Gen LPP : Avances en el conocimiento de uno de los genes candidato de la enfermedad celíaca

[ES] La enfermedad celíaca (EC) es una enteropatía autoinmune de predisposición genética, producida por la ingestión en la dieta de péptidos derivados de cereales como el trigo o la cebada. Aunque se creía que afectaba casi de forma exclusiva a los individuos europeos (1%), actualmente se conocen casos en todo el mundo. El modelo patogénico se centra en los mecanismos de la inmunidad adaptativa dependientes de la estimulación de linfocitos T CD4+ reactivos, pero existe además un efecto tóxico directo del gluten sobre el epitelio intestinal, dependiente de la inmunidad innata. La participación de la Genética en la susceptibilidad a la enfermedad es conocida desde hace tiempo, siendo el locus HLA el que explica aproximadamente el 40% del componente genético de la enfermedad. Para tratar de identificar otros genes con susceptibilidad, se han venido realizando múltiples esfuerzos durante los últimos años. Uno de los últimos, llevado a cabo en 2011, fue el Proyecto Immunochip. En él, se analizaron más de 200.000 variantes y se descubrieron 13 nuevos loci de riesgo para la EC, que junto con los descubiertos en anteriores trabajos y el locus HLA, daban un total de 40 loci de riesgo. Entre ellos, se encontraba la región que ocupa el gen LPP . Localizado en el cromosoma 3, un estudio reciente lo vincula con los procesos de adhesión celular en el intestino. En el presente trabajo, se ha estudiado el efecto de la gliadina sobre la expresión del gen de interés (LPP ) y el posible efecto de un silenciamiento del mismo sobre dos genes relacionados con las uniones celulares (ACTB y TJP1). En el caso de la gliadina, no se halló un cambio significativo en la expresión del gen. Mientras, los resultados del efecto del silenciamiento fueron dispares, no siendo concluyentes para el gen ACTB, pero encontrando una posible asociación entre los genes LPP y TJP1.

Hanseníase neural, aspectos diagnósticos da forma neural pura e mecanismos imunopatogênicos da lesão do nervo na doença. Participação de quimiocinas CCL2 e CXCL10 e metaloproteinases 2 e 9

O diagnóstico da hanseníase neural pura baseia-se em dados clínicos e laboratoriais do paciente, incluindo a histopatologia de espécimes de biópsia de nervo e detecção de DNA de Mycobacterium leprae (M. leprae) pelo PCR. Como o exame histopatológico e a técnica PCR podem não ser suficientes para confirmar o diagnóstico, a imunomarcação de lipoarabinomanana (LAM) e/ou Glicolipídio fenólico 1 (PGL1) - componentes de parede celular de M. leprae foi utilizada na primeira etapa deste estudo, na tentativa de detectar qualquer presença vestigial do M. leprae em amostras de nervo sem bacilos. Além disso, sabe-se que a lesão do nervo na hanseníase pode diretamente ser induzida pelo M. leprae nos estágios iniciais da infecção, no entanto, os mecanismos imunomediados adicionam severidade ao comprometimento da função neural em períodos sintomáticos da doença. Este estudo investigou também a expressão imuno-histoquímica de marcadores envolvidos nos mecanismos de patogenicidade do dano ao nervo na hanseníase. Os imunomarcadores selecionados foram: quimiocinas CXCL10, CCL2, CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD45RO, CD68, HLA-DR, e metaloproteinases 2 e 9. O estudo foi desenvolvido em espécimes de biópsias congeladas de nervo coletados de pacientes com HNP (n=23 / 6 BAAR+ e 17 BAAR - PCR +) e pacientes diagnosticados com outras neuropatias (n=5) utilizados como controle. Todas as amostras foram criosseccionadas e submetidas à imunoperoxidase. Os resultados iniciais demonstraram que as 6 amostras de nervos BAAR+ são LAM+/PGL1+. Já entre as 17 amostras de nervos BAAR-, 8 são LAM+ e/ou PGL1+. Nas 17 amostras de nervos BAAR-PCR+, apenas 7 tiveram resultados LAM+ e/ou PGL1+. A detecção de imunorreatividade para LAM e PGL1 nas amostras de nervo do grupo HNP contribuiu para a maior eficiência diagnóstica na ausência recursos a diagnósticos moleculares. Os resultados da segunda parte deste estudo mostraram que foram encontradas imunoreatividade para CXCL10, CCL2, MMP2 e MMP9 nos nervos da hanseníase, mas não em amostras de nervos com outras neuropatias. Além disso, essa imunomarcação foi encontrada predominantemente em células de Schwann e em macrófagos da população celular inflamatória nos nervos HNP. Os outros marcadores de ativação imunológica foram encontrados em leucócitos (linfócitos T e macrófagos) do infiltrado inflamatório encontrados nos nervos. A expressão de todos os marcadores, exceto CXCL10, apresentou associação com a fibrose, no entanto, apenas a CCL2, independentemente dos outros imunomarcadores, estava associada a esse excessivo depósito de matriz extracelular. Nenhuma diferença na frequência da imunomarcação foi detectada entre os subgrupos BAAR+ e BAAR-, exceção feita apenas às células CD68+ e HLA-DR+, que apresentaram discreta diferença entre os grupos BAAR + e BAAR- com granuloma epitelioide. A expressão de MMP9 associada com fibrose é consistente com os resultados anteriores do grupo de pesquisa. Estes resultados indicam que as quimiocinas CCL2 e CXCL10 não são determinantes para o estabelecimento das lesões com ou sem bacilos nos em nervo em estágios avançados da doença, entretanto, a CCL2 está associada com o recrutamento de macrófagos e com o desenvolvimento da fibrose do nervo na lesão neural da hanseníase.

Um limite absoluto para o Direito? O princípio do dano e o problema da coação legítima

O princípio do dano, assim como elaborado por John Stuart Mill em On Liberty, é tido como elemento fundamental à afirmação do liberalismo a partir do século XIX e seu desenvolvimento rumo ao século XX. Diante das nascentes democracias européias foi afirmado como um princípio absoluto de proteção à liberdade individual contra a imposição da moralidade pela opinião pública e pelo Estado. Mill partilhava o apreço de Tocqueville pela democracia sem deixar de temer a tirania das maiorias. Inicialmente, investiga-se o lugar do princípio do dano na filosofia política milliana e as fragilidades apontadas por seus críticos. Em um segundo momento, analisa-se sua influência na defesa das liberdades civis na Inglaterra da década de 1950, especificamente com a edição do Relatório Wolfenden que defendeu a descriminalização de práticas homossexuais, bem como o debate que se lhe seguiu sobre os limites do Direito protagonizado por H.L.A. Hart. Na última parte, o objeto do estudo é o princípio do dano agora inserido em uma doutrina liberal-perfeccionista, assim como formulada por Joseph Raz em A Moralidade da Liberdade. O objetivo final é revelar a existência de incoerências internas no princípio do dano, tanto em sua versão original como nas que lhe sucederam, de modo a impedir a fixação de uma espaço imune ao Direito e à imposição da moralidade. No entanto, visto da perspectiva adequada, o fracasso na elaboração de tal princípio deve ser relativizado, eis que no seu devir o princípio do dano serviu à reflexão acerca dos limites da coerção legítima, bem como ao aprimoramento de conceitos relevantes à filosofia política como moralismo legal, paternalismo e perfeccionismo jurídicos.

Alorreatividade dos enxertos ósseos homólogos na reconstrução alveolar em humanos

Enxerto ósseo homólogo é utilizado independentemente da compatibilidade HLA entre doador e receptor ou uso de drogas imunossupressoras. Considerando o volume de transplantes ósseos realizados no Brasil e o possível efeito deletério da sensibilização HLA para o transplante de órgãos sólidos, este estudo tem como objetivo avaliar a alorreatividade do enxerto ósseo homólogo fresco-congelado utilizado na reconstrução alveolar com finalidade de reabilitação oral com prótese sobre implantes. Anticorpos anti-HLA e anti-MICA foram monitorados através do teste Labscreen Mixed, nos intervalos 0, 7, 30, 90 e 180 pós transplante ósseo em 15 pacientes (6 homens e 9 mulheres, idade média 58,1, DP=10,1) que estavam em tratamento no Instituto de Odontologia da Pontifícia Universidade Católica do Rio de Janeiro. Caso resultado do teste Mixed fosse positivo (Razão de fundo normatizado, NBG>4,5) o teste Labscreen Single (tecnologia antígeno único por pérola, SABA) era realizado para verificar se os anticorpos anti-HLA eram específicos ao doador. Nenhum paciente relatou transplante prévio, 4 relataram transfusão prévia e todas as mulheres relataram gravidez. Dez pacientes não apresentaram reação positiva no dia 0 sendo considerados não sensibilizados previamente (NSP); destes, 6 pacientes permaneceram sem nenhuma evidência de sensibilização, 2 pacientes apresentaram reação positiva para Classe I e II; 2 para Classe I apenas; e 2 para MICA, sendo considerados sensibilizados pelo enxerto ósseo oral. Dois pacientes apresentaram aumento de Intensidade Média de Fluorescência (ΔMFI>1000) de anticorpos específicos ao doador para Classe I e Classe II, e 2 somente para Classe II, demonstrando uma reação específica ao doador. Os resultados sugerem uma alorreatividade HLA oscilatória ao enxerto ósseo homólogo em reconstruções alveolares, confirmada pela formação de anticorpos anti-HLA específicos ao doador em 4 pacientes (27%) da amostra.

Estudo de fatores prognósticos em pacientes submetidos ao transplante de medula óssea para tratamento de leucemia mielóide crônica.

O presente estudo compreende 96 transplantes de medula óssea (TMO) de doadores HLA-idênticos em pacientes portadores de Leucemia Mielóide Crônica, no período de Junho de 1986 a Junho de 1998. A autora selecionou diversas covariáveis para serem estudadas como fatores prognósticos de cinco desfechos principais: ocorrência de doença enxerto contra hospedeiro (DECH) aguda e crônica, incidência de recaída, sobrevida livre de doença (SLD) e sobrevida global (SG). As covariáveis estudadas foram: idade, sexo, escolaridade, tempo entre o diagnóstico e o transplante, fase da doença ao transplante, regime de condicionamente, profilaxia de DECH, compatibilidade de sexo entre doador e receptor, sexo do doador, tamanho do baço e do fígado, percentagem de blastos e número de plaquetas no sangue periférico na primeira consulta ao CEMO, ocorrência e grau de DECH aguda, ocorrência de DECH crônica e tempo para recuperação de plaquetas após o TMO. Não foi encontrada associação estatisticamente significativa num nível de 95% de confiança entre qualquer das covariáveis e a ocorrência de DECH crônica ou de recaída. A ocorrência de DECH aguda mostrou-se associada apenas com a fase da doença ao transplante. As covariáveis que se mostraram associadas com a sobrevida global e a sobrevida livre de doença foram: a percentagem de blastos no sangue periférico e tamanho do baço na primeira consulta ao CEMO, a fase da doença ao transplante, o tipo de profilaxia de DECH, a ocorrência e o grau de DECH aguda e o tempo para recuperação de plaquetas num nível acima de 20 x 103/mm3.

人外周血单核细胞来源的树突状细胞的体外

以人浓缩白细胞来源的CD14+单核细胞为前体,建立体外快速培养树突状细胞(dendritic cell,DC)的方法.采用密度梯度离心和MACS磁珠分选系统,收集高纯度的CD14+单核细胞;以rGM-CSF、rIL-4联合分化2天诱导不成熟DC,再将分化后的细胞以rTNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2共同活化2天得到成熟DC.流式细胞仪检测结果表明,分化2天的不成熟DC具有吞噬能力,且表型HLA-DR、CD40、CD80表达在80%以上,CD83、CD86基本小表达,成熟后的DC能够激活T细胞增殖,HLA-DR表达增高,CD83、CD86表达占85%.

树突状细胞与HIV-1 辅助蛋白相互作用的体外研究——新的实验体系的建立与应用

树突状细胞（DC）是免疫系统中具有多种免疫功能的关键细胞，但在HIV/AIDS 患者 体内，虽有大量病毒及抗原存在，却不能有效地激发特异性免疫应答。最新的研究显示， HIV/AIDS 血源和性传染的途径虽有不同，但DC 均是早于T 细胞而最先遭受感染的“第一 靶细胞”。已知辅助蛋白（Nef、Rev、Tat、Vif、Vpr 和Vpu）是HIV-1 在宿主细胞内复制 和致病的根本因素。而哪种辅助蛋白、如何影响DC 功能，至今研究结果甚少，结论杂乱 不一。 本论文作为HIV-1 影响DC 功能研究的实验体系部分，旨在为系统比较研究6 个辅助 蛋白对DC 功能的调节和机理奠定基础。采用分子生物学和免疫学技术方法，把辅助蛋白 基因从DNA 和mRNA 水平导入目的细胞DC，在DC 前体及其分化、成熟的各个时相， 连续、动态地分析辅助蛋白对DC 特征性表面标志及免疫相关基因的表达水平、摄取和处 理抗原、激发和调控免疫应答等功能的影响，以期揭示HIV/AIDS 患者DC 功能明显异常 和失调的原因。 首先，分别将6 个辅助蛋白基因克隆到pEGFP-N2 和pCS2+表达载体，得到具有绿色 荧光蛋白融合基因的表达载体，将分别用于DNA 和mRNA 水平转染DC。再以K562 细胞 为模型建立mRNA 转染细胞的基本方法；以人外周血CD14 单核细胞为前体，建立了体外 “2＋2”快速诱导DC 的方法。最后，利用Amaxa 转染系统，从DNA 水平研究辅助蛋白对 DC 前体（单核细胞）的功能影响。发现单核细胞转染辅助蛋白与GFP 融合基因5h 后，胞 内蛋白大量表达，且能维持表达48h；其中Nef、Tat、Vpu、Rev、Vif、Vpr 表达效率分别 为35.42%、34.42%、43.42%、 17.07%、13.65%、10.29%；单核细胞转染基因后，表型 CD14、HLA-DR、CD80、CD83、CD86、DC-SIGN 没有明显的表达变化；转染Nef、Vpu、 Rev 辅助蛋白后，单核细胞有10％凋亡；Vpr 能抑制单核细胞IL-10 的分泌，Nef 能促进分 泌IL-6。 总之，通过构建辅助蛋白的表达载体，优化DC 的体外培养过程以及mRNA 转染方法， 并成功将辅助蛋白导入DC 前体，鉴定其表型和功能变化。为研究辅助蛋白影响DC 的功 能和机制建立了稳定而可行的实验系统。

人类白细胞抗原-DRB1与胃腺癌及其临床特征和幽门螺杆菌感染的相关性

目的　探讨人类白细胞抗原 (HLA) DRB1等位基因与胃腺癌及其临床特征和幽门螺杆菌(Hp)感染的关联性。方法　运用序列特异性引物聚合酶链反应和等位基因序列分析技术 ,检测无亲缘关系湖北省汉族健康人 136例、胃癌组 6 3例的HLA DRB1基因。内镜活检、Giemsa染色和 (或 )外周血ELISA检查胃黏膜Hp感染情况。SAS软件数据处理。 结果　HLA DRB10 90 1、12等位基因均与湖北省汉族人胃腺癌呈正相关 ;HLA DRB115等位基因则呈负相关。携带及非携带上述各等位基因患者 ,分

人类白细胞抗原DRB1和DQB1等位基因多态性与大肠癌的关联性

目的　探讨人类白细胞抗原HLA DRB1, DQB1等位基因与大肠癌遗传关联性。方法　运用序列特异性引物聚合酶链反应 ,结合等位基因序列分析 ,检测无亲缘关系的湖北籍汉族健康人136名、大肠癌组 5 4例患者的HLA DRB1、 DQB1基因。结果　大肠癌患者与正常人比较 ,HLA DRB1 0 90 1等位基因分布频率明显增高 (0 2 315、0 1397,P =0 0 33) ;而 DRB1 0 80X等位基因频率明显降低 (0 0 0 93、0 0 80 9,P =0 0 0 71)。两组间HLA

基于RTI的车辆定位仿真系统数据传输研究

目前分布式体系结构的研究重点是提高系统的可扩展性、互操作性和可重用性，而对于实时性要求高的分布式仿真系统，还需要在HLA体系结构基础上，考虑如何提高系统的数据传输效率，以满足实时性要求。本文从应用层角度出发，从以下两个方面研究了改进策略： 一，从数据交互方面考虑，为了提高分布式仿真系统内部有效数据传输效率，满足系统实时性要求，以车辆定位仿真系统为问题原型，提出一种基于运行时间支撑系统数据分发管理（RTI-DDM）和套接字(Socket)的双层数据传输模型：一方面利用RTI-DDM来限定传输数据的范围，依据待交互的数据值域对数据的发送和接收进行过滤，有效降低系统内部冗余数据的传输；另一方面，利用Socket技术在仿真实体之间建立点对点的直接传输，从而提高系统的运行效率。对比实验结果表明，在相同的仿真交互数据量下，该模型相对于传统单层RTI数据传输模型，数据传输延时平均缩短70%。 二，从时间管理方面考虑，本文通过实验验证的方法，分析不同时间管理策略对仿真系统的数据传输和运行控制的影响，并针对车辆定位仿真系统中联邦成员之间的数据交互和逻辑控制关系特点，选择合适的时间管理策略，保证数据因果关系的正确性，进一步提高了系统的数据传输性能。 实验和应用结果表明，本文提出的改进策略简单有效，提高了系统数据传输效率，较好的解决了基于HLA/RTI的定位仿真系统的实时性问题。

卫星通信网络用户接入与路由选择技术研究

卫星移动通信作为下一代移动通信中一个必不可少的组成部分，用户接入切换和路由选择策略已经成为卫星移动通信领域的研究重点。同时对卫星通信网络建设方案及其关键技术进行充分的仿真建模论证也已经成为卫星通信系统建设前的一项必不可少的工作。本文围绕用户接入切换策略和路由选择策略开展了如下工作： 在卫星通信网络用户接入切换策略中，本文针对低轨卫星通信网络研究多星覆盖接入切换技术。首先在引入非均匀多业务模型的基础上，结合星上信道分配策略设计一种多业务组合加权接入策略。接着在基于HLA/RTI的卫星网络仿真系统之上进行用户接入仿真实现，并对最近卫星、最长覆盖时间和组合加权接入策略进行了仿真分析与比较，验证了组合加权策略下的系统性能。最后进一步仿真讨论加权系数取值不同对系统新呼叫阻塞概率、切换呼叫阻塞概率和切换请求到达概率的影响。 针对卫星通信网络路由策略，本文重点研究多层卫星网络，在建立星间链路预测模型的基础上，借鉴延时可容忍网络路由设计思想，设计一种链路中断容忍路由策略，利用非均匀时间段内卫星网络拓扑结构的可预测性进行路由表计算，同时提供动态的拥塞控制机制和基于洪范思想的故障中断容忍策略，解决由卫星运动、通信设备故障等引发链路中断情况下的路由问题。通过仿真，验证该路由策略的时空特性和链路利用率。

基于刚体运动学仿真的坦克训练模拟系统研究

根据坦克部队作战特点，以计算机技术、网络技术、系统仿真与模型方法为基础，将HLA与坦克分队战术训练相结合，把分散在不同地点的人与设备“连接”到同一模拟训练环境中；将虚拟现实技术与半实物仿真模拟器相结合，建立吴有时空一致性的系统合成的虚拟“战场环境”；将刚体运动学与解析几何相结合，解决坦克实体模型视景仿真和坦克直线运动与转向运动中的六自由度刚体运动学模拟技术。遵循这一技术路线，完成了以计算机仿真技术与军事训练专业的复合应用为目的的分布式坦克训练模拟与分析系统。

多表征模型组合仿真的形式描述与因果序研究

多表征模型组合仿真是可组合仿真、遗留系统集成的重要研究领域，也是多表征建模与仿真的一项关键技术，无论在理论研究还是实际应用上都有重要意义。本文针对多表征模型组合仿真问题在以下几个方面展开了较深入的研究：（1）并发控制机制；（2）多表征模型组合的形式描述；（3）因果序保持；（4）所有权管理服务。 在分析并发表示法特点的基础上，针对并发表示法中对于交互控制过于集中的问题，将集中式的并发控制机制改为分布式的并发控制机制，改进了整个并发控制的体系结构模型；对于多表征实体中的集中式并发控制处理中容易造成服务瓶颈的问题，利用多表征仿真的分层交互规则，将原有的单个交互消解器和一致性执行器改成分布式的控制方式，以有效缓解单个交互消解器的负担。 在改进的采用分布式并发控制机制的体系结构基础上，对多表征模型组合的机制及过程进行了分析，然后使用并行离散事件规范PDEVS对多表征原子模型与耦合模型进行了形式化定义，证明了多表征耦合模型具有耦合封闭性，这使得可以将多表征耦合模型与其它的多表征原子模型或多表征耦合模型一起不断地组合成更大的系统，即多表征模型可以以构件耦合的方式层次式地组成整个仿真系统。并提出了一个多表征模型组合框架。通过多表征模型组合框架清晰地描述了多表征模型组合的过程以及与HLA/RTI协调的机制。 针对HLA时间管理服务中没有提供因果排序机制，而多表征模型组合仿真需要保证以因果序提交模型交互的问题，我们通过引入向量时间，设计了一个符合因果序提交的通信协议，并对其相关的正确性问题进行了证明。 分析了HLA所有权协议应用于多表征模型组合仿真时存在的不足，并以HLA协商型推模式所有权服务为例进行了改进，使得所有权协议可以支持指定某个成员为对象属性所有权的接收者、解决了RTI不存储释放了所有权的属性的更新值，以及HLA属性所有权服务本身不包含时间管理机制等问题。

可扩展的卫星网络建模与仿真研究

卫星网络仿真是对卫星网络进行优化设计、性能分析、效能评估的有效途径。本文针对卫星网络的建模与仿真开展了如下工作： 围绕卫星网络的建模问题，本文在分析卫星网络组成结构和运行特点的基础上，建立了卫星的轨道运行、平台状态、有效载荷模型；针对不同组网模式建立了结构模型；综合考虑卫星的状态参数和空间环境对链路的影响建立了链路模型；基于物理信道、网络层、传输层三个层次建立了通信模型，并讨论了各仿真模型的组成、适应性和可扩展性。 在建模基础上，设计了基于HLA的卫星组网仿真系统总体架构，给出了仿真联邦对象模型的详细设计与具体实现方式，设计了仿真运行流程和系统接口，并进行了仿真实验，验证了仿真模型的正确性和有效性，并进一步分析了HLA在进行面向服务扩展时的适用性，给出了利用XMSF体系结构对其进行扩展的必要性和研究思路。 通过对可扩展的建模与仿真框架（XMSF）特别是面向服务的体系结构（SOA）和仿真服务总线（SSB）的讨论，针对研究卫星网络上层应用的需要，设计了基于XMSF/HLA双层体系结构的原型系统，重点研究了基于web的C/S交互通讯模式和仿真服务总线运行模式。该系统结构支持对HLA的“web化”扩展，并可跨平台、跨语言共享，易于理解和实现。

Efficient synthesis of highly substituted pyrrolin-4-ones via PIFA-mediated cyclization reactions of enaminones

A convenient and efficient synthesis of highly substituted pyrrolin-4-ones is developed via the PIFA-mediated cyclization reactions of readily available enaminones, and a mechanism involving sequential cleavage of N-C bond, formation of new N-C bond, intramolecular addition reaction, and benzilic acid type rearrangement is proposed.