Percutaneous peptide immunization via corneum barrier-disrupted murine skin for experimental tumor immunoprophylaxis

H-2Kb-restricted tumor epitope peptides, including tyrosinase-related protein 2 residues 181–188 (TRP-2) and connexin 37 residues 52–59 (MUT1), were applied to permeability barrier-disrupted C57BL/6 (B6) mouse skin from which the stratum corneum of the epidermis had been removed by tape-stripping. This procedure primed tumor-specific cytotoxic T lymphocytes (CTLs) in the lymph nodes and spleen, protected mice against subsequent challenge with corresponding tumor cells, and suppressed the growth of established tumors. Preventive and therapeutic effectiveness was correlated with the frequency of tumor-specific CTL precursors. MHC class II Iab+ cells separated from tape-stripped skin, compared with those from intact skin, exhibited a strong antigen-presenting capacity for CTL, suggesting that CTL expansion after peptide application is primarily mediated by epidermal Langerhans cells. Thus, percutaneous peptide immunization via barrier-disrupted skin provides a simple and noninvasive means of inducing potent anti-tumor immunity which may be exploited for cancer immunotherapy.

Conformations and folding of lysozyme ions in vacuo.

Proton transfer reactivity of isolated charge states of the protein hen egg-white lysozyme shows that multiple distinct conformations of this protein are stable in the gas phase. The reactivities of the 9+ and 10+ charge state ions, formed by electrospray ionization of "native" (disulfide-intact) and "denatured" (disulfide-reduced) solutions, are consistent with values calculated for ions in their crystal structure and fully denatured conformations, respectively. Charge states below 8+ of both forms, formed by proton stripping, have similar or indistinguishable reactivities, indicating that the disulfide-reduced ions fold in the gas phase to a more compact conformation.

Gas-phase folding and unfolding of cytochrome c cations.

Water is thought to play a dominant role in protein folding, yet gaseous multiply protonated proteins from which the water has been completely removed show hydrogen/deuterium (H/D) exchange behavior similar to that used to identify conformations in solution. Indicative of the gas-phase accessibility to D2O, multiply-charged (6+ to 17+) cytochrome c cations exchange at six (or more) distinct levels of 64 to 173 out of 198 exchangeable H atoms, with the 132 H level found at charge values 8+ to 17+. Infrared laser heating and fast collisions can apparently induce ions to unfold to exchange at a higher distinct level, while charge-stripping ions to lower charge values yields apparent folding as well as unfolding.

Oxidação eletroquímica de etanol em temperatura ambiente e intermediária: estudo quantitativo das vias reacionais por espectrometria de massas on-line

Na primeira parte do trabalho, foram investigados materiais ativos para eletro-oxidar etanol e acetaldeído seletivos para a rota C2 (Carbono 2) e, também, ativos para eletro-oxidar hidrogênio molecular, visando a aplicação em células a combustível de hidrogênio indireto. Neste tipo de célula, um processador de combustível externo desidrogena o etanol e os produtos desta reação, contendo H2, acetaldeído e, possivelmente, etanol residual, são direcionados para alimentar o ânodo. Neste sentido, o eletrocatalisador anódico pode ser ativo para a eletro-oxidação de etanol residual, bem como acetaldeído, mas este deve catalisar a reação via C2 com o objetivo de evitar a formação de espécies que envenenam a superfície catalítica (CO ou CHx), ou seja, a ligação C-C deve permanecer intacta. Os eletrocatalisadores bimetálicos foram formados por M/Pt/C (onde M = W, Ru ou Sn) e os produtos reacionais foram analisados por DEMS On-line. Os resultados mostraram que Ru/Pt/C e Sn/Pt/C apresentaram maiores taxas de reação global, no entanto, eles não foram seletivos. Por outro lado, W2/Pt3/C foi mais seletivo para a rota C2, dada a não formação de CH4 e CO2. Além disso, este material também foi ativo e estável para a eletro-oxidação de H2, mesmo na presença de acetaldeído, o que o torna um potencial catalisador para aplicação no ânodo de células a combustível de hidrogênio indireto. Na segunda parte do trabalho, o objetivo foi relacionado com o estudo de eletrocatalisadores seletivos para a rota C1 (Carbono 1). A oxidação eletroquímica do etanol e de seus produtos reacionais foram investigados por DEMS on-line em temperatura ambiente e intermediária (245oC). Para temperatura ambiente, utilizou-se solução aquosa de ácido sulfúrico (H2SO4) e, para temperatura intermediária, utilizou-se ácido sólido (CsH2PO4) como eletrólito. Os eletrocatalisadores investigados foram formados por SnOxRuOx-Pt/C e Pt/C. Em temperatura ambiente, os resultados de polarização potenciodinâmica mostraram uma maior atividade eletrocatalítica para o material SnOxRuOx-Pt/C, com eficiência de corrente para formação de CO2 de 15,6% contra 15,2% para Pt/C, sob condições estagnantes, sem controle por transporte de massa. O stripping de resíduos reacionais, após a eletro-oxidação de etanol bulk, sob condições de fluxo, mostraram o acúmulo de espécies com 1 átomo de carbono (CO e CHx) que causam o bloqueio dos sítios ativos e são oxidadas eletroquimicamente somente em mais altos potenciais (ca. 1,0 V). Por outro lado, as curvas de polarização a 245oC mostraram maiores valores de eficiências de correntes para formação de CO2 (45% para Pt/C em ambos potenciais 0,5 V e 0,8 V contra 36% e 50% para SnOxRuOx-Pt/C em 0,5 V e 0,8 V respectivamente) quando comparado com os valores obtidos em temperatura ambiente, mas com atividades similares para SnOxRuOx-Pt/C e Pt/C. Para ambos os eletrocatalisadores, os estudos de espectrometria de massas a 245oC evidenciaram que as rotas eletroquímicas ocorrem em paralelo com rotas puramente químicas, envolvendo catálise heterogênea, de decomposição do etanol, produzindo H2 e CO2 como produtos majoritários.

Análise de confiabilidade de estruturas com paredes portantes de concreto pré-moldado

O método construtivo com painéis portantes de concreto é economicamente viável, porém relativamente novo no cenário nacional, sobretudo no caso dos pré-moldados. As incertezas referentes às peculiaridades desse método, bem como a nova norma brasileira de painéis pré-moldados, ainda em elaboração, vem a motivar uma análise probabilística dos critérios de projeto disponíveis. Utilizando-se a técnica da confiabilidade estrutural, é possível propagar as incertezas referentes às variáveis a uma resposta final no índice de confiabilidade, sendo um cálculo totalmente probabilístico. Neste trabalho, emprega-se tal técnica com informações estatísticas referentes a lajes de concreto moldadas in loco para verificar, de maneira mais verossímil, a segurança dos critérios de projeto impostos pelo Precast Concrete Institute Design Handbook - Precast and Prestressed Concrete - 7th Edition (2010) às fases transitórias (desforma, transporte e içamento) e pela Norma Brasileira ABNT NBR 6118: 2014 - Projeto de estruturas de concreto, à fase em uso. Prossegue-se a uma análise crítica dos resultados bem como sugestões para diminuir a variação dos resultados, sobretudo pela calibração de novos coeficientes parciais de segurança, processo para o qual este trabalho pode servir de base.

Pós-tratamento físico-químico por flotação de efluentes de reatores anaeróbios de manta de lodo (UASB)

O emprego da flotação por ar dissolvido (FAD) para o pós-tratamento de efluentes de reatores anaeróbios aparenta ser atraente considerando algumas características desse processo físico-químico. A FAD é reconhecidamente um processo de alta taxa, particularmente eficiente na remoção de material particulado em suspensão e de flocos produzidos pela coagulação química de águas residuárias. Além disso, há produção de lodo espesso e provavelmente arraste de parcela de gases e de compostos voláteis, presentes nos efluentes anaeróbios. Entretanto, a concepção de sistemas de FAD deve ser precedida por ensaios em unidades de flotação em escala de laboratório, permitindo a determinação dos principais parâmetros do processo. Neste trabalho, são apresentados e discutidos os resultados obtidos em laboratório e em instalação piloto de flotação com escoamento contínuo recebendo efluente de reator anaeróbio de manta de lodo (UASB), com 18 m3 de volume, tratando esgoto sanitário. Os ensaios em unidade em escala de laboratório foram realizados utilizando diferentes dosagens de cloreto férrico (entre 30 e 110 mg/L) ou de polímero catiônico (entre 1,0 e 16,0 mg/L), atuando como coagulantes. Além disso, foram estudadas as condições de floculação (tempo de 15 e de 25 min, e gradiente médio de velocidade de floculação entre 30 e 100 s-1) e diferentes valores de quantidade de ar fornecido ao processo (S*, entre 4,7 e 28,5 g de ar por m3 de efluente). Com a instalação piloto de FAD foram realizados apenas ensaios preliminares variando-se a taxa de aplicação superficial (140 e 210 m3/m2/d) para diferentes valores de S* (14,8 a 29,5 g de ar por m3 de efluente). Com o emprego de dosagem de 65 mg/L de cloreto férrico, de tempo de 15 min e gradiente médio de velocidade de floculação de 80 s-1 e de 19 g de ar por m3 de efluente, foram observados excelentes resultados em laboratório, com elevadas remoções de DQO (89%), de fosfato total (96%), de sólidos suspensos totais (96%), de turbidez (98%), de cor aparente (91%), de sulfetos (não detectado) e NTK (47%). Considerando o sistema UASB e FAD, nos testes em laboratório, foram observadas remoções globais de 97,7% de DQO, de 98,0% de fosfato total, de 98,9% de SST, de 99,5% de turbidez, de 97,8% de cor aparente e de 59,0% de NTK. Nos ensaios com a instalação piloto de FAD, o sistema apresentou remoções de 93,6% de DQO, de 87,1% de SST, de 90% de sulfetos e de 30% de NTK.

Nitrate reduction at Pt(1 0 0) single crystals and preferentially oriented nanoparticles in neutral media

The electroreduction of nitrate on Pt(1 0 0) electrodes in phosphate buffer neutral solution, pH 7.2, is reported. The sensitivity of the reaction to the crystallographic order of the surface is studied through the controlled introduction of defects by using stepped surfaces with (1 0 0) terraces of different length separated by monoatomic steps, either with (1 1 1) or (1 1 0) symmetry. The results of this study show that nitrate reduction occurs mainly on the well defined (1 0 0) terraces in the potential region where H adsorption starts to decrease, allowing the nitrate anion to access the surface. Adsorbed NO has been detected as a stable intermediate in this media. An oxidation process observed at 0.8 V has been identified as leading to the formation of adsorbed NO and being responsible for a secondary reduction process observed in the subsequent negative scan. Using in situ FTIRS, ammonium was found to be the main product of nitrate reduction. This species can be oxidized at high potentials resulting in adsorbed NO and nitrate (probably with nitrite as intermediate).

NANO(BIO)SENSORES ELECTROQUIMICOS Y PLASMÓNICOS: DISEÑO, CARACTERIZACIÓN Y APLICACIONES PARA LA CUANTIFICACION DE BIOMARCADORES DE ALTO IMPACTO

En Argentina, en consonancia con el resto del mundo, la Nanotecnología es considerada un área estratégica. Sin embargo, las investigaciones en Nanobiotecnología todavía constituyen un área de vacancia. El uso de nanomateriales para desarrollar plataformas bioanalíticas que permitan la construcción de biosensores ofrece múltiples ventajas y una promisoria perspectiva de aplicación en diversas áreas. En la actualidad, los laboratorios de análisis clínicos, la industria farmacéutica y alimentaria, y los laboratorios de control bromatológico y ambiental requieren de metodologías analíticas que proporcionen resultados exactos, reproducibles, rápidos, sensibles y selectivos empleando pequeños volúmenes de muestra, con un mínimo consumo de reactivos y una producción de deshechos limpia y escasa. Las investigaciones en nanobiosensores se encuentran dirigidas hacia el logro de estas metas. Uno de los grandes desafíos es lograr biosensores miniaturizados con potencialidad para el desarrollo de dispositivos de medición descentralizada (“point of care”) y la detección simultánea de multianalitos. Aún cuando se han hecho innumerables desarrollos en los casi 50 años de vida de los biosensores, todavía hay numerosos interrogantes por dilucidar. La modificación con nanomateriales juega un rol preponderante en los transductores tanto en los electroquímicos como en los plasmónicos. El uso de películas delgadas de Au para SPR modificadas con grafeno u óxido de grafeno, es un campo de una enorme potencialidad y sin embargo es muy poco explotado, por lo que reviste gran importancia. En lo referido a la capa de biorreconocimiento, se trabajará con moléculas capaces de establecer interacciones de bioafinidad, como los anticuerpos y también moléculas que son muy poco usadas en nuestro país y en Latinoamérica como ADN, aptámeros, PNA y lectinas. RESUMEN: El Objetivo general de este proyecto es desarrollar nuevas plataformas bioanalíticas para la detección de diferentes eventos de bioafinidad a partir de la integración de transductores electroquímicos (EQ) y plasmónicos con materiales nanoestructurados (nanotubos de carbono, nanoláminas de grafeno, nanoalambres metálicos); biomoléculas (ADN, “peptide nucleic acid” (PNA), aptámeros, anticuerpos, lectinas) y polímeros funcionalizados con moléculas bioactivas. Las arquitecturas supramoleculares resultantes estarán dirigidas al desarrollo de biosensores EQ y plasmónicos para la cuantificación de biomarcadores de relevancia clínica y medioambiental. Se funcionalizarán CNT, grafeno, óxido de grafeno, nanoalambres metálicos empleando homopéptidos y proteínas con alta afinidad por cationes metálicos, los que se integrarán a transductores de carbono y oro y biomoléculas de reconocimiento capaces de formar complejos de afinidad (antígeno-anticuerpo, aptámero-molécula blanco, ADN-ADN, PNA-ADN, lectinas-hidratos de carbono, ligandos-cationes metálicos y avidina-biotina). Se sintetizarán y caracterizarán nuevos monómeros y polímeros funcionalizados con moléculas bioactivas y/o grupos rédox empleando diferentes rutas sintéticas. Se desarrollarán genosensores para la detección del evento de hibridación de secuencias de interés médico (cáncer de colon y de mama, tuberculosis); aptasensores para la detección de marcadores proteicos de T. cruzi, enfermedades cardiovasculares y contaminantes catiónicos; inmunosensores para la detección de biomarcadores proteicos relacionados con enfermedades cardiovasculares y cáncer; y biosensores de afinidad con lectinas para la detección de hidratos de carbono. La caracterización de las plataformas y las señales analíticas se obtendrán empleando las siguientes técnicas: voltamperometrías cíclica, de pulso diferencial y de onda cuadrada; stripping; resonancia de plasmón superficial; espectroscopía de impedancia electroquímica; microscopías de barrido electroquímico, SEM, TEM, AFM,SNOM, espectroscopías: UV-vis, FTIR,Raman;RMN, TGA y DSC.

Constituição e modelo de mercado : uso liberal e desuso neoliberal

Tese de doutoramento, Direito (Ciências Jurídico-Políticas), Universidade de Lisboa, Faculdade de Direito, 2016

Troubleshooting di un impianto di disidratazione di gas naturale: un caso di studio

Il principale componente non idrocarburico contenuto nel gas naturale è l’acqua che viene rimossa mediante assorbimento con glicole trietilenico, il processo di trattamento più comune nella produzione di gas naturale. La presenza di acqua libera nel gas deve essere rimossa totalmente, per evitare la formazione di condensa nelle condizioni di trasporto e di distribuzione più critiche cioè a pressione elevata e a bassa temperatura. Obiettivo di questa tesi è l’analisi delle cause e dei fenomeni che portano a rilevanti perdite di glicole (TEG) in impianti di disidratazione del gas naturale operanti con elevate concentrazioni di CO2 e H2S nel gas di processo. Le perdite, in relazione alle diverse condizioni operative e concentrazioni dei gas menzionati, possono arrivare a raggiungere valori pari a 3-4 volte l'entità attesa, con punte che raggiungono 10 volte tali valori. Il lavoro di tesi è stato focalizzato su un impianto attualmente in esercizio, situato in Arabia Saudita. L’attività è stata condotta presso la Comart di Ravenna, azienda specializzata nella progettazione di impianti nel settore Oil&Gas. Inizialmente sono state studiate le caratteristiche di un impianto di disidratazione di gas naturale mediante assorbimento con glicole trietilenico. Dopo l’analisi delle possibili fonti di perdita, la colonna di alimentazione del ribollitore (Still Column) e il relativo condensatore, sulla base dei dati operativi degli impianti, sembra essere il punto su cui si concentrano le perdite. Vengono presentati i dettagli costruttivi di tale colonna al fine di determinarne i possibili malfunzionamenti. Scopo della tesi sarà l'identificazione, partendo dall'attuale configurazione dell’impianto, delle cause che portano a tali valori di perdite e l'individuazione di una configurazione colonna/condensatore (con eventuali altri equipment necessari) in grado di minimizzare le perdite contenendo al minimo i costi aggiuntivi della soluzione.

Pliocene-Pleistocene carbon isotope record of foraminifera from DSDP Site 89-586

Oceanographic changes in the western equatorial Pacific during the past 6 m.y. are inferred from carbon isotopic analyses of planktonic and benthic foraminifers from Ontong Java Plateau (DSDP Site 586). Sample spacing is 1.5 m (ca. 35,000-75,000 yr). An overall trend of d13C toward lighter values is evident for the last 5 m.y. in all four foraminiferal taxa analyzed (G. sacculifer, Pulleniatina, P. wuellerstorfi, and O. umbonatus). This trend is interpreted as an enrichment of the global ocean with 12C, because of the addition of carbon from organic carbon reservoirs (or lack of removal of carbon to such reservoirs), as a consequence of an overall drop in sea level. Differences between shallow- and deep-water d13C decrease slightly during this time interval, suggesting a moderate drop in productivity. This drop is not sufficient to explain the drop in sedimentation rate, however, much of which apparently must be ascribed to winnowing effects. A marked convergence in the d13C values of planktonic taxa exists within the last 2 m.y. We propose that this convergence indicates nutrient depletion in thermocline waters, caused by the vigorous removal of phosphate in marginal upwelling regions, or by the stripping of intermediate waters in their source regions. No large shifts are seen in the carbon isotope record of the last 6 m.y., in contrast to the oxygen isotope record. Some indication of cyclicity is present, with a period between 0.5 and 1.0 m.y. (especially in the earlier portion of the record).

Galaxy threshing and ultra-compact dwarfs in the Fornax cluster

We have discovered a new type of galaxy in the Fornax Cluster: 'ultra-compact' dwarfs (UCDs). The UCDs are unresolved in ground-based imaging and have spectra typical of old stellar systems. Although the UCDs resemble overgrown globular clusters, based on VLT UVES echelle spectroscopy, they appear to be dynamically distinct systems with higher internal velocity dispersions and M/L ratios for a given luminosity than Milky Way or M31 globulars. Our preferred explanation for their origin is that they are the remnant nuclei of dwarf elliptical galaxies which have been tidally stripped, or 'threshed' by repeated encounters with the central cluster galaxy, NGC1399. If correct, then tidal stripping of nucleated dwarfs to form UCDs may, over a Hubble time, be an important source of the plentiful globular cluster population in the halo of NGC1399, and, by implication, other cD galaxies. In this picture, the dwarf elliptical halo contents, up to 99% of the original dwarf luminosity, contribute a significant fraction of the populations of intergalactic stars, globulars, and gas in galaxy clusters.