Expressão gênica e viabilidade de folículos ovarianos pré-antrais de Sapajus apella congelados e cultivados in vitro

O objetivo do presente estudo foi desenvolver um protocolo de congelação para a preservação de folículos pré-antrais de Sapajus apella (macaco-prego). Para este fim, fragmentos ovarianos foram expostos à diferentes soluções crioprotetoras, adicionadas ou não por antioxidantes (selênio e trolox), congelados e cultivados in vitro por 24/horas. Análises morfológicas, ultraestruturais, de viabilidade e estresse oxidativo foram desenvolvidas. A coleta do material foi realizada no Centro Nacional de primatas (CENP) e nove macacos-prego maduras e saudáveis foram usadas. Biopsias ovarianas de 1 mm³ foram coletadas por laparoscopia exploratória. Os folículos coletados foram classificados de acordo com sua fase de desenvolvimento em primordial, primário ou secundário. A viabilidade folicular foi observada através da utilização de marcadores fluorescentes (Iodeto de propídeo e Hoechst) qRT-PCR foi usado para avaliar a expressão de hormônios e fatores de crescimento. O TEAC foi usado para mensurar o estresse oxidativo no tecido. Os resultados mostraram que a solução congelação contendo trolox não afetou a morfologia folicular e expressão gênica. A criopreservação resultou em elevadas taxas de viabilidade folicular quando o trolox estava presente na solução, porém a expressão de genes codificando BMP4 e KL foi negativamente afetada. Nossos achados mostraram um efeito favorável da adição do trolox à solução de congelação. Entretanto, a viabilidade folicular e expressão gênica foram afetados após cultivo in vitro.

Ativação partenogenética de oócitos maturados in vitro de Cebus apella

O objetivo deste trabalho foi avaliar a maturação oocitária in vitro (MIV) na espécie C. apella, relacionando com a expansão das células do cumulus e promovendo a produção in vitro de embriões (PIVE), por meio da ativação partenogenética e fecundação in vitro (FIV). Os oócitos puncionados dos folículos antrais medindo 2-9 mm de diâmetro foram classificados em desnudos (OD), com poucas células do cumulus (PCC) e complexo cumulus-oophorus intacto (CCO intacto). A expansão das células do cumulus foi analisada nos tempos de 0, 36 e 40 h de MIV e classificada em cinco categorias de expansão. A competência meiótica nos oócitos foi verificada pela extrusão do 1º corpúsculo polar (CP) após 40 h de MIV. Os oócitos foram divididos em 3 grupos para PIVE: grupo controle (FIV), ativação partenogenética utilizando 5 μM de ionomicina em associação com 2 mM de 6-DMAP ou em associação com 50 μM de roscovitina. Para a FIV, os espermatozóides obtidos do coágulo seminal, foram diluídos em água de coco em pó (ACP-118®) e submetidos ao resfriamento para serem levados posteriormente ao cultivo in vitro com os oócitos. O aumento no tempo da MIV e a presença de várias células do cumulus associadas aos oócitos proporcionaram maior expansão das células do cumulus, pois somente os CCO intactos alcançaram a expansão total em 40 h de MIV (p < 0,005). A presença das células do cumulus nos oócitos (PCC e CCO intactos) maturados in vitro por 40 h promoveu a competência meiótica (metáfase II) significamente mais elevada que os OD (p < 0,005). Após 6 h de resfriamento em ACP-118® e separação pelo método do swin-up, os espermatozóides utilizados na FIV possuíam 80% de motilidade e vigor 4. O tratamento com ionomicina/roscovitina promoveu a extrusão do 2º CP e formação pronuclear e com ionomicina/6-DMAP formou pronúcleos, sem extrusão do 2º CP. O protocolo utilizando a ionomicina/6-DMAP e da FIV originou as primeiras divisões embrionárias, observada pela taxa de clivagem. Os resultados encontrados sugerem que em C. apella a presença e a expansão total das células do cumulus estão relacionadas com a competência oocitária. A utilização dos oócitos maturados in vitro e dos espermatozóides diluídos e resfriados em ACP-118® promoveu a PIVE por diferentes métodos nesta espécie.

Avaliação histológica do ovário de caititu (Tayassu tajacu), criado em cativeiro

O objetivo deste estudo foi de avaliar os aspectos morfométricos e histológicos do ovário de caititu (Tayassu tajacu) durante duas fases do ciclo estral, e obter dados a respeito da população folicular ovariana. O estudo foi realizado no campo experimental Embrapa- Amazônia Oriental (Belém, Pará). Ovários de seis fêmeas adultas de caititu foram obtidos através de ovariectomia para posteriormente processamento histológico. Os mesmos foram fixados em Bouin, seccionados obtendo cortes de 7 μm de espessura e corados com Hematoxilina e Eosina. Os folículos pré-antrais foram classificados em folículo primordial, primário e secundário. Os folículos antrais foram caracterizados pela presença da cavidade antral. O número de folículos pré-antrais e antrais por ovário foi estimado usando o Fractionator Method. Para análise qualitativa, todos os folículos foram classificados em normais ou degenerados. O diâmetro do folículo, do oócito e de seu núcleo e da camada da granulosa, exceto do folículo antral, foi medido utilizando uma ocular micrométrica para acompanhar o desenvolvimento folicular. Todos os resultados foram representados como média ± desvio padrão. Os resultados revelaram diferenças entre as categorias de folículos pré-antrais nos ovários direito e esquerdo. A média numérica de folículos pré-antrais presentes foi maior no ovário esquerdo e na fase folicular do ciclo estral. Folículos primordiais foram encontrados no córtex com uma única camada de células foliculares de formato pavimentoso, envolvendo o oócito esférico. Nos folículos primários, foi observado a proliferação de células pavimentosas e/ou cúbicas formando mais de uma camada envolvendo o oócito. Folículos secundários apresentaram-se constituídos de duas ou mais camadas concêntricas de células cuboidais. A zona pelúcida e as células imaturas da teca foram primeiramente localizadas em folículos secundários. Folículos antrais foram caracterizados pela presença da cavidade antral, pela projeção do cumulus oophorus no interior do antro, envolvendo o oócito e pela divisão da teca interna e teca externa. O número médio de folículos primordiais e primários normais foi significativo (p<0,05) quando comparado ao número médio de folículos degenerados. As mudanças nos diâmetros observados podem ser utilizadas, possivelmente, como um parâmetro na classificação das diferentes categorias foliculares.

Desenvolvimento morfológico dos ovários em embriões e fetos bovinos da raça Nelore

Pós-graduação em Zootecnia - FCAV

Ovarian and uterine periovulatory Doppler ultrasonography in bitches

Este trabalho teve como objetivo descrever as características ultrassonográficas uterinas e ovarianas, e dopplervelocimétricas das suas artérias nos dias periovulatórios em cadelas. Quinze ciclos estrais em 10 animais foram avaliados. As características ultrassonográficas, índices de resistência (IR) e índices de pulsatilidade (IP) do útero e dos ovários em cada animal foram registrados 5 dias antes e depois da ovulação (D0). Os dados foram analisados estatisticamente e os resultados foram expressos em média ± erro padrão da média (P<0,05). Como resultados as características ultrassonográficas uterinas foram semelhantes em todos os ciclos e dias avaliados, tendo o corpo uterino um diâmetro médio de 0,85±0,02cm. Foi observado um aumento no volume dos ovários e nos diâmetros dos folículos, tendo os ovários um volume de 0,64±0,06cm³, e a cavidade dos folículos um diâmetro de 0,46±0,01cm no dia da ovulação. Após a ovulação, foi observado colapso dos folículos somente em alguns ciclos. A perfusão sanguínea uterina diminuiu dois dias antes da ovulação e permaneceu inalterada até a ovulação. Após a ovulação, houve um aumento gradual na perfusão das artérias uterinas e ovarianas, direcionando o fluxo de sangue para os ovários e aumentando a perfusão da artéria intra-ovariana um dia após a ovulação. Conclui-se que características específicas são observadas na imagem ultrassonográfica uterina e ovariana, e dopplervelocimétricas de suas artérias nos dias periovulatórios, e quando associadas permitem estimar com mais precisão o dia da ovulação.

Expressão gênica das isoformas do receptor do hormônio luteinizante(LHR) em células células da granulosa antes, durante e após o desvio folicular em novilhas Nelore

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FMVZ

Efeitos dos fatores de crescimento fibroblástico 10 e 18 (FGFs 10 e 18) sobre a esteroidogênese em ovários fetais bovinos

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Influência da ação da hCG sobre a expressão gênica de epirregulina, ampirregulina e hialurona sintetase-2 em folículos ovarianos de éguas estimuladas ou não com extrato de pituitária equina

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Avaliação funcional de estruturas luteais formadas após aspiração folicular em éguas

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Efeito da administração da Deslorelina por 70 dias na forma de implante na dinâmica folicular, perfil endócrino e expressão de receptores endométriais de estrógeno, progesterona e ocitocina de vacas nelore (Bos taurus indicus)

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Morfologia e biometria do aparelho reprodutor feminino da capivara (Hydrochoerus hydrochaeris)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Folículos ovarianos pré-antrais bovinos: cultivo in vitro e xenotransplante

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Protocolos de superovulação em veado-catingueiro (Mazama gouazoubira)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Efeito do fator de crescimento IGF-I sobre a maturação in vitro de oócitos caninos (Canis familiaris): avaliação da maturação nuclear e citoplasmática

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Fatores homólogos aos fatores de crescimento fibroblásticos são expressos em folículos antrais e corpos lúteos bovinos

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)