Stabilisation of MAD2 expression through inhibition of miR-433; A novel mechanism for restoring chemo-responsiveness in ovarian tumours

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is characterised by late diagnosis and recurrences, both of which contribute to the high morbidity and mortality of this cancer. Unfortunately, EOC has an innate susceptibility to become chemo-resistant. Specifically, up to 30% of patients may not respond to current standard chemotherapy (paclitaxel and platinum in combination) and of those who have an initial response, some patients relapse within a few months. Therefore, in order to improve patient outcome it is crucial to establish what factors influence a patients' individualised response to chemotherapy. We analysed MAD2 protein expression in a patient cohort of 35 ovarian tumours and a panel of 5 ovarian cancer cell lines. We have demonstrated that low nuclear MAD2 expression intensity was significantly associated with chemo-resistant ovarian tumours (p=0.0136). Moreover, in vitro studies of the 5 ovarian cancer cell lines revealed that reduced MAD2 expression was associated with paclitaxel resistance. In silico analysis identified a putative miR-433 binding domain in the MAD2 3′UTR and expression profiling of miR-433 in the ovarian cancer cell lines showed that low MAD2 protein expression was associated with high miR-433 levels. In vitro over-expression of miR-433 attenuated MAD2 protein expression with a concomitant increase in cellular resistance to paclitaxel. Over-expression of a morpholino oligonucleotide that blocks miR-433 binding to MAD2 3′UTR stabilised MAD2 protein expression and protects from miR-433 induced degradation. Furthermore, miR-433 expression analysis in 35 ovarian tumour samples revealed that high miR-433 expression was associated with advanced stage presentations (p=0.0236). In conclusion, ovarian tumours that display low nuclear MAD2 intensity are chemo-resistant and stabilising MAD2 expression by antagonising miR-433 activity is a potential mechanism for restoring chemo-responsiveness in these tumours.

MIR-433 Predicts poor response to chemotherapy in ovarian cancer patients by the induction of cellular senescence

Annually, ovarian cancer (OC) affects 240,000 women worldwide and is the most lethal gynaecological malignancy. Such mortality is predominantly associated with the development of an intrinsic and acquired resistance to chemotherapy, the lack of targeted therapies and the lack of biomarkers predicting response to standard treatment.

Our clinical data demonstrates that increased miR-433 expression in primary high grade serous OC (HGSOCs) is significantly associated with poor PFS (n=46, p=0.024). Interestingly, the IHC analysis of two miR-433 targets: MAD2 [1] and HDAC6 shows that low IHC levels of both proteins is also significantly associated with worse outcome (p=0.002 and 0.002 respectively; n=43). Additionally, the analysis of miR 433 in the publicly available TCGA dataset corroborates that high miR-433 is significantly correlated with worse OS for patients presenting with OC (n=558 and p=0.027). In vito, in a panel of OC cell lines, higher miR-433 and lower MAD2 and HDAC6 levels were associated with resistance to paclitaxel.

To further investigate the role of miR-433 in the cellular response to chemotherapy, we generated an OC cell line stably expressing miR-433 or miR-control. MTT viability assays and Western Blot analyses established that miR-433 cells were more resistant to paclitaxel treatment (50nM) compared to miR-controls. Importantly, we have shown for the first time that miR 433 induced senescence resulting in a chracteristic flattened morphology and down-regulation of phosphorylated Retinoblastoma (p Rb), a molecular marker of senescence. Surprisingly, miR 433 induced senescence was independent from two well recognised senescent drivers: namely p53/p21 and p16. To explore this further we performed an in silico analysis of seven microRNA platforms which indicated that miR 433 potentially targets Cyclin-dependent kinase CDK6, which promotes sustained phosphorylation of Rb and thus cell cycle progression. In vitro, the overexpression of pre-miR-433 resulted in diminished CDK6 expression demonstrating a novel interaction between miR-433 and CDK6.

In conclusion, this study demonstrates that high miR-433 expression predicts poor outcome in OC patients by putatively rendering OC cells resistant to paclitaxel treatment through the induction of cellular senescence identifying this microRNA as a potential marker of chemoresponse.

Resistance to chemotherapy in ovarian cancer is miRrored by the microRNA miR-433-dependent dysregulation of the cell cycle.

An understanding of the mechanisms underlying the development of resistance to chemotherapy treatment is a gateway to the introduction of novel therapies and improved outcomes for women presenting with ovarian cancer (OC). The desired apoptotic death post-chemotherapy depends on an intact and fully functioning cell cycle machinery.

In this study we demonstrate that stable expression of miR-433 renders OC cells more resistant to paclitaxel treatment. Interestingly, only cells with the highest miR-433 survived paclitaxel suggesting the possible role of miR-433 in cancer recurrence. Importantly, for the first time we demonstrate that miR 433 induces cellular senescence, exemplified by a flattened morphology, the downregulation of phosphorylated Retinoblastoma (p Rb) and increased β galactosidase activity. Surprisingly, miR 433 induced senescence was independent of two well recognised senescent drivers: p21 and p16. Further in silico analysis followed by in vitro experiments identified CKD6 as a novel miR-433 target gene possibly explaining the observed p21 and p16-independent induction of cellular senescence. Another in silico identified miR-433 target gene was CDC27, a protein involved in the regulation of the cell cycle during mitosis. We demonstrate that the overexpression of pre-miR-433 leads to the downregulation of CDC27 in vitro revealing a novel interaction between miR-433 and CDC27, an integral cell cycle regulating protein.

Interestingly, miR-433 expressing cells also demonstrated an ability to impact their tumour microenvironment. We show that miR-433 is present in exosomes released from miR-433 overexpressing and high miR-433 naïve cells. Moreover, growth condition media (GCM) harvested from cells with high miR-433 have higher levels of IL-6 and IL-8, two key cytokines involved in the senescence associated secretory phenotype (SASP). Importantly, GCM from miR-433-enriched cells repressed the growth of co-cultured cells with initial studies showing a GCM-dependent induction of chemoresistance.

In conclusion, data in this study highlights how the aberrant expression miR-433 contributes to chemoresistance in OC cells. We postulate that standard chemotherapy, particularly paclitaxel, used to treat women with OC may have an attenuated ability to kill cells harbouring increased levels of miR-433, allowing for a subsequent chemoresistant phenotype post-therapy.

A miR-433 mediated mechanism of chemoresistance in high grade serous ovarian cancer (HGSOC).

Higher expression of the miR-433 microRNA (miRNA) is associated with poorer survival outcomes in patients with HGSOC that may be overcome by a greater understanding of the functional role of this miRNA. We previously described miR-433 as a critical cell cycle regulator and mediator of cellular senescence. Downregulation of the mitotic arrest deficiency 2 (MAD2) protein by miR-433 led to increased cellular resistance to paclitaxel in epithelial ovarian cancer cells (EOC). Furthermore immunohistochemical (IHC) analysis of MAD2 expression in patients with HGSOC showed that loss of MAD2 was significantly associated with poorer patient survival. Higher miR-433 expression is also associated with an increased resistance to the platins which is unrelated to loss of MAD2 expression. In silico analysis of the miR-433 target proteins in the TCGA database identified the association between a number of miR-433 targets and poorer patient survival. IHC analysis of the miR-433 target, histone deacetylase 6 (HDAC6), confirmed that its expression was significantly associated with a decrease in patient overall survival. The knock-down of HDAC6 by siRNA in EOC cells did not attenuate apoptotic responses to paclitaxel or platin although lower endogenous HDAC6 expression was associated with more resistant EOC cell lines. In vitro analysis revealed that EOC cells which survived chemotherapeutic kill with high doses of paclitaxel expressed higher miR-433 and concomitant decreased expression of the miR-433 targets. These cells were more chemoresistant compared to the parental cell line and repopulated as 3d organoid cultures in non-adherent stem cell selective conditions; thus indicating that the cells which survive chemotherapy were viable, capable of regrowth and had an increased potential for pluripotency. In conclusion, our data suggests that chemotherapy is not driving the transcriptional upregulation of miR-433 but rather selecting a population of cells with high miR-433 expression that may contribute to chemoresistant disease and tumour recurrence.

Zur Bedeutung von Strafe im Kontext struktureller Gewalt : Weibliche und männliche Erfahrungen in der Sozialisation

Bestrafungen gehören seit „Erfindung“ der Kindheit zu einem wesentlichen Bestandteil der Kindererziehung bis heute. Bestraft werden sowohl Jungen als auch Mädchen, wenn auch für unterschiedliche Taten. Zwar ist z.B. in der jüngeren Geschichte die körperliche Gewalt in der Schule verschwunden und seit kurzem auch zumindest formell im Elternhaus, dennoch werden Kinder immer noch bestraft. Alle Menschen haben als Kinder Strafen am eigenen Leibe und/oder in der eigenen Seele zu spüren bekommen oder waren zumindest Zeugen derselben. Wie also lernen Jungen und Mädchen mit Strafen umzugehen, sie anzunehmen oder sich in bestimmten Fällen zu distanzieren, ohne sie als solche infrage zu stellen? Und welche gesellschaftlichen Regelungen werden über Strafe vermittelt? Diesen Fragen geht die Autorin mit Hilfe der qualitativen empirischen Forschungsmethode der Erinnerungsarbeit (nach Frigga Haug 1990) nach.

Die Kosten der Modellabteilung "H-Milch"

Mit der vorliegenden Arbeit wird die im Jahr 1975 durchgeführte Modellkalkulation in der H-Milch-Abteilung aktualisiert, indem die Funktionsinhalte der Abteilung erweitert werden und der neueste Stand der Technik entsprechend bestehender Produktionsstrukturen zur Anwendung kommt. Darüber hinaus werden die generell für alle Modellabteilungen geltenden methodischen Weiterentwicklungen In den Kalkulationen berücksichtigt. Unterteilt in drei Unterabteilungen - Ultrahocherhitzung, Aseptische Abpackung und Lager - wird der Produktionsprozeß zur Herstellung der ausgewählten Produkte H-Vollmilch und teilentrahmte H-Milch hinsichtlich ihrer Kostenverursachung untersucht. Die Bestimmung der Abteilungs- und Stückkosten für H-Milch erfolgt in vier Modellen, deren Kapazitäten entsprechend der Abfülleistung zwischen 5.700 Packungen/Stunde und 34.200 Packungen/Stunde liegen. In Abhängigkeit vom Beschäftigungsgrad, der für Werte zwischen 15 und 100 % simuliert wird, können so die Kosten für Produktionsmengen zwischen 4,6 und 183,4 Mio. Packungen/Jahr ermittelt werden. Die zu tätigenden Investitionen für die Grundversion betragen im Modeln 5,1 Mio. DM, die sich im Modell 4 auf 18,0 Mio. DM erhöhen. Bezogen auf die jeweilige Outputmenge, die sich zu 40 % aus H-Vollmilch und zu 60 % aus teilentrahmter H-Milch zusammensetzt, ergeben sich aus den Investitionssummen spezifische Investitionen, die sich mit zunehmender Modellgröße von 168 auf 98 DM/1.000 Packungen erheblich senken. Die modellspezifischen Gesamtkosten der Abteilung „H-Milch“, die sich aus den Einzelkosten der Produkte und den Einzelkosten der Abteilung zusammensetzen, betragen im größten Modell bei 100%iger Beschäftigung 75,7 Pf/Packung, die sich im kleinsten Modell auf 78,4 Pf/Packung erhöhen. Die outputbezogenen Einzelkosten der Produkte differieren infolge des unterschiedlichen Fettgehaltes nur in den Rohstoffkosten; in den übrigen Kostenarten wird von den gleichen Produktionsverbräuchen ausgegangen, da für die Herstellung beider Produkte dieselbe Technologie verwendet wird. Bei einem Beschäftigungsgrad von 63 % entfallen von den Gesamtkosten der Abteilung je nach Modellgröße 58-61 % auf die Rohstoffkosten, 3 - 5 % auf die Anlagekosten und 30 % auf die Verpackungskosten. Die übrigen Kostenarten wie Energiekosten mit 3 - 4 % und Personalkosten mit 0,8 -1,5 % sind von geringerer Bedeutung. Den Ergebnissen der Modellkalkulationen ist zu entnehmen, daß mit zunehmender Kapazitätsgröße und ansteigendem Beschäftigungsgrad erhebliche Stückkostendegressionen zu erreichen sind. So empfehlen sich beispielsweise bei verminderten Produktionsmengen Anpassungen in der Ausstattung der Abteilung, die zu sprunghaften Kostensenkungen führen können. Kostendegressionseffekte ergeben sich auch bei der Verringerung der Produktionstage in Beschäftigungssituationen eines 2- und 1-Schichtbetriebes. Wird z.B. in einer Abteilung mit zwei Abfüllanlagen (Modell 2) die Produktion eines 2-Schichtbetriebes von 250 Produktionstagen auf 200 Produktionstage/Jahr konzentriert, lassen sich die Abteilungskosten um 70.000 DM/Jahr verringern

Die Kosten der Modellabteilung „Milchtrocknung“ am Beispiel der Herstellung von Sprühmagermilchpulver

Mit der Analyse des Kostenverlaufes in der Abteilung „Milchtrocknung“ wird die Aktualisierung der Modellabteilungsrechnung fortgeführt. In fünf Unterabteilungen - Vorstapelung, Eindampfung, Trocknung, Absackung und Lager - wird verursachungsgerecht untersucht, welche Kosten bei der Herstellung von Sprühmagermilchpulver, abgefüllt in 25-kg-Säcken, auf Abteilungsebene entstehen. Die Bestimmung der Abteilungs- und Stückkosten erfolgt in drei Modellgrößen, deren Kapazitäten entsprechend der Leistung des Verdampfers für Verarbeitungsmengen zwischen 10.800 und 55.000 kg Magermilch/Stunde ausgelegt sind. In Abhängigkeit vom Beschäftigungsgrad, der für Werte zwischen 15 und 100 % simuliert wird, lassen sich Kosten für Produktionsmengen zwischen 1.000 und 35.300 t Magermilchpulver/Jahr ermitteln. Die in Ansatz gebrachten Investitionen betragen im Modell 1 8,1 Mio. DM, die sich im Modell 3 auf 20,3 Mio. DM erhöhen. Bezogen auf die jeweilige Outputmenge ergeben sich aus den Investitionssummen spezifische Investitionen, die mit zunehmender Modellgröße von 1.177 DM auf 576 DM/t Magermilchpulver abfallen. Bei einer Beschäftigung von 100 % mit 340 Produktionstagen im Jahr errechnen sich in den Modellkalkulationen modellspezifische Gesamtkosten in Höhe von 371,28 Pf im Modell 1,358,74 Pf im Modell 2 und 351,06 Pf im Modell 3 je kg Magermilchpulver. Kostenanalysen bei einem Beschäftigungsgrad von 80 % mit 280 Produktionstagen im Jahr zeigen, daß die modellspezifischen Gesamtkosten zu 86 % (Modell 1) bis 92 % (Modell 3) von den Rohstoffkosten bestimmt werden. 3 - 6 % entfallen auf die Anlagekosten, 1 - 3 % auf die Personalkosten, und mit 4 % sind die Kosten für Energie und Betriebsstoffe an den modellspezifischen Gesamtkosten beteiligt. Die Verpackungskosten werden in allen Modellen mit einem Anteil von 1 % an den Gesamtkosten ausgewiesen. Unter dem Einfluß von Kapazitätsauslastung und Kapazitätsgröße lassen sich auffallende Kostendegressionseffekte erzielen, die durch Simulationsrechnungen für verschiedene Variationen von Beschäftigungen, Produktionstagen und -Zeiten belegt werden. Die Kostenanalyse zeigt deutlich, daß mit zunehmender Modellgröße und steigender Produktionsmenge erhebliche Stückkostendegressionen zu erzielen sind, wobei der Einfluß des Beschäftigungsgrades auf die Kostendesgression merklich höher ist als derjenige der Modellgröße.

Implementação da diretiva 2010/75/EU - emissões industriais. Estudo de caso: refinaria de Sines

Tese de mestrado integrado em Engenharia da Energia e do Ambiente, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2016

Jornalismo político na revolução: a imprensa Trotskista em 1974-75.

Dissertação apresentada à Escola Superior de Comunicação Social como parte dos requisitos para obtenção de grau de mestre em Jornalismo.

Red de arrastre pelágica 124/1800 y resultados del filtrado de los paneles de malla 150 y 75 mm en la prspección de la vinciguerria Crucero BIC Jose Olaya Balandra 9910, del Callao a Chancay

Se presentaron los resultados de la modificación y adaptaciones de la red pelágica 124/1800 para la captura del recurso Vinciguerria.

Juvenalis, Satirae, cum glossis marginalibus et interlinearibus (1-75). - Persius, Satirae, cum glossis marginalibus et interlinearibus (76v-88v).

Ce ms. a appartenu à l'avocat parisien Antoine Loisel (1536-1617) (signature au f. 1), grand-père de Claude Joly, chantre de Notre-Dame, qui légua les mss. dont il avait hérité de son grand-père au chapitre de Notre-Dame de Paris en 1680. Notre-Dame.

Français 904

Contient : 1° Le Mystère de la Création et de la Passion ; 2° Fragment d'une farce dont les personnages sont un vilain et son fils. Premiers vers (fol. 270) ; 3° « Moralité nouvelle de la Croix Faubin, à sept personnaige » (fol. 273)