusiikkia käsittelevästä kirjallisuudesta kuten Johann Matthesonin Der vollkommene Capellmeister vuodelta 1739, sekä C.P.E. Bachin Versuch über die Wahre Arts das Clavier zu spielen vuosilta 1753/1762. Jälkimmäinen teos on kuitenkin tulkittavissa aikakauden ulkopuoliseksi teokseksi. Kyseisen teoksen käyttöä perustellaan tämän työn kuluessa. Toivon että tätä työtä voidaan myös pitää johdantona barokkimusiikin esittämiskäytäntöön, sekä käyttää apuvälineenä esimerkiksi opetuksessa edistyneillä oppilailla. Työn kieli ja ulkoasu sekä käsiteltävät asiat on yritetty esittää mahdollisimman selkeästi ja ymmärrettävästi, jotta myös sen pedagoginen käyttö esimerkiksi musiikkiopistotasolla olisi mahdollista. Valitessani opinnäytetyön aihetta päädyin tekemään tämän työn siitä syystä, että en ollut aikaisemmin juurikaan perehtynyt barokkimusiikkiin. Tämän opinnäytetyön tekeminen tarjosi sopivat puitteet "päästä kiinni" sekä barokkimusiikin soittamiseen että tiedon hakuun. Koska kyseinen teos on haastava, on työn määrä ollut suuri ja olen joutunut todella pohtimaan asioita. Työ on avannut silmiä uusille asioille ja opettanut paljon sekä soittamisesta että tiedon hakemisesta kyseisestä aiheesta sekä yleensä. Työni koostuu kahdesta osiosta, äänitteestä ja kirjallisesta työstä. Työn äänitysvaihe ja sen jälkityöstö tehtiin yhteistyössä Sibelius-Akatemian musiikkiteknologian opiskelijoiden kanssa.

Ei ne suuret tulot, vaan... : riippumattoman musiikintekijän tulomuodot digitalisoituvassa maailmassa

Opinnäytetyö selvittää musiikkiteollisuuden ansaintalogiikkaa ja riippumattoman musiikintekijän tulomuotoja, sekä teknologisen kehityksen ja Internetin aiheuttaman rakennemuutoksen vaikutusta niihin. Alan nykyisenä ongelmana nähdään musiikintekijälle päätyvän rahan pieni osuus teollisuudessa liikkuvasta tulovirrasta. Työn tavoitteena on löytää kustannustehokkaita väyliä musiikin saattamiseen kuulijoille, pohtien samalla erilaisten promootiokanavien vaikutusarvoa. Lopullisena tarkoituksena on löytää tapa elättää itseään musiikin tekemisellä. Lähdeaineistona on käytetty alan kirjallisuutta, tilastoja, Internet-artikkeleita, sekä kirjoittajan omaa kokemusta alalta. Työ osoittaa, kuinka hankalaa musiikin tekemisellä tienaaminen on Suomessa. Kustannusten pitäminen mahdollisimman alhaisina ja asioiden tekeminen omatoimisesti mahdollisimman pitkälle ovat perusedellytys voitolliselle liiketoiminnalle. Digitaaliteknologia yhdessä Internetin kanssa tarjoaa mahdollisuuden tähän. Musiikintekijän merkittävimmiksi tulomuodoiksi osoittautuvat esiintymis- ja tekijänoikeuskorvaukset. Äänitteillä ansaitseminen on todennäköisintä pienlevy-yhtiöiden kanssa toimiessa, isojen levy-yhtiöiden raskas kulurakenne takaa sen että itse musiikintekijälle tuloutuu vain murto-osa tuotoista. Äänitteiden digijakelu ei vielä tarjoa varteenotettavaa tulonlähdettä musiikintekijälle, mutta sen merkitys kasvaa lähitulevaisuudessa, samoin kuin erilaisista edelleenlisensioinneista ja oheistuotteista kertyvät tulot.

Angiopoietin 2 regulates the transformation and integrity of lymphatic endothelial cell junctions.

Primitive lymphatic vessels are remodeled into functionally specialized initial and collecting lymphatics during development. Lymphatic endothelial cell (LEC) junctions in initial lymphatics transform from a zipper-like to a button-like pattern during collecting vessel development, but what regulates this process is largely unknown. Angiopoietin 2 (Ang2) deficiency leads to abnormal lymphatic vessels. Here we found that an ANG2-blocking antibody inhibited embryonic lymphangiogenesis, whereas endothelium-specific ANG2 overexpression induced lymphatic hyperplasia. ANG2 inhibition blocked VE-cadherin phosphorylation at tyrosine residue 685 and the concomitant formation of button-like junctions in initial lymphatics. The defective junctions were associated with impaired lymph uptake. In collecting lymphatics, adherens junctions were disrupted, and the vessels leaked upon ANG2 blockade or gene deletion. ANG2 inhibition also suppressed the onset of lymphatic valve formation and subsequent valve maturation. These data identify ANG2 as the first essential regulator of the functionally important interendothelial cell-cell junctions that form during lymphatic development.

Oikeusministeri Aarre Simonen 7/8 1969

Kirje 7.8.1969

Teologis-filosofista aatehistoriaa uusissa väitöskirjoissa

Simo Knuuttila