994 resultados para signalisation cellulaire
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Les voies de signalisation des MAP kinases (MAPK) conventionnelles jouent des rles essentiels pendant le dveloppement des lymphocytes T (LT) ainsi que lors de leur activation suite la reconnaissance antignique. En raison de ses diffrences structurelles ainsi que de son mode de rgulation, ERK3 fait partie des MAPK dites non-conventionnelles. Encore aujourdhui, les vnements menant lactivation de ERK3, ses substrats ou partenaires ainsi que sa fonction physiologique demeurent peu caractriss. Nous avons entrepris dans cette thse dtudier le rle de ERK3 lors du dveloppement et de lactivation des LT en utilisant un modle de souris dficient pour lexpression de ERK3. Nous avons premirement tabli que ERK3 est exprime chez les thymocytes. Ensuite, nous avons valu le dveloppement thymique chez la souris ERK3-dficiente et nous avons observ une diminution significative de la cellularit aux tapes DN1, DP et SP CD4+ du dveloppement des LT. La cration de chimres hmatopotiques ERK3-dficientes nous a permis de dmontrer que la diminution du nombre de cellules observe aux tapes DN1 et DP est autonome aux thymocytes alors que le phnotype observ ltape SP CD4+ est dpendant de labolition simultane de ERK3 dans lpithlium thymique et dans les thymocytes. Une tude plus approfondie de ltape DP nous a permis de dmontrer quen absence de ERK3, les cellules DP meurent plus abondamment et accumulent des cassures doubles brins (DSB) dans leur ADN. De plus, nous avons dmontr que ces cassures dans lADN sont ralises par les enzymes RAG et quen absence de ces dernires, la cellularit thymique est presque rtablie chez la souris ERK3-dficiente. Ces rsultats suggrent que ERK3 est implique dans un mcanisme essentiel la rgulation des DSB pendant le rarrangement V(D)J de la chane du rcepteur des cellules T (RCT). Dans le deuxime article prsent dans cette thse, nous avons montr que ERK3 est exprim chez les LT priphriques, mais seulement suite leur activation via le RCT. Une fois activs in vitro les LT ERK3-dficients prsentent une diminution marque de leur prolifration et dans la production de cytokines. De plus, les LT ERK3-dficients survivent de faon quivalente aux LT normaux, mais tonnamment, ils expriment des niveaux plus faibles de la molcule anti-apoptotique Bcl-2. Ces rsultats suggrent que la prolifration rduite des LT ERK3-dficients est la consquence dune altration majeure de leur activation. Ainsi, nos rsultats tablissent que ERK3 est une MAPK qui joue des rles essentiels et uniques dans le dveloppement thymique et dans lactivation des lymphocytes T priphriques. Grce ces travaux, nous attribuons pour la toute premire fois une fonction in vivo pour ERK3 au cours de deux diffrentes tapes de la vie dun LT.
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Nous avons dmontr la prsence d'apoptose dans le systme limbique suivant un infarctus du myocarde. Cette mort cellulaire serait partiellement relie l'augmentation de cytokines pro-inflammatoires. Des tudes dmontrent que certains probiotiques ont des effets bnfiques en diminuant le ratio de cytokines pro/anti-inflammatoires. La prise de probiotiques en prvention, avant locclusion dune artre coronarienne, pourrait-elle diminuer lapoptose dans le systme limbique? Mthodes : La combinaison de probiotiques Lactobacillus helveticus R0052 et Bifidobacterium longum R0175 ou son vhicule fut additionn dans leau des rats pendant 28 jours conscutifs. Un infarctus du myocarde fut provoqu par locclusion de lartre coronaire gauche. Aprs 40 minutes d'occlusion, les rgions ischmiques ont t reperfuses pour 72 heures. Les animaux furent sacrifis et la taille de l'infarctus mesure. L'amygdale et l'hippocampe furent prlevs pour dterminer l'activit de la caspase-3 (pro-apoptotique), le ratio Bax/Bcl2(proapoptotique/ anti-apoptotique) et l'activit d'Akt (survie cellulaire). Rsultats : La taille de linfarctus n'est pas diminue dans le groupe probiotique (45% de la rgion risque)compar au groupe placebo. Nos marqueurs dapoptose dmontrent une diminution dans les rgions du gyrus dent, de lamygdale latrale et mdiane dans le groupe probiotique par rapport au placebo. Lactivit de la caspase-3 et le ratio Bax:Bcl2 furent rduits dans le groupe probiotique de 50% et 40% respectivement (p < 0.05) et phosphorylation dAkt fut augmente de 35% (p<0.05). Aucune diffrence fut observe pour les rgions Ca1 et Ca3. Conclusion : La combinaison de probiotiques utilise rduit lapoptose dans diffrentes rgions du systme limbique 72 heures aprs un IM.
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Les cellules drives de la moelle osseuse, principalement les cellules endothliales prognitrices, sont rduites chez les patients souffrant de maladies cardiovasculaires. Leur mobilisation et leur incorporation aux sites de lsion vasculaire sont des vnements prpondrants dans lacclration des processus de rendothlialisation. Dans un modle murin, le 17-estradiol favorise les processus de gurison vasculaire par la mobilisation et le recrutement des cellules endothliales prognitrices drives de la moelle osseuse. Il existe prsentement plusieurs stratgies afin daugmenter la mobilisation des cellules prognitrices ainsi que leur incorporation la paroi vasculaire. Cependant, peu dtudes privilgient la livraison locale dun nombre lev de cellules prognitrices fonctionnelles par un vhicule biodgradable et leur maintien au site de lsion afin de favoriser la rendothlialisation cible. Un polymre dintrt pour cette application savre tre le chitosan. Ce biopolymre non toxique et biodgradable est couramment utilis dans lingnierie tissulaire et, depuis peu, est utilis dans la gurison vasculaire. Le chitosan complex la phosphorylcholine voit sa solubilit saccrotre dans les solutions aqueuses ainsi que sa biocompatibilit cellulaire en condition physiologique. Le projet de ce mmoire visait donc : 1) tudier in vitro, la capacit dun polymre de chitosan complex la phosphorylcholine influencer ladhsion, la survie, la diffrenciation et la fonctionnalit cellulaire dans un modle murin de culture mixte de cellules drives de la moelle osseuse et 2) de dterminer limpact de la prsence du 17-estradiol sur ces mmes comportements cellulaires. Nos travaux dmontrent que la matrice de chitosan-phosphorylcholine savre compatible avec notre modle de culture cellulaire. En effet, ce polymre est capable de promouvoir lorganisation et le dveloppement des cellules drives de la moelle osseuse de faon comparable la matrice normalement utilise dans la croissance in vitro des cellules endothliales prognitrices, la fibronectine. De plus, ce polymre na nullement compromis lactivit migratoire des cellules, laissant supposer quil pourrait ventuellement tre un vhicule appropri pour effectuer une livraison cellulaire un site de lsion. Il savre que le 17-estradiol, lorsquajout au milieu de culture ou complex au polymre de chitosan phosphorylcholine, est capable de moduler le comportement cellulaire, et ce, de faon diffrente. Le 17-estradiol complex au polymre de chitosan-phosphorylcholine dmontre, par rapport sa forme soluble, une plus grande aptitude accrotre le nombre de cellules hmatopotiques ainsi que des cellules endothliales prognitrices drives de la moelle osseuse in vitro. De plus, le 17-estradiol complex au polymre de chitosan-phosphorylcholine permet une amplification marque des cellules endothliales prognitrices et leur offre un support adquat afin de favoriser la gurison vasculaire. Lensemble de nos travaux suggre que le polymre de chitosan complex la phosphorylcholine en prsence ou non de 17-estradiol est une matrice compatible avec les cellules prognitrices drives de la moelle osseuse in vitro. Le 17-estradiol complex au polymre est toutefois plus efficace que sa forme soluble promouvoir lamplification du nombre de cellules prognitrices. Ce polymre reprsente un outil thrapeutique attrayant et une matrice de livraison dagent bioactif prometteuse pour le recrutement cellulaire dans lacclration de la gurison vasculaire.
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Cette thse rapporte ltude des proprits physicochimiques des nanoparticles polymriques et leur impact sur linteraction avec les cellules vivantes. Nous nous sommes tout spcialement attachs tudier leffet des proprits adhsives et mcaniques des nanoparticules sur leur capacit de pntration de la membrane cellulaire. Pour ce faire, nous avons tout dabord utilis des nanoparticules dacide polylactique (PLA) fonctionnalises en surface avec un ligand des slectines E et P. Le greffage du ligand sur la particule sest fait par une nouvelle mthode exprimentale garantissant la prsence du ligand la surface de la particule durant toute sa dure de vie. Cette mthode consiste mlanger un polymre fonctionnalis avec le ligand avec un autre polymre non fonctionnalis. La prsence du ligand la surface des nanoparticules formes partir de ce mlange de polymres a t confirme par analyse ToF SIMS. Nous avons pu prouver que les particules possdant le ligand greff leur surface dmontraient une capacit adhsive suprieure leurs homologues non fonctionnaliss sur des cellules endothliales HUVEC actives par diffrentes drogues. De plus, le captage des particules par les cellules HUVEC est modul par le niveau dexpression des rcepteurs selectine E et P et aussi par la quantit de ligand libre. Ces rsultats montrent clairement que le greffage du ligand confre aux particules des proprits adhsives accrues et spcifiques ce qui permet leur usage postrieure comme vecteur pharmaceutique capable de cibler un rcepteur particulier la surface dune cellule. Nous avons aussi dmontr que linteraction entre les nanoparticules et la membrane cellulaire peut aussi tre contrle aussi bien par les proprits mcaniques de la cellule que de la nanoparticule. Dans une premire tape, nous avons mesur laide de lappareil de forces de surface llasticit de cellules macrophagiques dposes sur diffrents substrats. En contrlant linteraction entre la cellule et le substrat sur lequel elle repose nous avons montr quil tait possible de modifier ii volont les proprits mcaniques cellulaire. Une augmentation de llasticit cellulaire saccompagne dune augmentation systmatique de linternalisation de nanoparticules de PLA non fonctionnalises. Ceci suggre un rle prpondrant des proprits mcaniques du cortex cellulaire dans le captage des nanoparticules de PLA. Dans une seconde tape, nous avons tudi leffet des proprits mcaniques des nanoparticules sur leur capacit de pntration cellulaire. Pour ce faire, nous avons synthtis des particules dhydrogel dont llasticit tait contrle par le degr dagent rticulant inclus dans leur formulation. Le contrle des proprits mcaniques des nanoparticules a t confirm par la mesure du module de Young des particules par microscopie de force atomique. Limpact des proprits mcaniques de ces particules sur leur capacit de pntration dans les cellules vivantes a t tudi sur des cellules macrophagiques de souris. Les rsultats ont montr que la cintique dinternalisation, la quantit de particules internalises et le mcanisme dinternalisation dpendent tous du module de Young des nanoparticules. Aucune diffrence dans le trajet intracellulaire des particules na pu tre observe malgr le fait que diffrentes voies dinternalisation aient t observes. Ce dernier rsultat peut sexpliquer par le fait que les nanoparticules sont internalises par plusieurs voie simultanment ce qui facilite leur accumulation dans les organelles digestives intracellulaires. Un modle simple permettant dexpliquer ces rsultats a t propos et discut.
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La barrire hmato-encphalique (BHE) protge le systme nerveux central (SNC) en contrlant le passage des substances sanguines et des cellules immunitaires. La BHE est forme de cellules endothliales lies ensemble par des jonctions serres et ses fonctions sont maintenues par des astrocytes, celles ci scrtant un nombre de facteurs essentiels. Une analyse protomique de radeaux lipidiques de cellules endothliales de la BHE humaine a identifi la prsence de la voie de signalisation Hedgehog (Hh), une voie souvent lies des processus de dveloppement embryologique ainsi quau niveau des tissus adultes. Suite nos expriences, jai dtermin que les astrocytes produisent et secrtent le ligand Sonic Hh (Shh) et que les cellules endothliales humaines en cultures primaires expriment le rcepteur Patched (Ptch)-1, le co-rcepteur Smoothened (Smo) et le facteur de transcription Gli-1. De plus, lactivation de la voie Hh augmente ltanchit des cellules endothliales de la BHE in vitro. Le blocage de lactivation de la voie Hh en utilisant lantagoniste cyclopamine ainsi quen utilisant des souris Shh dficientes (-/-) diminue lexpression des protines de jonctions serres, claudin-5, occcludin, et ZO-1. La voie de signalisation sest aussi montre comme tant immunomodulatoire, puisque lactivation de la voie dans les cellules endothliales de la BHE diminue lexpression de surface des molcules dadhsion ICAM-1 et VCAM-1, ainsi que la scrtion des chimiokines pro-inflammatoires IL-8/CXCL8 et MCP-1/CCL2, crant une diminution de la migration des lymphocytes CD4+ travers une monocouche de cellules endothliales de la BHE. Des traitements avec des cytokines pro-inflammatoires TNF- and IFN- in vitro, augmente la production de Shh par les astrocytes ainsi que lexpression de surface de Ptch-1 et de Smo. Dans des lsions actives de la sclrose en plaques (SEP), o la BHE est plus permable, les astrocytes hypertrophiques augmentent leur expression de Shh. Par contre, les cellules endothliales de la BHE naugmentent pas leur expression de Ptch-1 ou Smo, suggrant une dysfonction dans la voie de signalisation Hh. Ces rsultats montrent que la voie de signalisation Hh promeut les proprits de la BHE, et quun environnement dinflammation pourrait potentiellement drgler la BHE en affectant la voie de signalisation Hh des cellules endothliales.
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Les cytokines jouent un rle fondamental dans la rgulation des processus biologiques via la cascade de signalisation JAK-STAT. Les Suppressors of Cytokine Signalling (SOCS), protines intracellulaires, inhibent la voie JAK-STAT. Plusieurs tudes supportent leur implication dans des maladies immunitaires, mais peu dinformations sont disponibles sur leur expression par les lymphocytes T humains. Nous postulons que les cytokines Interfron-(IFN-) et Interleukine-27 (IL-27), dotes dun potentiel immuno-rgulateur, ont des rles bnfiques via linduction des SOCS. Limpact de lIFN- et lIL-27 sur lexpression des SOCS-1 et SOCS-3 par des cellules T CD8 et CD4 humaines a t tudi en utilisant des cellules sanguines de donneurs sains. Lexpression de ces rgulateurs a t value aux niveaux de lARNm par qRT-PCR et protique par immunocytochimie. Les SOCS-1 et SOCS-3 ont t rapidement induits en ARNm dans les deux types cellulaires en rponse lIFN- ou lIL-27 et une augmentation de lexpression a t confirme au niveau protique. Afin de mimer les thrapies base dIFN-, les cellules T ont t exposes chroniquement lIFN-. Aprs chaque ajout de cytokine les cellules T ont augment lexpression du SOCS-1, sans moduler le SOCS-3. LIL-27 a induit les SOCS-1 et SOCS-3 prfrentiellement dans les cellules T CD8 ; ceci corrle avec des rsultats du laboratoire dmontrant une plus petite expression des rcepteurs lIL-27 par les lymphocytes T CD4 que les CD8. Notre projet a permis dlucider lexpression des SOCS dans deux populations de cellules T et de clarifier les mcanismes dactions de lIFN- et lIL-27.
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Depuis la dcouverte de la premire protine possdant une activit tyrosine kinase (protein tyrosine kinase [PTK]) dans les annes 1980, limportance des PTKs et de la phosphorylation sur rsidu tyrosine dans la rgulation des vnements de signalisation intracellulaire est bien tablie. Quant aux protines qui possdent une activit tyrosine phosphatase (protein tyrosine phosphatase [PTP]), dont lexistence na t dvoile quune dixaine dannes plus tard, elles ont longtemps t perues comme des enzymes dont le rle ne se rsumait qu' contrecarrer passivement les activits des PTKs. Il est maintenant clair que les activits des PTPs sont spcifiques, hautement rgules, et quelles doivent tre coordonnes avec celles des PTKs pour une rgulation adquate des vnements de signalisation intracellulaire. En dpit de cette vidence, la contribution des PTPs la rgulation des diffrents processus physiologiques fondamentaux demeure encore peu caractrise. Cest le cas, notamment, de langiogense, le processus par lequel de nouveaux vaisseaux sanguins sont forms partir de ceux prexistants. Le VEGF (Vascular endothelial growth factor), un des facteurs angiogniques les plus importants, est connu pour induire majoritairement ses effets biologiques via lactivation du rcepteur activit tyrosine kinase VEGFR2 (Vascular endothelial growth factor receptor 2). Puisque langiogense est implique dans le dveloppement dune multitude de pathologies, dont la progression tumorale, une meilleure caractrisation des PTPs qui assurent la qualit de la rponse angiognique en agissant de pair avec le VEGFR2 savre cruciale et ce, afin de raffiner les outils thrapeutiques actuels. Lexpression de la PTP DEP-1 corrle avec la dphosphorylation du rcepteur VEGFR2 localis au niveau des jonctions cellules-cellules et contribue linhibition de la prolifration des cellules endothliales en rponse au VEGF lorsque les cellules sont confluence. Par contre, la contribution spcifique de DEP-1 la rgulation des voies de signalisation et des rponses biologiques induites par le VEGF demeurait toujours inconnue. Les travaux de recherche prsents dans cette thse dmontrent tout dabord que DEP-1 rgule ngativement lactivit tyrosine kinase de VEGFR2 en dphosphorylant spcifiquement les rsidus tyrosine Y1054/Y1059 de sa boucle dactivation. Cette dphosphorylation mne par consquent une diminution gnrale de la phosphorylation du rcepteur et une attnuation de la plupart des voies de signalisation induites par le VEGF, incluant la voie mitognique PLC-ERK1/2. Par ailleurs, malgr ce rle ngatif global, nos travaux rvlent tonnement, et pour la premire fois, que DEP-1 contribue dune manire positive la promotion de la survie des cellules endothliales via lactivation de la voie Src-Gab1-Akt en aval du rcepteur VEGFR2. Ce pouvoir pro-survie de DEP-1 dans les cellules endothliales rside avant tout dans sa capacti dphosphoryler la tyrosine inhibitrice de Src (Y529). Au cours de notre tude, nous avons pu identifier deux rsidus tyrosine au niveau de lextrmit carboxy-terminale de DEP-1, Y1311 et Y1320, dont la phosphorylation est dpendante de Src. Nos travaux rvlent par ailleurs que ces deux rsidus tyrosine phosphoryls lient le domaine SH2 de Src et que la Y1320 est principalement requise pour lactivation de Src et dAkt en rponse au VEGF dans les cellules endothliales. Ces rsultats constituent donc une avance majeure dans la comprhension des mcanismes molculaires par lesquels DEP-1 peut rguler le programme angiognique dpendant du VEGF. De plus, cette dcouverte dun rle positif pour DEP-1 dans la survie des cellules endothliales pourrait mener llaboration de nouvelles approches thrapeutiques visant inhiber cette fonction spcifique de DEP-1 pour bloquer l'angiogense pathologique.
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Limportance respective des lymphocytes T rgulateurs naturels gnrs dans le thymus ou induits en priphrie dans la rgulation immunitaire et la rsolution de linflammation est dsormais bien tablie. Nous avons contribu mettre en vidence une nouvelle voie dinduction de lymphocytes T rgulateurs priphriques partir de cellules T humaines CD4+CD25- naves et mmoires. Nous avons montr que lengagement de la molcule ubiquitaire transmembranaire CD47 sur la cellule T par un anticorps monoclonal ou par le peptide 4N1K (peptide driv du domaine carboxy-terminal de la thrombospondine-1 et spcifique du site de liaison CD47) induisait des lymphocytes T CD4+ rgulateurs exerant une fonction suppressive sur les lymphocytes T effecteurs. Les proprits suppressives induites par la thrombospondine-1 confortent les fonctions anti-inflammatoires de cette protine de la matrice extracellulaire. Linhibition exerce par les lymphocytes T rgulateurs induits dpend du contact intercellulaire entre les cellules T rgulatrices et leurs cibles, et est indpendante du TGF-. Nos rsultats dmontrent galement le rle de CD47 sur le lymphocyte T CD4+ dans la rponse immunitaire spcifique de lantigne in vivo. En effet, les souris BALB/c dficientes pour CD47 prsentent un biais de la scrtion danticorps et de cytokines de type Th1, alors que les souris BALB/c sont dcrites comme exprimant un profil de production de cytokines de type Th2. Nos travaux mettent en vidence le rle de CD47 dans linhibition du dveloppement dune rponse cellulaire et humorale de type Th1 in vivo, confirmant de prcdentes tudes in vitro ralises avec des cellules T CD4+ humaines. Nous prsentons galement le rle inhibiteur de lengagement de CD28 in vitro sur la diffrenciation en cellules Th17 des lymphocytes T CD4+ nafs isols de souris BALB/c. Le mcanisme propos est dpendant de la production de lIL-2 et de lIFN- et indpendant de la prsence de lymphocytes T rgulateurs. Notre tude du rle de deux molcules transmembranaires CD47 et CD28 exprimes sur la cellule T CD4+, contribue une meilleure connaissance des mcanismes impliqus dans la tolrance immunologique, la rsolution de linflammation et la diffrenciation des cellules T "helper" CD4+.
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La surexpression rtrovirale du facteur de transcription HOXB4 rsulte en une expansion slective des cellules souches hmatopotiques (CSH) in vitro et in vivo et ce, sans induire de leucmie. Par contre, la demi-vie intracellulaire de la protine est de seulement une heure et le fait que la protine disparat du milieu de culture aprs environ 4 heures reprsente un obstacle majeur lutilisation clinique de la protine HOXB4. Trois mutants HOXB4 ayant une substitution d`un seul acides amins (AA) parmi les 31 premiers AA ont dmontr une augmentation de la stabilit de la protine. Nous avons donc valu leffet de HOXB4 et de ses trois mutants sur la production de cellules prognitrices mylodes. Lexpression ectopique de HOXB4 sauvage (s-HOXB4) et HOXB4 mutant (m-HOXB4) a un effet comparable sur la frquence des cellules prognitrices mylodes en essai clonognique. Par contre, la capacit de prolifration des cellules prognitrices mylodes qui surexpriment s-HOXB4 et 1423 m-HOXB4 a t suprieure celle des cellules contrles (GFP seul) et des deux autres mutants. De plus, malgr le fait que toutes les variantes de HOXB4 confrent une capacit dautorenouvellement similaire aux cellules prognitrices multipotents (GEMM), la production des progniteurs granulocytaires (CFU-G) est compromise lorsque les cellules surexpriment 1426 et 1427 m-HOXB4. Dautre part, la densit cellulaire des colonies mylodes qui surexpriment ces deux mutants est diminue, ce qui suggre que ces mutations ont non seulement augment sa stabilit, mais potentiellement affect certaines fonctions biologiques de s-HOXB4. Enfin, 1423 m-HOXB4 semble navoir perdu aucune fonction de s-HOXB4 dans nos valuations clonogniques in vitro, ce qui fait de ce mutant une molcule intressante pour des applications cliniques dexpansion des cellules prognitrices hmatopotiques.
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Le cancer est la principale cause de mortalit au Canada. Les taxanes (e.g. le paclitaxel et le doctaxel (DCTX)) constituent des remdes efficaces contre une srie de tumeurs solides telles que les cancers du sein, du poumon et de lovaire. Par ailleurs, des acides nucliques (e.g. les oligonuclotides antisens (AON) ou les petits ARN interfrents (siRNAs)), capables de supprimer slectivement certains oncognes impliqus dans la carcinognse, sont actuellement tudis pour traiter une large gamme de cancers. Bien que lactivit des taxanes et des acides nucliques soit bien tablie sur des modles humains et/ou animaux, plusieurs aspects physico-chimiques et cliniques restent encore amliorer. Leur solubilit limite (pour les taxanes), leur dgradation rapide dans le sang (pour les acides nucliques), leur limination prcoce, leur absence de slectivit et leur toxicit envers les tissus sains sont les principaux facteurs limitant leur efficacit. Cest pourquoi de nombreux efforts ont port sur llaboration de systmes de vectorisation cibls base de polymres, dans le but de surmonter les problmes associs aux thrapies actuelles. Dans cette thse, deux types de micelles polymres ont t dvelopps pour la vectorisation de DCTX et dacides nucliques. Dune part, des micelles de poly(oxyde dthylne)-bloc-poly(oxyde de butylne/styrne) ont t tudies pour la premire fois pour solubiliser le DCTX et le protger de lhydrolyse. Ces polymres se sont rvls moins toxiques que le surfactant utilis commercialement pour solubiliser le DCTX (i.e. polysorbate 80) et ont permis une libration prolonge du principe actif. Dautre part, deux systmes diffrents de micelles polyioniques (PICM) ont t mis au point pour la vectorisation dacides nucliques. De nouveaux conjugus de poly(thylne glycol) (PEG)-oligonuclotide ont t proposs pour la protection et la libration contrle dAON. Lorsque ces conjugus ont t formuls avec des dendrimres de poly(amidoamine) (PAMAM), des complexes de taille homogne ont t obtenus. Ces PICM ont permis de prolonger la libration de lAON et de le protger efficacement contre la dgradation enzymatique. De plus, des polymres de poly(oxyde dthylne)-bloc-poly(mthacrylate de propyle-co-acide mthacrylique) ont t incorpors afin de confrer des proprits acido-sensibles aux PICM. Dans ces micelles, formes de ce dernier polymre formul avec le dendrimre PAMAM, des oligonuclotides (AON et siRNA) ciblant loncogne Bcl-2 ont t encapsuls. Linternalisation cellulaire fut assure par un fragment danticorps monoclonal (Fab) situ lextrmit de la couronne de PEG. Aprs linternalisation cellulaire et la protonation des units dacide mthacrylique sous leffet de lacidification des endosomes, les micelles se sont affranchies de leur couronne. Elles ont ainsi expos leur cur compos dacide nuclique et de dendrimre PAMAM, qui possde une charge positive et des proprits endosomolytiques. En effet, ces PICM acido-sensibles cibles ont permis daugmenter la biodisponibilit des acides nucliques vectoriss et se sont avres plus efficaces pour silencer loncoprotine Bcl-2 que les micelles non cibles ou que le dendrimre de PAMAM commercial seul. Finalement, les nanovecteurs polymres prsents dans cette thse se rvlent tre des systmes prometteurs pour la vectorisation des anticancreux et des acides nucliques.
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Lexposition du ftus lthanol est reconnue comme tant la principale cause de maladies vitables lors du dveloppement. Une forte exposition lalcool durant la gestation peut occasionner des dysmorphies cranio-faciales et des retards mentaux, ainsi que des troubles dapprentissages et du comportement. Le dveloppement du systme visuel est galement perturb chez une grande majorit denfants qui ont t exposs lalcool. Lorsque les doses prises sont leves, le systme visuel peut prsenter une panoplie de symptmes comme une augmentation de la tortuosit des vaisseaux rtiniens, de la myopie, de lhypermtropie, du strabisme et une hypoplasie du nerf optique. Cependant, trs peu dtudes se sont penches sur les effets de plus faibles doses sur le dveloppement du systme visuel du primate. Le singe est un excellent modle pour tudier le systme visuel car il possde plusieurs similitudes avec lhumain tant au niveau dveloppemental quau niveau structurel. De plus, le singe utilis, le Chlrocebus aethiops sabeus, possde lavantage que des individus de cette espce ont une consommation naturelle et volontaire lalcool. Une tude (Clarren et al., 1990) a suggr quune faible exposition lalcool du ftus du primate non humain occasionnait une diminution du nombre de cellules ganglionnaires de la rtine (CGRs). tant donn que le corps genouill latral dorsal (CGLd) reoit la plupart de ses intrants de la rtine, il est raisonnable dassumer que les couches rtino-rcipientes du CGLd devraient tre aussi affectes. Nous avons alors mis lhypothse que le CGLd devrait galement subir une diminution du nombre de neurones. Pour la premire fois, nous avons utilis une mthode strologique pour quantifier le nombre de cellules dans les couches parvo- (P) et magnocellulaires (M) du CGLd. Contrairement notre hypothse de dpart, nous navons pas observ de diminution dans le nombre global de neurones dans le CGLd des animaux exposs lalcool par rapport des sujets contrles, ni une diminution de son volume. Nous avons toutefois observ une diminution de la taille du corps cellulaire seulement dans la population M du CGLd. Ces rsultats suggrent que le systme visuel est affect par une faible exposition lalcool durant son dveloppement qui devrait se traduire sur le comportement par des dficits dans les fonctions de la voie M.
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Au niveau clinique, il a t observ que de 15 30 % des patients qui ont subi un infarctus du myocarde dveloppent une dpression majeure. De plus, la population atteinte de dpression post-infarctus prsente un risque de mortalit de trois quatre fois plus lev, et ce, en comparaison avec la population non dpressive post-infarctus. Dans un modle de rat dvelopp pour tudier la dpression post-infarctus, des cellules apoptotiques ont t retrouves au niveau du systme limbique. Il apparat que les cytokines seraient en partie responsables de cette mort cellulaire qui relie le cur en ischmie et le systme nerveux central. Donc, les objectifs de cette thse sont : 1) de caractriser spatialement et temporellement la survenue de la mort cellulaire par apoptose dans les structures du systme limbique du rat, la suite dun infarctus du myocarde ; 2) de dterminer leffet de lanti-inflammatoire celecoxib sur cette apoptose observe au niveau de lamygdale et de dterminer limplication de lenzyme COX-2 ; 3) de dterminer limplication de la cytokine pro-inflammatoire TNF- dans lapoptose observe au niveau des structures du systme limbique du rat, la suite dun infarctus du myocarde. Afin datteindre ces objectifs, les rats ont subi une ischmie de 40 minutes, suivi dune priode de reperfusion qui varie dun protocole lautre (15 minutes, 24, 48, 72 heures ou 7 jours). De plus, en fonction du protocole, ces rats ont t traits avec soit du clcoxib (inhibiteur slectif de la COX-2), soit avec du PEG sTNF-R1 (inhibiteur du TNF-). la suite de ces protocoles, les rats ont t sacrifis, la taille de linfarctus a t dtermine et les diffrentes structures crbrales du systme limbique prleves. Des tests biochimiques propres chaque protocole ont t raliss afin de documenter l'apoptose. Il a alors t observ quaucun des deux traitements ne prsentait deffet sur la taille de linfarctus. Ltude de lapoptose dans le systme limbique a rvl que : 1) le processus apoptotique se mettait en place dans lhippocampe ds les 15 premires minutes de reperfusion suivant linfarctus du myocarde et que ce processus tait spatialement dynamique dans le systme limbique jusquau septime jour postreperfusion ; 2) il est apparu que la COX-2 tait implique dans l'apoptose du systme limbique ; 3) il a t observ que le TNF- priphrique tait impliqu dans ce processus apoptotique aprs 72 heures de reperfusion en activant la voie extrinsque de l'apoptose. Ces rsultats ont permis de caractriser la survenue de lapoptose au niveau du systme limbique chez le rat la suite dun infarctus du myocarde et de documenter l'implication de la COX-2 et du TNF- dans ce processus. Bien que ces rsultats napportent pas de schmas thrapeutiques clairs ou de mcanismes physiopathologiques globaux ces derniers permettent une meilleure comprhension de la relation existante entre le cur et le systme nerveux central dans le cadre de linfarctus du myocarde. De manire moins spcifique ils prcisent la relation entre le systme inflammatoire et le systme nerveux central.
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Nhx1 est un antiport vacuolaire de Na+/H+ chez la levure Saccharomyces cerevisiae. Nhx1 joue un rle important dans le maintien de lhomostasie ionique du cytoplasme de la cellule. En effet, la mutation du gne NHX1 chez la levure nhx1 entrane une perte de lhomostasie cellulaire quand les cellules sont cultives dans un milieu de faible osmolarit. Ce travail rapporte pour la premire fois, et contrairement la cellule parentale, que la mutation du gne NHX1 a pour effet une sensibilit du mutant nhx1 une varit des drogues et des agents cationiques et anioniques lorsque les cellules sont cultives dans un milieu riche. En outre, dans ces conditions de culture, aucune sensibilit na t observe chez le mutant nhx1 quand les cellules sont traites avec diffrentes concentrations de sel. Nous avons aussi dmontr que la sensibilit du mutant nhx1 aux diffrents agents ainsi que la scrtion de lenzyme carboxypeptidase Y observ chez ce mutant nont pas t restaur lorsque les cellules sont cultives dans des milieux avec diffrents pH ou avec diffrentes concentrations de sel. Enfin, une analyse gntique a rvl que le mutant nhx1 montre un phnotype distinct dautres mutants qui ont un dfaut dans le trafic entre le compartiment pr-vacuolaire et lappareil de Golgi quand ces cellules sont traites avec diffrents agents. Cette analyse prouve que la sensibilit de nhx1 aux diffrents agents nest pas lie au trafic entre le compartiment pr-vacuolaire et lappareil de Golgi.
Resumo:
Le syndrome reproducteur et respiratoire porcin (SRRP) est une des maladies les plus dvastatrices conomiquement pour l'industrie mondiale du porc. L'agent tiologique du SRRP est le virus du SRRP (VSRRP) lequel est connu pour avoir une spcificit d'hte trs restreinte et pour sa transmission par voie aerosol. Les antignes et les ARN du VSRRP ont t trouvs dans des cellules pithliales du tractus respiratoire de porcs infects par le virus. Linteraction entre les macrophages alvolaires porcins (PAMs) et le VSRRP a t dmontre comme jouant un rle important dans linfection cause par le virus. Malgr cela, linteraction prenant place entre les cellules pithliales du tractus respiratoire porcin et le virus ne devrait pas tre nglige. Jusqu prsent, la rplication du VSRRP in vitro dans des cellules pithliales du tractus respiratoire porcin na pas t conduite avec succs et les tentatives pour le faire ont chou. Une nouvelle ligne de cellules pithliales de poumon de porc (SJPL) est maintenant disponible et sera utilise dans cette tude afin de dterminer si elle est permissive la rplication du VSRRP et si elle peut tre un modle appropri pour ltude de la pathognse virale du VSRRP. Lexprimentation a dmontr que cette nouvelle ligne cellulaire tait permissive linfection et la rplication du VSRRP. Afin de corroborer ces rsultats, la cintique de rplication du virus t effectue avec les cellules MARC-145 et SJPL. Aucune diffrence significative dans la production virale totale na t trouve entre les deux lignes cellulaires. Les cellules SJPL ont permis la rplication de plusieurs souches Nord-Amricaines du VSRRP, quoiquelles sont lgrement moins efficaces que les cellules MARC-145 pour lisolement du virus. De plus, les cellules SJPL sont phnotypiquement diffrentes des cellules MARC-145. Plus prcisment, les cellules SJPL sont plus sensibles lactivation par le VSRRP des pro-caspases 3/7 et plusieurs inducteurs apoptotiques. Elles ont galement montr de 8 16 fois plus de sensibilit leffet antiviral caus par lIFN- sur la rplication du virus contrairement aux cellules MARC-145. Ces rsultats dmontrent que les cellules SJPL pourraient reprsenter un substitut intressant aux cellules MARC-145 pour la production dantignes pour un vaccin anti-VSRRP. galement, d leurs origines (poumon de lhte naturel), elles pourraient savrer tre un modle in vitro plus appropri pour ltude de la pathognse du VSRRP.
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La protine Tau joue un rle essentiel dans les neurones, notamment par ses interactions avec les lments du cytosquelette. Des tudes rcentes ont galement montr que Tau tait implique dans la motilit des organelles le long des microtubules axonaux. Dans ce mmoire de Matrise, nous avons dmontr par recouvrement sur gel une nouvelle interaction in vitro pour Tau avec la petite GTPase Rab5, qui est implique dans lendocytose prcoce. De plus, nous avons montr que Tau et Rab5 immuno-prcipitaient sur une mme population de vsicules in vivo. La sur-expression de Tau dans des neurones primaires de lhippocampe nous a permis de montrer que Tau et Rab5 avaient une distribution similaire dans laxone des neurones, suggrant un rle de Tau dans lancrage des endosomes prcoces sur les microtubules. Par contre, la diffrence de ce qui a pu tre observ dans certaines tudes, la sur-expression de Tau na pas inhib le transport axonal des endosomes prcoces. Enfin, nous avons montr que Tau interagissait prfrentiellement avec la Rab5 active lie au GTP et des rsultats prliminaires nous laissent penser que Tau serait un effecteur ou une GAP pour Rab5. Dans les tauopathies, la Tau devient hyperphosphoryle, dcroche des microtubules axonaux et forme des agrgats dans le corps cellulaire du neurone. Ces modifications biochimiques et de localisation de la protine Tau pourraient tre la source dune perte dinteraction de la Tau avec Rab5 et tre responsable de certaines atteintes neurologiques observes dans les tauopathies.
